Name: isolation and cultivation of adult rat cardiomyocytes
Uploaded: 2017-10-19T15:00:00
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著者ありがとうナディン Woitasky とピーター ・ ボルクのテクニカル サポート。さらに、著者は原稿を準備する彼女の助けの夫人クラウディア ローレンツ (医療ライター、ACCEDIS) をありがとうございます。この原稿は DFG (Schlu 324/7-1) によって財政上支えられます。

ケアと、米国国立衛生研究所 (NIH 文書番号 85-23、1996 の改正) によって公開された実験動物の使用の調査ガイドによると。一般に、雄 wistar ラット 3 〜 4 ヶ月の熟成、250-350 g の平均重量はこのプロトコルに使用されます。1 つのラット心は 20 の培養皿には十分 (皿あたり 1 mL; 内径: 35 mm) おおよそセル密度が 1.5 倍の 10 4 セル/1000 mm 2。
 1 です。 メディアの準...

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大人の心筋細胞生体内での挙動は他の細胞 (例えば、神経細胞、内皮細胞、線維芽細胞、炎症細胞) と電気シンシチウム彼らを形作る多くの相互作用を受けます1。したがって、分離と培養 ARVC の専ら大人の心筋細胞のストレス適応の勉強が必要です。隔離・培養 ARVC の主な効果は、: 1) 細胞外マトリックスと細胞間の連絡先から切断します。2) 収縮刺激から切断...

生体内で大人の心筋細胞間の細胞間接触に基づく電気シンシチウムとして働きます。さらに、心臓線維芽細胞、内皮細胞、神経細胞、炎症細胞1のような隣接する細胞に影響を与えています。心筋細胞の細胞内組織を適応能力を研究するために心臓肥大、心不全、分離ラット心室の栽培が主要な最初のステップみたように負荷条件を変更心筋 (ARVC) は必要な2,3,4です。歴史的には、心筋細胞最初から分離された鶏胚心5,6.数年後、終末分化した心筋細胞の最初の分離は、カルシウム枯渇7を使用して記述されていた。ただし、これらの大人の心筋細胞はカルシウム耐性をなかったし、したがって、機能アッセイには使用できませんでした。最後に、1976 年に新しいプロトコルと有効にパウエル ツイスト生理的条件8下大人の心室心筋細胞を調査します。最初のステップとして彼らは低カルシウム濃度とステップワイズ法で生理学的濃度 ca がその後増加の下で成人の心筋細胞を分離しました。今日、分離と大人の心筋細胞の培養のためのほとんどのプロトコルはこのカルシウム プロトコルで動作し、高密度細胞接触1の酵素の消化力のコラゲナーゼを使用します。
育成に成功した、牛胎児血清 (FCS) またはオンコスタチン M (OSM) が必要です。ARVC 実行、デ- と再-differentiation 筋分解と改革9,10、11,12を含む広汎な構造変更をします。このプロセスは再発現胎児型遺伝子、β-ミオシン重鎖 (β-MHC) のような伴われる拡散4,11、とも呼ばれる、偽足のような構造体の形成と肥大から知られています。13。 さらに、swiprosin-1 (EFHD2)、新たに同定されたタンパク質は栽培 ARVC11の再分化の過程で大きな役割を果たしています。その結果、文化 ARVC 文化2,4,14の 2 〜 3 週間後の収縮を自発的に表示する、広範囲にわたる多セルに変換します。
最近の発見は、心臓再脱 differentiation 模倣文化の条件下で発生すると機能を生体内で見られる心臓改造10,15時に明らかにしました。心筋リモデリングは、心疾患16の間にキーのプロセスです。心疾患は、工業化社会で死の主な原因で、まだ、大人の心筋細胞の生物学の理解を深めることが重要です (人; 2015)。ARVC の分離と培養は新たな戦略と心臓疾患の治療のための薬を開発することができます。この原稿分離 ARVC の耕作のためのプロトコルが提供されます。さらに、このメソッドのいくつかの重要な部分は、ディスカッション セクションでハイライトされます。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Langendorff perfusion system</td>
			<td>inhouse construction</td>
			<td></td>
			<td>double-walled with a water 
			based heating system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue chopper Mc Ilwain</td>
			<td>Cavey Laboratory Engeneering Co. Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aortic Cannula, OD 1,8 mm</td>
			<td>inhouse construction</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Abdominal shears</td>
			<td>Aeskulap</td>
			<td>BC772R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capsule forceps</td>
			<td>Eickemeyer</td>
			<td>171307</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissor large</td>
			<td>Aeskulap</td>
			<td>BC562R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissor small</td>
			<td>Aeskulap</td>
			<td>BC163R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mash with Polyamid</td>
			<td>Neolab</td>
			<td>4-1413</td>
			<td>mash size 200 &#956;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic disc</td>
			<td>Cavey Laboratory Engeneering Co. Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Typ II</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS004177</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and cultivation of adult rat cardiomyocytes

そのままの心で隣接するセル大人の心筋細胞に影響を与えます。分離法と成人の心筋細胞の培養は、特定の治療法や環境下でこれらの細胞の動作の正確な調査が可能です。この原稿は、ラットの心室心筋細胞 (ARVC) の培養と分離を成功させるためのプロトコルを示します。
頚部転位深麻酔下でラットが犠牲に。中心部を抽出し、大動脈がカバーされていません。その後、蛍光灌流システム カルシウム枯渇とコラゲナーゼ処理の灌流が実行されます。その後、心室の組織を取得しますみじん切り、再循環、フィルター、CaCl2の段階的な追加で 3 つの遠心分離手順に続いて生理カルシウム濃度に到達するまで。ARVC 細胞培養皿にメッキパーツを多数。細胞培養液を更新した後 ARVC できます栽培される 6 日間の血清を含む培養液を変更せず。ARVC の分離は、カルシウム敏感なプロセスです。細胞内カルシウム濃度のわずかな変化は、質と隔離されたセルの実行可能性の減少を引き起こします。
新鮮な分離 ARVC は棒状のものです。栽培の最初の日以内に、彼らは、棒状形態とフォーム偽足のような構造 (拡散) を失います。この形態の形成の間に ARVC は当初改革アクチン繊維の応力およびde novo sarcomerogenesis によって続いて収縮要素を低下します。栽培の 1 週間後は、ほとんど ARVC は明確に検出可能な十字紋と広範な外観を表示します。このプロセスは細胞内カルシウム濃度に敏感イオノマイシンによる治療は拡散減衰です。Β-ミオシン重鎖 (β-MHC)、オンコスタチン M (OSM) swiprosin 1 (EFHD2)、このプロセスでのデ- と再-differentiation キー マーカー。最近の研究はことを心臓改造中に見られる生体機能模倣心臓再脱 differentiation 発生培養条件下で示唆しています。したがって、ARVC の分離と培養心筋細胞の生物学を理解する上で重要な役割を再生します。

アダルト文化における心筋細胞:図 1は、最後の洗浄後、新鮮単離アダルト心筋 2 h の概要を示します。すべての心筋細胞の約 75% は、棒状の形態を持っていた。残りの 25% は、円形の形態とない検出そのまま細胞膜 (図 1) 異常な外観を示した。まで栽培 (6 日目) の最後にすべての心筋細胞の 15% を示した広がり、...

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Isolation and Cultivation of Adult Rat Cardiomyocytes (Video) | JoVE

ここでは、分離と培養ラット心室心筋細胞 (ARVC) のためのプロトコルを提案する.分離 ARVC は、短期および長期の栽培に使用できます。分離と ARVC の栽培は、心疾患の新しい治療法の開発に重要な役割を再生できます。

ラット心筋細胞の分離と培養

In an intact heart, adjacent cells influence adult cardiomyocytes. With the method of isolation and cultivation of adult cardiomyocytes, a precise ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation and Cultivation of Adult Rat Cardiomyocytes

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

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離と新鮮な外科的試料からのヒト心室の心筋細胞の機能解析

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Isolation of Atrial Cardiomyocytes from a Rat Model of Metabolic Syndrome-related Heart Failure with Preserved Ejection Fraction

Isolation of Atrial Cardiomyocytes from a Rat Model of Metabolic Syndrome-related Heart Failure with Preserved Ejection Fraction (Video) | JoVE

保存された駆出率とメタボリック症候群関連心不全ラットモデルから心房の心筋細胞の単離

In this article, we describe an optimized, Langendorff-based procedure for the isolation of single-cell atrial cardiomyocytes (ACMs) from a rat model of ...

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An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney (Video) | JoVE

ラット腎臓からそのまま糸球体を分離する効率的なふるい分け法

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice

Isolation of Atrial Myocytes from Adult Mice (Video) | JoVE

成体マウスからの心房筋細胞の単離

The electrophysiological properties of atrial myocytes importantly affect overall cardiac function. Alterations in the underlying ionic currents ...

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Ultrasonic-augmented Primary Adult Fibroblast Isolation (Video) | JoVE

超音波増強原発性成人線維芽細胞分離

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In Vitro Assessment of Cardiac Function Using Skinned Cardiomyocytes

In Vitro Assessment of Cardiac Function Using Skinned Cardiomyocytes (Video) | JoVE

皮膚心筋細胞を用いた心機能のインビトロ評価

In this article, we describe the steps required to isolate a single permeabilized (&#34;skinned&#34;) cardiomyocyte and attach it to a force-measuring ...

Model of Ischemic Heart Disease and Video-Based Comparison of Cardiomyocyte Contraction Using hiPSC-Derived Cardiomyocytes

Model of Ischemic Heart Disease and Video-Based Comparison of Cardiomyocyte Contraction Using hiPSC-Derived Cardiomyocytes (Video) | JoVE

hiPSC由来心筋細胞を用いた虚血性心疾患のモデルと心筋細胞収縮の映像的比較

Ischemic heart disease is a significant cause of death worldwide. It has therefore been the subject of a tremendous amount of research, often with ...

Isolation and Cultivation of Mandibular Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Rats

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ラットにおける骨髄間葉系幹細胞の単離と培養

Here we present an efficient method for isolating and culturing mandibular bone marrow mesenchymal stem cells (mBMSCs) in vitro to rapidly obtain numerous ...

Sarcomere Shortening of Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes using Fluorescent-Tagged Sarcomere Proteins.

Sarcomere Shortening of Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes using Fluorescent-Tagged Sarcomere Proteins. (Video) | JoVE

蛍光タグ付きサルコメアタンパク質を用いた多能性幹細胞由来心筋細胞のサルコメア短縮

Pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes (PSC-CMs) can be produced from both embryonic and induced pluripotent stem (ES/iPS) cells. These cells ...

Modifications of the Langendorff Method for Simultaneous Isolation of Atrial and Ventricular Myocytes from Adult Mice

Modifications of the Langendorff Method for Simultaneous Isolation of Atrial and Ventricular Myocytes from Adult Mice (Video) | JoVE

成体マウスからの心房と心室筋細胞の同時分離のためのランゲンドルフ法の改変

A single cardiomyocyte is a vital tool in the cellular and subcellular level studies of cardiac biology and diseases as a fundamental unit of contraction ...