Name: contractility measurements of human uterine smooth muscle to aid drug development
Uploaded: 2018-01-26T14:00:00
Duration: 7 min 56 s
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इस शोध को यूरोपीय संघ के क्षितिज २०२० अनुसंधान और नवाचार कार्यक्रम (ग्रांट एग्रीमेंट नं ७१४३६६) के तहत प्रोजेक्ट I3243 और यूरोपियन रिसर्च काउंसिल (ईआरसी) के माध्यम से ऑस्ट्रिया के विज्ञान कोष (FWF) द्वारा समर्थन दिया गया है । CWG एक चाप डिस्कवरी अर्ली कैरियर शोधकर्ता (DECRA) फैलोशिप (DE150100784) द्वारा एक ऑस्ट्रेलियाई अनुसंधान परिषद (एआरसी) भविष्य फैलोशिप (FT140100730) और मिमी द्वारा समर्थित किया गया है । एसए एक हैरिस-भलाई अपरिपक्व जंम अनुसंधान केंद्र महिलाओं, ब्रिटेन की भलाई के द्वारा प्रशासित अनुदान द्वारा समर्थित है ।

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

दवा की खोज के लक्ष्य को सक्रिय या बाधा सेलुलर संकेत रास्ते से एक चिकित्सीय प्रतिक्रिया उत्पन्न जो उपंयास, शक्तिशाली, और उच्च चयनात्मक लाइगैंडों का उत्पादन करने के लिए है । यह एक उपयुक्त परख प्रणाली में जो विश्वसनीय, मजबूत, और प्रासंगिक परिणामों के साथ नेतृत्व यौगिकों का परीक्षण करने के लिए1की आवश्यकता है । औषधीय तकनीक जैसे ligand-रिसेप्टर बाइंडिंग और कार्यात्मक परख अक्सर heterologous सेल-आधारित सिस्टम को रोजगार, एक्सप्रेस रिसेप्टर्स जो अंयथा2मौजूद नहीं होगा इंजीनियर. Whilst इन तकनीकों रिसेप्टर औषध और प्रारंभिक दवा के विकास के लिए बहुमूल्य अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं, डेटा प्राप्त vivo परिदृश्य में एक सच को प्रतिबिंबित नहीं कर सकते हैं. इसलिए यह महत्वपूर्ण है कि कोशिका आधारित परख से औषधीय डेटा भी शारीरिक रूप से प्रासंगिक मॉडलों में मांय हैं ।
गर्भाशय चिकनी मांसपेशी (myometrium) गर्भाशय जो परिश्रम के दौरान संकुचन के लिए जिंमेदार है कि efface और गर्भाशय ग्रीवा को चौड़ा और भ्रूण3उद्धार के पेशी परत का गठन किया । myometrium का संकुचन सहज है; यह हार्मोन या तंत्रिका इनपुट4अनुबंध करने की आवश्यकता नहीं है । संकुचन myometrial कोशिका झिल्ली जो वोल्टेज के उद्घाटन की ओर जाता है के सहज ध्रुवीकरण के बारे में लाया जाता है सीए2 +-चैनल (एल प्रकार चैनल) और सीए की आमद2 + सेल5में । कैल्शियम calmodulin के साथ परिसरों और मायोसिन प्रकाश श्रृंखला कळेनासे सक्रिय करता है जो बारी phosphorylates मायोसिन और संकुचन के साथ पार पुल चक्र गठन को सक्षम करने के लिए. छूट आमतौर पर de-फास्फारिलीकरण द्वारा मायोसिन के मायोसिन फॉस्फेट और Ca की एकाग्रता में कमी के द्वारा मध्यस्थता है2 + सेल से बाहर निकालना और/या sequestering sarcoplasmic (SR)5,6 ,7.
कई तरीकों myometrial समारोह और रोग का अध्ययन करने के लिए विकसित किया गया है, से vivo में आंतरिक और बाहरी tocography और अंतर्गर्भाशयी दबाव कैथेटर, बदल या myometrial मूल की कोशिकाओं को अमर की पीढ़ी के लिए8 ,9,10,11,12. Whilst सेल संस्कृति प्रणालियों का पता लगा सकते है कि एक पदार्थ सेलुलर स्तर पर कार्य कर सकते हैं, अंग स्नान के भीतर ऊतकों के स्ट्रिप्स उपकरणों के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है औषधीय रिएजेंट के लिए पूरे ऊतकों के कार्यात्मक प्रतिक्रियाओं को मापने । पारंपरिक अंग स्नान आम तौर पर एक बड़ा गर्म गिलास चैंबर जो 5 और ५० के बीच शारीरिक खारा (PSS) की मिलीलीटर धारण करने में सक्षम है है । इन बड़े कक्षों के भीतर स्ट्रिप्स आम तौर पर ऑक्सीजन और PSS की बड़ी मात्रा के साथ वातन की आवश्यकता होती है । ऊतक के स्ट्रिप्स और विच्छेदित स्नान कक्ष के भीतर निलंबित कर रहे है और एक बल transducer जो तनाव में बदलाव के उपाय, जैसे एक संकुचन के दौरान के रूप में संलग्न । दोनों मनुष्यों और जानवरों सहित, गिनी पिग13, माउस14, चूहा15, खरगोश16, और दूसरों17,18से myometrium के स्ट्रिप्स, अनुसंधान समूहों के एक नंबर के द्वारा इस्तेमाल किया गया है की जांच myometrial शरीर विज्ञान और विकृति से संबंधित कई सवाल, अपरिपक्व और बेकार मजदूरों सहित. उदाहरण के लिए, myometrial स्ट्रिप्स कारकों की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया गया है जो विनियमित और myogenic गतिविधि को संशोधित19,20,21, ऐसे SR22के रूप में organelle समारोह का निर्धारण, के रूप में अच्छी तरह के रूप में आयन चैनल23,24,25,26, पंप और एक्सचेंजर्स27 myometrial फिजियोलॉजी में उनकी भूमिका का निर्धारण करने के लिए की जांच मॉडुलन ।
इस पूर्व vivo तकनीक ऊतक संकुचन प्रदर्शन के आकलन के लिए अनुमति देता है और संकुचन के मापदंडों पर विभिन्न एजेंटों के प्रत्यक्ष प्रभाव सहित मापा जा करने के लिए, संकुचन बल (शक्ति), आवृत्ति, और अवधि, के रूप में अच्छी तरह के रूप में इन मूल्यों के एकीकरण, कुल काम का एक सूचकांक उत्पंन करने के लिए (मतलब अभिंन बल या वक्र के तहत क्षेत्र, ईमेज) । के रूप में पृथक ऊतक पट्टी की तैयारी एक से अधिक कोशिका प्रकार के एक मॉडल का गठन, पूरे ऊतक के शारीरिक प्रतिक्रिया मापा जा सकता है । अंग स्नान और पृथक ऊतक पट्टी इसलिए सेल संस्कृति के काम और पूरे पशु के बीच पुल प्रदान करने में एक उपयोगी उपकरण है/vivo काम में / इसलिए, ड्रग डिस्कवरी के क्षेत्र में, उनके उत्तेजक के संदर्भ में उपन्यास एजेंटों के प्रभाव (यानी, उत्तेजक) या निरोधात्मक (यानी, छूट) vivo में संभावित अधिक बारीकी से मूल्यांकन किया जा सकता है. इस तकनीक का सफलतापूर्वक ऑक्सीटोसिन के विकास में इस्तेमाल किया गया था और वी1aरिसेप्टर (OTR और वी1aआर) एक tocolytic एजेंट के रूप में विरोधी atosiban के लिए अपरिपक्व श्रम संकुचन और देरी अपरिपक्व जन्म को बाधित । इन विट्रो में atosiban के myometrial स्ट्रिप्स पर परीक्षण के लिए काफी ऑक्सीटोसिन (OT)-प्रेरित संकुचन28,29,30को कम करने में सक्षम विरोधी पाया । महत्वपूर्ण रूप से इन अध्ययनों से atosiban के शोधों के मूल्य को मान्य करने में मदद मिली और यह नैदानिक परीक्षणों के लिए आगे ले जाने के लिए आवश्यक सबूत की अवधारणा डेटा उत्पन्न31,३२,३३,३४ . Atosiban अब व्यापक रूप से पसंद की दवा यूरोप में श्रम में देरी के रूप में प्रयोग किया जाता है । इसी तरह के सबूत-अवधारणा अध्ययन ऑक्सीटोसिन एनालॉग carbetocin के लिए किया गया था के बाद को रोकने में अपनी चिकित्सीय क्षमता दिखाने के प्रसवोत्तर रक्तस्त्राव३५,३६,३७। अंय प्रमुख इस परख के साथ विकास के तहत वर्तमान यौगिकों retosiban (GSK221149A)३८ और nolasiban (डेटा अप्रकाशित) शामिल हैं । ये विधियां भी रोगी समूहों के बीच की तुलना करने के लिए सफलतापूर्वक उपयोग किया गया है३९,४०,४१,४२,४३,४४, ४५,४६,४७ और अंतर प्रजातियों के मतभेदों के लिए जांच ।
यहां हम छोटे के भीतर गर्भवती मानव myometrium से अलग पूर्व vivo ऊतक स्ट्रिप्स के उपयोग का वर्णन (1 मिलीलीटर) कस्टम-अंग स्नान उदाहरण देकर स्पष्ट करना कैसे इस विधि के पूरक और औषधीय डेटा सेल से प्राप्त की पुष्टि करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है आधारित परख . बायोप्सी बड़े पैमाने पर पूर्व के दौर से गुजर महिलाओं से प्राप्त किया गया श्रम ऐच्छिक सीजेरियन सेक्शन (सीएस) प्रसव के रूप में वे शल्य चिकित्सा की योजना बनाई है और इसलिए बायोप्सी संग्रह अनुसूची करने के लिए आसान कर रहे हैं, myometrium करने के लिए आसान पहुँच है, और ऊतकों किसी को उजागर नहीं किया गया होगा uterotonic उत्तेजक या ढीला सर्जरी से पहले । हालांकि, बायोप्सी भी अनियोजित (आपातकालीन) श्रम में सीएस प्रसव के दौर से गुजर महिलाओं से प्राप्त किया जा सकता है उपलब्ध कराने के पर्याप्त समय के लिए पूरी तरह से रोगी की सहमति है । अधिकांश बायोप्सी शल्य चीरा की साइट पर कम गर्भाशय खंड से सर्जरी के दौरान प्राप्त कर रहे हैं, लेकिन यह भी ऊपरी खंड से नमूने प्राप्त करने के लिए संभव है४८,४९. योनि प्रसव के बाद कुछ मामलों में, अपरा बिस्तर से पंच बायोप्सी भी५०प्राप्त किया गया है । हालांकि, यह सबसे पारंपरिक मार्ग नहीं है और प्राप्त myometrial ऊतक की मात्रा छोटी है । गैर गर्भवती myometrium पहले से प्राप्त किया जा सकता है या रजोनिवृत्ति के बाद महिलाओं सौम्य स्त्री की स्थिति के लिए गर्भाशय के दौर से गुजर । एक पूर्ण मोटाई बायोप्सी गर्भाशय ग्रीवा से दूर कम कोष से, पोस्ट-पैथोलॉजी परीक्षा का नमूना है, और myometrium serosal और एंडोमेट्रियल सतहों से परहेज गर्भाशय की दीवार के बीच से लिया जाता है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Origin software</td>
			<td>Origin Lab</td>
			<td></td>
			<td>2015 version</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labscribe Software</td>
			<td>WPI</td>
			<td></td>
			<td>Formally Datatrax</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism graphical software</td>
			<td>GraphPad Prism</td>
			<td></td>
			<td>PRISM 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LabTrax 4-Channel Data Acquisition</td>
			<td>WPI</td>
			<td>LAB-TRAX-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transbridge Transducer Amplifier</td>
			<td>WPI</td>
			<td>SYS-TBM4M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Force-displacement Transducer</td>
			<td>WPI</td>
			<td>FORT10g</td>
			<td>10 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNC to BNC Cable</td>
			<td>WPI</td>
			<td>500184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Clamp stand</td>
			<td>WPI</td>
			<td>M10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micrometer</td>
			<td>Reconditioned from microscopes</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>MINIPULS3</td>
			<td>R4 Standard pump head</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction pumps</td>
			<td>Various</td>
			<td>AP2 air pump</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulating Water bath</td>
			<td>Grant Instruments</td>
			<td>TC120</td>
			<td>5L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perspex Tissue Bath</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water reservoir container</td>
			<td>the reallyusefulbox</td>
			<td></td>
			<td>7L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Hooks (fixed)</td>
			<td>Hand made in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic tubing</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F117948</td>
			<td>PVC 2.79 mm internal diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon Tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>various diameters</td>
			<td>R-3603</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminium clips</td>
			<td>Laser services, USA</td>
			<td>custom made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Zoom binocular microscope</td>
			<td>WPI</td>
			<td>PZMIV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Fiber-optic Light Source</td>
			<td>WPI</td>
			<td>PHOTONIC PL 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Dishes</td>
			<td>Handmade with Sylgard</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard Silicone Elastomer kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td></td>
			<td>Sylgard 170 Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Scissors</td>
			<td>WPI</td>
			<td>50086</td>
			<td>8.5 cm, straight edge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>WPI</td>
			<td>15914</td>
			<td>10 cm, straight edge (serrated)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14393</td>
			<td>10 cm, straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting pins</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>Z192341</td>
			<td>B-D precision guide syringe needle 30G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>H9269</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physiological Salt Solution</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>various</td>
			<td>PSS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxytocin acetate salt</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>O6379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>[Arg8]-vasopressin acetate salt</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>V9879</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

contractility measurements of human uterine smooth muscle to aid drug development

डिस्कवरी और उपंयास दवा यौगिकों या जैव रासायनिक जांच के लक्षण वर्णन मजबूत और शारीरिक रूप से प्रासंगिक परख प्रणालियों पर भरोसा करते हैं । हम तरीकों का वर्णन करने के लिए उपाय पूर्व vivo myometrium सिकुड़ना. इस परख कारकों और myometrial संकुचन के मॉडुलन में शामिल अणुओं की जांच करने के लिए और उनके उत्तेजक या निरोधात्मक कार्रवाई निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, और इसलिए vivo मेंउनकी चिकित्सीय क्षमता । बायोप्सी सूचित सहमति के साथ सीजेरियन सेक्शन डिलिवरी के दौर से गुजर महिलाओं से प्राप्त कर रहे हैं । myometrium के ठीक स्ट्रिप्स, विच्छेदित काटा और 1 मिलीलीटर अंग स्नान ३७ डिग्री सेल्सियस पर शारीरिक खारा समाधान के साथ superfused के भीतर एक बल transducer से जुड़ी हैं । स्ट्रिप्स के भीतर सहज संकुचन विकसित 2 – 3 ज तनाव सेट के तहत और कई घंटे के लिए स्थिर रहते हैं (> 6 एच). स्ट्रिप्स भी ऐसे अंतर्जात हार्मोन, ऑक्सीटोसिन और vasopressin, जो संकुचन आवृत्ति, बल और अवधि के एकाग्रता पर निर्भर मॉडुलन के कारण के रूप में अनुबंध करने के लिए प्रेरित किया जा सकता है और अधिक निकटता परिश्रम में संकुचन समान है । इसलिए, ज्ञात और उपंयास दवा सुराग के प्रभाव सहज और एगोनिस्ट प्रेरित संकुचन पर परीक्षण किया जा सकता है ।
इस प्रोटोकॉल विशेष रूप से विवरण कैसे इस परख मानव myometrial संकुचन के विभिंन मापदंडों पर उनके प्रभाव को मापने के द्वारा ज्ञात और उपंयास एजेंटों की शक्ति का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । हम ऑक्सीटोसिन-और V1a रिसेप्टर विरोधी, atosiban और SR49059 ज्ञात यौगिकों जो ऑक्सीटोसिन और vasopressin प्रेरित संकुचन को बाधित के उदाहरण के रूप में उपयोग करते हैं, और प्रदर्शन कैसे इस विधि के पूरक और सत्यापित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है औषधीय डेटा सेल आधारित परख से प्राप्त करने के लिए दवा विकास सहायता । ऑक्सीटोसिन और vasopressin की तुलना में उपन्यास एगोनिस्ट के प्रभाव की विशेषता भी हो सकती है. Whilst हम ऑक्सीटोसिन/vasopressin प्रणाली के उदाहरण का उपयोग करें, इस विधि भी अंय रिसेप्टर्स और आयन चैनल है कि गर्भाशय के संकुचन और विश्राम में एक भूमिका निभाने के लिए मानव गर्भाशय फिजियोलॉजी और pathophysiology की समझ अग्रिम अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।

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Contractility Measurements of Human Uterine Smooth Muscle to Aid Drug Development

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