Name: posterior semicircular canal approach for inner ear gene delivery in neonatal mouse
Uploaded: 2018-03-02T14:00:00
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Este trabajo fue apoyado por fondos de la NIDCD División de intramuros investigación /NIH (DC000082-02 para W.W.C.), así como DC000081 a base de proyección de imagen avanzada. Estamos agradecidos por el personal de Animalario NIDCD para el cuidado de nuestros animales.

Todos los procedimientos animales fueron aprobados por el cuidado Animal y uso en el Instituto Nacional en sordera y otros trastornos de la comunicación (NIDCD ASP1378-15).
1. preparación y configuración del procedimiento
<ol><li>Esterilizar todos los instrumentos de óxido de etileno en el inicio del experimento. Entre los animales, limpiar instrumentos usando esterilización del grano.</li>
	<li>Cargar la solución con terapia génica viral en una micropipeta en el inyector de micro. Lo...

<ol>
	<li>Chien, W. W., Monzack, E. L., McDougald, D. S., Cunningham, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+sensorineural+hearing+loss.">Gene therapy for sensorineural hearing loss.</a> Ear Hear. 36, 1-7 (2015).</li><li>Askew, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tmc+gene+therapy+restores+auditory+function+in+deaf+mice.">Tmc gene therapy restores auditory function in deaf mice.</a> Sci Transl Med. 7, 295 (2015).</li><li>Akil, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+hearing+in+the+VGLUT3+knockout+mouse+using+virally+mediated+gene+therapy.">Restoration of hearing in the VGLUT3 knockout mouse using virally mediated gene therapy.</a> Neuron. 75, 283-293 (2012).</li><li>Pan, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+restores+auditory+and+vestibular+function+in+a+mouse+model+of+Usher+syndrome+type+1c.">Gene therapy restores auditory and vestibular function in a mouse model of Usher syndrome type 1c.</a> Nat Biotechnol. 35, 264-272 (2017).</li><li>Isgrig, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Therapy+Restores+Balance+and+Auditory+Functions+in+a+Mouse+Model+of+Usher+Syndrome.">Gene Therapy Restores Balance and Auditory Functions in a Mouse Model of Usher Syndrome.</a> Mol Ther. 25, 780-791 (2017).</li><li>Lentz, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+hearing+and+vestibular+function+by+antisense+oligonucleotides+in+a+mouse+model+of+human+deafness.">Rescue of hearing and vestibular function by antisense oligonucleotides in a mouse model of human deafness.</a> Nat Med. 19, 345-350 (2013).</li><li>Shibata, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+Interference+Prevents+Autosomal-Dominant+Hearing+Loss.">RNA Interference Prevents Autosomal-Dominant Hearing Loss.</a> Am J Hum Genet. 98, 1101-1113 (2016).</li><li>Van Sluyters, R. C., Obernier, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+care+and+use+of+mammals+in+neuroscience+and+behavioral+research.">Guidelines for the care and use of mammals in neuroscience and behavioral research.</a> Contemp Top Lab Anim. 43, 48 (2004).</li><li>Chien, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Therapy+Restores+Hair+Cell+Stereocilia+Morphology+in+Inner+Ears+of+Deaf+Whirler+Mice.">Gene Therapy Restores Hair Cell Stereocilia Morphology in Inner Ears of Deaf Whirler Mice.</a> Mol Ther. 24, 17-25 (2016).</li><li>Hirose, K., Hartsock, J. J., Johnson, S., Santi, P., Salt, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+lipopolysaccharide+compromises+the+blood-labyrinth+barrier+and+increases+entry+of+serum+fluorescein+into+the+perilymph.">Systemic lipopolysaccharide compromises the blood-labyrinth barrier and increases entry of serum fluorescein into the perilymph.</a> J Assoc Res Otolaryngol. 15, 707-719 (2014).</li><li>Okada, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+targeting+mouse+vestibule+using+adenovirus+and+adeno-associated+virus+vectors.">Gene transfer targeting mouse vestibule using adenovirus and adeno-associated virus vectors.</a> Otol Neurotol. 33, 655-659 (2012).</li><li>Suzuki, J., Hashimoto, K., Xiao, R., Vandenberghe, L. H., Liberman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+gene+therapy+with+ancestral+AAV+in+adult+mice:+complete+transduction+of+inner+hair+cells+without+cochlear+dysfunction.">Cochlear gene therapy with ancestral AAV in adult mice: complete transduction of inner hair cells without cochlear dysfunction.</a> Sci Rep. 7, 45524 (2017).</li></ol>

Se han descrito varios abordajes quirúrgicos para tener acceso a roedores interior de orejas. Cochleostomy y enfoques de ventanas redondas son más utilizados para acceder a la cóclea, mientras que el canal semicircular posterior y el saco endolinfático enfoques se suelen utilizar para acceder a los órganos vestibulares1. En un estudio reciente, mostramos canal semicircular posterior inyecciones de terapia génica viral dio lugar a la alta eficacia de transducción de la célula de pelo en los...

Oído interno la terapia génica es un campo de rápido desarrollo de la investigación. Se ha aplicado en varios modelos de animales para combate ototoxicidad, traumatismo de ruido y de pérdida de audición hereditaria1. Varios estudios recientes han demostrado la recuperación funcional de la audición y las funciones de balance en ratones mutantes después de oído interno gene terapia entrega2,3,4,5,6, 7. uno de los principales factores en determinar el éxito de la terapia génica de oído interno es el método quirúrgico utilizado para acceder el oído interno. Idealmente, el acercamiento quirúrgico sería fácil de realizar, los hitos anatómicos sería consistente y fácil de identificar y la transducción resultante de tipos celulares específicos sería alta.
En un estudio reciente, demostró que cuando la terapia génica viral fue inyectada a través del canal semicircular posterior del ratón mutante whirler (un modelo de pérdida de la audición y la disfunción vestibular), transducción eficiente de células de pelo sensoriales fue visto en el vestibular órganos, así como en la cóclea5. La alta eficiencia de transducción de la célula de pelo sensorial dio lugar a la mejora de las funciones auditivas y vestibulares en estos ratones mutantes.
En este artículo, describimos en detalle el enfoque del canal semicircular posterior para tener acceso al oído interno de ratón neonatal.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:735px;" width="733">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Operating microscope</td>
			<td style="width:113px;">Zeiss</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:295px;">OPMI Pico ENT microscope. Other dissection microscopes would also work.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micro-forcepts</td>
			<td style="width:113px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:111px;">11251-10, 11295-51</td>
			<td>#5 and #55 Dumont</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micro-scissors</td>
			<td style="width:113px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:111px;">15002-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Nanoliter2000 microinjector</td>
			<td style="width:113px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Heating pad</td>
			<td style="width:113px;">Mastex</td>
			<td>Model 500/600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">5-0 vicryl sutures</td>
			<td style="width:113px;">Ethicon</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">AAV8-whirlin</td>
			<td style="width:113px;">Vector Biolabs</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Glass pipette</td>
			<td style="width:113px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:111px;">B100-75-10</td>
			<td>Borosilicate glass</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

posterior semicircular canal approach for inner ear gene delivery in neonatal mouse

Oído interno la terapia génica ofrece gran promesa como tratamiento potencial para la pérdida de oído y mareos. Uno de los determinantes críticos del éxito de la terapia génica de oído interno debe encontrar un método de entrega que se traduce en eficiencia de transducción consistente de tipos celulares específicos y reducir al mínimo pérdida de la audición. En este estudio, describimos el enfoque del canal semicircular posterior como un método viable para la entrega del gene de oído interno en ratones neonatales. Mostramos que entrega del gene a través del canal semicircular posterior es capaz de inundar todo oído interno. La fácil identificación anatómica del canal semicircular posterior, así como mínima manipulación del hueso temporal necesario, hacer este quirúrgico acercarse una opción atractiva para la entrega del gene de oído interno.

Inyección de whirlin AAV8 terapia génica en ratones neonatales whirler a través del canal semicircular posterior dio lugar a whirlin expresión (verde) en células de pelo utricular (figura 2), con la eficiencia global de la infección del 53,1% (SD 38.1, n = 28)5 . Células transduced había alargado estereocilios (rojo) en comparación con las células de pelo de orejas no contralaterales (5.35 μm ± 2.11 vs 3,20 ± 0.34 μm, res...

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Posterior Semicircular Canal Approach for Inner Ear Gene Delivery in Neonatal Mouse

En este estudio, describimos el enfoque del canal semicircular posterior como un método confiable para la entrega del gene de oído interno en ratones neonatales. Mostramos que entrega del gene a través del canal semicircular posterior es capaz de inundar todo oído interno.

Enfoque del Canal Semicircular posterior para la entrega del Gene de oído interno en ratón Neonatal

Inner ear gene therapy offers great promise as a potential treatment for hearing loss and dizziness. One of the critical determinants of the success of ...

Research

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