Name: spatial and temporal control of t cell activation using a photoactivatable agonist
Uploaded: 2018-04-25T13:00:00
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हम सलाह और सहायता के लिए हुँसे लैब के सदस्यों को धंयवाद । स्वास्थ्य के अमेरिका के राष्ट्रीय संस्थानों द्वारा समर्थित (R01-AI087644 को M.H. और P30-CA008748 को मेमोरियल Sloan-Kettering कैंसर सेंटर).

1. Stimulatory ग्लास सतहों की तैयारी
<ol><li>कोट आठ-biotinylated पाली के साथ अच्छी तरह से चैम्बर्ड coverglass-L-lysine (बायो पीएलएल) पतला 1:500 आसुत, जल में (ddH2ओ) । कमरे के तापमान (आरटी) में 30 मिनट के लिए मशीन ।</li>
	<li>H2O से धो लें ।</li>
	<li>आर टी प?...

<ol>
	<li>Dustin, M. L., Chakraborty, A. K., Shaw, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+structure+and+function+of+the+immunological+synapse.">Understanding the structure and function of the immunological synapse.</a> Cold Spring Harb.Perspect.Biol. 2, a002311 (2010).</li><li>Liu, X., Huse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+Synapse+Formation:+Cell+Polarity+During+T+Cell-APC+Interaction.">Immunological Synapse Formation: Cell Polarity During T Cell-APC Interaction.</a> Cell Polarity 1. , 247-275 (2015).</li><li>Bunnell, S. C., Kapoor, V., Trible, R. P., Zhang, W., Samelson, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+actin+polymerization+drives+T+cell+receptor-induced+spreading:+A+role+for+the+signal+transduction+adaptor+LAT.">Dynamic actin polymerization drives T cell receptor-induced spreading: A role for the signal transduction adaptor LAT.</a> Immunity. 14, 315-329 (2001).</li><li>Dustin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+Function+of+the+Immunological+Synapse+from+Studies+with+Supported+Planar+Bilayers.">Insights into Function of the Immunological Synapse from Studies with Supported Planar Bilayers.</a> Current topics in microbiology and immunology. 340, (2010).</li><li>Chauveau, A., Le Floc'h, A., Bantilan, N. S., Koretzky, G. a., Huse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diacylglycerol+kinase+&#945;+establishes+T+cell+polarity+by+shaping+diacylglycerol+accumulation+at+the+immunological+synapse.">Diacylglycerol kinase &#945; establishes T cell polarity by shaping diacylglycerol accumulation at the immunological synapse.</a> Sci. Signal. 7, ra82 (2014).</li><li>Huse, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+Temporal+Dynamics+of+T+Cell+Receptor+Signaling+with+a+Photoactivatable+Agonist.">Spatial and Temporal Dynamics of T Cell Receptor Signaling with a Photoactivatable Agonist.</a> Immunity. 27, 76-88 (2007).</li><li>Quann, E. J., Merino, E., Furuta, T., Huse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localized+diacylglycerol+drives+the+polarization+of+the+microtubule-organizing+center+in+T+cells.">Localized diacylglycerol drives the polarization of the microtubule-organizing center in T cells.</a> Nat Immunol. 10, 627-635 (2009).</li><li>Basu, R., Chen, Y., Quann, E. J., Huse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+variable+hinge+region+of+novel+PKCs+determines+localization+to+distinct+regions+of+the+immunological+synapse.">The variable hinge region of novel PKCs determines localization to distinct regions of the immunological synapse.</a> PLoS One. 9, 1-8 (2014).</li><li>Liu, X., Kapoor, T. M., Chen, J. K., Huse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diacylglycerol+promotes+centrosome+polarization+in+T+cells+via+reciprocal+localization+of+dynein+and+myosin+II.">Diacylglycerol promotes centrosome polarization in T cells via reciprocal localization of dynein and myosin II.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 110, 11976-11981 (2013).</li><li>Quann, E. J., Liu, X., Altan-Bonnet, G., Huse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cascade+of+protein+kinase+C+isozymes+promotes+cytoskeletal+polarization+in+T+cells.">A cascade of protein kinase C isozymes promotes cytoskeletal polarization in T cells.</a> Nat. Immunol. 12, 647-654 (2011).</li><li>Boniface, J. J., Reich, Z., Lyons, D. S., Davis, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermodynamics+of+T+cell+receptor+binding+to+peptide-MHC:+evidence+for+a+general+mechanism+of+molecular+scanning.">Thermodynamics of T cell receptor binding to peptide-MHC: evidence for a general mechanism of molecular scanning.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 96, 11446-11451 (1999).</li><li>Garboczi, D. N., Hung, D. T., Wiley, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HLA-A2-peptide+complexes:+refolding+and+crystallization+of+molecules+expressed+in+Escherichia+coli+and+complexed+with+single+antigenic+peptides.">HLA-A2-peptide complexes: refolding and crystallization of molecules expressed in Escherichia coli and complexed with single antigenic peptides.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 89, 3429-3433 (1992).</li><li>Huse, M., Lillemeier, B. F., Kuhns, M. S., Chen, D. S., Davis, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+use+two+directionally+distinct+pathways+for+cytokine+secretion.">T cells use two directionally distinct pathways for cytokine secretion.</a> Nat. Immunol. 7, 247-255 (2006).</li><li>Abeyweera, T. P., Merino, E., Huse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+signaling+blocks+activating+receptor+clustering+and+induces+cytoskeletal+retraction+in+natural+killer+cells.">Inhibitory signaling blocks activating receptor clustering and induces cytoskeletal retraction in natural killer cells.</a> J. Cell Biol. 192, 675-690 (2011).</li><li>Nguyen Duc, T., Huse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Generalizable+Platform+for+the+Photoactivation+of+Cell+Surface+Receptors.">A Generalizable Platform for the Photoactivation of Cell Surface Receptors.</a> ACS Chem. Biol. 10, 2435-2440 (2015).</li><li>Airan, R. D., Thompson, K. R., Fenno, L. E., Bernstein, H., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporally+precise+in+vivo+control+of+intracellular+signalling.">Temporally precise in vivo control of intracellular signalling.</a> Nature. 458, 1025-1029 (2009).</li><li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+control+of+chemokine+receptor+signal+and+T-cell+migration.">Optogenetic control of chemokine receptor signal and T-cell migration.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 111, 6371-6376 (2014).</li><li>Levskaya, A., Weiner, O. D., Lim, W. A., Voigt, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporal+control+of+cell+signalling+using+a+light-switchable+protein+interaction.">Spatiotemporal control of cell signalling using a light-switchable protein interaction.</a> Nature. 461, 997-1001 (2009).</li><li>Guntas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+an+improved+light-induced+dimer+(iLID)+for+controlling+the+localization+and+activity+of+signaling+proteins.">Engineering an improved light-induced dimer (iLID) for controlling the localization and activity of signaling proteins.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 112, 112-117 (2015).</li><li>Wu, Y. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetically+encoded+photoactivatable+Rac+controls+the+motility+of+living+cells.">A genetically encoded photoactivatable Rac controls the motility of living cells.</a> Nature. 461, 104-108 (2009).</li><li>Pathak, G. P., Vrana, J. D., Tucker, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+control+of+cell+function+using+engineered+photoreceptors.">Optogenetic control of cell function using engineered photoreceptors.</a> Biol. cell/under auspices Eur. Cell Biol. Organ. 105, 59-72 (2014).</li><li>Grusch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatio-temporally+precise+activation+of+engineered+receptor+tyrosine+kinases+by+light.">Spatio-temporally precise activation of engineered receptor tyrosine kinases by light.</a> EMBO J. 33, 1713-1726 (2014).</li><li>Yi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centrosome+repositioning+in+T+cells+is+biphasic+and+driven+by+microtubule+end-on+capture-shrinkage.">Centrosome repositioning in T cells is biphasic and driven by microtubule end-on capture-shrinkage.</a> J. Cell Biol. 202, 779-792 (2013).</li></ol>

हाल के वर्षों में, प्रकाश सेलुलर प्रक्रियाओं के spatiotemporally नियंत्रित सक्रियण के लिए एक उत्कृष्ट उपकरण के रूप में उभरा है । विभिंन तरीकों से विकसित किया गया है, जुड़े लाभ और नुकसान के साथ प्रत्येक । यहां वर्?...

टी लिम्फोसाइटों (टी कोशिकाओं) सेल सतह MHC के संदर्भ में प्रदर्शित प्रतिजनी पेप्टाइड्स पहचानने से सेलुलर प्रतिरक्षा में एक केंद्रीय भूमिका निभाते हैं । प्रतिजन मांयता है, जो TCR द्वारा मध्यस्थता है, भोली टी कोशिकाओं के भेदभाव ड्राइव और cytolytic और प्रभाव आबादी द्वारा संचार प्रतिक्रियाओं के वितरण को बढ़ावा देता है । TCR सगाई भी सेलुलर वास्तुकला में नाटकीय परिवर्तन लाती है । मिनट के भीतर, टी कोशिकाओं प्रतिजन के पक्ष पर gloms-प्रस्तुत सेल (APC), एक ध्रुवीय प्रतिरक्षा synapse (है) के रूप में जाना जाता इंटरफेस बनाने1,2। साइटोकिंस के दिशात्मक रिलीज को सक्षम करने या, साइटोटोक्सिक टी लिम्फोसाइटों (CTLs), lytic प्रोटीन है कि APC नष्ट करने के मामले में द्वारा potentiates टी सेल प्रभाव प्रतिक्रियाओं है ।
pMHC द्वारा TCR सगाई कई बहाव अनुकूलक अणुओं की तेजी से फास्फारिलीकरण, टी कोशिकाओं के सक्रियकरण के लिए लिंक सहित (अक्षांश), जो अंततः मजबूत synaptic cytoskeleton के remodeling को बढ़ावा देता है लाती है 2 । Cortical रेशा actin (एफ actin) ड्राइव टी APC सतह पर फैल सेल, और फिर एक कुंडलाकार में एफ-actin संचय द्वारा विशेषता संरचना में हल करता है परिधि और केंद्र से कमी है । एफ actin अंगूठी गठन कसकर microtubule आयोजन केंद्र (MTOC, भी टी कोशिकाओं में centrosome कहा जाता है) के उंमुखीकरण के लिए युग्मित है बस अंतरफलक के केंद्र के नीचे एक स्थिति के लिए । दोनों ईवेंट्स प्रारंभिक antigen पहचान के मिनट के भीतर हो और जिसमें क्रमिक सक्रियण ईवेंट्स और प्रभाव प्रतिसाद हो वास्तु प्रसंग स्थापित करें ।
अध्ययन करने के लिए, विभिंन प्रयोगशालाओं दृष्टिकोण है जिसमें APC एक कांच की सतह है कि या तो शामिल मैटीरियल TCR लाइगैंडों है या एक लिपिड bilayer है कि खुद लाइगैंडों3,4शामिल का समर्थन करता है की जगह है विकसित किया है । टी कोशिकाओं के रूप में इन सतहों कि कुल आंतरिक प्रतिबिंब प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप (TIRF) या फोकल माइक्रोस्कोपी द्वारा imaged किया जा सकता है पर संपर्कों की तरह है, जल्दी टी सेल सक्रियण के उच्च संकल्प अध्ययन को सक्षम करने और गठन है ।
हालांकि इन तरीकों को पूरी तरह से इकट्ठे के उत्कृष्ट दृश्य के लिए अनुमति दी है, TCR निंनलिखित संकेत के बहुत: pMHC बंधाव सेकंड के भीतर होता है, TCR सक्रियण के बाद की घटनाओं के अनुक्रम का निर्धारण सही प्रयास उलझी . इस मुद्दे को दरकिनार करने के लिए एक photoactivation दृष्टिकोण विकसित किया गया है, जिसमें photoactivatable pMHC को TCR सक्रियण5,6,7का spatiotemporal नियंत्रण प्राप्त करने के लिए प्रयोग किया जाता है । इस प्रणाली में, टी कोशिकाओं कांच सतहों photoactivatable pMHC युक्त है कि गैर है stimulatory पराबैंगनी (यूवी) प्रकाश के साथ विकिरणित तक TCR के लिए संलग्न हैं । टी सेल के नीचे सतह के एक माइक्रोन आकार क्षेत्र के यूवी विकिरण एक stimulatory क्षेत्र है कि टी सेल द्वारा मांयता प्राप्त किया जा सकता है बनाने photocage निकालता है । बाद संकेतन घटनाओं और cytoskeletal remodeling तो आनुवंशिक रूप से इनकोडिंग फ्लोरोसेंट पत्रकारों का उपयोग कर निगरानी कर रहे हैं । दो photoactivatable के संस्करण एंटीजन पेप्टाइड्स, मोठ cytochrome सी88-103 (एमसीसी) और ovalbumin257-264 (ओवा), जो कक्षा द्वितीय MHC i-Ek और वर्ग i MHC H2-kbके सन्दर्भ में प्रस्तुत किए गए हैं, क्रमशः विकसित (चित्र 1) । यह दोनों CD4+ टी एमसीसी-I-Ek (5C व्यक्त करने के लिए विशिष्ट कोशिकाओं के विश्लेषण में सक्षम बनाता है । C7, 2B4, या और TCRs) और सीडी 8 + टी कोशिकाओं के लिए विशिष्ट ओवा-H2-K b (OT1 TCR व्यक्त करना). 
पिछले एक दशक से अधिक, TCR photoactivation और इमेजिंग दृष्टिकोण को जल्दी TCR संकेतन कदम की सटीक कैनेटीक्स स्थापित करने के लिए उपयोग किया गया है और भी आणविक रास्ते की पहचान करने के लिए ध्रुवीकरण cytoskeletal remodeling5, ६ , 7 , 8 , 9 , 10. उदाहरण के लिए, परख का निर्धारण करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई थी कि APC की ओर centrosome उंमुखीकरण लिपिड दूसरा दूत diacylglycerol के एक स्थानीयकृत ढाल द्वारा मध्यस्थता है पर केंद्रित है । यह प्रत्याशित है कि इस पद्धति के अनुप्रयोगों के लिए मूल्यवान है कि मांग उच्च टी सेल समारोह के संकल्प इमेजिंग विश्लेषण जारी रहेगा ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1152">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">Nunc Lab-Tek Chambered Coverglass</td>
			<td style="width:211px;">Thermofischer Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">155361</td>
			<td style="width:443px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Poly-L-lysine hydrobromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2636</td>
			<td>Will need to make Biotinylated Poly-L-Lysine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EZ-Link NHS-Biotin</td>
			<td>Thermofischer Scientific</td>
			<td align="right">20217</td>
			<td>Will need to make Biotinylated Poly-L-Lysine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Streptavidin</td>
			<td style="width:211px;">Thermofischer Scientific</td>
			<td align="right">434301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BirA-500: BirA biotin-protein ligase standard reaction kit</td>
			<td>Avidity</td>
			<td>BirA500</td>
			<td>Will be used to biotinylate proteins</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Biotinylated Hb I-EK&#160;</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For protein folding, see reference 6. For biotinylation, use BirA kit</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Biotinylated NPE-MCC I-EK&#160;</td>
			<td>Anaspec</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Custom NPE-MCC (H-ANERADLIAYL-K(Nvoc)-QATK-OH) can be purchased from Anaspec</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Biotinylated &#945;H2-Kk antibody</td>
			<td style="width:211px;">BD Biosciences</td>
			<td align="right">553591</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Biotinylated NPE-OVA H2-Kb</td>
			<td style="width:211px;">Anaspec</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Custom NPE-OVA (H-SIINFE-K(Nvoc)-L-OH) can be purchased from Anaspec</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Biotinylated KAVY H2-Db&#160;</td>
			<td style="width:211px;">Anaspec</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Custom synthesized protein (KAVYDFATL) can be purchased from Anaspec</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biotinylated ICAM1&#160;</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For protein folding, see reference in protocol. For biotinylation, use BirA kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">Hand held UV lamp</td>
			<td style="width:211px;">UVP</td>
			<td style="width:119px;">UVGL-25</td>
			<td>Lamp is held &#60; 1 cm from the sample.&#160; 30 s of 365 light is sufficient for detectable decaging, 20 min for quantitative decaging.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">Olympus IX-81 OMAC TIRF system.</td>
			<td style="width:211px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Additional information about the imaging system can be found in Figure 6</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:379px;">Mosaic digital diaphragm</td>
			<td style="width:211px;">Andor</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:379px;">Slidebook software</td>
			<td style="width:211px;">Intelligent Imaging Innovations</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatial and temporal control of t cell activation using a photoactivatable agonist

टी लिम्फोसाइटों तेजी से, ध्रुवीय संकेतन में संलग्न हैं, TCR सक्रियण के बाद मिनट के भीतर होने वाली । यह प्रतिरक्षा synapse, एक छवि कक्ष-सेल जंक्शन है कि टी सेल सक्रियण और दिशाहीन लक्ष्य प्रभाव प्रतिक्रियाओं को नियंत्रित करता है के गठन लाती है । इन प्रक्रियाओं को प्रभावी ढंग से अध्ययन करने के लिए, एक इमेजिंग दृष्टिकोण है कि तेजी से कब्जा करने के लिए सिलवाया है, ध्रुवीकरण प्रतिक्रियाओं आवश्यक है । यह प्रोटोकॉल ऐसी प्रणाली का वर्णन करता है, जो एक photoactivatable पेप्टाइड-प्रमुख histocompatibility कॉम्प्लेक्स (pMHC) पर आधारित होती है जो पराबैंगनी प्रकाश के संपर्क में आने तक गैर-stimulatory है. लक्षित decaging videomicroscopy प्रयोगों के दौरान इस एजेंट के TCR सक्रियण और अनुवर्ती सेलुलर प्रतिक्रियाओं के उच्च-रिज़ॉल्यूशन निगरानी की सटीक spatiotemporal नियंत्रण द्वारा कुल आंतरिक प्रतिबिंब (TIRF) इमेजिंग सक्षम करता है । यह दृष्टिकोण भी आनुवंशिक और औषधीय गड़बड़ी रणनीतियों के साथ संगत है । यह अच्छी तरह से परिभाषित आणविक रास्ते के विधानसभा के लिए अनुमति देता है कि TCR ध्रुवीकरण cytoskeletal संरचनाओं कि आबाद प्रतिरक्षा synapse के गठन के लिए संकेतन लिंक ।

photoactivation और इमेजिंग दृष्टिकोण अवलोकन और तेजी से सतही ठहराव, ध्रुवीकरण संकेत प्रतिक्रियाओं के लिए अनुमति देता है । अपनी क्षमताओं को समझाने के लिए, यहां reproduced एक TCR-प्रेरित तमंचा संचय और centrosome reओरिए...

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Spatial and Temporal Control of T Cell Activation Using a Photoactivatable Agonist

एक Photoactivatable एगोनिस्ट का उपयोग कर टी सेल सक्रियण के स्थानिक और लौकिक नियंत्रण

यह प्रोटोकॉल टी सेल सक्रियण के सटीक spatiotemporal नियंत्रण को सक्षम करने, photoactivatable पेप्टाइड-MHC का उपयोग कर टी लिम्फोसाइटों को सक्रिय करने के लिए एक इमेजिंग-आधारित पद्धति का वर्णन करता है ।

T lymphocytes engage in rapid, polarized signaling, occurring within minutes following TCR activation. This induces formation of the immunological ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

माउस टी कोशिकाओं में टी सेल रिसेप्टर्स की रेट्रोवायरल transduction

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

भ्रष्टाचार बनाम मेजबान रोग के प्रेरण और<em&gt; Vivo में</em&gt; टी सेल निगरानी एक MHC-मिलान murine मॉडल का उपयोग

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Artificial Antigen Presenting Cell (aAPC) Mediated Activation and Expansion of Natural Killer T Cells

Artificial Antigen Presenting Cell aAPC Mediated Activation and Expansion of Natural Killer T Cells

कृत्रिम एंटीजन सेल (aAPC) मध्यस्थता सक्रियकरण और प्राकृतिक हत्यारा टी कोशिकाओं के विस्तार पेश

Natural killer T (NKT) cells are a unique subset of T cells that display markers characteristic of both natural killer (NK) cells and T cells1. Unlike ...

Static Adhesion Assay for the Study of Integrin Activation in T Lymphocytes

टी lymphocytes में Integrin से सक्रियण के अध्ययन के लिए स्टेटिक आसंजन परख

T lymphocyte adhesion is required for multiple T cell functions, including migration to sites of inflammation and formation of immunological synapses with ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

माउस भोले सीडी 4<sup&gt; +</sup&gt; टी सेल अलगाव और<em&gt; इन विट्रो</em&gt; टी सेल सबसेट में भेदभाव

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Cortical Actin Flow in T Cells Quantified by Spatio-temporal Image Correlation Spectroscopy of Structured Illumination Microscopy Data

संरचित रोशनी माइक्रोस्कोपी डेटा की spatio- लौकिक छवि सहसंबंध स्पेक्ट्रोस्कोपी द्वारा मात्रा टी कोशिकाओं में cortical एक्टिन प्रवाह

Filamentous-actin plays a crucial role in a majority of cell processes including motility and, in immune cells, the formation of a key cell-cell ...

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

एक<em&gt; इन विट्रो</em&gt; रक्त मस्तिष्क बाधा मुक़ाबला स्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग कर के आदर्श: टी सेल endothelial सेल बातचीत पर ध्यान देने के

Breakdown of the blood-brain barrier (BBB) is a critical step in the development of autoimmune diseases such as multiple sclerosis (MS) and its animal ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

टी सेल Alloreactivity का मापन इमेजिंग फ्लो का उपयोग करना

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Highly Multiplexed, Super-resolution Imaging of T Cells Using madSTORM

बेहद मल्टीप्लेक्जड, सुपरस्टोयलिंग इमेजिंग टी सेल

Imaging heterogeneous cellular structures using single molecule localization microscopy has been hindered by inadequate localization precision and ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

Vivo में एक टीकाकरण मॉडल का उपयोग कर प्रतिजन-विशिष्ट टी-सेल Cytolytic फ़ंक्शन का पता लगाने के लिए परख

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...