Name: establishment of an extracellular acidic ph culture system
Uploaded: 2017-11-19T14:00:00
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우리 시스템 생물학 및 의학, RCAST, 도쿄의 대학에 대 한 게놈 과학의 부 및 연구실의 회원을 감사합니다. 우리는 특히 박사 H. 油, 박사 토니 고다마, (LSBM, RCAST, 도쿄의 대학), 감사 박사 K. 富, 박사 토니 요시다, 및 박사 대답 유용한 토론 및 지원에 대 한 Kunisato (쿄와 Hakko 기린 (주)). 이 작품 일부에 의해 지원 되었다 특정에 대 한 젊은 과학자 (A) (26710005, 방법), 선진적인 과학 연구에 대 한 혁신적인 지역 (26116711 16 H 01567, 방법), 그리고 도전에 대 한 특정 교육, 문화, 스포츠, 과학 및 기술 일본, 다케다 과학 재단 (러브), 암 연구 (러브), 고바야시 재단 및 암 연구에 대 한 프로젝트의 예비 연구 (16 K 14605, 방법) 및 치료 진화 (P-만들기) 그리고 의료 연구 및 개발, 아메드 (러브) 일본 기관에서 혁신적인 암 제어에 대 한 실질적인 연구.

1입니다. 산 성 문화 매체의 준비
<ol><li>
제어 (pH 7.4)의 준비 및 낮은 pH (pH 6.8) 문화 매체
	<ol>
<li>4.75 g을 물 500 mL에 L-글루타민 없이 DMEM 분말의 분해.</li>
		<li>압력 꽉 병에서 0.33 M NaHCO3 솔루션을 준비 합니다. 주의: 그것은 이후 NaHCO3 CO2 가스가 열 하 고 열 분해 방출 압력 꽉 병을 사용 하는 것이 중요.</li>
		<li>압력솥 매체 고 솔루션입니다. 이러한 버퍼를 25 ?...

<ol>
	<li>Cairns, R. A., Harris, I. S., Mak, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cancer+cell+metabolism.">Regulation of cancer cell metabolism.</a> Nature reviews. Cancer. 11 (2), 85-95 (2011).</li><li>Chang, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+Competition+in+the+Tumor+Microenvironment+Is+a+Driver+of+Cancer+Progression.">Metabolic Competition in the Tumor Microenvironment Is a Driver of Cancer Progression.</a> Cell. 162 (6), 1229-1241 (2015).</li><li>Hsu, P. P., Sabatini, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+cell+metabolism:+Warburg+and+beyond.">Cancer cell metabolism: Warburg and beyond.</a> Cell. 134 (5), 703-707 (2008).</li><li>Gerweck, L. E., Seetharaman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+pH+gradient+in+tumor+versus+normal+tissue:+potential+exploitation+for+the+treatment+of+cancer.">Cellular pH gradient in tumor versus normal tissue: potential exploitation for the treatment of cancer.</a> Cancer research. 56 (6), 1194-1198 (1996).</li><li>Webb, B. A., Chimenti, M., Jacobson, M. P., Barber, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysregulated+pH:+a+perfect+storm+for+cancer+progression.">Dysregulated pH: a perfect storm for cancer progression.</a> Nature Rev. Cancer. 11 (9), 671-677 (2011).</li><li>Gatenby, R. A., Gillies, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+do+cancers+have+high+aerobic+glycolysis?.">Why do cancers have high aerobic glycolysis?.</a> Nature reviews. Cancer. 4 (11), 891-899 (2004).</li><li>McBrian, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histone+acetylation+regulates+intracellular+pH.">Histone acetylation regulates intracellular pH.</a> Mol Cell. 49 (2), 310-321 (2013).</li><li>Damaghi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+acidosis+in+the+tumour+microenvironment+selects+for+overexpression+of+LAMP2+in+the+plasma+membrane.">Chronic acidosis in the tumour microenvironment selects for overexpression of LAMP2 in the plasma membrane.</a> Nat Commun. 6, 8752 (2015).</li><li>Corbet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acidosis+Drives+the+Reprogramming+of+Fatty+Acid+Metabolism+in+Cancer+Cells+through+Changes+in+Mitochondrial+and+Histone+Acetylation.">Acidosis Drives the Reprogramming of Fatty Acid Metabolism in Cancer Cells through Changes in Mitochondrial and Histone Acetylation.</a> Cell Metab. 24 (2), 311-323 (2016).</li><li>Chen, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genomic+analysis+of+lactic+acidosis+and+acidosis+response+in+human+cancers.">The genomic analysis of lactic acidosis and acidosis response in human cancers.</a> PLoS genetics. 4 (12), e1000293 (2008).</li><li>Kondo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+Acidic+pH+Activates+the+Sterol+Regulatory+Element-Binding+Protein+2+to+Promote+Tumor+Progression.">Extracellular Acidic pH Activates the Sterol Regulatory Element-Binding Protein 2 to Promote Tumor Progression.</a> Cell Rep. 18 (9), 2228-2242 (2017).</li></ol>

여기, 우리는 간단한 산 성 pH 문화 시스템 및 그것의 평가 과정을 설명. 중간 산성화, 즉, 감소 된 중 탄산염 농도, 젖 산 추가, 및 HCl 또한의 세 가지 방법의 조합을 사용 pH-응답 메커니즘을 철저 하 게 조사 하 고 다른 종양 세포 응답을 비교 하 산소 또는 양분 기아 같은 microenvironmental 조건.
이 방법의 키 문화 매체에서 중 탄산염, 젖 산, 그리고 HCl의 적절 한 농도 결정 ?...

종양 microenvironment 종양 진행과 암 세포 물질 대사1,2,3에 중요 한 역할을 재생합니다. 암 세포는 저 산소 증, 영양 부족, 세포 외 산 성 pH (페) 등 조건에 자주 노출 됩니다. 그러나, 종양 진행에 pHe의 역할은 하지 명확히으로 광범위 하 게 산소 또는 양분 기아에서. 종양 조직에 페 산 성, 약 산도 6.84,5에 도달 될 수 있다. 산 성 pH에서 양성자 (H+)의 호 기성 및 혐 기성 glycolytic 배설 발생 하 고 확산 암에 의해 젖 산 세포5,6.
최근 연구 결과 밝혀 그 산 성 페 유도 히스톤 deacetylation, 지방산 산화 및 심한 산 성 환경7,8,,910에 적응에 대 한 산 성 리소좀의 exocytosis. 그러나, 어떤 세포 외 산성화를 통해 장치 암 동작 및 산 성 pH 종양 microenvironment 레 귤 레이 터 완전히 결정 되지 않은 키의 id 영향을 줍니다. 또한, 몇 가지 보고서 중 탄산염, 트리 스, 파이프와 HEPES 버퍼 또는 젖 산 및 HCl, 불분명 한 농도 사용 하 여 다양 한 산 성 pH 미디어 설명 하지만 중간도 포괄적인의 조정 안정성을 설명 하기 위해 몇 가지 보고서 여러 독특한 산 성 문화 미디어7,8,,910 의 비교
키 레 귤 레이 터 및 extracellular 산성화의 맥락에서 암 세포의 대사 변화를 명료 하 우리 산 성 페를 유지 하기 위해 간단한 생체 외에서 문화 모델을 설립 하 고 암 세포11페의 역할을 조사 했다. 우리 37 ° C에서 5%에서 6.8의 pHe와 산 성 문화 매체를 유지 하는이 메서드를 사용 하 여 CO2, 문화 매체에서 감소 중 탄산염 농도 사용 하 여. pH 7.4 정상적으로 사용 하 고 매체를 제어. 중간 pH는 적어도 24 시간 동안 되었고 PANC-1과 AsPC 1 췌장암 세포의 문화 중 72 h에 의해 점차적으로 감소. 향상 된 분해 가속 양성자 뿐만 아니라 젖 산7,,89의 배설, 때문에 우리 또한 감소 하는 것 보다 젖 산을 추가 하 여 유도 하는 젖 산 증을 흉내 낸 문화 메서드를 설립 합니다 중 탄산염 농도입니다. 또한, 매체에서 HCl을 이용한 산 성 페 산 성 pH 배양 세포 응답 하지 않은 중 탄산염의 감소 된 농도 때문 가능성을 제외 수 있습니다. 또한, 다양 한 미디어를 사용 하 여 다른 중 탄산염 농도와 7.4을 6.4의 ph, 우리 세포 응답에 페 효과의 정도 평가할 수 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium&#8220;Nissui&#8221; 2</td>
			<td>Nissui</td>
			<td>05919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher&#160;</td>
			<td>10438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Wako</td>
			<td>191-01305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine solution</td>
			<td>Thermo Fisher&#160;</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin Mixed Solution(Stabilized)</td>
			<td>Nacalai</td>
			<td>09367-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5g/l-Tripsin/0.53mmol/l-EDTA Solution, with Phenol Red</td>
			<td>Nacalai</td>
			<td>32778-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5%-Trypan Blue Stain Solution</td>
			<td>Nacalai</td>
			<td>29853-34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactic acid solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>252476</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H9892</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Plus Mini Kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>74134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript IV First-Strand Synthesis System</td>
			<td>Thermo Fisher&#160;</td>
			<td>18091</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power SYBR Green PCR Master Mix&#160;</td>
			<td>Applied Biosystems&#160;</td>
			<td>4368702&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell lines</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PANC-1</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AsPC-1</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1682</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KMS-6</td>
			<td>JCRB Cell Bank</td>
			<td>JCRB0432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TIG</td>
			<td>JCRB Cell Bank</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRC9</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HUVEC</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer with Wi-Fi</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>ND-ONE-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuantStudio 5 Real-Time PCR System</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>CRL-1682</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of an extracellular acidic ph culture system

종양 microenvironment 영양 기아, 저 산소 증 등의 암 진행 및 암에 중요 한 역할을 한다. 그러나, 종양의 적극성 및 그것의 기본 메커니즘에 산 성 세포 외 산도의 역할은 하지 광범위 하 게 연구 되었습니다 hypoxic 또는 영양소 고갈 조건에 비해. 또한, 산 성 세포 외 종양 microenvironment을 모방 하는 잘 정의 된 문화 방법 하지 완전히 보고 되었습니다.
여기는 간단한 생체 외에서 문화 메서드 중 탄산염 및 젖 산 증가 또는 문화 매체에서 HCl 농도 감소 산 성 세포 외 산도 사용 하 여 유지 하기 위해 선물이. 중간 pH는 적어도 24 시간 동안 되었고 72 h PANC-1과 AsPC 1 췌장암 세포의 문화에 따라 점차적으로 감소. 이 연구에서는 3 가지 산 성 미디어 조건 매우 upregulated pH 반응 유전자 MSMO1, INSIG1, 및 IDI1 와 같은 산소 또는 영양 기아. 에 비해 이 유전자의 upregulation 산 성 pH의 표식으로 사용할 수 있습니다. 이 간단한 기술은 microenvironment 산 성 종양에서 종양 악성의 기본 메커니즘을 명료 하 게 도움이 됩니다. 따라서, 우리의 세포 외 산 성 pH 문화 시스템 셀룰러 산 성 pH 응답 암 세포 뿐만 아니라 1 차 셀, 신장 관 세포는 다른 산 성 장애, 당뇨병 ketoacidosis, 관계 등에서 발견을 통해 유산 증, 신장 관 산 성 증, 그리고 호흡 증.

적절 한 중 탄산염 농도 결정 하려면 우리 0-8 m m NaHCO3 (문화 매체에서 최종 농도)의 범위에서 DMEM을 준비 하 고 ph 6.4-7.4 (그림 1)에서 이르는 문화 미디어를 준비 하는 데 성공 했다. 우리는 extracellular pH pH 6.8 단단한 종양4,5에 도달 하면 주장 이전 보고서에 따르면 8 m m NaHCO3 (pH 7.4) 제어 매체, ...

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Establishment of an Extracellular Acidic pH Culture System

산 성 종양 microenvironment 종양 진행에 중요 한 역할을 담당합니다. 암 세포 생체 외에서 에 산 성 세포 외 산도의 효과 평가 하기 위해 간단한 산 성 문화 시스템을 설립 했습니다.

세포 외 산 성 pH 문화 체계의 설립

Conditions of the tumor microenvironment, such as hypoxia or nutrient starvation, play critical roles in cancer progression and malignancy. However, the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Plant Cell Wall Extension (Creep) Induced by Acidic pH and by Alpha-Expansin

Measuring Plant Cell Wall Extension Creep Induced by Acidic pH and by Alpha-Expansin

측정 식물 세포 벽 확장 (크리프)는 산성 산도에 의해 및 알파 Expansin에 의해 유도된

Growing plant cell walls characteristically exhibit a property known as 'acid growth', by which we mean they are more extensible at low pH (&lt; 5) 1. The ...

연구

생물학

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

전 비켜</em이미징 및 미세 애플 리케이션에 적합> 치킨의 배아 문화 시스템

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...

The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System

회전 형 바틀 문화 시스템을 사용 로던트 전체 엠브료 문화의 방법

Whole embryo culture (WEC) technique has been developed in 1950's by New and his colleagues, and applied for developmental biology 1. Although development ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

무 혈청 전체 배아 배양 시스템에서 마우스 배아 개발

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

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The thyroid is a bilobated endocrine gland localized at the base of the neck, producing the thyroid hormones T3, T4, and calcitonin. T3 and T4 are ...

Development of an Insert Co-culture System of Two Cellular Types in the Absence of Cell-Cell Contact

세포 - 세포 연락이없는 두 세포 유형의 삽입 공동 배양 시스템 개발

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The insect fat body plays a central role in insect metabolism and nutrient storage, mirroring functions of the liver and fat tissue in vertebrates. Insect ...

Establishment of a Clonal Culture of Unicellular Conjugating Algae

단 세포 변화 조류의 클론 문화 설립

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