Name: investigating the detrimental effects of low pressure plasma sterilization on the survival of bacillus subtilis spores using live cell microscopy
Uploaded: 2017-11-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy at JoVE.com

המחברים תודה אנדריאה שרדר לסיוע טכני מעולה שלה במהלך חלקים של עבודה זו, Nikea ג'יי אולריך על הסיוע במהלך הצילומים וידאו. כן נרצה להודות לייל א סימונס על התרומה הנדיבה שלו של זנים Bacillus subtilis : LAS72 ו- LAS24. עבודה זו נתמכה חלקים על ידי מענקים מ קרן מחקר גרמני (DFG) Paketantrag (PlasmaDecon פאק 728) הפלסטינית (או 7/3-1), RM (2023 מו/2-1) ואת ה-DLR להעניק חיים ISS DLR-FuW-פרויקט, Programm RF-FuW, Teilprogramm 475 (F.M.F, M.R., חומרי גלם). F.M.F. נתמך על ידי מלגה לתואר שלישי של אסכולת מחקר מדעי החיים שטח (SpaceLife) הלמהולץ-הגרמני וחלל מרכז (DLR) בקלן, גרמניה, אשר מומן על ידי האגודה הלמהולץ (הלמהולץ-Gemeinschaft) על פני תקופה של שש שנים ( מענק מס VH-KO-300) וקיבל כספים נוספים מבית ה-DLR, לרבות המנהלים וחלל, המכון לרפואה התעשייה האווירית לישראל. התוצאות של מחקר זה ייכלל את עבודת הדוקטורט של פליקס מ פוקס.

1. ייצור נבג bacillus subtilis , טיהור
<ol><li>לייצור נבג, להעביר לילה מ ל תרבות של בהתאמה זן B. subtilis , בתוספת אנטיביוטיקה מתאימה, 200 מ ל כפול-כוח נוזלי שפר הנבגה לבינוני (לכל ליטר 16 גרם מרק מזין, אשלגן כלורי 2 g, 0.5 ג'י MgSO 4* 7 שעות2O, 2 מ ל 1 מ' Ca (3)2, 2 מ ל- 0.1 M-MnCl-2 * • 4 H2O, 2 ...

<ol>
	<li>Nicholson, W. L., Schuerger, A. C., Race, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Migrating+microbes+and+planetary+protection.">Migrating microbes and planetary protection.</a> Trends Microbiol. 17, 389-392 (2009).</li><li>COSPAR. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=COSPAR+Planetery+Protection+Policy.">COSPAR Planetery Protection Policy.</a> Space Research Today, COSPAR's Information Bulletin. 193, 1-14 (2015).</li><li>De Geyter, N., Morent, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonthermal+plasma+sterilization+of+living+and+nonliving+surfaces.">Nonthermal plasma sterilization of living and nonliving surfaces.</a> Annu Rev Biomed Eng. 14, 255-274 (2012).</li><li>Shimizu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cold+atmospheric+plasma+-+A+new+technology+for+spacecraft+component+decontamination.">Cold atmospheric plasma - A new technology for spacecraft component decontamination.</a> Planet. Space Sci. 90, 60-71 (2014).</li><li>Lerouge, S., Fozza, A. C., Wertheimer, M. R., Marchand, R., Yahia, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterilization+by+Low-Pressure+Plasma:+The+Role+of+Vacuum-Ultraviolet+Radiation.">Sterilization by Low-Pressure Plasma: The Role of Vacuum-Ultraviolet Radiation.</a> Plasma Polym. 5, 31-46 (2000).</li><li>Rossi, F., Kyli&#225;n, O., Rauscher, H., Gilliland, D., Sirghi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+low-pressure+plasma+discharge+for+the+decontamination+and+sterilization+of+medical+devices.">Use of a low-pressure plasma discharge for the decontamination and sterilization of medical devices.</a> Pure Appl. Chem. 80, 1939-1951 (2008).</li><li>Halfmann, H., Hauser, J., Awakowicz, P., Koller, M., Esenwein, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+double+inductively+coupled+low-pressure+plasma+for+sterilization+of+medical+implant+materials.">A double inductively coupled low-pressure plasma for sterilization of medical implant materials.</a> Biomed Tech (Berl). 53, 199-203 (2008).</li><li>Halfmann, H., Denis, B., Bibinov, N., Wunderlich, J., Awakowicz, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+most+efficient+VUV/UV+radiation+for+plasma+based+inactivation+of+Bacillus+atrophaeus+spores.">Identification of the most efficient VUV/UV radiation for plasma based inactivation of Bacillus atrophaeus spores.</a> J. Phys. D: Appl. Phys. 40, 5907 (2007).</li><li>Vaishampayan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+horneckiae+sp.+nov.,+isolated+from+a+spacecraft-assembly+clean+room.">Bacillus horneckiae sp. nov., isolated from a spacecraft-assembly clean room.</a> Int J Syst Evol Microbiol. 60, 1031-1037 (2010).</li><li>Mandic-Mulec, I., Stefanic, P., van Elsas, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecology+of+Bacillaceae.">Ecology of Bacillaceae.</a> Microbiol Spectr. 3, (2015).</li><li>Alekhova, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+of+bacteria+of+the+genus+Bacillus+on+board+of+international+space+station.">Diversity of bacteria of the genus Bacillus on board of international space station.</a> Dokl Biochem Biophys. 465, 347-350 (2015).</li><li>Claus, D., Bekerley, R. C. W., Sneath, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genus+Bacillus+Cohn+1872.">Genus Bacillus Cohn 1872.</a> Bergey's manual of systematic bacteriology. 2, 1105-1141 (1986).</li><li>Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spore+Resistance+Properties.">Spore Resistance Properties.</a> Microbiol Spectr. 2, (2014).</li><li>Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spores+of+Bacillus+subtilis:+their+resistance+to+and+killing+by+radiation,+heat+and+chemicals.">Spores of Bacillus subtilis: their resistance to and killing by radiation, heat and chemicals.</a> J Appl Microbiol. 101, 514-525 (2006).</li><li>Roth, S., Feichtinger, J., Hertel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Bacillus+subtilis+spore+inactivation+in+low-pressure,+low-temperature+gas+plasma+sterilization+processes.">Characterization of Bacillus subtilis spore inactivation in low-pressure, low-temperature gas plasma sterilization processes.</a> J Appl Microbiol. 108, 521-531 (2010).</li><li>Roth, S., Feichtinger, J., Hertel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+Deinococcus+radiodurans+to+low-pressure+low-temperature+plasma+sterilization+processes.">Response of Deinococcus radiodurans to low-pressure low-temperature plasma sterilization processes.</a> J Appl Microbiol. 109, 1521-1530 (2010).</li><li>Setlow, B., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+DNA+repair+in+Bacillus+subtilis+spore+resistance.">Role of DNA repair in Bacillus subtilis spore resistance.</a> J Bacteriol. 178, 3486-3495 (1996).</li><li>Schaeffer, P., Millet, J., Aubert, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catabolic+repression+of+bacterial+sporulation.">Catabolic repression of bacterial sporulation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 54, 704-711 (1965).</li><li>Simmons, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+responses+to+double-strand+breaks+between+Escherichia+coli+and+Bacillus+subtilis+reveals+different+requirements+for+SOS+induction.">Comparison of responses to double-strand breaks between Escherichia coli and Bacillus subtilis reveals different requirements for SOS induction.</a> J Bacteriol. 191, 1152-1161 (2009).</li><li>Raguse, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+of+Biological+Indicators+by+Uniformly+Distributing+Bacillus+subtilis+Spores+in+Monolayers+To+Evaluate+Enhanced+Spore+Decontamination+Technologies.">Improvement of Biological Indicators by Uniformly Distributing Bacillus subtilis Spores in Monolayers To Evaluate Enhanced Spore Decontamination Technologies.</a> Appl Environ Microbiol. 82, 2031-2038 (2016).</li><li>Horneck, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+of+bacterial+spores+in+space,+a+contribution+to+the+discussion+on+Panspermia.">Protection of bacterial spores in space, a contribution to the discussion on Panspermia.</a> Orig Life Evol Biosph. 31, 527-547 (2001).</li><li>Opretzka, J., Benedikt, J., Awakowicz, P., Wunderlich, J., Keudell, A. v. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+chemical+sputtering+during+plasma+sterilization+of+Bacillus+atrophaeus.">The role of chemical sputtering during plasma sterilization of Bacillus atrophaeus.</a> J. Phys. D: Appl. Phys. 40, 2826 (2007).</li><li>Stapelmann, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilization+of+low-pressure+plasma+to+inactivate+bacterial+spores+on+stainless+steel+screws.">Utilization of low-pressure plasma to inactivate bacterial spores on stainless steel screws.</a> Int. J. Astrobiol. 13, 597-606 (2013).</li><li>Raguse, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+of+the+importance+of+the+spore+coat+structure+and+pigmentation+in+the+Bacillus+subtilis+spore+resistance+to+low-pressure+plasma+sterilization.">Understanding of the importance of the spore coat structure and pigmentation in the Bacillus subtilis spore resistance to low-pressure plasma sterilization.</a> J. Phys. D: Appl. Phys. 49, 285401 (2016).</li><li>Pandey, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+cell+imaging+of+germination+and+outgrowth+of+individual+Bacillus+subtilis+spores;+the+effect+of+heat+stress+quantitatively+analyzed+with+SporeTracker.">Live cell imaging of germination and outgrowth of individual Bacillus subtilis spores; the effect of heat stress quantitatively analyzed with SporeTracker.</a> PloS one. 8, e58972 (2013).</li></ol>

עיקור וסירוס של משטחים באמצעות בטמפרטורה נמוכה, פלזמה בלחץ נמוך היא חלופה מבטיח עיקור די קונבנציונלי הליכים כגון טיפול עם מייננת קרינה, כימיקלים (למשל גזים כמו H2O2 או אתילן אוקסיד) או חום לח ויבש23. שיטות העיקור רגילים מספקים בעיקר של עיקור יעיל, אך הם ידועים כדי...

יעד מרכזי של חקר החלל הוא החיפוש אחר חתימות של צורות חיים ושל מולקולות על גופים פלנטריים וירח אחרים במערכת השמש שלנו. העברת מיקרואורגניזמים או מולקולות כדור הארץ לאזורים קריטי של חקר הוא סיכון מסוים לפגיעה פיתוח, שלמות של החיים-זיהוי משימות על גופים פלנטריים כגון מאדים ואת אירופה1. ההנחיות הבינלאומי של הגנה על כוכבי הלכת, הוקמה על ידי הוועדה של שטח מחקר (COSPAR) בשנת 1967, לכפות חוקים נוקשים על משימות רובוטיות ומזומן כוכבי לכת אחרים, ירחים שלהם, אסטרואידים וגופים שמימיים אחרים ולווסת ניקוי ועיקור של חללית, רכיבי חומרה קריטיים מוקדמת להשיק כדי לשלול זיהום מיקרואורגניזמים יבשתי ולמנוע זיהום לחצות של גופים שמימיים2. במהלך העשור האחרון, היישום של הלא-thermal פלזמות צבר רחב לב במחקר ביו-רפואי, תזונה, כמו גם בחלל יישומים3,4,5. פלזמה-עיקור הוא אלטרנטיבה מבטיחה שיטות העיקור קונבנציונאלי כפי שהוא מציע איון חיידקים מהיר ויעיל6, בעת היותו עדין כדי רגיש וחומרים יציב חום. פלזמה הפרשות מכילות תערובת של תגובתי סוכני כגון פוטונים אולטרה סגול (UV) ולאחר ספקטרום אולטרה סגול ואקום (VUV) אשר להוביל איון מיקרוביאלי מהירה3אטומים מתרגש/נייטרלי, חלקיקים טעונים, רדיקלים חופשיים. במחקר זה, אנו משתמשים בלחץ נמוך פלזמה שנוצר על ידי זוגי בשילוב inductively פלזמה בלחץ נמוך (DICP) מקור7,8 כדי להשבית Bacillus subtilis endospores מופץ על זכוכית בדיקת השטח.
חיידקים גראם חיוביים של משפחת Bacillaceae מופצים באופן נרחב בבתי-גידול טבעיים של אדמה, משקעים אוויר כמו כמו דופן סביבות כגון מתקני חדר נקי, תחנת החלל הבינלאומית9,10 ,11. התכונה ברורים ביותר של הסוג של Bacillus היא יכולת ליצור עמידים מאוד endospores רדום (ןלהל נבגים) כדי לשרוד את התנאים שלילי, כגון דלדול מזין12. הנבגים עמידים בדרך כלל הרבה יותר מאשר עמיתיהם תא וגטטיבית מגוון של טיפולים, לחצים סביבתיים, כולל חום, UV, הקרנה גמא, לייבוש, הפרעה מכנית של כימיקלים רעילים, כגון המחמצנים חזק או סוכני שינוי ב- pH (נבדקה הפניות13,14) ולכן הם אובייקטים האידיאלי לבדיקת היעילות של שיטות איון מיקרוביאלי. מאז הדנ א הגנומי יעד עיקרי של טיפול פלזמה של15,חיידקים16, תיקון פלזמה-induced נגעים דנ א (למשל שוברת הד כפול) על נבג התחייה חיונית להישרדות של חיידקים13, 17.
לכן, אנחנו לומדים את קיבולת נביטה של נבגים ואת התפקיד של DNA לתקן במהלך נבג, תוצר לאחר בטיפול את הנבגים עם לחץ נמוך ארגון פלזמה על-ידי נבגים בודדים הבאים ותיקון שלהם ביטוי של DNA מתויג קרינה פלואורסצנטית חלבון רקה עם מיקרוסקופ פלורסצנטיות קונאפוקלית זמן לפתור. אנחנו נותנים הוראה צעד אחר צעד של הכנת B. subtilis נבגים ב monolayers להשגת תוצאות הבדיקה לשחזור, הטיפול של ספורה monolayers עם לחץ נמוך פלזמה עבור עיקור, הכנת פלזמה מטופלים נבגים עבור ultrastructural הערכה באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סריקה (SEM), וניתוח מיקרוסקופיה של תא חי ברמה של נבגים בודדים בהופעה עם ניטור פעיל הדנ א תיקון תהליכים המתרחשים בתוך התא בתגובה טיפול פלזמה.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Two substance nozzle (model 970-8)</td>
			<td>Schlick</td>
			<td>14,404</td>
			<td>230 V, 50 Hz, D 4.484/8, 0.8 mm bore diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria Bertani Medium</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>70122-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube connectors</td>
			<td>Festo</td>
			<td>n/a</td>
			<td>G 1/8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetvalve DO35-3/2NC-G018-230AC</td>
			<td>Bosch Rexroth</td>
			<td>820005100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLN Polyamid tube</td>
			<td>Festo</td>
			<td>558206</td>
			<td>d = 6 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48300-026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Timer 550-2-C</td>
			<td>Gefran</td>
			<td>F000074</td>
			<td>220 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>attofluor cell chamber</td>
			<td>Menzel, Fisher Ref.</td>
			<td>3406816</td>
			<td>d=25 mm, round</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4*7 H2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>13152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ca(NO3)2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>202967</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl2 * 4 H2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>244589</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeSO4 * 7H2O</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>13446-34-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>215422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P9541-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nutrient Broth (NB)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>105443</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria-Bertani (LB)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>110283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-wellplate</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>243656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 780, Axio Observer Z1</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy GmbH</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leo 1530 Gemini</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy GmbH</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN 2 and ZEN lite 2012 (Software)</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy GmbH</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SigmaPlot, version 13.0 (Statistic software)</td>
			<td>Systat GmbH, Erkrath, Germany</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Attofluor cell chamber</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A7816</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#181;-Dish 35 mm, high Grid-500 Glass Bottom</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>81168</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

investigating the detrimental effects of low pressure plasma sterilization on the survival of bacillus subtilis spores using live cell microscopy

פלזמה-עיקור הוא אלטרנטיבה מבטיחה שיטות העיקור קונבנציונאלי למטרות תעשייה, קליני, ומטרות בחלל. לחץ נמוך פלזמה (LPP) הפרשות מכיל קשת רחבה של מינים הפעילים, אשר להוביל איון מיקרוביאלי מהירה. ללמוד את היעילות ואת מנגנוני עיקור מאת ל"י/נ, אנו משתמשים נבגים של האורגניזם מבחן Bacillus subtilis בגלל עמידותם יוצאת דופן מפני תהליכי עיקור קונבנציונלי. אנו מתארים את הייצור של B. subtilis נבג monolayers, תהליך עיקור פלזמה לחץ נמוך ב כור פלזמה inductively בשילוב כפול, אפיון מורפולוגיה נבג באמצעות מיקרוסקופיית אלקטרונים סריקה (SEM), ו ניתוח של נביטה, תוצר של נבגים על ידי מיקרוסקופ תא חי. יעד עיקרי של מינים פלזמה הוא חומר גנטי (DNA), תיקון פלזמה-induced נגעים DNA בעת התחייה נבג הוא חיוני להישרדות של האורגניזם. כאן, אנחנו לומדים את קיבולת נביטה של נבגים ותיקון התפקיד של ה-DNA במהלך נבג, תוצר לאחר הטיפול עם ל"י/נ באיתור מתויג fluorescently DNA תיקון חלבונים (רקה) עם זמן לפתור פלורסצנטיות קונאפוקלית מיקרוסקופ. מטופלים, נבג לא מטופל monolayers הם מופעלים עבור נביטה, דמיינו במיקרוסקופ הפוכה קונאפוקלית תא חי לאורך זמן לעקוב אחרי התגובה של נבגים בודדים. התצפיות שלנו לחשוף השבר של הנבטת ו. הנוכחי נבגים תלויה משך הטיפול-LPP להגיע למינימום לאחר 120 ס' רקה-YFP קרינה פלואורסצנטית (חלבון פלורסצנטיות צהוב) זוהה רק כמה נבגים ופיתח בכל . הנוכחי תאים עם העלאה קלה בנבגים שטופלו ל"י/נ יתר על כן, חלק מהחיידקים וגטטיבי נגזר שטופלו LPP נבגים הראו עלייה ציטופלזמה, נטו lyse. השיטות שתואר לניתוח של נבגים בודדים יכול להיות למופת לחקר היבטים אחרים של נבג ותוצר.

ההישרדות של מטופלים-פלזמה B. subtilis נבגים
טיפול פלזמה של נבגים B. subtilis להשתמש בתוכנית לימוד ירידה בהישרדות עם הגדלת משך הטיפול פלזמה (איור 2). נבגים של המתח לבטא את רקה-ין דבוקה YFP הראה הישרדות עקומות הדומה נבגים של...

Watch this Scientific Journal Video about Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy at JoVE.com

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

חוקרים את מזיקה אפקטים של נמוך לחץ פלזמה עיקור על ההישרדות של Bacillus subtilis הנבגים באמצעות Live התא מיקרוסקופ

פרוטוקול זה ממחיש את הצעדים החשובים רצופים הנדרש כדי להעריך את הרלוונטיות של ניטור חיוניות פרמטר בתהליכי תיקון ה-DNA להחיות Bacillus subtilis נבגים לאחר הטיפול עם לחץ נמוך פלזמה על-ידי מעקב מתויג פלורסצנטיות DNA תיקון חלבונים באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים זמן לפתור קונפוקלית וסריקה.

Plasma sterilization is a promising alternative to conventional sterilization methods for industrial, clinical, and spaceflight purposes. Low pressure ...

Research

JoVE Journal

Biology

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Imaging Mismatch Repair and Cellular Responses to DNA Damage in Bacillus subtilis

Imaging Mismatch Repair and Cellular Responses to DNA Damage in Bacillus subtilis

הדמיה תיקון Mismatch ותגובות נייד נזק לדנ&quot;א Bacillus subtilis</em

Both prokaryotes and eukaryotes respond to DNA damage through a complex set of physiological changes. Alterations in gene expression, the redistribution ...

Identifying the Effects of BRCA1 Mutations on Homologous Recombination using Cells that Express Endogenous Wild-type BRCA1

זיהוי השפעות של מוטציות BRCA1 על רקומבינציה הומולוגיים באמצעות תאים אקספרס BRCA1 אנדוגני wild-type

The functional analysis of missense mutations can be complicated by the presence in the cell of the endogenous protein. Structure-function analyses of the ...

FRET Microscopy for Real-time Monitoring of Signaling Events in Live Cells Using Unimolecular Biosensors

סריג מיקרוסקופי לניטור בזמן אמת של אירועי איתות בתאים חיים באמצעות Biosensors Unimolecular

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET) microscopy  continues to gain increasing interest as a technique for real-time monitoring  of biochemical ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

חי הדמיה של חיסול תאים אפופטוטיים במהלך<em&gt; דרוזופילה</em&gt; עובר

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Analyzing Craniofacial Morphogenesis in Zebrafish Using 4D Confocal Microscopy

ניתוח Craniofacial המורפוגנזה בדג הזברה שימוש 4D מיקרוסקופיה confocal

Time-lapse imaging is a technique that allows for the direct observation of the process of morphogenesis, or the generation of shape. Due to their optical ...

Light Sheet Fluorescence Microscopy of Plant Roots Growing on the Surface of a Gel

מיקרוסקופ פלואורסצנטי גיליון אור של שורשי הצמח גדל על פני השטח של ג&#39;ל

One of the key questions in understanding plant development is how single cells behave in a larger context of the tissue. Therefore, it requires the ...

Standardized Method for High-throughput Sterilization of Arabidopsis Seeds

שיטה סטנדרטית עבור תפוקה גבוהה עיקור של תודרנית זרעים

Arabidopsis thaliana (Arabidopsis) seedlings often need to be grown on sterile media. This requires prior seed sterilization to prevent the growth of ...

Single-cell Microfluidic Analysis of Bacillus subtilis

Single-cell Microfluidic Analysis of Bacillus subtilis

ניתוח Microfluidic תא בודד של Bacillus subtilis

Microfluidic technology overcomes many of the limitations to traditional analytical methods in microbiology. Unlike bulk-culture methods, it offers ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

הכנת הדוגמא ביולוגית על ידי הקפאת בלחץ גבוה, שיפור ניגודיות בסיוע מיקרוגל, ושרף מינימלי הטמעה של אמצעי הדמיה

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

הדמיה חיה של מחזור החיים של החיידק טורף Bdellovibrio bacteriovorus באמצעות מיקרוסקופית פלואורסצני זמן לשגות

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...