Name: investigating the detrimental effects of low pressure plasma sterilization on the survival of bacillus subtilis spores using live cell microscopy
Uploaded: 2017-11-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy at JoVE.com

Os autores Andrea Schröder agradecer a excelente assistência técnica durante as partes deste trabalho e Nikea J. Ulrich pela sua assistência durante a gravação do vídeo. Gostaríamos também de agradecer a Lyle A. Simmons por sua generosa doação das estirpes de Bacillus subtilis : LAS72 e LAS24. Este trabalho foi financiado em partes por subsídios desde a Fundação de pesquisa alemã (DFG) Paketantrag (PlasmaDecon PAK 728) para PA (AW 7/3-1) e RM (MO 2023/2-1) e o DLR concedem vida de ISS DLR-FuW-Projekt, Programm RF-FuW, Teilprogramm 475 (F.M.F, M.R. e R.M.). F.M.F. foi apoiado por uma bolsa de doutoramento da escola de Helmholtz espaço Life Sciences Research (SpaceLife) no centro aeroespacial alemão (DLR), em Colónia, na Alemanha, que foi financiado pela Associação Helmholtz (Helmholtz-Gemeinschaft) durante um período de seis anos ( N º de Grant VH-ko-300) e recebeu fundos adicionais do DLR, incluindo o Conselho Executivo aeroespacial e o Instituto de Medicina Aeroespacial. Os resultados deste estudo serão incluídos na tese de doutorado de Felix M. Fuchs.

1. produção de esporos de bacillus subtilis e purificação
<ol><li>Para a produção de esporos, transferir uma cultura da noite 5 mL das respectivas estirpe de b. subtilis , suplementada com antibióticos apropriados, para 200 mL dose dupla Schaeffer esporulação meio líquido (por litro caldo nutriente de 16G, KCl 2 g, 0,5 g de MgSO 4* 7 H2O, 2ml 1 M Ca (NO3)2, 2 mL 0,1 M MnCl2 * • 4 H2O, 2ml 1 mM Filipa4, 2 mL de gli...

<ol>
	<li>Nicholson, W. L., Schuerger, A. C., Race, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Migrating+microbes+and+planetary+protection.">Migrating microbes and planetary protection.</a> Trends Microbiol. 17, 389-392 (2009).</li><li>COSPAR. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=COSPAR+Planetery+Protection+Policy.">COSPAR Planetery Protection Policy.</a> Space Research Today, COSPAR's Information Bulletin. 193, 1-14 (2015).</li><li>De Geyter, N., Morent, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonthermal+plasma+sterilization+of+living+and+nonliving+surfaces.">Nonthermal plasma sterilization of living and nonliving surfaces.</a> Annu Rev Biomed Eng. 14, 255-274 (2012).</li><li>Shimizu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cold+atmospheric+plasma+-+A+new+technology+for+spacecraft+component+decontamination.">Cold atmospheric plasma - A new technology for spacecraft component decontamination.</a> Planet. Space Sci. 90, 60-71 (2014).</li><li>Lerouge, S., Fozza, A. C., Wertheimer, M. R., Marchand, R., Yahia, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterilization+by+Low-Pressure+Plasma:+The+Role+of+Vacuum-Ultraviolet+Radiation.">Sterilization by Low-Pressure Plasma: The Role of Vacuum-Ultraviolet Radiation.</a> Plasma Polym. 5, 31-46 (2000).</li><li>Rossi, F., Kyli&#225;n, O., Rauscher, H., Gilliland, D., Sirghi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+low-pressure+plasma+discharge+for+the+decontamination+and+sterilization+of+medical+devices.">Use of a low-pressure plasma discharge for the decontamination and sterilization of medical devices.</a> Pure Appl. Chem. 80, 1939-1951 (2008).</li><li>Halfmann, H., Hauser, J., Awakowicz, P., Koller, M., Esenwein, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+double+inductively+coupled+low-pressure+plasma+for+sterilization+of+medical+implant+materials.">A double inductively coupled low-pressure plasma for sterilization of medical implant materials.</a> Biomed Tech (Berl). 53, 199-203 (2008).</li><li>Halfmann, H., Denis, B., Bibinov, N., Wunderlich, J., Awakowicz, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+most+efficient+VUV/UV+radiation+for+plasma+based+inactivation+of+Bacillus+atrophaeus+spores.">Identification of the most efficient VUV/UV radiation for plasma based inactivation of Bacillus atrophaeus spores.</a> J. Phys. D: Appl. Phys. 40, 5907 (2007).</li><li>Vaishampayan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+horneckiae+sp.+nov.,+isolated+from+a+spacecraft-assembly+clean+room.">Bacillus horneckiae sp. nov., isolated from a spacecraft-assembly clean room.</a> Int J Syst Evol Microbiol. 60, 1031-1037 (2010).</li><li>Mandic-Mulec, I., Stefanic, P., van Elsas, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ecology+of+Bacillaceae.">Ecology of Bacillaceae.</a> Microbiol Spectr. 3, (2015).</li><li>Alekhova, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+of+bacteria+of+the+genus+Bacillus+on+board+of+international+space+station.">Diversity of bacteria of the genus Bacillus on board of international space station.</a> Dokl Biochem Biophys. 465, 347-350 (2015).</li><li>Claus, D., Bekerley, R. C. W., Sneath, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genus+Bacillus+Cohn+1872.">Genus Bacillus Cohn 1872.</a> Bergey's manual of systematic bacteriology. 2, 1105-1141 (1986).</li><li>Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spore+Resistance+Properties.">Spore Resistance Properties.</a> Microbiol Spectr. 2, (2014).</li><li>Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spores+of+Bacillus+subtilis:+their+resistance+to+and+killing+by+radiation,+heat+and+chemicals.">Spores of Bacillus subtilis: their resistance to and killing by radiation, heat and chemicals.</a> J Appl Microbiol. 101, 514-525 (2006).</li><li>Roth, S., Feichtinger, J., Hertel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Bacillus+subtilis+spore+inactivation+in+low-pressure,+low-temperature+gas+plasma+sterilization+processes.">Characterization of Bacillus subtilis spore inactivation in low-pressure, low-temperature gas plasma sterilization processes.</a> J Appl Microbiol. 108, 521-531 (2010).</li><li>Roth, S., Feichtinger, J., Hertel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+Deinococcus+radiodurans+to+low-pressure+low-temperature+plasma+sterilization+processes.">Response of Deinococcus radiodurans to low-pressure low-temperature plasma sterilization processes.</a> J Appl Microbiol. 109, 1521-1530 (2010).</li><li>Setlow, B., Setlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+DNA+repair+in+Bacillus+subtilis+spore+resistance.">Role of DNA repair in Bacillus subtilis spore resistance.</a> J Bacteriol. 178, 3486-3495 (1996).</li><li>Schaeffer, P., Millet, J., Aubert, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catabolic+repression+of+bacterial+sporulation.">Catabolic repression of bacterial sporulation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 54, 704-711 (1965).</li><li>Simmons, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+responses+to+double-strand+breaks+between+Escherichia+coli+and+Bacillus+subtilis+reveals+different+requirements+for+SOS+induction.">Comparison of responses to double-strand breaks between Escherichia coli and Bacillus subtilis reveals different requirements for SOS induction.</a> J Bacteriol. 191, 1152-1161 (2009).</li><li>Raguse, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+of+Biological+Indicators+by+Uniformly+Distributing+Bacillus+subtilis+Spores+in+Monolayers+To+Evaluate+Enhanced+Spore+Decontamination+Technologies.">Improvement of Biological Indicators by Uniformly Distributing Bacillus subtilis Spores in Monolayers To Evaluate Enhanced Spore Decontamination Technologies.</a> Appl Environ Microbiol. 82, 2031-2038 (2016).</li><li>Horneck, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+of+bacterial+spores+in+space,+a+contribution+to+the+discussion+on+Panspermia.">Protection of bacterial spores in space, a contribution to the discussion on Panspermia.</a> Orig Life Evol Biosph. 31, 527-547 (2001).</li><li>Opretzka, J., Benedikt, J., Awakowicz, P., Wunderlich, J., Keudell, A. v. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+chemical+sputtering+during+plasma+sterilization+of+Bacillus+atrophaeus.">The role of chemical sputtering during plasma sterilization of Bacillus atrophaeus.</a> J. Phys. D: Appl. Phys. 40, 2826 (2007).</li><li>Stapelmann, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilization+of+low-pressure+plasma+to+inactivate+bacterial+spores+on+stainless+steel+screws.">Utilization of low-pressure plasma to inactivate bacterial spores on stainless steel screws.</a> Int. J. Astrobiol. 13, 597-606 (2013).</li><li>Raguse, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+of+the+importance+of+the+spore+coat+structure+and+pigmentation+in+the+Bacillus+subtilis+spore+resistance+to+low-pressure+plasma+sterilization.">Understanding of the importance of the spore coat structure and pigmentation in the Bacillus subtilis spore resistance to low-pressure plasma sterilization.</a> J. Phys. D: Appl. Phys. 49, 285401 (2016).</li><li>Pandey, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+cell+imaging+of+germination+and+outgrowth+of+individual+Bacillus+subtilis+spores;+the+effect+of+heat+stress+quantitatively+analyzed+with+SporeTracker.">Live cell imaging of germination and outgrowth of individual Bacillus subtilis spores; the effect of heat stress quantitatively analyzed with SporeTracker.</a> PloS one. 8, e58972 (2013).</li></ol>

Esterilização de superfícies utilizando baixa temperatura, baixa pressão plasma é uma alternativa promissora para procedimentos de esterilização bastante convencional, tais como o tratamento com radiação ionizante a radiação, produtos químicos (por exemplo, gases como H2O2 ou óxido de etileno) ou calor seco e úmido,23. Métodos de esterilização comum principalmente fornecem uma esterilização eficaz, mas eles são conhecidos por influenciar o materia...

Dos principais objetivos da exploração espacial é a busca de assinaturas de formas de vida e biomoléculas em outros planetas e luas em nosso sistema solar. A transferência de microorganismos ou biomoléculas de origem terrestre, de áreas críticas de exploração é de risco especial para o impacto do desenvolvimento e integridade das missões de deteção de vida em planetas como Marte e Europa1. As diretrizes internacionais de proteção planetária, estabelecida pelo Comité de pesquisa espacial (sistema) em 1967, impor normas rigorosas em missões tripuladas e robóticas para outros planetas, suas luas, asteroides e outros corpos celestes e regular o limpeza e esterilização de uma nave espacial e componentes de hardware crítico prévios para lançar a fim de eliminar a contaminação de microorganismos terrestres e evitar contaminação cruzada de corpos celestes2. Na última década, a aplicação de plasmas não térmicos ganhou ampla atenção na pesquisa biomédica e nutricional, bem como em aplicações de voo espacial3,4,5. Esterilização plasma é uma alternativa promissora aos métodos convencionais de esterilização que oferece rápida e eficiente de inactivação microbiana6, sendo suave para sensíveis e materiais lábeis de calor. Descargas de plasma contêm uma mistura de agentes reativos como os radicais livres, partículas carregadas, neutro/excitado átomos fótons no ultravioleta (UV) e espectro ultravioleta de vácuo (VUV) que levam a inativação microbiana rápida3. Neste estudo, utilizamos o plasma de baixa pressão gerada pelo duplo plasma indutivo de baixa pressão (DICP) fonte7,8 para inactivar endósporos de Bacillus subtilis distribuídos na superfície de ensaio de vidro.
Bactérias gram-positivas da família bacilos são amplamente distribuídas em habitats naturais do solo, sedimentos e ar, bem como em ambientes incomuns, tais como instalações de sala limpa e a estação espacial internacional9,10 ,11. A característica mais distinta do gênero Bacillus é a capacidade de formar altamente resistentes endósporos dormentes (doravante referidos como esporos) para sobreviver a condições desfavoráveis, tais como esgotamento de nutrientes12. Os esporos são geralmente muito mais resistentes do que suas contrapartes de célula vegetativa de uma variedade de tratamentos e estresses ambientais, incluindo o calor, UV, radiação gama, dessecação, ruptura mecânica e produtos químicos tóxicos, tais como oxidantes fortes ou agentes de mudança de pH (revistos em referências13,14) e, portanto, são objetos ideais para testar a eficiência dos métodos de inativação microbiana. Desde que o DNA genômico é um alvo principal do tratamento de bactérias15,16, o reparo de lesões de DNA induzida por plasma plasma (por exemplo, quebras de dupla cadeia de DNA) em cima do esporo revival é crucial para a sobrevivência de bactérias13, 17.
Assim, estudamos a capacidade de germinação dos esporos e o papel do reparo de DNA durante a germinação dos esporos e consequência natural após ter tratado os esporos com plasma de argônio de baixa pressão por seguintes esporos individuais e reparar sua expressão de DNA marcado com fluorescência proteína RecA com microscopia de fluorescência confocal tempo-resolvido. Nós damos uma instrução passo a passo da preparação de esporos de b. subtilis em monocamadas para alcançar resultados reprodutíveis, o tratamento de monocamadas de esporo com plasma de baixa pressão para esterilização, a preparação de esporos de plasma Tratado para avaliação ultraestrutural usando microscopia eletrônica de varredura (MEV) e análise de microscopia célula viva ao nível dos esporos individuais em concerto com o monitoramento do DNA ativo reparar processos que ocorrem dentro da célula em resposta a um tratamento de plasma.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Two substance nozzle (model 970-8)</td>
			<td>Schlick</td>
			<td>14,404</td>
			<td>230 V, 50 Hz, D 4.484/8, 0.8 mm bore diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria Bertani Medium</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>70122-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube connectors</td>
			<td>Festo</td>
			<td>n/a</td>
			<td>G 1/8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetvalve DO35-3/2NC-G018-230AC</td>
			<td>Bosch Rexroth</td>
			<td>820005100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLN Polyamid tube</td>
			<td>Festo</td>
			<td>558206</td>
			<td>d = 6 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48300-026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Timer 550-2-C</td>
			<td>Gefran</td>
			<td>F000074</td>
			<td>220 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>attofluor cell chamber</td>
			<td>Menzel, Fisher Ref.</td>
			<td>3406816</td>
			<td>d=25 mm, round</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4*7 H2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>13152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ca(NO3)2</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>202967</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl2 * 4 H2O</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>244589</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeSO4 * 7H2O</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>13446-34-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>215422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P9541-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nutrient Broth (NB)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>105443</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria-Bertani (LB)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>110283</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-wellplate</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>243656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM 780, Axio Observer Z1</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy GmbH</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leo 1530 Gemini</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy GmbH</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN 2 and ZEN lite 2012 (Software)</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy GmbH</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SigmaPlot, version 13.0 (Statistic software)</td>
			<td>Systat GmbH, Erkrath, Germany</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Attofluor cell chamber</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A7816</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#181;-Dish 35 mm, high Grid-500 Glass Bottom</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>81168</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

investigating the detrimental effects of low pressure plasma sterilization on the survival of bacillus subtilis spores using live cell microscopy

Esterilização plasma é uma alternativa promissora para os métodos de esterilização convencionais para fins de exploração espacial e industrial, clínica. Descargas de baixa pressão plasma (LPP) contenham um amplo espectro de espécies ativas, que levam a inativação microbiana rápida. Para estudar a eficiência e a mecanismos de esterilização por LPP, usamos os esporos do Bacillus subtilis organismo teste por causa de sua extraordinária resistência contra procedimentos de esterilização convencionais. Descrevemos a produção de monocamadas de esporos de b. subtilis , o processo de esterilização por plasma de baixa pressão em um reator de plasma indutivo duplo, a caracterização da morfologia dos esporos usando microscopia eletrônica de varredura (MEV) e o análise da germinação e consequência de esporos por microscopia de células vivas. Um alvo principal das espécies de plasma é material genómico (DNA) e reparo de lesões de DNA induzida por plasma sobre avivamento esporo é crucial para a sobrevivência do organismo. Aqui, podemos estudar a capacidade de germinação dos esporos e o papel do DNA reparo durante a germinação dos esporos e consequência natural após o tratamento com LPP rastreando fluorescente etiquetado DNA reparo proteínas (RecA) com microscopia de fluorescência confocal tempo-resolvido. Tratados e monocamadas de esporos não tratados são ativadas para a germinação e visualizadas com um microscópio invertido confocal célula viva ao longo do tempo a seguir a reação dos esporos individuais. Nossas observações revelam que a fração de germinação e superando os esporos é dependente da duração do LPP-tratamento, atingindo um mínimo após 120 s. RecA-YFP fluorescência (proteína de fluorescência amarela) foi detectada apenas em alguns esporos e desenvolvida em toda a superando as células com uma ligeira elevação no LPP-tratados esporos. Além disso, algumas das bactérias vegetativas derivado LPP-tratados esporos mostrou um aumento no citoplasma e tendiam a lyse. Os métodos descritos para análise de esporos individuais podem ser exemplares para o estudo de outros aspectos da germinação de esporos e consequência.

Sobrevivência dos tratados com plasma b. subtilis esporos
Tratamento de plasma de esporos do b. subtilis utilizadas neste estudo show uma diminuição na sobrevivência com o aumento da duração do tratamento a plasma (Figura 2). Esporos da estirpe expressando o recA-gene fundido a YFP mostrou curvas de sobrevivência semelhante a esporos da estirpe selvagem tipo, indicando...

Watch this Scientific Journal Video about Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy at JoVE.com

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Investigando os prejudiciais efeitos de baixa pressão Plasma esterilização na sobrevivência de esporos de Bacillus subtilis usando Live celular microscopia

Este protocolo ilustra as etapas consecutivas importantes, necessárias para avaliar a pertinência de monitoramento parâmetro de vitalidade e os processos de reparação do DNA em reviving esporos de Bacillus subtilis após o tratamento com plasma de baixa pressão de tracking proteínas através do tempo-resolvido microscopia confocal e microscopia eletrônica de reparo de DNA marcado com fluorescência.

Plasma sterilization is a promising alternative to conventional sterilization methods for industrial, clinical, and spaceflight purposes. Low pressure ...

Research

JoVE Journal

Biology

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Imaging Mismatch Repair and Cellular Responses to DNA Damage in Bacillus subtilis

Imaging Mismatch Repair and Cellular Responses to DNA Damage in Bacillus subtilis

Mismatch Repair imagem e respostas celulares a danos no DNA em Bacillus subtilis</em

Both prokaryotes and eukaryotes respond to DNA damage through a complex set of physiological changes. Alterations in gene expression, the redistribution ...

Biologia

Identifying the Effects of BRCA1 Mutations on Homologous Recombination using Cells that Express Endogenous Wild-type BRCA1

Identificar os efeitos das mutações BRCA1 em Recombinação Homóloga usando células que expressam BRCA1 tipo selvagem endógena

The functional analysis of missense mutations can be complicated by the presence in the cell of the endogenous protein. Structure-function analyses of the ...

FRET Microscopy for Real-time Monitoring of Signaling Events in Live Cells Using Unimolecular Biosensors

FRET Microscopia para Monitoramento em Tempo Real de eventos de sinalização em células vivas utilizando biossensores unimolecular

F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET) microscopy  continues to gain increasing interest as a technique for real-time monitoring  of biochemical ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Imagens ao vivo de Apuramento celular por apoptose durante<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriogênese

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Analyzing Craniofacial Morphogenesis in Zebrafish Using 4D Confocal Microscopy

Analisando Craniofacial morfogênese em Zebrafish Usando 4D microscopia confocal

Time-lapse imaging is a technique that allows for the direct observation of the process of morphogenesis, or the generation of shape. Due to their optical ...

Light Sheet Fluorescence Microscopy of Plant Roots Growing on the Surface of a Gel

Microscopia de Luz Folha de fluorescência das raízes das plantas que crescem na superfície de um gel

One of the key questions in understanding plant development is how single cells behave in a larger context of the tissue. Therefore, it requires the ...

Standardized Method for High-throughput Sterilization of Arabidopsis Seeds

Método padronizado para a esterilização da elevado-produção de sementes de Arabidopsis

Arabidopsis thaliana (Arabidopsis) seedlings often need to be grown on sterile media. This requires prior seed sterilization to prevent the growth of ...

Single-cell Microfluidic Analysis of Bacillus subtilis

Single-cell Microfluidic Analysis of Bacillus subtilis

Célula única Microfluidic análise de Bacillus subtilis

Microfluidic technology overcomes many of the limitations to traditional analytical methods in microbiology. Unlike bulk-culture methods, it offers ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Preparação de amostras biológicas por congelamento de alta pressão, realce de contraste assistida por microondas e resina mínima incorporação para a imagem latente de Volume

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Imagem de células vivas do ciclo de vida do predador bacteriano Bdellovibrio bacteriovorus usando microscopia de fluorescência de lapso de tempo

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...