Name: collection of post-mating semen from the female reproductive tract and measurement of semen liquefaction in mice
Uploaded: 2017-11-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Collection of Post-mating Semen from the Female Reproductive Tract and Measurement of Semen Liquefaction in Mice at JoVE.com

עבודה זו נתמכת על ידי קרן הזנק במכללה לרפואה וטרינרית (WSU) WW. המחברים מודים סיירה אולסן (WSU) על קריאה ביקורתית של כתב היד הזה.

כל בעלי החיים, הליכים המשמשים במחקר זה מטופל בהתאם להנחיות אכפת לי חיה אוניברסיטת מדינת וושינגטון (WSU) והוועדה שימוש ובציות שאושרו על-ידי WSU בעלי חיים פרוטוקולים #4702, #4735.
1. עכברים
<ol><li>
שימוש רגיל C57BL/6J למבוגרים זכר עכברים או זנים אחרים של ריבית. לשמור על חיות תחת סביבת טמפ...

<ol>
	<li>Suarez, S. S., Pacey, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+transport+in+the+female+reproductive+tract.">Sperm transport in the female reproductive tract.</a> Hum Reprod Update. 12 (1), 23-37 (2006).</li><li>Bedford, J. M., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+sperm+motility+after+mating+in+the+rat+and+hamster.">Initiation of sperm motility after mating in the rat and hamster.</a> J Androl. 13 (5), 444-449 (1992).</li><li>Lilja, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+biology+of+semenogelin.">Cell biology of semenogelin.</a> Andrologia. 22 Suppl 1, 132-141 (1990).</li><li>Lilja, H., Abrahamsson, P. A., Lundwall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semenogelin,+the+predominant+protein+in+human+semen.+Primary+structure+and+identification+of+closely+related+proteins+in+the+male+accessory+sex+glands+and+on+the+spermatozoa.">Semenogelin, the predominant protein in human semen. Primary structure and identification of closely related proteins in the male accessory sex glands and on the spermatozoa.</a> J Biol Chem. 264 (3), 1894-1900 (1989).</li><li>Veveris-Lowe, T. L., Kruger, S. J., Walsh, T., Gardiner, R. A., Clements, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seminal+fluid+characterization+for+male+fertility+and+prostate+cancer:+kallikrein-related+serine+proteases+and+whole+proteome+approaches.">Seminal fluid characterization for male fertility and prostate cancer: kallikrein-related serine proteases and whole proteome approaches.</a> Semin Thromb Hemost. (33), 87-99 (2007).</li><li>Emami, N., Deperthes, D., Malm, J., Diamandis, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+role+of+human+KLK14+in+seminal+clot+liquefaction.">Major role of human KLK14 in seminal clot liquefaction.</a> J Biol Chem. 283 (28), 19561-19569 (2008).</li><li>Gerhard, I., Roth, B., Eggert-Kruse, W., Runnebaum, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+kallikrein+on+sperm+motility,+capillary+tube+test,+and+pregnancy+rate+in+an+AIH+program.">Effects of kallikrein on sperm motility, capillary tube test, and pregnancy rate in an AIH program.</a> Arch Androl. 24 (2), 129-145 (1990).</li><li>Li, S., Garcia, M., Gewiss, R. L., Winuthayanon, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crucial+role+of+estrogen+for+the+mammalian+female+in+regulating+semen+coagulation+and+liquefaction+in+vivo.">Crucial role of estrogen for the mammalian female in regulating semen coagulation and liquefaction in vivo.</a> PLoS Genet. 13 (4), e1006743 (2017).</li><li>Elia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+semen+hyperviscosity:+prevalence,+pathogenesis+and+therapeutic+aspects.">Human semen hyperviscosity: prevalence, pathogenesis and therapeutic aspects.</a> Asian J Androl. 11 (5), 609-615 (2009).</li><li>Winuthayanon, W., Hewitt, S. C., Orvis, G. D., Behringer, R. R., Korach, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uterine+epithelial+estrogen+receptor+alpha+is+dispensable+for+proliferation+but+essential+for+complete+biological+and+biochemical+responses.">Uterine epithelial estrogen receptor alpha is dispensable for proliferation but essential for complete biological and biochemical responses.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (45), 19272-19277 (2010).</li><li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+vaginal+lavage,+crystal+violet+staining,+and+vaginal+cytological+evaluation+for+mouse+estrous+cycle+staging+identification.">Performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification.</a> J Vis Exp. (67), e4389 (2012).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lab+Animal+Research.+Fundamentals+of+Breeding+and+Weaning.">Lab Animal Research. Fundamentals of Breeding and Weaning.</a> JoVE. , (2017).</li><li>Prassas, I., Eissa, A., Poda, G., Diamandis, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unleashing+the+therapeutic+potential+of+human+kallikrein-related+serine+proteases.">Unleashing the therapeutic potential of human kallikrein-related serine proteases.</a> Nat Rev Drug Discov. 14 (3), 183-202 (2015).</li><li>Muytjens, C. M., Vasiliou, S. K., Oikonomopoulou, K., Prassas, I., Diamandis, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Putative+functions+of+tissue+kallikrein-related+peptidases+in+vaginal+fluid.">Putative functions of tissue kallikrein-related peptidases in vaginal fluid.</a> Nat Rev Urol. 13 (10), 596-607 (2016).</li></ol>

איסוף זרע מן העכבר uteri יכול לספק יתרונות על פני הזרע ניתוח במבחנה כפי לשעבר יכול להמחיש את האינטראקציות פיזיולוגי בין הזרע לבין הפרשות באיברי הרבייה הנקביים. טכניקות שהוצגו במחקר זה מאפשר לחוקרים לקבוע את איכות תאי הזרע וכן הכדאיות הזרע, תנועתיות בתנאים פיזיולוגיים אידיאלי. יתר ...

מערכת הרבייה הנשית מורכבת ספינלי העליון והתחתון. מערכת הרבייה העליון כולל החצוצרות, הרחם endocervix. מערכת הרבייה נמוכה יותר כולל את ectocervix הנרתיק. בבני אדם, הזרע ejaculated הופקד אצל הקיר הקדמי של הנרתיק, הסמוך ectocervix1. בעכברים, עם זאת, הזרע הוא נסחף לתוך הרחם תוך דקות לאחר ההזדווגות2.
הזרע מכיל ג'ל הזרע הוא פני השטח למוצק בתוך שניות של שפיכה, גורם את הזרע כדי להיות לכודים,3. מרותק למיטה. ניזול משחרר את הזרע קיבוע על-ידי שינוי זרע מדמוי ג'ל מימית עקביות. תהליך זה הוא חיוני תנועתיות הזרע ורביה יונקים. הידע של זרע ניזול מבוססת בעיקר על במבחנה מחקרים שבו זרע הופך מעובה בקערה תרבות. בבני אדם, הפעילות האנזימטית מתרחשת של הערמונית אנטיגן ספציפי או ה-PSA (הידוע גם kallikrein הקשורות peptidase 3 או KLK3) הוא התורם העיקרי עבור ניזול באמצעות הידרוליזה של semenogelins (יוצרי ג'ל חלבונים המצויים הזרע)4 ,5,6. השפלה של semenogelins משחררת את הזרע של coagulum הזרע, הגדלת ניידות זרע. פריד זרע לשחות לעבר החצוצרה כדי להפרות את הביצית. ניזול (או זרע צמיגות) בדיקות הם אחד הקרנתם הראשונית סטנדרטי עבור בדיקת זרע במרפאות פוריות כדי להעריך את פוריות הגבר7.
מאמר שפורסם לאחרונה מראה כי ניתוח של נוזל הזרע שנאסף את העכבר הנשי באיברי הרבייה שלאחר ההזדווגות יכולה לשמש להמחשת חוסר ניזול שיכולים לגרום לאחר מכן ליקויי פוריות8. ניזול פגומים כגון לרטרו זרע תורם 11.8-32.3% מהמקרים עקרה גברים9, רומז ניזול נורמלי הוא הכרחי עבור רבייה יונקים. עם זאת, מחקרים וטיפול של פגמים ניזול התמקדו אך ורק זכר7. האפשרות כי באיברי הרבייה הנקביים ממלאת תפקיד הזרע ניזול לא נחקרו. לכן, שיטות איסוף זרע ומדידת זמן ניזול יספק לחוקרים כלי אבחון הרומן כדי לקבוע אם ניזול יכול להיות אחד הגורמים לאי פוריות באורגניזם מודל עניין.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="571">
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Toothpick</td>
			<td style="width:71px;">Diamond</td>
			<td style="width:119px;">750-Flat</td>
			<td style="width:167px;">Autoclaved sterile, use blunted toothpick. Do not use point-ended</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Dissecting scissors</td>
			<td style="width:71px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">08-940</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Spring scissors</td>
			<td style="width:71px;">Roboz</td>
			<td style="width:119px;">RS-5600</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Fine forceps</td>
			<td style="width:71px;">Roboz</td>
			<td style="width:119px;">RS-5045</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">25-&#956;L glass capillary tube</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">53432-761</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Leibovitz&#8217;s L-15 media</td>
			<td style="width:71px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">11415064</td>
			<td style="width:167px;">Supplement with 1% FBS</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:71px;">Gemini Bio-Products</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">1.5-mL microcentrifuge tube</td>
			<td style="width:71px;">Axygen</td>
			<td style="width:119px;">MCT-150-C</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">2-mL microcentrifuge tube</td>
			<td style="width:71px;">Axygen</td>
			<td style="width:119px;">MCT-200-A</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:215px;">Digital dry block heater</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">13259-052</td>
			<td style="width:167px;">For warming the microcentrifuge tube prior to semen collection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Minicentrifuge</td>
			<td style="width:71px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">LSE 6765</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">35-mm culture dish</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">10861-656</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">15-mL polypropylene centrifuge tube</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">10025-686</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Waterbath</td>
			<td style="width:71px;">Precision</td>
			<td style="width:119px;">TSGP05</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Heated stage stereomicroscope</td>
			<td style="width:71px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">MZ10F</td>
			<td style="width:167px;">To keep the tissue warm prior to semen collection</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Brightfield microscope</td>
			<td style="width:71px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">DMi8</td>
			<td style="width:167px;">Optional. For video imaging of the sperm motility</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Camera</td>
			<td style="width:71px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">DMC2900</td>
			<td style="width:167px;">Optional. For video imaging of the sperm motility</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Glass slides</td>
			<td style="width:71px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-552-3</td>
			<td style="width:167px;">Optional. For video imaging of the sperm motility</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Coverslip</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">48393-059</td>
			<td style="width:167px;">Optional. For video imaging of the sperm motility</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:215px;">Bleach</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Dilute in dH2O to 10% concentration</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

collection of post-mating semen from the female reproductive tract and measurement of semen liquefaction in mice

בעכברים, פלטה הזרע החודר לתוך הרחם. לאחר השפיכה, הזרע משתנה עקביות דמוי ג'ל כדי דומעות, תהליך הנקרא ניזול. במחקר זה, נראה כיצד לאסוף את הזרע פוסט-ejaculated באיברי הרבייה הנקביים במודל של עכברים. עכברים הנשי הראשון, מבוגרים על הבמה ייחום שוכנו לכלוב של הזכר בן לילה. למחרת בבוקר, הזדווגות אושר על ידי הנוכחות של הכנס copulatory בפתח הנרתיק. עכברים נקבה עם תקעים copulatory היו מורדמים, נאסף כל באיברי הרבייה בכללותה (הנרתיק, הרחם, oviducts, השחלות), המבטיח מערכת סגורה כדי להכיל את הזרע. מערכת הרבייה הונח צינור microcentrifuge 1.5 mL, הנרתיק חתכו אותה כדי לשחרר את הזרע לתוך הצינור. כדי להבטיח נפח הזרע המרבי עבור ניתוח, מלקחיים חסר שיניים שימשו כדי לסחוט את הקרניים הרחם השחלות מקצה לקצה הנרתיק גירוש הזרע שנותרו. מערכת הרבייה לגמרי ואז אבדו. הצינור המכיל זרע היה טוו בקצרה למטה. פיפטה נימי 25 μL הונח לתוך הצינור בזווית של 180 מעלות (במקביל לקיר tube). כמות הזמן נהגו למלא את צינור קפילרי לקו μL 25 הוקלט. זרע מן המגדל זכר מוכחת בדרך כלל לוקח כ 60-180 s כדי למלא צינור קפילר 25 μL. טכניקה זו של אוסף זרע יכול לשמש גם ביישומים אחרים במורד הזרם כגון הדמיה וניתוח תנועתיות הזרע.

זרע נאסף מן CTRL וקו h נקבות כ 8 לאחר ההזדווגות עם זכרים CTRL פורייה. ניזול (או זרע צמיגות) הוא לכמת על ידי לוקחים את הזמן כדי למלא 25 קפילר μL זרע. הזרע שנאסף CTRL uteri לקח 2.06 דקות ±0.12 (mean±S.E.M, n = 5) כדי למלא את צינור קפילרי (איור 1). עם זאת, הזרע שנאסף KO uteri לקח יותר מ 60 דקות (60.0 ±0.0, mean±S.E.M, ...

Watch this Scientific Journal Video about Collection of Post-mating Semen from the Female Reproductive Tract and Measurement of Semen Liquefaction in Mice at JoVE.com

Collection of Post-mating Semen from the Female Reproductive Tract and Measurement of Semen Liquefaction in Mice

אוסף של שלאחר ההזדווגות זרע באיברי הרבייה הנקביים, מדידה של זרע ניזול בעכברים

ניזול זרע נדרש הזרע להשתחרר הג'ל הזרע. מחקר זה מספק את נהלי איסוף זרע מן באיברי הרבייה הנקביים שלאחר ההזדווגות, ומדידת זמן ניזול זרע.

In mice, ejaculated semen is deposited in the uterus. After ejaculation, the semen changes consistency from gel-like to watery, a process called ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

ניתוח Immunofluorescent מכתים של פטריות הגוף והנפש ומה קולט אור נוירונים במוח למבוגרים דרוזופילה melanogaster

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

נהלים השתלת השחלות Orthotopic לחקור את ההשפעה ואת בריאות-תוחלת החיים של השחלות הזדקנות ביולוגית בעכברים הנשי

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

Combinational Treatment of Trichostatin A and Vitamin C Improves the Efficiency of Cloning Mice by Somatic Cell Nuclear Transfer

טיפול קומבינטוריים Trichostatin A וויטמין C משפר את היעילות של שיבוט עכברים באמצעות העברה גרעיני תאים סומטיים

Somatic cell nuclear transfer (SCNT) provides a unique opportunity to directly produce a cloned animal from a donor cell, and it requires the use of ...

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

שיטת In Vivo ללמוד העכבר דם Testis מכשול שלמות

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by ...

In Vitro Assays to Evaluate the Migration, Invasion, and Proliferation of Immortalized Human First-trimester Trophoblast Cell Lines

במבחני חוץ גופית כדי להעריך את ההעברה הפלישה, התפשטות של שורות תאים מונצחים Trophoblast בטרימסטר הראשון אנושי

Cell movement is a critical property of trophoblasts during placental development and early pregnancy. The significance of proper trophoblast migration ...

Measuring Sperm Guidance and Motility within the Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

Measuring Sperm Guidance and Motility within the Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

מדידת הדרכה זרע ותנועתיות בתוך האלגיה של מערכת הרבייה של האנדרוגינוס

Successful fertilization is fundamental to sexual reproduction, yet little is known about the mechanisms that guide sperm to oocytes within the female ...

In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle

במבחנה תרבות אסטרטגיה עבור Oocytes מ זקיק אנטרל מוקדם בבקר

The limited reserve of mature, fertilizable oocytes represents a major barrier for the success of assisted reproduction in mammals. Considering that ...

Defining the Program of Maternal mRNA Translation during In vitro Maturation using a Single Oocyte Reporter Assay

הגדרת התוכנית של תרגום mRNA אימהי במהלך התבגרות במבחנה באמצעות בדיקה של כתב ביצית יחיד

Events associated with oocyte nuclear maturation have been well described. However, much less is known about the molecular pathways and processes that ...

Use of Bisection to Reduce Mitochondrial DNA in the Bovine Oocyte

שימוש בביזקציה להפחתת דנ"א מיטוכונדריאלי בביצית בקר

Interspecies somatic cell nuclear transfer (iSCNT) may be used to rescue endangered species, but two distinct populations of mitochondrial DNA (mtDNA) ...