Name: collection of post-mating semen from the female reproductive tract and measurement of semen liquefaction in mice
Uploaded: 2017-11-18T14:00:00
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यह काम कॉलेज ऑफ पशु चिकित्सा (WSU) स्टार्ट-अप फंड को WW करने के लिए सपोर्ट करता है । लेखक इस पांडुलिपि के महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए सिएरा ऑलसेन (WSU) धंयवाद ।

इस अध्ययन में प्रयुक्त सभी जानवरों और प्रक्रियाओं को वॉशिंगटन स्टेट यूनिवर्सिटी (WSU) पशु देखभाल और उपयोग समिति के दिशानिर्देशों और WSU-अनुमोदित पशु प्रोटोकॉल #4702 और #4735 के अनुपालन में के अनुसार संभाला गया ?...

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	<li>Suarez, S. S., Pacey, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm+transport+in+the+female+reproductive+tract.">Sperm transport in the female reproductive tract.</a> Hum Reprod Update. 12 (1), 23-37 (2006).</li><li>Bedford, J. M., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+sperm+motility+after+mating+in+the+rat+and+hamster.">Initiation of sperm motility after mating in the rat and hamster.</a> J Androl. 13 (5), 444-449 (1992).</li><li>Lilja, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+biology+of+semenogelin.">Cell biology of semenogelin.</a> Andrologia. 22 Suppl 1, 132-141 (1990).</li><li>Lilja, H., Abrahamsson, P. A., Lundwall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semenogelin,+the+predominant+protein+in+human+semen.+Primary+structure+and+identification+of+closely+related+proteins+in+the+male+accessory+sex+glands+and+on+the+spermatozoa.">Semenogelin, the predominant protein in human semen. Primary structure and identification of closely related proteins in the male accessory sex glands and on the spermatozoa.</a> J Biol Chem. 264 (3), 1894-1900 (1989).</li><li>Veveris-Lowe, T. L., Kruger, S. J., Walsh, T., Gardiner, R. A., Clements, J. 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P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+role+of+human+KLK14+in+seminal+clot+liquefaction.">Major role of human KLK14 in seminal clot liquefaction.</a> J Biol Chem. 283 (28), 19561-19569 (2008).</li><li>Gerhard, I., Roth, B., Eggert-Kruse, W., Runnebaum, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+kallikrein+on+sperm+motility,+capillary+tube+test,+and+pregnancy+rate+in+an+AIH+program.">Effects of kallikrein on sperm motility, capillary tube test, and pregnancy rate in an AIH program.</a> Arch Androl. 24 (2), 129-145 (1990).</li><li>Li, S., Garcia, M., Gewiss, R. L., Winuthayanon, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crucial+role+of+estrogen+for+the+mammalian+female+in+regulating+semen+coagulation+and+liquefaction+in+vivo.">Crucial role of estrogen for the mammalian female in regulating semen coagulation and liquefaction in vivo.</a> PLoS Genet. 13 (4), e1006743 (2017).</li><li>Elia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+semen+hyperviscosity:+prevalence,+pathogenesis+and+therapeutic+aspects.">Human semen hyperviscosity: prevalence, pathogenesis and therapeutic aspects.</a> Asian J Androl. 11 (5), 609-615 (2009).</li><li>Winuthayanon, W., Hewitt, S. C., Orvis, G. D., Behringer, R. R., Korach, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uterine+epithelial+estrogen+receptor+alpha+is+dispensable+for+proliferation+but+essential+for+complete+biological+and+biochemical+responses.">Uterine epithelial estrogen receptor alpha is dispensable for proliferation but essential for complete biological and biochemical responses.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (45), 19272-19277 (2010).</li><li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+vaginal+lavage,+crystal+violet+staining,+and+vaginal+cytological+evaluation+for+mouse+estrous+cycle+staging+identification.">Performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification.</a> J Vis Exp. (67), e4389 (2012).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lab+Animal+Research.+Fundamentals+of+Breeding+and+Weaning.">Lab Animal Research. Fundamentals of Breeding and Weaning.</a> JoVE. , (2017).</li><li>Prassas, I., Eissa, A., Poda, G., Diamandis, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unleashing+the+therapeutic+potential+of+human+kallikrein-related+serine+proteases.">Unleashing the therapeutic potential of human kallikrein-related serine proteases.</a> Nat Rev Drug Discov. 14 (3), 183-202 (2015).</li><li>Muytjens, C. M., Vasiliou, S. K., Oikonomopoulou, K., Prassas, I., Diamandis, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Putative+functions+of+tissue+kallikrein-related+peptidases+in+vaginal+fluid.">Putative functions of tissue kallikrein-related peptidases in vaginal fluid.</a> Nat Rev Urol. 13 (10), 596-607 (2016).</li></ol>

माउस uteri से वीर्य का संग्रह पूर्व के रूप में वीर्य और मादा प्रजनन पथ से स्राव के बीच शारीरिक बातचीत वर्णन कर सकते हैं के रूप में इन विट्रो में अधिक से अधिक लाभ प्रदान कर सकते हैं। इस अध्ययन में प्रस?...

मादा प्रजनन पथ ऊपरी और निचले इलाकों में शामिल है । ऊपरी प्रजनन पथ फैलोपियन ट्यूब, गर्भाशय, और endocervix शामिल हैं । लोअर प्रजनन पथ ectocervix और योनि शामिल हैं । मनुष्यों में, बोल पड़ना वीर्य योनि के पूर्वकाल दीवार पर जमा है, ectocervix1के बगल में । चूहों में, तथापि, वीर्य2संभोग के बाद मिनट के भीतर गर्भाशय में बह रहा है ।
वीर्य स्खलन के सेकंड के भीतर जम जाता है कि लाभदायक जेल होता है, जिससे शुक्राणु फंस और मैटीरियल3हो जाता है । द्रवीकरण ने वीर्य को जेल से बदलकर मैटीरियल शुक्राणुओं को रिलीज किया-जैसे कि पानी में संगति करना । शुक्राणु गतिशीलता और स्तनधारी प्रजनन के लिए यह प्रक्रिया जरूरी है । वीर्य द्रवीकरण का ज्ञान अधिकांशतः इन विट्रो अध्ययनों पर आधारित होता है जहाँ वीर्य एक कल्चरल डिश में तरलीकृत हो जाता है. मनुष्यों में, प्रोस्टेट विशिष्ट प्रतिजन या पीएसए के एंजाइमी गतिविधि (भी kallikrein-संबंधित peptidase 3 या KLK3 के रूप में जाना जाता है) द्रवीकरण के hydrolysis के माध्यम से semenogelins के लिए प्रमुख योगदानकर्ता है (जेल बनाने प्रोटीन वीर्य में मौजूद)4 ,5,6. semenogelins का क्षरण शुक्राणु को लाभदायक रक्तकण से मुक्त कर, शुक्राणु गतिशीलता को बढ़ाते हैं । मुक्त शुक्राणु फैलोपियन ट्यूब की ओर तैरने के लिए अंडे खाद । द्रवीकरण (या वीर्य चिपचिपापन) परीक्षण प्रजनन क्लिनिक में वीर्य विश्लेषण के लिए मानक प्रारंभिक प्रदर्शनों में से एक के लिए पुरुष प्रजनन7का आकलन कर रहे हैं ।
हाल ही में प्रकाशित एक लेख से पता चलता है कि प्राथमिक द्रव का विश्लेषण महिला माउस प्रजनन पथ से एकत्र के बाद संभोग द्रवीकरण में एक कमी है कि बाद में प्रजनन दोष8का कारण बन सकता वर्णन किया जा सकता है । दोषपूर्ण द्रवीकरण जैसे वीर्य hyperviscosity में पुरुषों में ऊसर मामलों के 11.8-32.3% योगदान करता है9, सुझाव है कि सामान्य द्रवीकरण स्तनधारी प्रजनन के लिए अपरिहार्य है । हालांकि, अध्ययन और द्रवीकरण दोषों के उपचार विशेष रूप से पुरुष7पर ध्यान केंद्रित किया है । संभावना है कि महिला प्रजनन पथ वीर्य द्रवीकरण में एक भूमिका निभाता है पता नहीं लगाया गया है । इसलिए, वीर्य संग्रह और मापने द्रवीकरण समय के लिए तरीकों शोधकर्ताओं एक उपंयास नैदानिक उपकरण के लिए निर्धारित है कि क्या द्रवीकरण ब्याज की मॉडल जीव में बांझपन के कारणों में से एक हो सकता है प्रदान करेगा ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="571">
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Toothpick</td>
			<td style="width:71px;">Diamond</td>
			<td style="width:119px;">750-Flat</td>
			<td style="width:167px;">Autoclaved sterile, use blunted toothpick. Do not use point-ended</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Dissecting scissors</td>
			<td style="width:71px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">08-940</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Spring scissors</td>
			<td style="width:71px;">Roboz</td>
			<td style="width:119px;">RS-5600</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Fine forceps</td>
			<td style="width:71px;">Roboz</td>
			<td style="width:119px;">RS-5045</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">25-&#956;L glass capillary tube</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">53432-761</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Leibovitz&#8217;s L-15 media</td>
			<td style="width:71px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">11415064</td>
			<td style="width:167px;">Supplement with 1% FBS</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:71px;">Gemini Bio-Products</td>
			<td style="width:119px;">100-106</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">1.5-mL microcentrifuge tube</td>
			<td style="width:71px;">Axygen</td>
			<td style="width:119px;">MCT-150-C</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">2-mL microcentrifuge tube</td>
			<td style="width:71px;">Axygen</td>
			<td style="width:119px;">MCT-200-A</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:215px;">Digital dry block heater</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">13259-052</td>
			<td style="width:167px;">For warming the microcentrifuge tube prior to semen collection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Minicentrifuge</td>
			<td style="width:71px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">LSE 6765</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">35-mm culture dish</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">10861-656</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">15-mL polypropylene centrifuge tube</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">10025-686</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Waterbath</td>
			<td style="width:71px;">Precision</td>
			<td style="width:119px;">TSGP05</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Heated stage stereomicroscope</td>
			<td style="width:71px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">MZ10F</td>
			<td style="width:167px;">To keep the tissue warm prior to semen collection</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Brightfield microscope</td>
			<td style="width:71px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">DMi8</td>
			<td style="width:167px;">Optional. For video imaging of the sperm motility</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Camera</td>
			<td style="width:71px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">DMC2900</td>
			<td style="width:167px;">Optional. For video imaging of the sperm motility</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Glass slides</td>
			<td style="width:71px;">Fisher</td>
			<td style="width:119px;">12-552-3</td>
			<td style="width:167px;">Optional. For video imaging of the sperm motility</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:215px;">Coverslip</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">48393-059</td>
			<td style="width:167px;">Optional. For video imaging of the sperm motility</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:215px;">Bleach</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Dilute in dH2O to 10% concentration</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

collection of post-mating semen from the female reproductive tract and measurement of semen liquefaction in mice

चूहों में, बोल पड़ना वीर्य गर्भाशय में जमा हो जाता है. स्खलन के बाद, वीर्य जेल से संगति-जैसे पानी के लिए, एक प्रक्रिया द्रवीकरण बुलाया बदल जाता है । इस अध्ययन में, हम एक माउस मॉडल में महिला प्रजनन पथ से पोस्ट-बोल-पड़ना वीर्य इकट्ठा करने के लिए कैसे दिखा. सबसे पहले, मद अवस्था में वयस्क मादा चूहे एक पुरुष के पिंजरे में रात भर घर में रहती थीं. अगली सुबह, शयन योनि खोलने में copulatory प्लग की उपस्थिति से पुष्टि की थी । copulatory प्लग के साथ महिला चूहों euthanized थे, और एक प्रजनन मार्ग एक पूरे के रूप में एकत्र किया गया था (योनि, गर्भाशय, oviducts, अंडाशय), एक बंद व्यवस्था सुनिश्चित करने के लिए वीर्य को नियंत्रित. प्रजनन पथ एक १.५ मिलीलीटर microcentrifuge ट्यूब में रखा गया था, और योनि के लिए ट्यूब में वीर्य को रिहा करने के लिए काट दिया गया था । विश्लेषण के लिए अधिकतम वीर्य की मात्रा सुनिश्चित करने के लिए, दांत संदंश को डिंबग्रंथि अंत से योनि अंत निष्कासित शेष वीर्य को गर्भाशय के सींग निचोड़ करने के लिए इस्तेमाल किया गया । इसके बाद पूरे जनन तंत्र को छोड़ दिया गया । वीर्य से युक्त ट्यूब संक्षेप में नीचे की प्रकाता थी. एक 25 μL केशिका पिपेट ट्यूब में १८० ° कोण (ट्यूब दीवार के समानांतर) में रखा गया था । 25 μL लाइन के लिए केशिका ट्यूब को भरने के लिए इस्तेमाल समय की मात्रा दर्ज की गई । एक सिद्ध पुरुष ब्रीडर से वीर्य आमतौर पर एक 25 μL केशिका ट्यूब भरने के लिए लगभग 60-180 एस लेता है । यह वीर्य संग्रह तकनीक भी अन्य बहाव अनुप्रयोगों में ऐसे शुक्राणु इमेजिंग और गतिशीलता विश्लेषण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है ।

वीर्य को ctrl और KO मादाओं से लगभग 8 ज उपजाऊ CTRL पुरुषों के साथ संभोग के बाद एकत्र किया गया था । द्रवीकरण (या वीर्य चिपचिपापन) वीर्य के साथ २५ μL केशिका ट्यूब को भरने के लिए लिया गया समय से मात्रा है. वीर्य से एकत्र ...

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Collection of Post-mating Semen from the Female Reproductive Tract and Measurement of Semen Liquefaction in Mice

महिला प्रजनन पथ और चूहों में वीर्य द्रवीकरण की माप से पोस्ट संभोग वीर्य का संग्रह

वीर्य द्रवीकरण के लिए आवश्यक है शुक्राणु को लाभदायक जेल से मुक्ति । यह अध्ययन महिला प्रजनन पथ पोस्ट-सहवास से वीर्य एकत्रित करने के लिए प्रक्रियाओं को प्रदान करता है, और वीर्य द्रवीकरण समय को मापने ।

In mice, ejaculated semen is deposited in the uterus. After ejaculation, the semen changes consistency from gel-like to watery, a process called ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains

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वयस्क Drosophila melanogaster दिमाग में मशरूम शरीर और Photoreceptor न्यूरॉन्स के विच्छेदन और Immunofluorescent धुंधला

Nervous system development involves a sequential series of events that are coordinated by several signaling pathways and regulatory networks. Many of the ...

Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

Orthotopic डिम्बग्रंथि प्रत्यारोपण प्रक्रियाओं मादा चूहों में डिम्बग्रंथि वार्धक्य के जीवन और स्वास्थ्य अवधि के प्रभाव की जांच करने के लिए

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

Combinational Treatment of Trichostatin A and Vitamin C Improves the Efficiency of Cloning Mice by Somatic Cell Nuclear Transfer

Trichostatin ए और विटामिन सी के संयोजन उपचार दैहिक कोशिका परमाणु हस्तांतरण द्वारा चूहों क्लोनिंग की दक्षता में सुधार

Somatic cell nuclear transfer (SCNT) provides a unique opportunity to directly produce a cloned animal from a donor cell, and it requires the use of ...

An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity

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Vivo में एक विधि माउस रक्त-वृषण बाधा अखंडता का अध्ययन करने के लिए

Spermatogenesis is the development of spermatogonia into mature spermatozoa in the seminiferous tubules of the testis. This process is supported by ...

In Vitro Assays to Evaluate the Migration, Invasion, and Proliferation of Immortalized Human First-trimester Trophoblast Cell Lines

विट्रो में प्रवास का मूल्यांकन करने के लिए assays, आक्रमण, और अमर मानव के प्रसार के पहले-trimester ट्रोफोब्लास्ट सेल लाइनों

Cell movement is a critical property of trophoblasts during placental development and early pregnancy. The significance of proper trophoblast migration ...

Measuring Sperm Guidance and Motility within the Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

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मापने शुक्राणु मार्गदर्शन और गतिशीलता के भीतर caदुष्टता hermaphrodite प्रजनन क्षेत्र एलिगेंस

Successful fertilization is fundamental to sexual reproduction, yet little is known about the mechanisms that guide sperm to oocytes within the female ...

In Vitro Culture Strategy for Oocytes from Early Antral Follicle in Cattle

पशुओं में अर्ली एंट्रल कूप से Oocytes के लिए विट्रो संस्कृति रणनीति

The limited reserve of mature, fertilizable oocytes represents a major barrier for the success of assisted reproduction in mammals. Considering that ...

Defining the Program of Maternal mRNA Translation during In vitro Maturation using a Single Oocyte Reporter Assay

एक एकल Oocyte रिपोर्टर परख का उपयोग कर इन विट्रो परिपक्वता के दौरान मातृ mRNA अनुवाद के कार्यक्रम को परिभाषित

Events associated with oocyte nuclear maturation have been well described. However, much less is known about the molecular pathways and processes that ...

Use of Bisection to Reduce Mitochondrial DNA in the Bovine Oocyte

बोवाइन ओओसाइट में माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए को कम करने के लिए द्विभाजन का उपयोग

Interspecies somatic cell nuclear transfer (iSCNT) may be used to rescue endangered species, but two distinct populations of mitochondrial DNA (mtDNA) ...