Name: stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis
Uploaded: 2017-12-22T13:00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af den britiske Heart Foundation (PG/13/60/30406) og University of Birmingham.

Alle dyr procedurer blev godkendt af dyrs velfærd etiske klageinstansen og britiske Home Office (UK, projekt licens 40/3745). Bruges musen på C57BL/6 baggrund, 8-12 uge gammel, 19-25 g kropsvægt, af begge køn.
1. animalsk anæstesi
<ol>
	<li>Placere en mus i en induktion kammer og fremkalde anæstesi ved en blanding af 5% isofluran med 100% ilt. Brug en gennemstrømningshastighed på 0,5 L/min. vente indtil musen helt stopper flytter og hyppighed af vejrtrækning bliver sjældne.</li>
	<li>Fjerne musen fra salen og barbere maven med en elektrisk clipper. Fjern hår fra maven så grundigt som muligt for at undgå kontaminering af bughulen.</li>
	<li>Placere musen i den liggende stilling og placere musens næsen i en kegle, der er knyttet til anæstesi system. Sænke isofluran til 2-3% (den nøjagtige procent afvige lidt fra dyr til dyr) procent. Sørg for, at dyret sove med sin respirationsfrekvens er lavere end sædvanligt, men undgå gispende. Hvis gispende opstår, mindske procent af isofluran med 0,5%.
	<ol>
		<li>Tjek den pedal refleks for at bekræfte korrekte anesthetization og starte kirurgi kun hvis den er negativ. Anvende vet salve på øjnene at forhindre tørhed.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Anvende en anti-bakteriedræbende løsning (1% Hibitane) på musens maven og tørre området ved hjælp af en steril bomuld bud på en måde udelukke potentielle rekontaminering af operationsstedet (f.eks, inde til ud i en cirkulær mode). Gentag 3 gange.</li>
</ol>
2. anvendelse af IVC stenose og mus opsving
Bemærk: Alle instrumenterne såvel som materialer (vatpinde, gaze, saltvand etc.) kommer i berøring med området kirurgi skal være steril. Operatøren skal krat forud for operationen og bære sterile handsker og kjole under proceduren. Mikroskop håndtag skal være indpakket i en steril folie.
<ol>
	<li>Give mus en anti-smertebehandling forud for operationen og under hele forsøgsperioden. For eksempel bruge buprenorphin 0,1 mg/kg subkutant 30 min før operationen og derefter hver 12 timer indtil dyret er aflivet. Som trombose i denne metode udvikler ligeledes til steril betændelse, undgå at bruge anti-inflammatoriske lægemidler som en præmedicinering.</li>
	<li>Dække mus med en steril drapere og lave et hul i drapere at afsløre stedet for kirurgi. Brug saks, gøre et snit langs den abdominale midterlinjen, 1,5 cm ned fra sternum. Bruge vatpinde exteriorize tarmene til venstre side af musen og dække dem med steril gaze gennemblødt i varmt (37 ° C) saltvand til at undgå udtørring.</li>
	<li>Identificere IVC og dens sidegrene (der kan være 0, 1 eller 2 af dem) i de caudale retning fra webstedet af sammensmeltning af IVC med den venstre nyre-vene. Ligate alle synlige sidegrene med 7-0 inert Prolene suturer som tæt på IVC som muligt.
	<ol>
		<li>Prøv ikke at holde sidegrene med pincet direkte men snarere trække dem op holde det fedtvæv, der omgiver dem med tang i den ene hånd og laver en tunnel under grenen med pincet i anden hånden. Luk ikke tilbage grene.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Holding omkringliggende væv med pincet, trække IVC op og venstre producere spændinger i det lille område mellem IVC og aorta nøjagtigt i vinklen mellem IVC og den venstre nyre-vene. Tage højde for at det er næsten umuligt at adskille aorta fra IVC selv 2-3 mm nedenfor (i den caudale retning).</li>
	<li>Ved hjælp af divergerende bevægelser med pincet tips i din højre hånd gør et hul mellem aorta og IVC. Husk, at flere bevægelser gjort, jo højere chance for at beskadige skibet. Ideelt set forsøge at minimere antallet af bevægelser til 3-5.</li>
	<li>Forbered et stykke af 7-0 inert Prolene sutur af ca 2 cm lange. Placere den i den mus bughulen på operatørens venstre side i nærhed til IVC.</li>
	<li>Trække IVC op og til venstre igen. Indsæt din rigtige pincet tips ind i hullet mellem aorta og IVC, så tips vises på anden siden af IVC. Tage sutur og trække det tilbage gennem hullet (fig. 3A).</li>
	<li>Lave en midlertidig knude med sutur men ikke lukke den. Anbring 30G nål ("en spacer") bøjet som en krog ind i knuden og nu lukke det (fig. 3B).</li>
	<li>Fjerne spacer (figur 3C).</li>
	<li>Returnere tarmene tilbage til bughulen med en bomuld bud og distribuere dem lige i den.</li>
	<li>Lukke peritoneum med 6-0 vicryl sutur ved hjælp af kontinuerlig sløjfer. Lukke de første og sidste sløjfer som en knude.</li>
	<li>Nære huden ved hjælp af metalhæfteklammer.</li>
	<li>Injicere musen med 0,5 mL varm (37 ° C) glucose saltvand subkutant til at genoprette den flydende balance i organismen.</li>
	<li>Placere musen i en individuel bur i en varm (25 ° C) kammer eller værelse og satte mad og gel vand inde i buret. Observere indtil musen er fuldt tilbagebetalt (generelt, omkring 1 h).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community.">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).</li><li>Huang, W., Goldberg, R. J., Anderson, F. A., Kiefe, C. I., Spencer, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secular+trends+in+occurrence+of+acute+venous+thromboembolism:+the+Worcester+VTE+study+(1985-2009).">Secular trends in occurrence of acute venous thromboembolism: the Worcester VTE study (1985-2009).</a> Am J Med. 127 (9), 829-839 (2014).</li><li>House of Commons Health Care Committee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prevention+of+Venous+Thromboembolism+in+Hospitalised+patients.">The Prevention of Venous Thromboembolism in Hospitalised patients.</a> The House of Commons. , (2005).</li><li>Kuipers, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Travel+and+venous+thrombosis:+a+systematic+review.">Travel and venous thrombosis: a systematic review.</a> J Intern Med. 262 (6), 615-634 (2007).</li><li>Lopez, J. A., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+venous+thrombosis.">Pathophysiology of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 123, 30-34 (2009).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=von+Willebrand+factor-mediated+platelet+adhesion+is+critical+for+deep+vein+thrombosis+in+mouse+models.">von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models.</a> Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).</li><li>Payne, H., Ponomaryov, T., Watson, S. P., Brill, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+with+a+deficiency+in+CLEC-2+are+protected+against+deep+vein+thrombosis.">Mice with a deficiency in CLEC-2 are protected against deep vein thrombosis.</a> Blood. 129 (14), 2013-2020 (2017).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+promote+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (1), 136-144 (2012).</li><li>von Bruhl, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes,+neutrophils,+and+platelets+cooperate+to+initiate+and+propagate+venous+thrombosis+in+mice+in+vivo.">Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo.</a> J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).</li><li>Sevitt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+and+growth+of+valve-pocket+thrombi+in+femoral+veins.">The structure and growth of valve-pocket thrombi in femoral veins.</a> J Clin Pathol. 27 (7), 517-528 (1974).</li><li>Witsch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+hollow+and+perforated+flexible+wire+allows+the+safe+and+effective+local+application+of+thrombolytic+therapy+in+a+mouse+model+of+deep+vein+thrombosis.">A novel hollow and perforated flexible wire allows the safe and effective local application of thrombolytic therapy in a mouse model of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Thrombolysis. 37 (4), 450-454 (2014).</li><li>Shaya, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+effect+of+dabigatran+and+dalteparin+on+thrombus+stability+in+a+murine+model+of+venous+thromboembolism.">Comparison of the effect of dabigatran and dalteparin on thrombus stability in a murine model of venous thromboembolism.</a> J Thromb Haemost. 14 (1), 143-152 (2016).</li><li>Ni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+platelet+thrombus+formation+in+arterioles+of+mice+lacking+both+von+Willebrand+factor+and+fibrinogen.">Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen.</a> J Clin Invest. 106 (3), 385-392 (2000).</li><li>Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+complete+stasis+model+of+inferior+vena+cava+thrombosis.">Mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis.</a> J Vis Exp. (52), (2011).</li><li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL/6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+(stasis)+model.">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li><li>Siefert, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+venous+thrombus+resolution+in+plasminogen+activator+inhibitor+type-2+deficient+mice.">Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice.</a> J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).</li><li>Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crossroads+of+coagulation+and+innate+immunity:+the+case+of+deep+vein+thrombosis.">Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 11, 233-241 (2013).</li><li>Day, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrovascular+thrombosis+is+driven+by+tissue+factor+derived+primarily+from+the+blood+vessel+wall.">Macrovascular thrombosis is driven by tissue factor derived primarily from the blood vessel wall.</a> Blood. 105 (1), 192-198 (2005).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+fibrinolytic+system+in+ApoE+gene-deleted+mice+with+hyperlipidemia+augments+deep+vein+thrombosis.">Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis.</a> J Vasc Surg. 55 (3), 815-822 (2012).</li><li>Zhou, J., May, L., Liao, P., Gross, P. L., Weitz, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+ligation+rapidly+induces+tissue+factor+expression+and+venous+thrombosis+in+rats.">Inferior vena cava ligation rapidly induces tissue factor expression and venous thrombosis in rats.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (6), 863-869 (2009).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+of+venous+thrombosis.">Electrolytic inferior vena cava model (EIM) of venous thrombosis.</a> J Vis Exp. (53), e2737 (2011).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+to+study+thrombogenesis+and+thrombus+resolution+with+continuous+blood+flow+in+the+mouse.">The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse.</a> Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+high-density+lipoprotein+receptor+SR-BI+and+apoA-I+protect+against+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis.">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li><li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches.">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li><li>Geddings, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strengths+and+weaknesses+of+a+new+mouse+model+of+thrombosis+induced+by+inferior+vena+cava+stenosis:+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH.">Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).</li><li>Alvarado, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+mice+have+increased+thrombotic+potential:+sex+differences+in+a+mouse+model+of+venous+thrombosis.">Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).</li></ol>

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Her, præsenteres en protokol af IVC-stenose, der efterligner blod flow forvrængning, en vigtig udløsende faktor for DVT. Stenose af IVC inducerer udviklingen af trombi i 65-100% af C57BL/6 mus inden for 48 timer og 25-50% af mus inden for 2-6 h6,8,23 (slethvar A, upublicerede data, 2016). En stor begrænsning af metoden er variation i Trombe størrelse24 (figur 4), som er observeret efter både kortsigtede (6 h) og langsigtet (48 h) IVC stenose. Årsagerne til sådanne variation (i betragtning af at de samme betingelser, såsom spacer, anæstesi osv., der bruges) forbliver uklare, men man kan spekulere at anatomiske variationer mellem mus (f.eks., bredde IVC, antal og placering af både side og tilbage grene) ligge til grund for dette fænomen. Variation i Trombe størrelse gør trombose prævalens (procent af mus med en Trombe) Hovedresultatet. Trombose forekomsten kan sammenlignes med en kontingenstabel og det Fisher eksakt test. Et af forsøgene var en undtagelse, når reduceret Trombe størrelse med den samme trombose prævalens efter injektion af podoplanin-hæmmende antistoffer blev observeret 7.
Denne metode er især nyttig, når venøs trombose indledning er studeret. Det giver mulighed for at undersøge tidlige begivenheder i karvæggen, som rekruttering af celler, fører i sidste ende til trombose. Pro eller anti thrombotic virkningerne af narkotika kan evalueres ved hjælp af denne model med trombose prævalens er en primær udlæsning. Stenose for 48 h kan anvendes til at afsløre en anti-trombotiske fænotype, 6 h stenose kan anvendes, hvis en prothrombotic fænotype forventes. Histologiske analyse af blodprop og IVC ringmur kan også udføres.
Spørgsmålet om side grene bør være forbundet eller forlod patent forbliver åben. Den ene gruppe har vist at ligatur af sidegrene ikke øger blodprop størrelse og placering af side gren tættere end 1,5 mm til webstedet IVC ligatur dramatisk svækker Trombe udvikling25. Lukning af sidegrene kan fremkalde endotel skade i dem og også øge tid af kirurgi26. I vores hænder nedsætter manglende side gren lukning væsentligt trombose prævalens (ned til 10-30% efter 48 h stenose; Slethvar, upubliceret) og derfor vi ligate alle synlige sidegrene.
Ideelt, littermate kontrol bør anvendes som mus, selv om den samme baggrund, men fra forskellige kilder, kan have lidt forskellige trombose prævalens. Hvis effekten af DVT sig selv på nogen parametre (for eksempel, biokemiske) er undersøgt, bør sham-opererede dyr anvendes. Humbug-drives mus gennemgå samme procedure men ligatur omkring IVC lukkes løst og efterladt der uden producere stenose.
Den hyppigste fejl (et kritisk trin) i denne protokol er et forsøg på at adskille aorta og IVC ikke netop på vinklen mellem fartøjer men lidt lavere, hvilket normalt resulterer i blødning. Når en massiv blødning opstår, god genopretning af musen bliver usandsynligt og anbefales det at standse eksperimentet og aflive dyret. Normalt, mus inddrive godt, flytte inde i buret og væsentligt mister ikke vægt. Vi anbefaler at bruge mus over 20 g for både hanner og hunner og holde dyr (især hanner) i individuelle bure efter operationen indtil slutningen af forsøget at undgå kæmper og skade. Det er blevet rapporteret i en anden (elektrolytisk) model af DVT, mandlige mus producere større trombi end hunner27. Analyse af vores data har ikke afsløret væsentlige forskel i trombose prævalensen mellem mandlige og kvindelige mus (slethvar, upubliceret). Derfor opfordres forskere til at udføre eksperimenter ved hjælp af IVC stenose model på mus af begge køn.
Optrævling af suturer og/eller hæfteklammer kan ikke udelukkes, især i lange eksperimenter (en uge og længere). Således mus bør kontrolleres mindst to gange om dagen specielt til sutur integritet og en særlig opmærksomhed bør gives til udseendet af blod spor på bur sengetøj.
Det skal bemærkes, at som nogen andre dyremodel stenose af IVC har sine begrænsninger med hensyn til oversættelse til mennesker. For eksempel, har murine IVCs ikke ventiler, hvorimod menneskelige DVT udvikler inde venøs ventiler. Også, mennesker har spinal lodret med muskel pumpe er en vigtig mekanisme accelererende blodgennemstrømningen i venerne. Derimod har mus vandret spinal orientering med ingen rolle i muskel pumpe støtte blod tilbage til hjertet. Disse begrænsninger skal overvejes, når oversætte data fra musen til den menneskelige sygdom.

Dyb venøs trombose (DVT) er udviklingen af trombi i dybe vener, normalt (men ikke kun) i benene. I konjunktioner med lungeemboli (PE; udpeget sammen som venøs tromboemboli, VTE) det udvikler sig i cirka 900.000 amerikanerne årligt og repræsenterer et alvorligt sundhedsproblem og økonomisk problem1,2. PE, en komplikation af DVT, opstår, når en blodprop bliver løsrevet fra sin oprindelige placering og når lungerne, som kan forårsage respiratorisk insufficiens og død. Dødstal fra VTE overstiger dødelighed fra AIDS, breast cancer og trafik ulykker, kombinerede3.
Den store faktor forårsager DVT udover er kendt årsager, såsom kræft eller traume, manglen mobilitet 4,5. Dette kan skyldes kirurgi (især ortopædisk), lammelse, langdistanceflyvninger eller andre årsager. Blodgennemstrømningen i venerne afhænger muskel pumpe og derfor lemmer immobilisering resultater i stagnerende blod flyde i venøse ventiler, hvilket fører til trombose. Formålet med metoden beskrevet heri er at sammenfatte disse blod flow forvrængning6,7. Delvis flow begrænsning i den ringere vena cava (IVC) efterligner betingelser skabt i menneskelige venøs ventiler og resulterer i dannelsen af en Trombe struktur ligner af menneskelige trombi6. Den store del af en blodprop er rød og består af røde blodlegemer, fibrin og indarbejdelse af blodplader. Trombi har en lille "hvide del" beriget med blodplader (figur 1), som ligner "linjer af Zahn" beskrevet i menneskelige venøs trombi. Begge dele i blodprop indeholder også neutrofiler8, som er blandt de første celler skal ansættes i stedet for fremtidige Trombe6,9. Neutrofiler i den røde del udvise neutrofile ekstracellulære fælder (net), hvorimod neutrofiler i den hvide del synes at være net8. På samme måde til menneskelige DVT, er trombose i mus ledsaget af forhøjet plasma D-dimer niveauer (figur 2). Lavmolekylære heparin (enoxaparin), anvendes til DVT profylakse hos patienter, også forhindrer trombose hos mus. En vigtig fordel ved denne metode er fravær i endothelial denudation9, som er karakteristisk for menneskelige DVT10. Denne funktion gør IVC stenose et mere klinisk relevante model af DVT end eksempelvis induktion i blodprop af ferrichloridopløsning, som inducerer endotel denudation og hvor trombi består overvejende af blodplader11, 12,13. En model af komplet stilstand i IVC foretrækkes af flere hold14,15,16. I modsætning til stenose, hvori resterende flow vedligeholdes i fartøjet, anvendelse af stasis stopper helt flowet og dermed begrænser adgangen til systemisk administreret stoffer til webstedet trombose. Det synes også, at underliggende trombose induceret af stenose og stasis mekanismer er forskellige: stenose resulterer i udviklingen af lokale betændelse (aktivering af endothelium, frigivelse af Weibel-Palade krop indhold, rekruttering af immunceller og blodplader til karvæggen) navnlig, forårsager "immunothrombosis"6,9,17, stasis synes at fremkalde snarere trombose baseret på væv faktor og andre koagulation og fibrinolyse-relaterede mekanismer18,19,20. Således, de stenose og stasis modeller afspejler lidt forskellige aspekter af venøs blodprop udvikling, selv om deres mekanismer kan helt sikkert overlapper. Elektrolytisk IVC model (EIM) af DVT21,22 inducerer en Trombe kun delvist tilstoppe karvæggen. Derfor er det bekvemt for afprøvning af systemisk administration af forskellige lægemidler virkninger på blodprop vækst. Denne model forudsætter dog afbrydelse af IVC væg integritet (indsættelse af en nål) og induktion i blodprop af elektrisk strøm gør patofysiologiske relevansen af denne mekanisme mindst diskutable.

<table style="border-collapse:collapse;width:536pt" width="715">
	<colgroup>
		<col style="width:162pt" width="216" />
		<col style="width:160pt" width="213" />
		<col style="width:89pt" width="119" />
		<col style="width:125pt" width="167" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">C57BL/6 mice</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Charles River</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66" style="width:125pt" width="167">8 - 10 weeks old, bothe genders</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Scissors</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">WPI</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">15922</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Scissors</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">WPI</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">14003</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Dumont 5/45 forceps</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">FST</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">11251-35</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">7-0 Prolene suture</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Ethicon</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">W8725</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">6-0 Vicryl suture</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Ethicon</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">W9981</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Cotton buds</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Spar</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Millswabs sterile&#160;</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Millpledge veterinary&#160;</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">611950</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Drapes</td>
			<td class="xl67">Kruuse</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">141765</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Glucose Saline-Aqupharm3</td>
			<td class="xl67">Animal Care</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">XVD589</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="46" style="height:34.5pt">
			<td class="xl63" height="46" style="width:162pt;height:34.5pt" width="216">Clear H20 HydroGel 98% sterile water&#160;</td>
			<td class="xl67">Clearh2o</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Buprenorphine</td>
			<td class="xl67">National Veterinary Supplies</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Isoflurane vaporizer</td>
			<td class="xl67">General Anaesthetic Services</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl63" height="42" style="width:162pt;height:31.5pt" width="216">IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">National Veterinary Supplies</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Sterilizer Steri350</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Inotech</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Microscope Olympus SZX10</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Olympus</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis

Dyb vene trombose (DVT) og dens ødelæggende komplikation, lungeemboli, er en alvorlig sundhedsproblem med høj dødelighed. Mekanismer af blodprop dannelse i venerne forbliver uklar. Manglende mobilitet (fxefter operation eller langdistanceflyvninger) er en af de vigtigste faktorer, som fører til DVT. Den patofysiologiske konsekvens af manglen mobilitet er blod flow stagnation i venøse ventiler. Her, er en model beskrevet der efterligner forstyrrelsen flow som en trombose-kørsel faktor. I denne model oprettes delvis flow begrænsning (stenose) i den ringere vena cava (IVC). Lukningen af omkring 90% af IVC lumen for 48 h resulterer i udvikling af trombi strukturelt ligner dem hos mennesker. Lighederne er: i) det meste af Trombe volumen er rød, dvs., består af røde blodlegemer og fibrin, ii) tilstedeværelsen af en hvid led (linjer af Zahn), iii) ikke-undveg endotel éncellelag, iv) forhøjede plasmaniveauer D-Dimer og v) mulighed for at forhindre trombose af lavmolekylære heparin. Begrænsninger omfatter variabel størrelse af trombi og faktum, at en vis procentdel af wild-type mus (0 - 35%) kan ikke producere en blodprop. Ud over visuelle observation og måling, kan trombi visualiseres ved ikke-invasive teknologier, såsom ultralyd, som giver mulighed for overvågning dynamikken i Trombe udvikling. På kortere tid points (1-6 h), intravital mikroskopi kan anvendes direkte observere begivenheder (f.eks., rekruttering af celler til karvæggen) forud for blodprop dannelse. Brug af denne metode af flere teams rundt om i verden har gjort det muligt at afdække grundlæggende mekanismer af DVT indledning og identificere potentielle mål, der kan være til gavn for dens forebyggelse.

Heri, er en model af DVT induceret af flow forvrængning i IVC beskrevet. Induktion af stenose i IVC indleder forvrængning og stagnation af blodgennemstrømningen og efter et stykke tid (i dette tilfælde, 48 h) resulterer i udviklingen af en blodprop, strukturelt ligner menneskelige DVT trombi (fig. 1A). Tilstedeværelsen af en blodprop inde IVC er let kan påvises visuelt (figur 1B). En vigtig ligheden mellem model og menneskelige DVT er forhøjet plasma D-dimer niveauer (figur 2). D-dimer er et produkt af fibrin nedbrydning og sin tilstedeværelse i blodet tyder på, at en aktiv trombotisk processen foregår.
Modellen præsenteres en trinvis i figur 3A-C. IVC er omhyggeligt udsat, et hul mellem IVC og aorta er lavet og en sutur (Prolene 7-0) er trukket gennem hullet under IVC. Derefter er IVC forbundet af sutur over en spacer (30G kanyle, figur 3D), efter som spacer er fjernet. Denne procedure giver mulighed for ca. 90% lukning af IVC lumen forlader de resterende 10% patent. Dette sikrer blod flow stagnation i sidste ende fører til trombose.
Figur 4 viser den store ulempe af modellens variable Trombe størrelse. Alle disse trombi blev indhentet i det samme eksperiment udført på vildtype mandlige mus af samme oprindelse, alder og lignende kropsvægt. Selv om alle mus produceret trombi (trombose forekomsten af 100%), varierer deres størrelse klart i en bred vifte.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig1.jpg"> 
Figur 1: Repræsentative Trombe efter 48 h begrænsning/stenose. (A) en typisk blodprop efter 48 h IVC stenose. Bemærk red (røde blodlegemer-beriget) og hvid (Trombocyt-beriget) dele. (B) IVC med (venstre) eller uden (ret) en blodprop. Skalere barer = 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig1large.jpg" target="_blank">venligst klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig2.jpg"> 
Figur 2 : Forhøjede plasmaniveauer D-dimer efter IVC stenose ansøgning. Mus blev udsat for IVC stenose. Blodet blev taget på de angivne tidspunkter, stabiliseret 1:9 med 3,8% natrium citrat, plasma blev fremstillet ved centrifugering (2.300 x g, 5 min) og D-dimer niveauer blev fastsat af en ELISA kit ifølge producentens anvisninger. Cirkler udpege sham-drives mus, krydser udpege IVC stenose. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig2large.jpg" target="_blank">Venligst klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig3.jpg"> 
Figur 3: Flow begrænsning/stenose i den ringere Vena Cava (IVC) model af DVT i mus. På hinanden følgende faser af modellen er præsenteret. (A) et hul mellem IVC og aorta er lavet og en sutur er trukket gennem det omkring IVC. (B) en knude er lukket over en spacer (30 G nål). (C) spacer er fjernet: den endelige opfattelse, at kirurgen ser før du lukker musen. Den stiplede gule linje afgrænser IVC. LRV står for venstre nyre-vene. Skalere barer = 0.2 mm. (D) spacer (30 G nål). Skalere barer = 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig3large.jpg" target="_blank">venligst klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig4.jpg"> 
Figur 4 . Variation af Trombe størrelse. Mus blev udsat for 48 h IVC stenose. Præsenteret er trombi fremstillet i det samme eksperiment. Skala barer 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig4large.jpg" target="_blank">venligst klik her for at se en større version af dette tal.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis at JoVE.com

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Vi beskriver her stenose i den ringere vena cava som murine model af dyb venetrombose. Denne model indeholder blod flow begrænsning, en af de store udløser for venøs trombose hos mennesker.

Stenose af den ringere Vena Cava: en Murine Model for dyb venøs trombose

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Murine Model of CD40-activation of B cells

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induktion af graft-versus-host sygdom og<em&gt; In Vivo</em&gt; T Cell Monitoring Brug en MHC-matchet murin model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Murine Model of Allergen Induced Asthma

Murin model af allergen-induceret astma

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

En murin model af gruppe B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Dyb venøs trombose induceret af Stasis i mus overvåges af høj frekvens ultralyd

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Dyb Dermal injektion som en Model af Candida albicans hudinfektion histologisk analyser

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

In Vivo Billeddannelse af reaktive ilt arter i en Murine sår Model

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various ...

Digestion of the Murine Liver for a Flow Cytometric Analysis of Lymphatic Endothelial Cells

Fordøjelsen af Murine leveren en Flow Cytometric analyse af lymfatisk Endothelial Cells

Within the liver, lymphatic vessels are found within the portal triad, and their described function is to remove interstitial fluid from the liver to the ...