Name: percutaneous contrast echocardiography-guided intramyocardial injection and cell delivery in a large preclinical model
Uploaded: 2018-01-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Percutaneous Contrast Echocardiography-guided Intramyocardial Injection and Cell Delivery in a Large Preclinical Model at JoVE.com

يشكر المؤلفون مونفورت شيلا، بريندا مارتينيز، كارلوس Micó، ألبرتو مونيوز، ومانويل مولينا للدعم الممتاز أثناء جمع البيانات، و "كارلوس بوينو" لتزويد الخلايا EGFP(+) HEK-293. وأيد هذا العمل جزئيا: مؤسسة Séneca، ص دي وكالة العلوم التكنولوجيا، المنطقة دي مورسيا، إسبانيا (ج ت) (منح عدد: 11935/PI/09)؛ العلاج دي الأحمر Celular، إيسسيي الفرعية. جرال. Redes، دي PN السادس أنا + د + أنا 2008-2011 (لا منحة. RD12/0019/0001) (جم)، تشترك في تمويله التمويل الهيكلي من "الاتحاد الأوروبي" (FEDER) (جم)؛ وجامعة ريدينغ، المملكة (AG، غيغابايت) المتحدة (التمويل المركزي). وكان الممولين أي دور في تصميم الدراسة أو جمع البيانات والتحليل، وقرار نشر أو إعداد المخطوطة.

التجارب الموضحة هنا كانت وافقت عليها "لجنة البحوث الأخلاقية" التابعة لجامعة مورسيا، إسبانيا، وأجريت وفقا للتوجيه 2010/63/الاتحاد الأوروبي من "المفوضية الأوروبية". تم إجراء الخطوات الموضحة ضمن البروتوكولات التشغيل القياسية التي كانت جزءا من خطة العمل، وأدوا ليس فقط لغرض تصوير الفيديو المصاح...

وكان الهدف الأساسي لتطوير تقنية مينيملي التي يمكن استخدامها لإيصال الخلايا الجذعية في عضلة القلب من الأرانب (كبيرة حجم الإكلينيكية حيوان نموذجا)17،18، بينما الاستفادة من الاستخدام نظام متاحة بسهولة في كثير من السريرية التصوير غير مكلفة نسبيا ومراكز البحوث....

العلاجات الخلية والجينات هي مثيرة ووضع استراتيجيات لتجديد/إصلاح عضلة القلب المصابين في هفريف من أي وقت مضى. وقد عدد قليل من الدراسات مقارنة الفعالية (مثلاً، معدل احتفاظ الخلية) طرق مختلفة لإيصال الخلية، التي أظهرت استمرار تفوق IMI عبر طرق إينتراكوروناري أو عن طريق الحقن الوريدي1،2 , 3 , 4 , 5-وهكذا، ليس من المستغرب أن نسبة كبيرة من الدراسات على نماذج متعدية للعلاج بالخلايا الجذعية لعضلة القلب المتضررة، تسليم إينجيكتاتي عبر IMI المضطلع بها في إطار العرض مباشرة في صدر فتح إجراء6،7 . بيد أن هذا النهج قد العديد من القيود، بما في ذلك طبيعة الغازية من الإجراء، الذي ينطوي على خطر وفيات الإجرائية المحيطة (غالباً ما يبلغ)8. وبالإضافة إلى ذلك، IMI ضمن طريقة العرض المباشر لا يلغي إمكانية حقن غير مقصود في تجويف البطين. في الممارسة السريرية IMI أثناء جراحة الصدر المفتوحة يمكن أن يكون وسيلة مناسبة لإيصال خلية العلاجية، مثلاً، خلال الشريان التاجي الالتفافية جراحة الاختلاس (تحويل)؛ ومع ذلك، هذا النهج قد لا يكون المناسبة لإيصال خلية في اعتلال عضلة القلب العالمية غير الدماغية المنشأ (مثلاً، هفريف الثانوي لاعتلال عضلة القلب الناجم عن انثراسيكلين (أيكم)).
شك في أن مرض القلب الاقفاري (IHD) هو السبب الأكثر شيوعاً هفريف (~ 66%)10من9،؛ ومع ذلك، غير الدماغية اعتلال عضلة القلب، بما في ذلك أيكم، ما زال يؤثر على نسبة كبيرة من المرضى الذين يعانون من هفريف (33%)9 . والواقع أن التقدم الذي أحرز مؤخرا في علم الأورام السريري أسفرت عن أكثر من 10 مليون من الناجين من السرطان في الولايات المتحدة الأمريكية وحدها11، مع تقديرات لعدد مماثل في أوروبا، وتمشيا مع اتجاه العام نحو تحسين البقاء على قيد الحياة لمرضى السرطان12 ،13. وهكذا، استكشاف فوائد العلاجات رواية مثل زرع الخلايا الجذعية لغير الدماغية اعتلال عضلة القلب، فضلا عن تجريب طريق فعالة وكسبها من الخلايا الجذعية التسليم بأهمية قصوى، نظراً للعدد المتزايد من المرضى تتأثر كارديوتوكسيسيتي الثانوي على أدوية السرطان.
من المذكرة، فرضية اختبار دراسات استخدام الخلايا الجذعية العلاج تهدف إلى إصلاح/تجديد عضلة القلب المتضررة كثيرا ما تنطوي على استخدام القوارض الصغيرة (مثلالفئران والجرذان). غالباً ما تتطلب هذه النماذج تكلفة عالية التردد نظم الموجات فوق الصوتية لتقييم وظيفة عضلة القلب، وعادة ما تكون مجهزة بمحولات المصفوفة الخطية التي لديها بعض القيود المتأصلة المرتبطة بها (مثلاً، صدى)14. ومع ذلك، قد نماذج أخرى مثل الأرانب، تمثل نموذجا الإكلينيكية كبيرة، بعض المزايا لاختبار الفرضية لعلاجات الخلايا الجذعية في هفريف. وهكذا، خلافا للفئران والجرذان، الأرانب الحفاظ على نظام النقل+ 2 Ca والكهربية الخلوية التي يشبه البشر وسائر الحيوانات الكبيرة (مثلالكلاب والخنازير)15،16،17 ،،من1819. وهناك ميزة أخرى، هي على الانقياد للقلب بالموجات فوق الصوتية التصوير باستخدام غير مكلفة نسبيا ونظم ضربات القلب السريرية متاحة على نطاق واسع مجهزة بمحولات الصفيف المرحلة ذات تردد عال نسبيا، مثلاً، 12 ميجاهرتز، مثل تلك التي كثيرا ما تستخدم في أمراض القلب في الأطفال حديثي الولادة وطب الأطفال. تسمح هذه النظم التصوير مشخصين ممتازة مع أحدث التكنولوجيا، وأنها تستفيد من تفوق التوافقي التصوير20. وعلاوة على ذلك، اختبار الفرضيات واسعة إمكانات العلاج التجديدي القلب (مثل، العلاج بالخلايا الجذعية)، السلامة، كفاءة، إمكانات كارديوميوجينيك، كذلك تقييم مصير إينجيكتاتي مرة واحدة سلمت إلى عضلة القلب، إلزامية قبل أن يمكن اعتبار للاستخدام البشري، وأنها تتطلب استخدام نماذج حيوانية الإكلينيكية الكبيرة، مثل،من17أرنب19. هنا، يمكننا وصف أسلوب كسبها لإيصال خلية عن طريق IMI التباين عن طريق الجلد-ضربات القلب تسترشد باستخدام نظام تخطيط صدى القلب سريرية، التي تهدف إلى العلاج القائم على زرع الخلايا الجذعية لاعتلال عضلة القلب غير الدماغية20 . كما يصف لنا فوائد الحبر الهند (InI، تعرف أيضا باسم الصين الحبر) كالموجات فوق الصوتية على النقيض عامل و في الموقع الراسم من إينجيكتاتي في قلب الأرنب.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="890">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">HD11 XE Ultrasound System</td>
			<td style="width:131px;">Philips</td>
			<td style="width:183px;">10670267</td>
			<td style="width:259px;">Echocardiography system.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">S12-4</td>
			<td style="width:131px;">Philips</td>
			<td style="width:183px;">B01YgG</td>
			<td>4-12 MHz phase array transducer</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;">Ultrasound Transmision Gel (Aquasone)</td>
			<td style="width:131px;">Parket laboratories Inc</td>
			<td style="width:183px;">N 01-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vasovet 24G</td>
			<td style="width:131px;">Braun</td>
			<td style="width:183px;">REF 381212</td>
			<td>&#160;over-the-needle catheter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Omnifix-F 1 ml syringe</td>
			<td style="width:131px;">Braun</td>
			<td style="width:183px;">9161406V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Imalgene (Ketamine)</td>
			<td style="width:131px;">Merial</td>
			<td style="width:183px;">RN 9767</td>
			<td>Veterinary prescription is necessary</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Domtor (Medetomidine)</td>
			<td style="width:131px;">Esteve</td>
			<td style="width:183px;">CN 570686.3</td>
			<td>Veterinary prescription is necessary</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Heating Pad</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Faber-Castel TG1</td>
			<td style="width:131px;">Faber-Castel</td>
			<td style="width:183px;">16 33 99</td>
			<td style="width:259px;">India (China) Ink</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Holter Syneflash</td>
			<td style="width:131px;">Ela medical</td>
			<td style="width:183px;">SF0003044S</td>
			<td style="width:259px;">24 h Holter ECG system.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Electrodes Blue Sensor&#174;</td>
			<td style="width:131px;">Ambu (NUMED)</td>
			<td style="width:183px;">VLC-00-S</td>
			<td style="width:259px;">Holter ECG electrodes.</td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:319px;">Microtome</td>
			<td style="width:131px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:183px;">RM2155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Microscope</td>
			<td style="width:131px;">Olimpus</td>
			<td style="width:183px;">CO11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">ABC Vector Elite</td>
			<td style="width:131px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:183px;">PK-6200</td>
			<td>Avidin Biotin Complex Kit.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Chicken anti-GFP antibody</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:183px;">A10262</td>
			<td>Primary antibody.</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">Biotinylated goat-anti-chicken IgG Antibody</td>
			<td style="width:131px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:183px;">BA-9010</td>
			<td>Secondary Antibody.</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">3,30-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB)</td>
			<td style="width:131px;">DAKO (Agilent)</td>
			<td style="width:183px;">S3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">Fluorescence Microscope</td>
			<td style="width:131px;">Carl Zeiss 
			MicroImaging</td>
			<td style="width:183px;">Zeiss AX10 Axioskop</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Holter ECG</td>
			<td>Elamedical</td>
			<td>Syneflash SF0003044S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">Dulbecco&#8217;s modified Eagle medium (DMEM)&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11965084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">10% fetal calf serum (FCS)</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11573397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">0.05% Trypsin-Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">Lipofectamine 2000 (Lipid transfection reagent)</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11668019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Reduced serum medium (Opti-MEM)</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">31985070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">Hygromycin B</td>
			<td style="width:131px;">Calbiochem (MERCK)</td>
			<td style="width:183px;">400051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Xylene (histological)</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">X3S-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Hydrogen Peroxide Solution (H2O2)</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:183px;">H1009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Pronase</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">53-702-250KU</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

percutaneous contrast echocardiography-guided intramyocardial injection and cell delivery in a large preclinical model

الخلية والعلاج الجيني مثيرة والاستراتيجيات الواعدة غرض التجديد القلب في الإعداد لفشل القلب مع انخفاض كسر قذفي (هفريف). قبل أن يمكن النظر في استخدام، ونفذت في البشر، مطلوبة في نماذج حيوانية كبيرة الدراسات السريرية واسعة النطاق لتقييم سلامة وفعالية، ومصير إينجيكتاتي (مثلاً، الخلايا الجذعية) مرة واحدة سلمت في عضلة القلب. نماذج القوارض الصغيرة توفر مزايا (مثلاً، الفعالية، الانقياد للتحوير الوراثي من حيث التكلفة)؛ ومع ذلك، نظراً للقيود الملازمة لهذه النماذج، ترجمة النتائج التي توصلت إليها في هذه نادراً ما إلى العيادة. على العكس من ذلك، نماذج حيوانية كبيرة مثل الأرانب، بمزايا (مثلاً، الكهربية القلبية مماثلة بالمقارنة مع البشر والحيوانات الكبيرة الأخرى)، مع الاحتفاظ بتوازن جيد فعالة من حيث التكلفة. وهنا، نحن توضح كيفية تنفيذ تقنية حقن (IMI) توجيه ضربات القلب إينتراميوكارديال تباين عن طريق الجلد، التي يتم كسبها، وجيد التحمل وآمنة وفعالة جداً في التنفيذ الهادف إينجيكتاتيس، بما في ذلك الخلايا، في مواقع عدة داخل عضلة القلب نموذج أرنب. لتنفيذ هذه التقنية، ونحن أيضا استفادت من نظام تخطيط صدى القلب السريرية متاحة على نطاق واسع. بعد وضع في الممارسة البروتوكول الموصوفة هنا، سوف تصبح باحث بالمعرفة الأساسية بالموجات فوق الصوتية المختصة في أداء هذا الأسلوب تنوعاً وكسبها للاستخدام الروتيني في التجارب، وتهدف إلى اختبار الفرضية قدرات للمداواة التجدد القلب في نموذج أرنب. متى تحقق الكفاءة، يمكن تنفيذ الإجراء بأكمله خلال 25 دقيقة بعد أنايسثيتيزينج الأرنب.

التباين عن طريق الجلد IMI توجيه ضربات القلب مع InI:
استخدام البروتوكول الموصوفة أعلاه، وبعد تحديد المواقع المثلى غيض الإبرة أكده تخطيط صدى القلب وحقن بدأت، هايبريتشوجينيسيتي ترانسمورال لوحظ أثناء تسليم InI (10% v/v في برنامج تلفزيوني) ...

Watch this Scientific Journal Video about Percutaneous Contrast Echocardiography-guided Intramyocardial Injection and Cell Delivery in a Large Preclinical Model at JoVE.com

Percutaneous Contrast Echocardiography-guided Intramyocardial Injection and Cell Delivery in a Large Preclinical Model

حقن إينتراميوكارديال توجيه ضربات القلب التباين عن طريق الجلد وتسليم خلية في نموذج الإكلينيكية كبير

رواية الاستراتيجيات العلاجية في الطب التجديدي القلب تتطلب دراسات شاملة ومفصلة في نماذج حيوانية السريرية كبيرة قبل أن يمكن النظر لاستخدامها في البشر. هنا، نبدي تقنية حقن إينتراميوكارديال توجيه ضربات القلب تباين عن طريق الجلد في الأرانب، الذي قيمة بالنسبة لفرضية اختبار فعالية هذه العلاجات الجديدة.

Cell and gene therapy are exciting and promising strategies for the purpose of cardiac regeneration in the setting of heart failure with reduced ejection ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

الشريان التاجي ربط Intramyocardial وحقن الفئران في نموذج من احتشاء

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

نقل الجينات لقصور القلب الدماغية في نموذج ما قبل السريرية

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

Intramyocardial Cell Delivery: Observations in Murine Hearts

داخل عضلة القلب توصيل الخليوي: ملاحظات في قلوب الفئران

Previous studies showed that cell delivery promotes cardiac function amelioration by release of cytokines and factors that increase cardiac tissue ...

Ultrasound-guided Transthoracic Intramyocardial Injection in Mice

الموجهة بالأمواج فوق الصوتية عبر الصدر حقن داخل عضلة القلب في الفئران

Murine models of cardiovascular disease are important for investigating pathophysiological mechanisms and exploring potential regenerative therapies. ...

A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

وما قبل السريرية الفئران نموذج من الانبثاث الكبدي

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

A Surgical Procedure for Resecting the Mouse Rib: A Model for Large-Scale Long Bone Repair

عملية جراحية لResecting الماوس الضلع: نموذج لواسعة النطاق إصلاح العظام الطويلة

This protocol introduces researchers to a new model for large-scale bone repair utilizing the mouse rib. The procedure details the following: preparation ...

Contractions of Human-iPSC-derived Cardiomyocyte Syncytia Measured with a Ca-sensitive Fluorescent Dye in Temperature-controlled 384-well Plates

تقلصات سينسيتيا كارديوميوسيتي المستمدة من اللجنة التوجيهية الإنسان يقاس بصبغة فلورسنت المراعية لكاليفورنيا في 384-جيدا لوحات التحكم في درجة الحرارة

Spontaneously contracting syncytia of cardiomyocytes derived from human-induced pluripotent stem cells (hiPSC-CM) are a useful model of human cardiac ...

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

نموذج قبل السريرية من نقص التروية الأطراف هند في الأرانب السكري

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

في المختبر نموذج الأوعية التاجية

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

تأخر التسليم داخل القلب للخلايا الجذعية بعد إصابة إعادة ضخ الإقفاري في نموذج مورين

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...