Name: percutaneous contrast echocardiography-guided intramyocardial injection and cell delivery in a large preclinical model
Uploaded: 2018-01-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Percutaneous Contrast Echocardiography-guided Intramyocardial Injection and Cell Delivery in a Large Preclinical Model at JoVE.com

Yazarlar Sheila Monfort, Brenda Martínez, Carlos Micó, Alberto Muñoz ve Manuel Molina EGFP(+) HEK-293 hücreler sağlamak için veri ve Carlos Bueno toplanması sırasında sağlanan mükemmel destek için teşekkür ederiz. Bu eser kısmen tarafından desteklenmiştir: Fundación Séneca, Agencia de Ciencia y Tecnología, Región de Murcia, İspanya (JT) (izni numarası: 11935/PI/09); Red de Terapia Celular, ISCIII-Sub. Gral. Redes, VI PN de ben + D + ben 2008-2011 (vermek yok. RD12/0019/0001) (JMM), ortak finanse yapısal fon ile Avrupa Birliği'nin (FEDER,) (JMM); ve okuma Üniversitesi, Amerika Birleşik Devletleri (AG, GB) (Merkez fon). Fon çalışma tasarım, veri toplama ve analizi, yayımlamaya karar veya el yazması hazırlanması herhangi bir rolü yoktu.

Burada açıklanan deneyleri etik University of Murcia, İspanya, araştırma Komitesi tarafından onaylanmış ve Avrupa Komisyonu yönergesi 2010/63/AB uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Açıklanan adımları çalışmalarının planının bir parçası olduğunu ve yalnızca bu kağıt için beraberindeki video çekimi amacıyla gerçekleştirilen değil standart çalışma protokolleri altında yapıldı.
1. hücre ve memeli ifade vektör hazırlanması
Not: B...

Tavşan (bir büyük ölçekli preklinik hayvan modeli)17,18, Miyokardiyum içine kök hücrelerin tesliminde kullanımı yararlanan ederken kullanılabilecek bir minimal invaziv tekniği geliştirmek için birincil hedefi oldu bir nispeten ucuz görüntüleme sistemi birçok klinik kullanıma hazır ve araştırma merkezleri. Burada, biz, bir klinik Ekokardiyografi sistemi kullanarak göstermek ve ını, in situ izleme yetenekleri ve echogenic özellikl...

Hücre ve gen terapileri heyecan verici ve hiç HFrEF yaralı Miyokardiyum Yenileyici/onarmak için stratejiler geliştirmek. Bir kaç çalışmalar hücre teslim, ımı üstünlük intrakoroner veya intravenöz yol1,2 üzerinde tutarlı bir şekilde göstermiştir farklı yolların etkinliği (örneğin, hücre tutma oranı) karşılaştırıldığında var , 3 , 4 , 5. böylece, kök hücre tedavisi yaralı Miyokardiyum translasyonel modelleri üzerinde çalışmalar büyük bir kısmı injectate bir açık göğüs yordamı '6,7 doğrudan görünümü altında gerçekleştirilen ımı üzerinden teslim şaşırtıcı değildir . Ancak, bu yaklaşım peri-usul mortalite (genellikle altında bildirilen)8risk taşıdığını yordam invaziv yapısı dahil olmak üzere bazı sınırlamaları vardır. Buna ek olarak, doğrudan görünümü altında bir ımı ventrikül boşluğuna içine yanlışlıkla enjeksiyon için olasılığı ortadan kaldırmaz. Klinik pratikte bir ımı açık göğüs cerrahisi sırasında olabilir uygun bir yöntem'tedavi hücre dır, örneğin, sırasında koroner arter bypass greft cerrahisi (CABG); Ancak, bu yaklaşım içinde küresel kardiyomiyopati (örneğin, HFrEF Antrasiklin kaynaklı kardiyomiyopati (AICM) ikincil) iskemik olmayan menşe hücre teslimat için uygun olmayabilir.
Hiç şüphe yok ki bu iskemik kalp hastalığı (IHD) olduğunu HFrEF en sık nedeni olduğunu (~ % 66)9,10; ancak, Sigara iskemik kardiyomiyopati, AICM, dahil olmak üzere hala hasta HFrEF (% 33)9 ile önemli bir bölümünü etkiler . Nitekim, klinik Onkoloji son gelişmeler kanser ABD tek başına11, 10 milyondan fazla ölüm tahminler Avrupa'daki kanser hastaları12 geliştirilmiş yaşama doğru genel bir eğilim ile tutarlı benzer bir sayının ile sonuçlandı ,13. Böylece, kök hücre nakli olmayan iskemik kardiyomiyopati, hem de kök hücre teslimat etkili ve minimal invaziv bir rotanın trialing için son derece önemlidir gibi yeni tedaviler faydaları keşfetmek, verilen hastaların sayısının artması rastlantısal antikanser ilaçlar için ikinci tarafından etkilenen.
Not, Hipotez testleri kullanarak kök hücre tedavisi yaralı Miyokardiyum sık onarım/yeniden amaçlayan çalışmalar küçük kemirgen (örneğin, fare ve sıçanlar) kullanımını gerektirir. Bu modeller genellikle genellikle bazı içerdiği ilişkili sınırlamaları (örneğin, yankı)14olan doğrusal dizi dönüştürücüler ile donatılmış miyokard fonksiyon değerlendirilmesi için pahalı yüksek frekans ultrason sistemleri gerektirir. Ancak, tavşanlar, büyük preklinik modeli temsil gibi diğer modeller HFrEF kök hücre tedavilerin Hipotez testleri için bazı avantajları var. Böylece, sıçanlar ve fareler aksine, tavşan bir Ca+ 2 taşıma sistemi ve insan ve (diğer büyük hayvanlarörneğin, köpek ve domuz)15,16,17 benzer hücresel Elektrofizyoloji korumak ,18,19. Diğer bir avantajı, kardiyak ultrason görüntüleme nispeten ucuz kullanarak ve yaygın olarak kullanılan klinik Ekokardiyografi sistemleri gibi nispeten yüksek frekans faz dizi güç çeviriciler, örneğin, 12 MHz ile donatılmış için onların amenability olduğunu Bu sık kullanılan yenidoğan ve pediatrik Kardiyoloji. Bu sistemlerin en modern teknoloji ile mükemmel Ekokardiyografik görüntülemede izin ve harmonik20düşsel üstünlük yararlanmak. Ayrıca, potansiyel kardiyak rejeneratif terapileri (örneğin, kök hücre tedavisi), onların Emanet, etkinlik, cardiomyogenic potansiyel yanı sıra bir kez injectate kaderi değerlendirilmesi geniş Hipotez testleri teslim içine Miyokardiyum, zorunlu önce insan kullanım için kabul edilebilir ve onlar tavşan17,19gibi büyük preklinik hayvan modelleri kullanılmasını gerektirir. Burada, kök hücre nakli tabanlı tedavisi olmayan iskemik kardiyomiyopati20 için amaçlayan bir klinik Ekokardiyografi sistemi kullanarak perkütan kontrast-Ekokardiyografi destekli ımı ile hücre teslimat için minimal invaziv tekniği tarif . Ayrıca, injectate tavşan kalbinde bir ultrason kontrast Ajan ve in situ izleyici olarak çini mürekkebi (ını, Çin mürekkep olarak da bilinir) faydaları açıklar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="890">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">HD11 XE Ultrasound System</td>
			<td style="width:131px;">Philips</td>
			<td style="width:183px;">10670267</td>
			<td style="width:259px;">Echocardiography system.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">S12-4</td>
			<td style="width:131px;">Philips</td>
			<td style="width:183px;">B01YgG</td>
			<td>4-12 MHz phase array transducer</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;">Ultrasound Transmision Gel (Aquasone)</td>
			<td style="width:131px;">Parket laboratories Inc</td>
			<td style="width:183px;">N 01-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vasovet 24G</td>
			<td style="width:131px;">Braun</td>
			<td style="width:183px;">REF 381212</td>
			<td>&#160;over-the-needle catheter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Omnifix-F 1 ml syringe</td>
			<td style="width:131px;">Braun</td>
			<td style="width:183px;">9161406V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Imalgene (Ketamine)</td>
			<td style="width:131px;">Merial</td>
			<td style="width:183px;">RN 9767</td>
			<td>Veterinary prescription is necessary</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Domtor (Medetomidine)</td>
			<td style="width:131px;">Esteve</td>
			<td style="width:183px;">CN 570686.3</td>
			<td>Veterinary prescription is necessary</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Heating Pad</td>
			<td style="width:131px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Faber-Castel TG1</td>
			<td style="width:131px;">Faber-Castel</td>
			<td style="width:183px;">16 33 99</td>
			<td style="width:259px;">India (China) Ink</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Holter Syneflash</td>
			<td style="width:131px;">Ela medical</td>
			<td style="width:183px;">SF0003044S</td>
			<td style="width:259px;">24 h Holter ECG system.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Electrodes Blue Sensor&#174;</td>
			<td style="width:131px;">Ambu (NUMED)</td>
			<td style="width:183px;">VLC-00-S</td>
			<td style="width:259px;">Holter ECG electrodes.</td>
		</tr>
		<tr height="30">
			<td height="30" style="height:30px;width:319px;">Microtome</td>
			<td style="width:131px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:183px;">RM2155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Microscope</td>
			<td style="width:131px;">Olimpus</td>
			<td style="width:183px;">CO11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">ABC Vector Elite</td>
			<td style="width:131px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:183px;">PK-6200</td>
			<td>Avidin Biotin Complex Kit.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Chicken anti-GFP antibody</td>
			<td style="width:131px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:183px;">A10262</td>
			<td>Primary antibody.</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">Biotinylated goat-anti-chicken IgG Antibody</td>
			<td style="width:131px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:183px;">BA-9010</td>
			<td>Secondary Antibody.</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">3,30-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB)</td>
			<td style="width:131px;">DAKO (Agilent)</td>
			<td style="width:183px;">S3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">Fluorescence Microscope</td>
			<td style="width:131px;">Carl Zeiss 
			MicroImaging</td>
			<td style="width:183px;">Zeiss AX10 Axioskop</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Holter ECG</td>
			<td>Elamedical</td>
			<td>Syneflash SF0003044S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">Dulbecco&#8217;s modified Eagle medium (DMEM)&#160;</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11965084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">10% fetal calf serum (FCS)</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11573397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">0.05% Trypsin-Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">Lipofectamine 2000 (Lipid transfection reagent)</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11668019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Reduced serum medium (Opti-MEM)</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">31985070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:319px;">Hygromycin B</td>
			<td style="width:131px;">Calbiochem (MERCK)</td>
			<td style="width:183px;">400051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Xylene (histological)</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">X3S-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Hydrogen Peroxide Solution (H2O2)</td>
			<td style="width:131px;">Sigma</td>
			<td style="width:183px;">H1009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Pronase</td>
			<td style="width:131px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">53-702-250KU</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

percutaneous contrast echocardiography-guided intramyocardial injection and cell delivery in a large preclinical model

Hücre ve gen tedavisi heyecan verici ve kalp yetmezliği ile kardiyak rejenerasyon ayarında amacıyla umut verici stratejileri düşük ejeksiyon fraksiyonu (HFrEF). Onlar kullanım için kabul ve insanlarda uygulanan önce geniş preklinik çalışmaları büyük hayvan modellerinde güvenlik, etkinlik ve bir kez Miyokardiyum teslim kaderi injectate (örneğin, kök hücre) değerlendirmek için gerekir. Küçük kemirgen modelleri (maliyet etkinliği, amenability genetik manipülasyon içinörneğin); avantaj sunar Ancak, bu modeller içerdiği sınırlamaları göz önüne alındığında, bu bulguların nadiren kliniğe çevirmek. Diğer taraftan, büyük hayvan tavşan gibi modellerinde avantajları (örneğin, insanlar ve diğer büyük hayvanlar ile karşılaştırıldığında benzer kardiyak Elektrofizyoloji), ederken iyi bir maliyet-etkin denge koruyarak. Burada, minimal invaziv, güvenli, iyi tolere ve injectates hücreleri de dahil olmak üzere, hedeflenen teslimat çok etkili bir perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü intramyocardial enjeksiyon (ımı) teknik gerçekleştirme göstermek, bir tavşan modeli Miyokardiyum içinde birkaç adresleri girmiş. Bu tekniğin uygulanması için yaygın olarak kullanılan klinik Ekokardiyografi sistemin avantajı da aldık. Burada açıklanan protokol pratikte konulduktan sonra bir araştırmacı temel ultrason bilgisi olan bu çok yönlü ve minimal invaziv teknik deney, Hipotez testleri amaçlı, rutin kullanım için performans yetkili olacak tavşan modelindeki kardiyak rejeneratif therapeutics yeteneklerini. Tavşan anaesthetizing sonra yetkinlik elde sonra tüm prosedürü 25 dk içinde gerçekleştirilebilir.

Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü ımı ını ile:
Yukarıda açıklanan iletişim kuralını kullanarak ve sonra iğne ucu en iyi konumlandırma Ekokardiyografi ve yerleştirme başlatıldı tarafından doğrulandı, transmural hyperechogenicity ını teslim sırasında gözlendi (% 10 PBS, v/v) (şekil 2E) , ımı (şekil 2F) hedef bölges...

Watch this Scientific Journal Video about Percutaneous Contrast Echocardiography-guided Intramyocardial Injection and Cell Delivery in a Large Preclinical Model at JoVE.com

Percutaneous Contrast Echocardiography-guided Intramyocardial Injection and Cell Delivery in a Large Preclinical Model

Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü Intramyocardial enjeksiyon ve hücre teslim büyük preklinik modeli

Onlar insanlar kullanmak için kabul edilebilir önce kardiyak rejeneratif tıp roman tedavi stratejileri kapsamlı ve detaylı çalışmalar büyük preklinik hayvan modellerinde gerektirir. Burada, biz perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü intramyocardial enjeksiyon tekniği Tavşanlarda, roman böyle tedavilerin etkinliğini test hipotez için değerli olan göstermek.

Cell and gene therapy are exciting and promising strategies for the purpose of cardiac regeneration in the setting of heart failure with reduced ejection ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Klinik öncesi Model İskemik Kalp Yetmezliği Gen Transferi

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

Intramyocardial Cell Delivery: Observations in Murine Hearts

Intramiyokardiyal Hücre Teslimat: Mürin Hearts Gözlemler

Previous studies showed that cell delivery promotes cardiac function amelioration by release of cytokines and factors that increase cardiac tissue ...

Ultrasound-guided Transthoracic Intramyocardial Injection in Mice

Farelerde ultrason eşliğinde transtorasik intramiyokardiyal Enjeksiyon

Murine models of cardiovascular disease are important for investigating pathophysiological mechanisms and exploring potential regenerative therapies. ...

A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

Karaciğer metastazları Klinik öncesi fare modeli

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

A Surgical Procedure for Resecting the Mouse Rib: A Model for Large-Scale Long Bone Repair

Fare kaburga Rezeksiyonu için Cerrahi Prosedür: Büyük Ölçekli Uzun Kemik Onarım İçin Bir Model

This protocol introduces researchers to a new model for large-scale bone repair utilizing the mouse rib. The procedure details the following: preparation ...

Contractions of Human-iPSC-derived Cardiomyocyte Syncytia Measured with a Ca-sensitive Fluorescent Dye in Temperature-controlled 384-well Plates

384-şey plakaları ısı kontrollü bir Ca duyarlı floresan boya ile ölçülen insan IPSC türetilmiş Cardiomyocyte Syncytia kasılmalar

Spontaneously contracting syncytia of cardiomyocytes derived from human-induced pluripotent stem cells (hiPSC-CM) are a useful model of human cardiac ...

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Diyabetik tavşanların arka ekstremite Iskemi preklinik modeli

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

Koroner Anjiyogenezin In Vitro Modeli

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

Bir Murine Modelinde İskemi Reperfüzyon Yaralanması Sonrası Kök Hücrelerin Gecikmiş İntramiyokardiyal Teslimi

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...