Name: dissection and explant culture of murine allantois for the in vitro analysis of allantoic attachment
Uploaded: 2018-01-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment at JoVE.com

وأيد هذا العمل SFB688 الأوقيانوغرافية ألماني (إلى جي).

وأقر تربية الماوس اونترفرانكين ريجيرونج، وأجريت جميع التحاليل طبقاً للقوانين المعمول بها في كل من ألمانيا والاتحاد الأوروبي، والأنظمة المتعلقة برعاية واستخدام الحيوانات المختبرية.
1-طلاء Microtiter لوحات مع إنتغرين α4β1 للثقافة Explant Allantois الرحم السابقين
<ol><li>إعادة تشكيل ?...

<ol>
	<li>Rossant, J., Cross, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+development:+lessons+from+mouse+mutants.">Placental development: lessons from mouse mutants.</a> Nat Rev Genet. 2 (7), 538-548 (2001).</li><li>Segerer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+essential+developmental+function+for+murine+phosphoglycolate+phosphatase+in+safeguarding+cell+proliferation.">An essential developmental function for murine phosphoglycolate phosphatase in safeguarding cell proliferation.</a> Sci Rep. 6, 35160 (2016).</li><li>Kane, S. V., Acquah, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+transport+of+immunoglobulins:+a+clinical+review+for+gastroenterologists+who+prescribe+therapeutic+monoclonal+antibodies+to+women+during+conception+and+pregnancy.">Placental transport of immunoglobulins: a clinical review for gastroenterologists who prescribe therapeutic monoclonal antibodies to women during conception and pregnancy.</a> Am J Gastroenterol. 104 (1), 228-233 (2009).</li><li>Xu, X., Vugmeyster, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+opportunities+in+absorption,+distribution,+metabolism,+and+excretion+studies+of+therapeutic+biologics.">Challenges and opportunities in absorption, distribution, metabolism, and excretion studies of therapeutic biologics.</a> AAPS J. 14 (4), 781-791 (2012).</li><li>Wesolowski, S. R., Kasmi, K. C., Jonscher, K. R., Friedman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+origins+of+NAFLD:+a+womb+with+a+clue.">Developmental origins of NAFLD: a womb with a clue.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 14 (2), 81-96 (2017).</li><li>Racicot, K., Mor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risks+associated+with+viral+infections+during+pregnancy.">Risks associated with viral infections during pregnancy.</a> J Clin Invest. 127 (5), 1591-1599 (2017).</li><li>Grandjean, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life-Long+Implications+of+Developmental+Exposure+to+Environmental+Stressors:+New+Perspectives.">Life-Long Implications of Developmental Exposure to Environmental Stressors: New Perspectives.</a> Endocrinology. 156 (10), 3408-3415 (2015).</li><li>Inman, K. E., Downs, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+allantois:+emerging+paradigms+in+development+of+the+mammalian+umbilical+cord+and+its+relation+to+the+fetus.">The murine allantois: emerging paradigms in development of the mammalian umbilical cord and its relation to the fetus.</a> Genesis. 45 (5), 237-258 (2007).</li><li>Arora, R., Papaioannou, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+allantois:+a+model+system+for+the+study+of+blood+vessel+formation.">The murine allantois: a model system for the study of blood vessel formation.</a> Blood. 120 (13), 2562-2572 (2012).</li><li>Watson, E. D., Cross, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+structures+and+transport+functions+in+the+mouse+placenta.">Development of structures and transport functions in the mouse placenta.</a> Physiology (Bethesda). 20, 180-193 (2005).</li><li>Yang, J. T., Rayburn, H., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion+events+mediated+by+alpha+4+integrins+are+essential+in+placental+and+cardiac+development.">Cell adhesion events mediated by alpha 4 integrins are essential in placental and cardiac development.</a> Development. 121 (2), 549-560 (1995).</li><li>Gurtner, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+disruption+of+the+murine+VCAM1+gene:+essential+role+of+VCAM-1+in+chorioallantoic+fusion+and+placentation.">Targeted disruption of the murine VCAM1 gene: essential role of VCAM-1 in chorioallantoic fusion and placentation.</a> Genes &amp; development. 9 (1), 1-14 (1995).</li><li>Kwee, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+development+of+the+embryonic+and+extraembryonic+circulatory+systems+in+vascular+cell+adhesion+molecule+(VCAM-1)+deficient+mice.">Defective development of the embryonic and extraembryonic circulatory systems in vascular cell adhesion molecule (VCAM-1) deficient mice.</a> Development. 121 (2), 489-503 (1995).</li><li>Downs, K. M., Gardner, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+into+early+placental+ontogeny:+allantoic+attachment+to+the+chorion+is+selective+and+developmentally+regulated.">An investigation into early placental ontogeny: allantoic attachment to the chorion is selective and developmentally regulated.</a> Development. 121 (2), 407-416 (1995).</li><li>Heyne, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+reliable+method+for+early+pregnancy+detection+in+inbred+mice.">A simple and reliable method for early pregnancy detection in inbred mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 54 (4), 368-371 (2015).</li><li>Downs, K. M., Temkin, R., Gifford, S., McHugh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+murine+allantois+by+allantoic+explants.">Study of the murine allantois by allantoic explants.</a> Dev Biol. 233 (2), 347-364 (2001).</li><li>Hou, W., Sarikaya, D. P., Jerome-Majewska, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+culture+of+pre-placental+tissues+reveals+that+the+allantois+is+required+for+maintained+expression+of+Gcm1+and+Tpbpalpha.">Ex vivo culture of pre-placental tissues reveals that the allantois is required for maintained expression of Gcm1 and Tpbpalpha.</a> Placenta. 47, 12-23 (2016).</li><li>Zeigler, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+allantois+and+chorion,+when+isolated+before+circulation+or+chorio-allantoic+fusion,+have+hematopoietic+potential.">The allantois and chorion, when isolated before circulation or chorio-allantoic fusion, have hematopoietic potential.</a> Development. 133 (21), 4183-4192 (2006).</li><li>Zaidel-Bar, R., Itzkovitz, S., Ma'ayan, A., Iyengar, R., Geiger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+atlas+of+the+integrin+adhesome.">Functional atlas of the integrin adhesome.</a> Nature cell biology. 9 (8), 858-867 (2007).</li></ol>

حضور المصل، ومصدر غنى لجزيئات لاصقة المؤيدة المصفوفة خارج الخلية مثل فيبرونيكتين، سوف نعلق allantois explants سهولة إلى مختلف من البلاستيك، الزجاج، أو تصفية السطوح9،16. وهكذا، إذا يهدف تحليل أجرى للتحقيق على وجه التحديد أثر التعديل الوراثي أو أي معاملة أخرى في مرفق...

المشيمة أمر لا غنى عنه للنمو الجنينية والتنمية في بيئة الرحم. وهو يشكل واجهة للأكسجين المستقلب وتبادل المغذيات بين الجنين والأم الدورة الدموية، وأيضا وظائف كجهاز الغدد الصماء والمناعية. أي إهانة الذاتية أو الخارجية التي يعوق التنمية المشيمة يؤدي إلى تأخر النمو داخل الرحم، وفقدان الجنين، أو مضاعفات الحمل، في الفئران والبشر1. في حين لا يزال عدد الطفرات الماوس المستهدفة التي تسبب فسيولوجيا المشيمة غير طبيعي لزيادة2، مع الأنماط الجينية 219 المدرجة حاليا على الموقع الشبكي للمعلوماتية الجينوم الماوس (MGI) (http://www.informatics.jax.org/vocab/mp_ontology/ MP:0010038)، العديد من هذه تعمل ليست مفهومة جيدا من وجهة نظر آليا. بالإضافة إلى التعديلات الوراثية، المخدرات جزيء صغير، والأجسام المضادة، السموم، مسببات الأمراض، والايضات الزائدة، أو مختلف العوامل البيئية قد تؤثر على وضع المشيمة والدالة3،،من45 , 6 , 7-بعد، بسيطة في المختبر فحوصات أن نموذج الخطوات الحاسمة في تطور المشيمة شحيحة.
التنمية المشيمية مورين هو بدأت في وقت مبكر ميدجيستيشن، عندما اللانتويس (سلف الإنمائية الحبل السري) ينبثق من نهاية الخلفي للجنين برعم أن ينمو نحو المشيمة8. التوسط تشوريواديسيفي الخلايا في الطبقة الخارجية من المهد الانتويك المرفق ونشر اللانتويس على سطح المشيمة (تشوريوالانتويك "الانصهار"). يطوي المشيمة فيما بعد إلى الزوائد التي ينمو المفرج اللانتويس شكل المتاهة، الطبقة المشيمية الداخلية حيث يتم تبادل المواد الغذائية والأكسجين بين دم الأم عن كثب محاذياً الكبدية والأوعية الجنينية9 ،10.
إرفاق اللانتويس للمشيمة هو الخطوة الأولى والحاسمة في تشكيل المتاهة، والعيوب في هذه العملية من بين الأسباب الأكثر شيوعاً للفتك الجنينية في ميدجيستيشن1. على الرغم من أن عددا من طفرات الماوس قد وصف مرفق تشوريوالانتويك فشل تحدث10، حيث يسرد قاعدة يتجاوزون حاليا 108 طفرات الماوس التي تتميز بها الشاذ الانصهار تشوريوالانتويك (http:// www.informatics.jax.org/vocab/mp_ontology/MP:0002824)، التفاعل بين الخلايا بين الخلية والأوعية الدموية التصاق جزيء-1 (VCAM-1، أعرب عن ميسوديرم الانتويك) وانتغرين α4β1 (المعبر عنها في mesothelium المشيمة، المستمدة من اكسترامبريونيك mesoderm) يبدو أنه لا غنى عنه للحجز تشوريوالانتويك والانصهار11،،من1213. المناعي تلطيخ جبل كل البرية من نوع الأجنة قد أظهرت أعرب VCAM-1 داخل ثلثي القاصي من ساق الانتويك في اليوم تقريبا الجنينية (ه) 7.513 (المرحلة سميط 1-4)، وأن التعبير عن ما زال مرتفعا أثناء الحجز تشوريوالانتويك-والانصهار11،12. عادة يتم الكشف عن فشل مرفق الانتويك للمشيمة بتحاليل نسيجية من براعم الرحم. ومع ذلك، أحجام allantois متغير فسيولوجيا عاليا في بين وحتى داخل ليتر من نفس المرحلة الإنمائية14، وفقط إرفاق allantois للمشيمة عندما قد بلغ حجم كافية لجعل الاتصال الجسدي. يعكس هذا التغير الطبيعي، مرفق تشوريوالانتويك يأخذ مكان في وقت ما بين ~ ه 8.0 و E 9.0 في الرحم، وتقييم موثوق بها إحصائيا لهذه العملية عن طريق الأنسجة فتعتمد على تحليل عدد كبير من كونسيبتوسيس للحصول على عينات كافية في المرحلة التنموية المناسبة.
هنا، يمكننا وصف أسلوب تقييم مرفق الانتويك خارج الرحم أقل اعتماداً على حجم اللانتويس. نظهر تشريح الأجنة الماوس وما اللانتويديس من يشكل الفئران الحوامل ~ 8 أيام ما بعد كويتوم (dpc؛ dpc 0.5 يعين الكشف عن المكونات المهبلي)، وثقافة اللاحقة من اللانتويس اكسبلانتس في α4β1 المعطل تداولها إينتيجرينس. هذا الأسلوب يتيح إجراء تقييم سريع الفنية المرفق وينتشر سلوك متعددة allantois explants بالتوازي وعند نقاط زمنية متتالية مختلفة. يمكن استخدام البروتوكول إلى الشاشة لآثار الطفرات المستهدفة، والمخدرات، أو العوامل البيئية المختلفة على اللانتويس مرفق السابقين فيفو.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1607">
	<tbody>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:319px;">C57BL/6J wildtype mice</td>
			<td style="width:256px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:119px;">Stock No:&#160;000664</td>
			<td style="width:915px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">70 % (v/v) Ethanol</td>
			<td style="width:256px;">VWR International</td>
			<td>930031006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Standard pattern forceps</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td>11000-12</td>
			<td style="width:915px;">Forceps used to open the abdominal cavity.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Micro dissecting forceps</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11254-20</td>
			<td>Dumont # 5 medical biology forcepts with fine, sharp tip.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fine scissors&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td>14094-11</td>
			<td>Straight blades.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spring scissors&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td>15012-12</td>
			<td>Noyes spring scissors with 14 mm blades for the dissection of uterus buds.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Microspoon</td>
			<td style="width:256px;">Carl Roth</td>
			<td>AT18.1</td>
			<td>5 mm Spoon diameter.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Microtiter plates</td>
			<td style="width:256px;">ibidi</td>
			<td style="width:119px;">81501</td>
			<td>We use uncoated, sterile angiogenesis slides (internal volume 50 &#181;L) with a hydrophobic surface that is not tissue-culture treated to reduce non-a4b1-mediated binding to plastic.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">10 cm dish</td>
			<td style="width:256px;">Nunc</td>
			<td style="width:119px;">150350</td>
			<td>Sterile tissue culture dishes.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">3.5 cm dish</td>
			<td style="width:256px;">Nunc</td>
			<td style="width:119px;">150288</td>
			<td>Sterile tissue culture dishes.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large orifice pipette tips&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Biozym</td>
			<td style="width:119px;">VT0140X</td>
			<td>Low binding pipette tips, 200 &#181;L.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">a4b1 integrin</td>
			<td style="width:256px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:119px;">6054-A4</td>
			<td>Murine a4b1 integrin recombinantly expressed and purified from a Chinese hamster ovary cell line.</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:319px;">Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D8537</td>
			<td>Without Ca2+ and Mg2+.</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:319px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:256px;">PAN Biotech</td>
			<td style="width:119px;">P04-03600</td>
			<td style="width:915px;">The formulation contains 4.5 g/L glucose, 110 mg/L sodium pyruvate and 3.7 g/L NaHCO3 but no L-glutamine, which is added separately.</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:319px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:256px;">Gibco (ThermoFisher Scientific)</td>
			<td style="width:119px;">15140-122</td>
			<td>100 x (10,000 U/mL Penicillin and 10,000 &#181;g/mL streptomycin) stock solution.&#160;Prepare and store aliquots at -20 &#176;C to avoid freeze/thaw.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:256px;">PAN Biotech</td>
			<td style="width:119px;">P04-80100</td>
			<td>100 x (200 mM) Stock solution. Prepare and store aliquots at -20 &#176;C to avoid freeze/thaw.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Biochrom</td>
			<td style="width:119px;">S 0115</td>
			<td>We use heat-inactivated FBS (heated to 56 &#176;C for 30 min with mixing to inactivate complement).</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A7030</td>
			<td>We use protease- and fatty acid-free albumin. Prepare a 0.1 % (w/v) solution in DMEM. Sterile filter the solution through a disposable cell culture filter with a 0.22 &#181;m pore size and low protein-binding membrane, and store aliquots at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;">para-Formaldehyde</td>
			<td style="width:256px;">Carl Roth</td>
			<td>0335.2</td>
			<td style="width:915px;">To make a formaldehyde solution in PBS, weigh para-formaldehyde powder in a ventilated hood, and add it to PBS preheated to ca. 60 &#176;C in a beaker on a stir plate. Add 1 N NaOH dropwise until solution clears. Let solution cool to room temperature, and filter through 0.22 mm filter syringe. Adjust pH with diluted HCl to ca. 6.9, and adjust to final volume with PBS. We aliquot and freeze the solution, but it can also be stored at 4 &#176;C for approximately four weeks.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">X100</td>
			<td>Use wide-orifice pipette tips to handle undiluted Triton X-100.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Normal goat serum</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>G9023</td>
			<td>To block non-specific binding of antibodies in immunofluorescence analyses.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">a-CD31 Antibodies</td>
			<td style="width:256px;">BD Biosciences</td>
			<td>550274</td>
			<td>Purified rat anti-mouse monoclonal antibodies, clone MEC 13.3.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Secondary goat anti-rat antibodies</td>
			<td style="width:256px;">Thermo Fisher</td>
			<td>A-11006</td>
			<td>Goat anti-rat IgG (heavy and light chains), cross-adsorbed, fluorescently labeled with Alexa Fluor 488. Other fluorescent labels are also possible.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Mowiol 4-88</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>81381</td>
			<td>Mounting medium for cytochemistry. MW ~31,000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Labovert&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Leitz</td>
			<td style="width:119px;">Labovert&#160;</td>
			<td>Inverted phase contrast microscope equipped with a 4 x and 10 x objective for somite pair counting. Other phase contrast microscopes (such as those that are routinely used in tissue culture) are also suitable.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">M80</td>
			<td style="width:256px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">M80</td>
			<td>Stereomicroscope with 8 : 1 zoom range (yielding a magnification between 7.5 x and 60 x) for embryo and allantois dissection.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">DM4000B</td>
			<td style="width:256px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">DM4000B</td>
			<td>Microscope system for histology with LED illumination. We use HCX PL FLUOTAR 5 x/0.15 and HC PL FLUOTAR 10 x/0.30 objectives. Other microscopes equipped phase contrast and fluorescence optics can be used to score allantois attachment.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Digital camera</td>
			<td style="width:256px;">JVC</td>
			<td style="width:119px;">KY-F75U</td>
			<td>3-CCD digital capture camera attached to the DM4000B LED microscope. We use Diskus software (Hilgers) to operate both the microscope and the camera.</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:319px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:256px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">SP5</td>
			<td style="width:915px;">Confocal microscope for higher-resolution imaging of endothelia in the vascular plexus of allantois explants. Immunofluorescence images were taken with a 40 x objective.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection and explant culture of murine allantois for the in vitro analysis of allantoic attachment

المشيمة أمر ضروري لنمو وتطور أجنة الثدييات. ولهذا السبب، العديد من التعديلات الوراثية والشتائم البيئية كما يحتمل أن تخل التنمية المشيمة أو وظيفة يمكن أن يسبب فقدان الحمل المبكر في الفئران والبشر. ومع ذلك، تفتقر إلى فحوصات بسيطة في المختبر الشاشة للآثار المحتملة على تكوين المشيمة. هنا، نحن نركز على النمذجة الخطوة الأولى والحاسمة في تكوين المشيمة، والذي يتألف من إرفاق اللانتويس للمشيمة. يصف لنا طريقة لتقييم سرعة إلحاق explants الانتويك في إنتغرين α4β1 المعطل تداولها، هو بمثابة ركيزة كوريو mimetic. ويمكن هذا النهج في المختبر تقييم نوعي للمرفق وينتشر سلوك explants allantois متعددة في نقاط زمنية مختلفة على التوالي. وقد يمكن استخدام البروتوكول للتحقيق في تأثير الطفرات الماوس المستهدفة، والمخدرات، أو العوامل البيئية المختلفة التي تم ربطها إلى مضاعفات الحمل أو فقدان الجنين على اللانتويس مرفق السابقين فيفو.

هذا البروتوكول وصف أسلوب لعزل و explant اللانتويديس مورين السابقين فيفو، وتفاصيل التقييم النوعي لمرفق allantois إنتغرين α4β1، وهي عملية حاسمة خلال في فيفو تشوريوالانتويك الانصهار. تدل نتائج الممثل هو مبين في الشكل 1 ألف–ح الخطوات الم...

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment at JoVE.com

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

يصف لنا فحص في المختبر لنموذج مرفق تشوريوالانتويك، الخطوة الأولى في تكوين المشيمة. البروتوكول يوضح ثقافة تشريح و explant مورين اللانتويديس على إنتغرين α4β1 المعطل تداولها. يتم تقييم مرفق allantois مجهريا في نقاط زمنية محددة سلفا.

تشريح وثقافة Explant موريني Allantois للتحليل في المختبر للحجز الانتويك

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

تشريح الإنسان عناصر الجسم الزجاجي لتحليل البروتين

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

الجلد لكمة خزعة الثقافة ازدراع لاشتقاق الخلايا الليفية الإنسان الابتدائية

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

الحقن الشريان السباتي لوأضافا الدوائية وتحليل Taxanes في الفئران

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

زجاجي كله فكاهة تشريح لتحليل Vitreodynamic

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

الفئران البروستاتا الجزئي تشريح والإخصاء الجراحي

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

تحليل الأمثل ل<em&gt; في فيفو</em&gt; و<em&gt; في المختبر</em&gt; كبدي تشحم

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

تشريح البنكرياس الماوس للتحليل النسيجي والتنميط الأيضية

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Neonatal Murine Cochlear Explant Technique as an In Vitro Screening Tool in Hearing Research

Neonatal Murine Cochlear Explant Technique as an In Vitro Screening Tool in Hearing Research

حديثي الولادة الفئران كوكلار تقنية إكسبلانت باعتبارها<em&gt; في المختبر</em&gt; أداة الفحص في أبحاث السمع

While there have been remarkable advances in hearing research over the past few decades, there is still no cure for Sensorineural Hearing Loss (SNHL), a ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

التحليل الكمي للأشعة المقطعية الصغرى من أورتوباثي في نموذج ماوس β-أمينوبروبيونيتريلي-المستحث الابهر والتشريح

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...