Name: dissection and explant culture of murine allantois for the in vitro analysis of allantoic attachment
Uploaded: 2018-01-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי SFB688 פתוח דויטשה (ל א).

העכבר הרבייה אושרה על-ידי Regierung Unterfranken ולאחר כל הבדיקות בוצעו בהתאמה קפדנית עם האיחוד האירופי וגרמנית כל החוקים והתקנות החלים לגבי טיפול ושימוש של חיות מעבדה.
1. ציפוי של Microtiter צלחות עם אינטגרין α4β1 לתרבות Explant של הרחם לשעבר Allantois
<ol><li>לשקם את אינטגרין α4β1 מאתר lyophilized-µg/m...

<ol>
	<li>Rossant, J., Cross, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+development:+lessons+from+mouse+mutants.">Placental development: lessons from mouse mutants.</a> Nat Rev Genet. 2 (7), 538-548 (2001).</li><li>Segerer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+essential+developmental+function+for+murine+phosphoglycolate+phosphatase+in+safeguarding+cell+proliferation.">An essential developmental function for murine phosphoglycolate phosphatase in safeguarding cell proliferation.</a> Sci Rep. 6, 35160 (2016).</li><li>Kane, S. V., Acquah, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+transport+of+immunoglobulins:+a+clinical+review+for+gastroenterologists+who+prescribe+therapeutic+monoclonal+antibodies+to+women+during+conception+and+pregnancy.">Placental transport of immunoglobulins: a clinical review for gastroenterologists who prescribe therapeutic monoclonal antibodies to women during conception and pregnancy.</a> Am J Gastroenterol. 104 (1), 228-233 (2009).</li><li>Xu, X., Vugmeyster, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+opportunities+in+absorption,+distribution,+metabolism,+and+excretion+studies+of+therapeutic+biologics.">Challenges and opportunities in absorption, distribution, metabolism, and excretion studies of therapeutic biologics.</a> AAPS J. 14 (4), 781-791 (2012).</li><li>Wesolowski, S. R., Kasmi, K. C., Jonscher, K. R., Friedman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+origins+of+NAFLD:+a+womb+with+a+clue.">Developmental origins of NAFLD: a womb with a clue.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 14 (2), 81-96 (2017).</li><li>Racicot, K., Mor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risks+associated+with+viral+infections+during+pregnancy.">Risks associated with viral infections during pregnancy.</a> J Clin Invest. 127 (5), 1591-1599 (2017).</li><li>Grandjean, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life-Long+Implications+of+Developmental+Exposure+to+Environmental+Stressors:+New+Perspectives.">Life-Long Implications of Developmental Exposure to Environmental Stressors: New Perspectives.</a> Endocrinology. 156 (10), 3408-3415 (2015).</li><li>Inman, K. E., Downs, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+allantois:+emerging+paradigms+in+development+of+the+mammalian+umbilical+cord+and+its+relation+to+the+fetus.">The murine allantois: emerging paradigms in development of the mammalian umbilical cord and its relation to the fetus.</a> Genesis. 45 (5), 237-258 (2007).</li><li>Arora, R., Papaioannou, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+allantois:+a+model+system+for+the+study+of+blood+vessel+formation.">The murine allantois: a model system for the study of blood vessel formation.</a> Blood. 120 (13), 2562-2572 (2012).</li><li>Watson, E. D., Cross, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+structures+and+transport+functions+in+the+mouse+placenta.">Development of structures and transport functions in the mouse placenta.</a> Physiology (Bethesda). 20, 180-193 (2005).</li><li>Yang, J. T., Rayburn, H., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion+events+mediated+by+alpha+4+integrins+are+essential+in+placental+and+cardiac+development.">Cell adhesion events mediated by alpha 4 integrins are essential in placental and cardiac development.</a> Development. 121 (2), 549-560 (1995).</li><li>Gurtner, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+disruption+of+the+murine+VCAM1+gene:+essential+role+of+VCAM-1+in+chorioallantoic+fusion+and+placentation.">Targeted disruption of the murine VCAM1 gene: essential role of VCAM-1 in chorioallantoic fusion and placentation.</a> Genes &amp; development. 9 (1), 1-14 (1995).</li><li>Kwee, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+development+of+the+embryonic+and+extraembryonic+circulatory+systems+in+vascular+cell+adhesion+molecule+(VCAM-1)+deficient+mice.">Defective development of the embryonic and extraembryonic circulatory systems in vascular cell adhesion molecule (VCAM-1) deficient mice.</a> Development. 121 (2), 489-503 (1995).</li><li>Downs, K. M., Gardner, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+into+early+placental+ontogeny:+allantoic+attachment+to+the+chorion+is+selective+and+developmentally+regulated.">An investigation into early placental ontogeny: allantoic attachment to the chorion is selective and developmentally regulated.</a> Development. 121 (2), 407-416 (1995).</li><li>Heyne, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+reliable+method+for+early+pregnancy+detection+in+inbred+mice.">A simple and reliable method for early pregnancy detection in inbred mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 54 (4), 368-371 (2015).</li><li>Downs, K. M., Temkin, R., Gifford, S., McHugh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+murine+allantois+by+allantoic+explants.">Study of the murine allantois by allantoic explants.</a> Dev Biol. 233 (2), 347-364 (2001).</li><li>Hou, W., Sarikaya, D. P., Jerome-Majewska, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+culture+of+pre-placental+tissues+reveals+that+the+allantois+is+required+for+maintained+expression+of+Gcm1+and+Tpbpalpha.">Ex vivo culture of pre-placental tissues reveals that the allantois is required for maintained expression of Gcm1 and Tpbpalpha.</a> Placenta. 47, 12-23 (2016).</li><li>Zeigler, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+allantois+and+chorion,+when+isolated+before+circulation+or+chorio-allantoic+fusion,+have+hematopoietic+potential.">The allantois and chorion, when isolated before circulation or chorio-allantoic fusion, have hematopoietic potential.</a> Development. 133 (21), 4183-4192 (2006).</li><li>Zaidel-Bar, R., Itzkovitz, S., Ma'ayan, A., Iyengar, R., Geiger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+atlas+of+the+integrin+adhesome.">Functional atlas of the integrin adhesome.</a> Nature cell biology. 9 (8), 858-867 (2007).</li></ol>

בנוכחות סרום, המהווה מקור עשיר של מולקולות פרו-דבק מטריצה חוץ-תאית כגון fibronectin, allantois explants ייצמד בקלות שונים פלסטיק, זכוכית או מסנן משטחים9,16. לפיכך, אם מטרת וזמינותו שבוצעו היא לחקור באופן ספציפי את האפקט של שינוי גנטי או כל טיפול אחר על הקובץ המצורף allantois מתא?...

השליה היא הכרחית לצמיחה עובריים ופיתוח בסביבת הרחם. היא מהווה את הממשק חמצן, מטבוליט של exchange התזונתי בין מחזור הדם העוברי, אימהית, גם פונקציות כמו איבר האנדוקרינית ו. כל עלבון אנדוגני או אקסוגני זה פוגע פיתוח היפרדות יכול להוביל פיגור גדילה תוך רחמי, אובדן עוברית או סיבוכים בהריון, בעכברים והן בני אדם1. בעוד המספר של העכבר יישוב מוטציות הגורמות פיזיולוגיה היפרדות חריג ממשיך לגדול2, עם אחרים 219 שמפורט כרגע באתר מידענות הגנום העכבר (MGI) (http://www.informatics.jax.org/vocab/ mp_ontology / MP:0010038), שרבים פנוטיפים אלה אינם מובנים היטב מנקודת מבט מכניסטית. בנוסף שינויים גנטיים, מולקולה קטנה סמים, נוגדנים חד-שבטיים, רעלים, פתוגנים, מטבוליטים עודף או סוכנים סביבתיים שונים עלול להשפיע על התפתחות השליה, הפונקציה3,4,5 , 6 , 7. ובכל זאת, פשוט במבחנה assays מודל שלבים קריטיים בפיתוח השליה נדירים.
פיתוח היפרדות מאתר תופעל ב- midgestation מוקדם, כאשר allantois (מבשר התפתחותית של הטבור) מתגלה מהקצה האחורי של העובר ניצן שגדל לעבר chorion8. Chorioadhesive תאים בשכבה החיצונית של ניצן allantoic לתווך את הקובץ המצורף, הפצת allantois על פני השטח של chorion (chorioallantoic "פיוז'ן"). Chorion לאחר מכן מתקפל לתוך villi בו להערכת של allantois גדל כדי ליצור את המבוך, השכבה הפנימית היפרדות איפה מזינים וחמצן מוחלפים בין דם אימהי צמוד juxtaposed sinusoids וכלי עובריים9 ,10.
הקובץ המצורף של allantois chorion השלב הראשוני וקריטיים אינפורמציה במבוך, פגמים בתהליך זה הם בין הגורמים הנפוצים ביותר lethality עובריים midgestation1. למרות מספר מוטציות העכבר תוארו שבו המצורף chorioallantoic נכשל להופיע10, מסד הנתונים MGI כיום רשימות 108 מוטציות העכבר המאופיינת על ידי היתוך chorioallantoic חריג (http:// www.informatics.jax.org/vocab/mp_ontology/MP:0002824), האינטראקציה המערכת בין תא דם אדהזיה מולקולה-1 (VCAM-1, לידי ביטוי את והמזודרם allantoic) לבין אינטגרין α4β1 (לידי ביטוי את mesothelium כוריוני, אשר נגזר והמזודרם extraembryonic) שנראה הכרחי עבור הקובץ המצורף chorioallantoic ופיוז'ן11,12,13. נוגדן כולה-הר פראי-סוג העובר הראו כי VCAM-1 מבוטא בתוך דיסטלי לשני-שליש הקנה allantoic ביום כ עובריים (E) 7.513 (שלב somite 1-4), כי הביטוי שלה נותרת גבוהה במהלך המצורף chorioallantoic - פיוז'ן11,12. כשל מהתופעה allantoic chorion מזוהה בדרך כלל על ידי ניתוח היסטולוגית של הרחם ניצנים. אולם, גדלים allantois הן מבחינה פיזיולוגית מאוד משתנה בין ובתוך אפילו המלטות של אותו שלב התפתחותי14, allantois יכולה רק לצרף chorion מתי זה הגיע בגודל מספיק ליצור מגע גופני. המשקף השתנות טבעי, מצורף chorioallantoic לוקח מקום מתישהו בין ~ E 8.0 ו- E 9.0 בתוך הרחם, הערכה סטטיסטית אמין של תהליך זה על ידי היסטולוגיה היא לפיכך תלויים הניתוח של מספר גדול של conceptuses להשיג מספיק דגימות בשלב ההתפתחותי המתאים.
כאן, אנו מתארים שיטה להערכת המצורף allantoic לשעבר עם רחם זה פחות תלויים בגודל allantois. נדגים את הקרע של העכבר עוברי, allantoides שלהם מ- uteri של עכברים בהריון ~ 8 ימים פוסט coitum (dpc; dpc 0.5 מייעד את הגילוי של פקק הנרתיק), ואת התרבות עוקבות של allantois explants על α4β1 קיבוע אינטגרינים. שיטה זו מאפשרת הערכה מהירה, פונקציונלי של הקובץ המצורף והפצת התנהגות של explants allantois מרובות במקביל, בנקודות זמן שונות רצופים. ניתן להשתמש בפרוטוקול למסך על ההשפעות של מוטציות יישוב, סמים או גורמים סביבתיים שונים על allantois קובץ מצורף ex-vivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1607">
	<tbody>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:319px;">C57BL/6J wildtype mice</td>
			<td style="width:256px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:119px;">Stock No:&#160;000664</td>
			<td style="width:915px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">70 % (v/v) Ethanol</td>
			<td style="width:256px;">VWR International</td>
			<td>930031006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Standard pattern forceps</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td>11000-12</td>
			<td style="width:915px;">Forceps used to open the abdominal cavity.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Micro dissecting forceps</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11254-20</td>
			<td>Dumont # 5 medical biology forcepts with fine, sharp tip.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fine scissors&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td>14094-11</td>
			<td>Straight blades.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spring scissors&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td>15012-12</td>
			<td>Noyes spring scissors with 14 mm blades for the dissection of uterus buds.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Microspoon</td>
			<td style="width:256px;">Carl Roth</td>
			<td>AT18.1</td>
			<td>5 mm Spoon diameter.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Microtiter plates</td>
			<td style="width:256px;">ibidi</td>
			<td style="width:119px;">81501</td>
			<td>We use uncoated, sterile angiogenesis slides (internal volume 50 &#181;L) with a hydrophobic surface that is not tissue-culture treated to reduce non-a4b1-mediated binding to plastic.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">10 cm dish</td>
			<td style="width:256px;">Nunc</td>
			<td style="width:119px;">150350</td>
			<td>Sterile tissue culture dishes.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">3.5 cm dish</td>
			<td style="width:256px;">Nunc</td>
			<td style="width:119px;">150288</td>
			<td>Sterile tissue culture dishes.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large orifice pipette tips&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Biozym</td>
			<td style="width:119px;">VT0140X</td>
			<td>Low binding pipette tips, 200 &#181;L.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">a4b1 integrin</td>
			<td style="width:256px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:119px;">6054-A4</td>
			<td>Murine a4b1 integrin recombinantly expressed and purified from a Chinese hamster ovary cell line.</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:319px;">Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D8537</td>
			<td>Without Ca2+ and Mg2+.</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:319px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:256px;">PAN Biotech</td>
			<td style="width:119px;">P04-03600</td>
			<td style="width:915px;">The formulation contains 4.5 g/L glucose, 110 mg/L sodium pyruvate and 3.7 g/L NaHCO3 but no L-glutamine, which is added separately.</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:319px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:256px;">Gibco (ThermoFisher Scientific)</td>
			<td style="width:119px;">15140-122</td>
			<td>100 x (10,000 U/mL Penicillin and 10,000 &#181;g/mL streptomycin) stock solution.&#160;Prepare and store aliquots at -20 &#176;C to avoid freeze/thaw.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:256px;">PAN Biotech</td>
			<td style="width:119px;">P04-80100</td>
			<td>100 x (200 mM) Stock solution. Prepare and store aliquots at -20 &#176;C to avoid freeze/thaw.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Biochrom</td>
			<td style="width:119px;">S 0115</td>
			<td>We use heat-inactivated FBS (heated to 56 &#176;C for 30 min with mixing to inactivate complement).</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A7030</td>
			<td>We use protease- and fatty acid-free albumin. Prepare a 0.1 % (w/v) solution in DMEM. Sterile filter the solution through a disposable cell culture filter with a 0.22 &#181;m pore size and low protein-binding membrane, and store aliquots at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;">para-Formaldehyde</td>
			<td style="width:256px;">Carl Roth</td>
			<td>0335.2</td>
			<td style="width:915px;">To make a formaldehyde solution in PBS, weigh para-formaldehyde powder in a ventilated hood, and add it to PBS preheated to ca. 60 &#176;C in a beaker on a stir plate. Add 1 N NaOH dropwise until solution clears. Let solution cool to room temperature, and filter through 0.22 mm filter syringe. Adjust pH with diluted HCl to ca. 6.9, and adjust to final volume with PBS. We aliquot and freeze the solution, but it can also be stored at 4 &#176;C for approximately four weeks.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">X100</td>
			<td>Use wide-orifice pipette tips to handle undiluted Triton X-100.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Normal goat serum</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>G9023</td>
			<td>To block non-specific binding of antibodies in immunofluorescence analyses.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">a-CD31 Antibodies</td>
			<td style="width:256px;">BD Biosciences</td>
			<td>550274</td>
			<td>Purified rat anti-mouse monoclonal antibodies, clone MEC 13.3.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Secondary goat anti-rat antibodies</td>
			<td style="width:256px;">Thermo Fisher</td>
			<td>A-11006</td>
			<td>Goat anti-rat IgG (heavy and light chains), cross-adsorbed, fluorescently labeled with Alexa Fluor 488. Other fluorescent labels are also possible.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Mowiol 4-88</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>81381</td>
			<td>Mounting medium for cytochemistry. MW ~31,000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Labovert&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Leitz</td>
			<td style="width:119px;">Labovert&#160;</td>
			<td>Inverted phase contrast microscope equipped with a 4 x and 10 x objective for somite pair counting. Other phase contrast microscopes (such as those that are routinely used in tissue culture) are also suitable.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">M80</td>
			<td style="width:256px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">M80</td>
			<td>Stereomicroscope with 8 : 1 zoom range (yielding a magnification between 7.5 x and 60 x) for embryo and allantois dissection.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">DM4000B</td>
			<td style="width:256px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">DM4000B</td>
			<td>Microscope system for histology with LED illumination. We use HCX PL FLUOTAR 5 x/0.15 and HC PL FLUOTAR 10 x/0.30 objectives. Other microscopes equipped phase contrast and fluorescence optics can be used to score allantois attachment.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Digital camera</td>
			<td style="width:256px;">JVC</td>
			<td style="width:119px;">KY-F75U</td>
			<td>3-CCD digital capture camera attached to the DM4000B LED microscope. We use Diskus software (Hilgers) to operate both the microscope and the camera.</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:319px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:256px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">SP5</td>
			<td style="width:915px;">Confocal microscope for higher-resolution imaging of endothelia in the vascular plexus of allantois explants. Immunofluorescence images were taken with a 40 x objective.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection and explant culture of murine allantois for the in vitro analysis of allantoic attachment

השליה היא חיונית עבור הצמיחה וההתפתחות של עוברי יונקים. מסיבה זו, רבים שינויים גנטיים ועלבונות סביר גם סביבתי זה להפריע התפתחות השליה או לפונקציה יכול לגרום לאבדן הריון מוקדם בעכברים ובבני אדם. למרות זאת, פשוט במבחנה מבחני על המסך עבור תופעות אפשריות על היווצרות השליה חסרים. כאן, אנו מתמקדים מידול הצעד הראשון וקריטיים היווצרות השליה, אשר מורכב הקובץ המצורף של allantois chorion. אנו מתארים שיטה להעריך במהירות את הקובץ המצורף של explants allantoic על α4β1 קיבוע אינטגרין, המשמש מצע chorio-מימטי. גישה זו במבחנה מאפשרת הערכה איכותית של הקובץ המצורף והפצת התנהגות של explants allantois מרובים בנקודות זמן שונות ברציפות. הפרוטוקול עשוי לשמש כדי לחקור את ההשפעה של העכבר יישוב מוטציות, סמים או גורמים סביבתיים שונים, אשר קושרו הריון סיבוכים או אובדן העובר על allantois קובץ מצורף ex-vivo.

פרוטוקול זה מתאר שיטה לבודד, explant allantoides מאתר ex-vivo, ומפרט את ההערכה איכותי של הקובץ המצורף allantois α4β1 אינטגרין, תהליך קריטי במהלך ויוו chorioallantoic פיוז'ן. התוצאות נציג באיור איור 1A–H מדגימים את השלבים רצופים של בידוד allantois החל מהרחם ב?...

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment at JoVE.com

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

אנו מתארים הנועד במבחנה דגם chorioallantoic מצורף, בשלב הראשון של היווצרות השליה. הפרוטוקול מדגים התרבות לנתיחה, explant של allantoides מאתר על קיבוע α4β1 אינטגרין. קובץ מצורף allantois מוערך ברמה המיקרוסקופית בנקודות זמן שנקבע מראש.

דיסקציה והתרבות Explant של Allantois מאתר לניתוח במבחנה של קובץ מצורף Allantoic

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

Dissection של גוף האדם אלמנטים הזגוגיות לניתוח proteomic

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

תרבות explant עור אגרוף ביופסיה לגזירה של fibroblasts אדם היסודי

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

חליטות עורק הראשי לpharmacokinetic וpharmacodynamic ניתוח של taxanes בעכברים

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

כל הזגוגיות ההומור Dissection לניתוח Vitreodynamic

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Murine הערמונית מיקרו לנתיחה סירוס כירורגי

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

ניתוח אופטימלי של<em&gt; In vivo</em&gt; ו<em&gt; במבחנה</em&gt; כבדית steatosis

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

דיסקציה של הלבלב העכבר עבור ניתוח היסטולוגית והגדרת פרופיל מטבולי

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Neonatal Murine Cochlear Explant Technique as an In Vitro Screening Tool in Hearing Research

Neonatal Murine Cochlear Explant Technique as an In Vitro Screening Tool in Hearing Research

Neonatal Murine Cochlear Explant טכניקה כמו<em&gt; במבחנה</em&gt; כלי הקרנה במחקר שמיעה

While there have been remarkable advances in hearing research over the past few decades, there is still no cure for Sensorineural Hearing Loss (SNHL), a ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

ניתוח כמותי מיקרו-CT Aortopathy במודל של עכברים של β-aminopropionitrile-induced מפרצת אבי העורקים, דיסקציה

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...