Name: dissection and explant culture of murine allantois for the in vitro analysis of allantoic attachment
Uploaded: 2018-01-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment at JoVE.com

이 작품은 도이치 가운데 SFB688 (ag는)에 의해 지원 되었다.

마우스 사육 Regierung 인 운터 프랑 켄에 의해 승인 되었다 그리고 모든 분석 모든 독일과 유럽 연합 해당 법률 및 규정 관리 및 실험 동물의 사용에 따라 실시 했다.
1. 결정의 코팅 전 Utero Allantois Explant 문화에 대 한 α4β1 Integrin와 플레이트
<ol><li>멸 균 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)에서 200 µ g/mL에서 동결 건조 된 murine α4β1 integrin reconstitute 미리 데워 진된 (37 ° C) PBS에에서...

<ol>
	<li>Rossant, J., Cross, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+development:+lessons+from+mouse+mutants.">Placental development: lessons from mouse mutants.</a> Nat Rev Genet. 2 (7), 538-548 (2001).</li><li>Segerer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+essential+developmental+function+for+murine+phosphoglycolate+phosphatase+in+safeguarding+cell+proliferation.">An essential developmental function for murine phosphoglycolate phosphatase in safeguarding cell proliferation.</a> Sci Rep. 6, 35160 (2016).</li><li>Kane, S. V., Acquah, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+transport+of+immunoglobulins:+a+clinical+review+for+gastroenterologists+who+prescribe+therapeutic+monoclonal+antibodies+to+women+during+conception+and+pregnancy.">Placental transport of immunoglobulins: a clinical review for gastroenterologists who prescribe therapeutic monoclonal antibodies to women during conception and pregnancy.</a> Am J Gastroenterol. 104 (1), 228-233 (2009).</li><li>Xu, X., Vugmeyster, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+opportunities+in+absorption,+distribution,+metabolism,+and+excretion+studies+of+therapeutic+biologics.">Challenges and opportunities in absorption, distribution, metabolism, and excretion studies of therapeutic biologics.</a> AAPS J. 14 (4), 781-791 (2012).</li><li>Wesolowski, S. R., Kasmi, K. C., Jonscher, K. R., Friedman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+origins+of+NAFLD:+a+womb+with+a+clue.">Developmental origins of NAFLD: a womb with a clue.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 14 (2), 81-96 (2017).</li><li>Racicot, K., Mor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risks+associated+with+viral+infections+during+pregnancy.">Risks associated with viral infections during pregnancy.</a> J Clin Invest. 127 (5), 1591-1599 (2017).</li><li>Grandjean, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life-Long+Implications+of+Developmental+Exposure+to+Environmental+Stressors:+New+Perspectives.">Life-Long Implications of Developmental Exposure to Environmental Stressors: New Perspectives.</a> Endocrinology. 156 (10), 3408-3415 (2015).</li><li>Inman, K. E., Downs, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+allantois:+emerging+paradigms+in+development+of+the+mammalian+umbilical+cord+and+its+relation+to+the+fetus.">The murine allantois: emerging paradigms in development of the mammalian umbilical cord and its relation to the fetus.</a> Genesis. 45 (5), 237-258 (2007).</li><li>Arora, R., Papaioannou, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+allantois:+a+model+system+for+the+study+of+blood+vessel+formation.">The murine allantois: a model system for the study of blood vessel formation.</a> Blood. 120 (13), 2562-2572 (2012).</li><li>Watson, E. D., Cross, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+structures+and+transport+functions+in+the+mouse+placenta.">Development of structures and transport functions in the mouse placenta.</a> Physiology (Bethesda). 20, 180-193 (2005).</li><li>Yang, J. T., Rayburn, H., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion+events+mediated+by+alpha+4+integrins+are+essential+in+placental+and+cardiac+development.">Cell adhesion events mediated by alpha 4 integrins are essential in placental and cardiac development.</a> Development. 121 (2), 549-560 (1995).</li><li>Gurtner, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+disruption+of+the+murine+VCAM1+gene:+essential+role+of+VCAM-1+in+chorioallantoic+fusion+and+placentation.">Targeted disruption of the murine VCAM1 gene: essential role of VCAM-1 in chorioallantoic fusion and placentation.</a> Genes &amp; development. 9 (1), 1-14 (1995).</li><li>Kwee, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+development+of+the+embryonic+and+extraembryonic+circulatory+systems+in+vascular+cell+adhesion+molecule+(VCAM-1)+deficient+mice.">Defective development of the embryonic and extraembryonic circulatory systems in vascular cell adhesion molecule (VCAM-1) deficient mice.</a> Development. 121 (2), 489-503 (1995).</li><li>Downs, K. M., Gardner, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+into+early+placental+ontogeny:+allantoic+attachment+to+the+chorion+is+selective+and+developmentally+regulated.">An investigation into early placental ontogeny: allantoic attachment to the chorion is selective and developmentally regulated.</a> Development. 121 (2), 407-416 (1995).</li><li>Heyne, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+reliable+method+for+early+pregnancy+detection+in+inbred+mice.">A simple and reliable method for early pregnancy detection in inbred mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 54 (4), 368-371 (2015).</li><li>Downs, K. M., Temkin, R., Gifford, S., McHugh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+murine+allantois+by+allantoic+explants.">Study of the murine allantois by allantoic explants.</a> Dev Biol. 233 (2), 347-364 (2001).</li><li>Hou, W., Sarikaya, D. P., Jerome-Majewska, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+culture+of+pre-placental+tissues+reveals+that+the+allantois+is+required+for+maintained+expression+of+Gcm1+and+Tpbpalpha.">Ex vivo culture of pre-placental tissues reveals that the allantois is required for maintained expression of Gcm1 and Tpbpalpha.</a> Placenta. 47, 12-23 (2016).</li><li>Zeigler, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+allantois+and+chorion,+when+isolated+before+circulation+or+chorio-allantoic+fusion,+have+hematopoietic+potential.">The allantois and chorion, when isolated before circulation or chorio-allantoic fusion, have hematopoietic potential.</a> Development. 133 (21), 4183-4192 (2006).</li><li>Zaidel-Bar, R., Itzkovitz, S., Ma'ayan, A., Iyengar, R., Geiger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+atlas+of+the+integrin+adhesome.">Functional atlas of the integrin adhesome.</a> Nature cell biology. 9 (8), 858-867 (2007).</li></ol>

혈 청, fibronectin 같은 프로 접착제 기질 분자의 풍부한 소스는 존재 allantois explants는 다양 한 플라스틱, 유리, 또는 필터 표면9,16에 쉽게 연결 됩니다. 따라서, 수행된 분석 결과의 목표는 구체적으로 유전자 조작의 효과 조사 하는 경우 allantois 첨부 파일에 다른 치료 움직일 α4β1, 그것은 비 특정 바인딩 사이트 (예를 들어, 소 혈 청을 차단 하는 중?...

태 미 발달 성장과 자 궁 환경에서 개발을 위한 불가결 하지 않습니다. 그것은 내 분 비 및 면역 기관으로 산소, 대사 산물, 및 태아 및 산 순환, 그리고 또한 기능 간의 영양 교환을 위한 인터페이스를 구성합니다. Placental 발달을 손상 하는 내 인 성 또는 외 인 모욕 자궁내 성장 지체, 태아 손실, 또는 임신 합병증, 생쥐와 인간1에서 발생할 수 있습니다. 비정상적인 태 반 생리학 시키는 대상된 마우스 돌연변이의 수 증가2, 219 genotypes 현재 마우스 게놈 정보 과학 (MGI) 웹사이트에 나열 된 계속 되는 동안 (http://www.informatics.jax.org/vocab/ mp_ontology / MP:0010038), 기계 론 적인 관점에서 잘 이해 되지 않습니다 많은이 고기. 이외에 유전 변경, 작은 분자 약물, 단일 클론 항 체, 독 소, 병원 체, 과잉 대사 또는 다양 한 환경 요원 영향을 미칠 수 태 반 개발 및 기능3,,45 , 6 , 7. 아직, 간단한 체 외에서 태 반 개발에서 모델 중요 한 단계는 부족 한 분석 실험.
(탯의 발달 전조) allantois chorion8쪽으로 성장 하는 새싹으로 태아의 뒤 끝에서 나올 때 murine placental 개발 초기 midgestation에서 시작 됩니다. Allantoic 새싹의 외부 층에서 Chorioadhesive 셀 중재 첨부 파일 그리고 allantois chorion (chorioallantoic "퓨전")의 표면에의 확산. chorion 이후에 villi는 미로, 영양분과 산소 juxtaposed 밀접 하 게 모성 혈액 사인 및 배아 용기9 사이 교환 되 안 태 반 층을 형성 하는 allantois의 맥 관 구조 성장에 주름 ,10.
allantois의 첨부는 chorion 미로 형성에 중요 한 초기 단계 이며,이 과정에서 결함에 있는 미 발달 치 사 율의 가장 일반적인 원인 중 midgestation1. 어디 chorioallantoic 첨부 파일10, 발생을 실패 하 고 MGI 데이터베이스 현재 나열을 비정상적인 chorioallantoic 퓨전 (http:// 특징으로하는 108 마우스 돌연변이 마우스 돌연변이의 숫자는 설명 www.informatics.jax.org/vocab/mp_ontology/MP:0002824), 세포 상호 작용은 혈관 세포 접착 분자-1 (VCAM-1, allantoic mesoderm 표현) α4β1 integrin (chorionic mesothelium는에 표현 extraembryonic mesoderm에서 파생 된) chorioallantoic 첨부 파일 및 퓨전11,,1213불가결 것 같다. 약 배아 날 (E) 7.5 VCAM-1 allantoic 줄기의 원심 2/3 내 표현 된다 나타났습니다 Immunohistochemical 전체 산 야생-타입 배아의 얼룩13 (1-4 somite 단계), 그리고의 식을 여전히 높은 동안에 chorioallantoic 첨부 파일 및-퓨전11,12. chorion에 allantoic 첨부 파일의 오류는 일반적으로 자 궁 싹의 조직학 분석에 의해 감지 됩니다. 그러나, allantois 크기 사이와 같은 발달 단계14의 새끼 내 에서도 순수 높은 변수 이며는 allantois만 연결할 수 있는 chorion 신체 접촉 수 있도록 충분 한 크기에 도달 하는 때. 이 자연적인 변화를 반영, chorioallantoic 첨부 파일 일어난다 언젠가 사이 ~ E 8.0과 9.0 E에서 utero에서, 그리고 조직학이이 과정의 통계적으로 신뢰할 수 있는 평가의 많은 수의 분석에 의존 이므로 적절 한 발달 단계에서 충분 한 표본을 conceptuses.
여기, 우리 allantoic 첨부 파일 utero ex allantois 크기에 덜 의존 하는 평가 하는 방법을 설명 합니다. 우리 임신 쥐의 uteri에서 마우스 배아와 그들의 allantoides의 해 부를 입증 ~ 8 일 coitum 게시 (dpc; dpc 0.5 지정 질 플러그 감지), 그리고 allantois의 후속 문화 explants 고정된 α4β1에 integrins입니다. 이 메서드는 첨부 파일 및 여러 allantois explants 병렬에서 및 다른 연속 시간 점에서 확산의 급속 한, 기능 평가 수 있습니다. 프로토콜을 사용할 수 있습니다 allantois 첨부 비보 전에 대상된 돌연변이, 약물, 또는 다양 한 환경 요인의 영향에 대 한 화면으로.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1607">
	<tbody>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:319px;">C57BL/6J wildtype mice</td>
			<td style="width:256px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:119px;">Stock No:&#160;000664</td>
			<td style="width:915px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">70 % (v/v) Ethanol</td>
			<td style="width:256px;">VWR International</td>
			<td>930031006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Standard pattern forceps</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td>11000-12</td>
			<td style="width:915px;">Forceps used to open the abdominal cavity.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Micro dissecting forceps</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11254-20</td>
			<td>Dumont # 5 medical biology forcepts with fine, sharp tip.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fine scissors&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td>14094-11</td>
			<td>Straight blades.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spring scissors&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td>15012-12</td>
			<td>Noyes spring scissors with 14 mm blades for the dissection of uterus buds.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Microspoon</td>
			<td style="width:256px;">Carl Roth</td>
			<td>AT18.1</td>
			<td>5 mm Spoon diameter.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Microtiter plates</td>
			<td style="width:256px;">ibidi</td>
			<td style="width:119px;">81501</td>
			<td>We use uncoated, sterile angiogenesis slides (internal volume 50 &#181;L) with a hydrophobic surface that is not tissue-culture treated to reduce non-a4b1-mediated binding to plastic.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">10 cm dish</td>
			<td style="width:256px;">Nunc</td>
			<td style="width:119px;">150350</td>
			<td>Sterile tissue culture dishes.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">3.5 cm dish</td>
			<td style="width:256px;">Nunc</td>
			<td style="width:119px;">150288</td>
			<td>Sterile tissue culture dishes.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large orifice pipette tips&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Biozym</td>
			<td style="width:119px;">VT0140X</td>
			<td>Low binding pipette tips, 200 &#181;L.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">a4b1 integrin</td>
			<td style="width:256px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:119px;">6054-A4</td>
			<td>Murine a4b1 integrin recombinantly expressed and purified from a Chinese hamster ovary cell line.</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:319px;">Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D8537</td>
			<td>Without Ca2+ and Mg2+.</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:319px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:256px;">PAN Biotech</td>
			<td style="width:119px;">P04-03600</td>
			<td style="width:915px;">The formulation contains 4.5 g/L glucose, 110 mg/L sodium pyruvate and 3.7 g/L NaHCO3 but no L-glutamine, which is added separately.</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:319px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:256px;">Gibco (ThermoFisher Scientific)</td>
			<td style="width:119px;">15140-122</td>
			<td>100 x (10,000 U/mL Penicillin and 10,000 &#181;g/mL streptomycin) stock solution.&#160;Prepare and store aliquots at -20 &#176;C to avoid freeze/thaw.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:256px;">PAN Biotech</td>
			<td style="width:119px;">P04-80100</td>
			<td>100 x (200 mM) Stock solution. Prepare and store aliquots at -20 &#176;C to avoid freeze/thaw.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Biochrom</td>
			<td style="width:119px;">S 0115</td>
			<td>We use heat-inactivated FBS (heated to 56 &#176;C for 30 min with mixing to inactivate complement).</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A7030</td>
			<td>We use protease- and fatty acid-free albumin. Prepare a 0.1 % (w/v) solution in DMEM. Sterile filter the solution through a disposable cell culture filter with a 0.22 &#181;m pore size and low protein-binding membrane, and store aliquots at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;">para-Formaldehyde</td>
			<td style="width:256px;">Carl Roth</td>
			<td>0335.2</td>
			<td style="width:915px;">To make a formaldehyde solution in PBS, weigh para-formaldehyde powder in a ventilated hood, and add it to PBS preheated to ca. 60 &#176;C in a beaker on a stir plate. Add 1 N NaOH dropwise until solution clears. Let solution cool to room temperature, and filter through 0.22 mm filter syringe. Adjust pH with diluted HCl to ca. 6.9, and adjust to final volume with PBS. We aliquot and freeze the solution, but it can also be stored at 4 &#176;C for approximately four weeks.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">X100</td>
			<td>Use wide-orifice pipette tips to handle undiluted Triton X-100.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Normal goat serum</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>G9023</td>
			<td>To block non-specific binding of antibodies in immunofluorescence analyses.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">a-CD31 Antibodies</td>
			<td style="width:256px;">BD Biosciences</td>
			<td>550274</td>
			<td>Purified rat anti-mouse monoclonal antibodies, clone MEC 13.3.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Secondary goat anti-rat antibodies</td>
			<td style="width:256px;">Thermo Fisher</td>
			<td>A-11006</td>
			<td>Goat anti-rat IgG (heavy and light chains), cross-adsorbed, fluorescently labeled with Alexa Fluor 488. Other fluorescent labels are also possible.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Mowiol 4-88</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>81381</td>
			<td>Mounting medium for cytochemistry. MW ~31,000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Labovert&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Leitz</td>
			<td style="width:119px;">Labovert&#160;</td>
			<td>Inverted phase contrast microscope equipped with a 4 x and 10 x objective for somite pair counting. Other phase contrast microscopes (such as those that are routinely used in tissue culture) are also suitable.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">M80</td>
			<td style="width:256px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">M80</td>
			<td>Stereomicroscope with 8 : 1 zoom range (yielding a magnification between 7.5 x and 60 x) for embryo and allantois dissection.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">DM4000B</td>
			<td style="width:256px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">DM4000B</td>
			<td>Microscope system for histology with LED illumination. We use HCX PL FLUOTAR 5 x/0.15 and HC PL FLUOTAR 10 x/0.30 objectives. Other microscopes equipped phase contrast and fluorescence optics can be used to score allantois attachment.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Digital camera</td>
			<td style="width:256px;">JVC</td>
			<td style="width:119px;">KY-F75U</td>
			<td>3-CCD digital capture camera attached to the DM4000B LED microscope. We use Diskus software (Hilgers) to operate both the microscope and the camera.</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:319px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:256px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">SP5</td>
			<td style="width:915px;">Confocal microscope for higher-resolution imaging of endothelia in the vascular plexus of allantois explants. Immunofluorescence images were taken with a 40 x objective.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection and explant culture of murine allantois for the in vitro analysis of allantoic attachment

태 반 포유류 배아의 개발과 성장을 위해 필수적 이다. 이러한 이유로 수많은 유전 변경 및 태 반 개발 또는 기능을 방해 하는 가능성이 또한 환경 모욕 쥐와 인간에서 이른 임신 손실을 발생할 수 있습니다. 그럼에도 불구 하 고, 태 반 형성에 미치는 잠재적 영향에 대 한 화면 분석 간단한 체 외에 부족 합니다. 여기, 우리는 allantois의 첨부는 chorion 이루어져 있는 태 반 형성에 중요 한 첫 번째 단계를 모델링에 초점. 빠르게 움직이지 α4β1 integrin chorio 모방 기판 역할에 allantoic explants의 첨부 파일을 평가 하는 방법을 설명 합니다. 생체 외에서 이렇게 하면 첨부 파일 및 확산 다른 연속 시간 포인트에서 여러 allantois explants의 동작의 질적 평가 수 있습니다. 타겟된 마우스 돌연변이, 약물, 또는 임신 합병증 이나 allantois 첨부 ex vivo에태아 손실에 연결 된 다양 한 환경 요인의 효과 조사 하는 프로토콜을 사용할 수 있습니다.

이 프로토콜 murine allantoides ex vivo, explant를 격리 하는 방법을 설명 하 고 chorioallantoic 융합 vivo에서 동안 α4β1 integrin allantois 첨부, 중요 한 프로세스의 질적 평가 자세히 설명. 그림 1A-H 에서 대표적인 결과 allantois 격리 임신 자 궁에서 시작의 연속 단계를 보여 줍니다. 자 궁 뿔, 지방 조직 등 선박 (...

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment at JoVE.com

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

생체 외에서 시험 모델 chorioallantoic 첨부 파일, 태 반 형성의 첫 번째 단계를 설명합니다. 프로토콜에 고정된 α4β1 integrin murine allantoides의 해 부 및 explant 문화를 보여 줍니다. 미리 정해진된 시간 포인트 allantois 첨부 현미경으로 평가 됩니다.

해 부와 Allantoic 첨부 파일의 생체 외에서 분석 Murine Allantois Explant 문화

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

Proteomic 분석을위한 인적 유리 바디 요소의 해부

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

연구

의학

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

인간의 기본 섬유 아세포의 유도를위한 피부 펀치 생검 절편 문화

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

쥐의 대동맥 부비동의 동맥 경화 병변의 정량 분석​​ 및 특성

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

마우스의 탁산의 약동학 및 약력 학적 분석을위한 경동맥 팅크

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

Vitreodynamic 분석을위한 항목의 유리체 유머 해부

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

쥐의 전립선 마이크로 해부 및 수술 거세

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

의 최적화 분석<em&gt; 생체</em&gt; 및<em&gt; 체외</em&gt; 간 지방증

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

조직학 분석 및 대사 프로 파일링에 대 한 마우스 췌의 해 부

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Neonatal Murine Cochlear Explant Technique as an In Vitro Screening Tool in Hearing Research

Neonatal Murine Cochlear Explant Technique as an In Vitro Screening Tool in Hearing Research

신생아 쥐의 달팽이관 Explant 기법으로<em&gt; 체외에서</em&gt; 청력 연구의 스크리닝 도구

While there have been remarkable advances in hearing research over the past few decades, there is still no cure for Sensorineural Hearing Loss (SNHL), a ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Β-aminopropionitrile-유도 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 Aortopathy의 양적 마이크로 CT 분석

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...