Name: dissection and explant culture of murine allantois for the in vitro analysis of allantoic attachment
Uploaded: 2018-01-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment at JoVE.com

Detta arbete stöds av den Deutsche Forschungsgemeinschafts SFB688 (att A.G.).

Mus avel godkändes av den Regierung Unterfranken, och alla analyser utfördes i strikt överensstämmelse med alla tyska och Europeiska unionens lagar och förordningar om skötsel och användning av försöksdjur.
1. beläggning av mikrotiter plattor med α4β1-Integrin för Ex Utero Allantois Explant kultur
<ol><li>Bered det frystorkade murina α4β1-integrin på 200 µg/mL i steril fosfatbuffrad saltlösning (PBS). Späd till en slutlig koncentration på 10 µg/mL i förväg vä...

<ol>
	<li>Rossant, J., Cross, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+development:+lessons+from+mouse+mutants.">Placental development: lessons from mouse mutants.</a> Nat Rev Genet. 2 (7), 538-548 (2001).</li><li>Segerer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+essential+developmental+function+for+murine+phosphoglycolate+phosphatase+in+safeguarding+cell+proliferation.">An essential developmental function for murine phosphoglycolate phosphatase in safeguarding cell proliferation.</a> Sci Rep. 6, 35160 (2016).</li><li>Kane, S. V., Acquah, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+transport+of+immunoglobulins:+a+clinical+review+for+gastroenterologists+who+prescribe+therapeutic+monoclonal+antibodies+to+women+during+conception+and+pregnancy.">Placental transport of immunoglobulins: a clinical review for gastroenterologists who prescribe therapeutic monoclonal antibodies to women during conception and pregnancy.</a> Am J Gastroenterol. 104 (1), 228-233 (2009).</li><li>Xu, X., Vugmeyster, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+opportunities+in+absorption,+distribution,+metabolism,+and+excretion+studies+of+therapeutic+biologics.">Challenges and opportunities in absorption, distribution, metabolism, and excretion studies of therapeutic biologics.</a> AAPS J. 14 (4), 781-791 (2012).</li><li>Wesolowski, S. R., Kasmi, K. C., Jonscher, K. R., Friedman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+origins+of+NAFLD:+a+womb+with+a+clue.">Developmental origins of NAFLD: a womb with a clue.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 14 (2), 81-96 (2017).</li><li>Racicot, K., Mor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risks+associated+with+viral+infections+during+pregnancy.">Risks associated with viral infections during pregnancy.</a> J Clin Invest. 127 (5), 1591-1599 (2017).</li><li>Grandjean, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life-Long+Implications+of+Developmental+Exposure+to+Environmental+Stressors:+New+Perspectives.">Life-Long Implications of Developmental Exposure to Environmental Stressors: New Perspectives.</a> Endocrinology. 156 (10), 3408-3415 (2015).</li><li>Inman, K. E., Downs, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+allantois:+emerging+paradigms+in+development+of+the+mammalian+umbilical+cord+and+its+relation+to+the+fetus.">The murine allantois: emerging paradigms in development of the mammalian umbilical cord and its relation to the fetus.</a> Genesis. 45 (5), 237-258 (2007).</li><li>Arora, R., Papaioannou, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+murine+allantois:+a+model+system+for+the+study+of+blood+vessel+formation.">The murine allantois: a model system for the study of blood vessel formation.</a> Blood. 120 (13), 2562-2572 (2012).</li><li>Watson, E. D., Cross, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+structures+and+transport+functions+in+the+mouse+placenta.">Development of structures and transport functions in the mouse placenta.</a> Physiology (Bethesda). 20, 180-193 (2005).</li><li>Yang, J. T., Rayburn, H., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion+events+mediated+by+alpha+4+integrins+are+essential+in+placental+and+cardiac+development.">Cell adhesion events mediated by alpha 4 integrins are essential in placental and cardiac development.</a> Development. 121 (2), 549-560 (1995).</li><li>Gurtner, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+disruption+of+the+murine+VCAM1+gene:+essential+role+of+VCAM-1+in+chorioallantoic+fusion+and+placentation.">Targeted disruption of the murine VCAM1 gene: essential role of VCAM-1 in chorioallantoic fusion and placentation.</a> Genes &amp; development. 9 (1), 1-14 (1995).</li><li>Kwee, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+development+of+the+embryonic+and+extraembryonic+circulatory+systems+in+vascular+cell+adhesion+molecule+(VCAM-1)+deficient+mice.">Defective development of the embryonic and extraembryonic circulatory systems in vascular cell adhesion molecule (VCAM-1) deficient mice.</a> Development. 121 (2), 489-503 (1995).</li><li>Downs, K. M., Gardner, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+into+early+placental+ontogeny:+allantoic+attachment+to+the+chorion+is+selective+and+developmentally+regulated.">An investigation into early placental ontogeny: allantoic attachment to the chorion is selective and developmentally regulated.</a> Development. 121 (2), 407-416 (1995).</li><li>Heyne, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+reliable+method+for+early+pregnancy+detection+in+inbred+mice.">A simple and reliable method for early pregnancy detection in inbred mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 54 (4), 368-371 (2015).</li><li>Downs, K. M., Temkin, R., Gifford, S., McHugh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+murine+allantois+by+allantoic+explants.">Study of the murine allantois by allantoic explants.</a> Dev Biol. 233 (2), 347-364 (2001).</li><li>Hou, W., Sarikaya, D. P., Jerome-Majewska, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+culture+of+pre-placental+tissues+reveals+that+the+allantois+is+required+for+maintained+expression+of+Gcm1+and+Tpbpalpha.">Ex vivo culture of pre-placental tissues reveals that the allantois is required for maintained expression of Gcm1 and Tpbpalpha.</a> Placenta. 47, 12-23 (2016).</li><li>Zeigler, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+allantois+and+chorion,+when+isolated+before+circulation+or+chorio-allantoic+fusion,+have+hematopoietic+potential.">The allantois and chorion, when isolated before circulation or chorio-allantoic fusion, have hematopoietic potential.</a> Development. 133 (21), 4183-4192 (2006).</li><li>Zaidel-Bar, R., Itzkovitz, S., Ma'ayan, A., Iyengar, R., Geiger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+atlas+of+the+integrin+adhesome.">Functional atlas of the integrin adhesome.</a> Nature cell biology. 9 (8), 858-867 (2007).</li></ol>

I närvaro av serum, som är en rik källa av Pro självhäftande extracellulär matrix molekyler såsom Fibronektin, fäster allantois bladsticklingar lätt vid olika plast, glas eller filter ytor9,16. Således, om utförs analysen syftar till specifikt undersöka effekten av en genetisk modifiering eller någon annan behandling på allantois fastsättning orörlig α4β1, är det kritiskt att blockera icke-specifik bindning platser (t.ex., med bovint s...

Moderkakan är oumbärlig för embryonal tillväxt och utveckling i livmodern miljön. Det utgör gränssnittet för syre, metabolit och näringsämnen utbyte mellan fetal och maternell cirkulation, och också funktioner som en endokrin och immunologiska organ. Alla endogena eller exogena förolämpning som försämrar placenta utveckling kan leda till intrauterin tillväxthämning, fetal förlust eller komplikationer under graviditeten, både möss och människor1. Medan antalet riktade mus mutationer som orsakar onormal placenta fysiologi fortsätter att öka2, 219 genotyper som visas på webbplatsen mus genomet informatik (MGI) (http://www.informatics.jax.org/vocab/ mp_ontology / MP:0010038), många av dessa fenotyper är inte förstått från en mekanistisk synvinkel. Förutom genetiska förändringar, småmolekylära läkemedel, monoklonala antikroppar, toxiner, kan patogener, överskott metaboliter eller olika miljöfaktorer påverka moderkakan utveckling och funktion3,4,5 , 6 , 7. ännu, enkel in vitro- analyser att modell kritiska steg i moderkakan utveckling är knappa.
Murina placenta utveckling startas i tidiga midgestation, när allantois (developmental föregångare av navelsträngen) dyker upp från den bakre änden av embryot som en knopp som växer mot den chorion8. Chorioadhesive celler i det yttre lagret av den allantoiska knoppen medla den bifogade filen och fördelningen av allantois på ytan av chorion (chorioallantoic ”fusion”). Chorion viker därefter in villi som växer i kärlsystemet av allantois att bilda labyrinten, det inre placenta lagret där näringsämnen och syre utbyts mellan tätt bredvid moderns blod sinusoider och embryonala fartyg9 ,10.
Fastsättning av allantois till chorion är det första och avgörande steget i labyrint bildandet, och brister i denna process är bland de vanligaste orsakerna till embryonal dödlighet i midgestation1. Även om ett antal mus mutanter har beskrivits där chorioallantoic fastsättning misslyckas inträffar10och MGI databasen innehåller för närvarande 108 mus mutanter som kännetecknas av onormal chorioallantoic fusion (http:// www.Informatics.Jax.org/Vocab/mp_ontology/MP:0002824), intercellulära samspelet mellan vaskulär celladhesionsmolekyl-1 (VCAM-1, uttryckt på allantoiska mesoderm) och α4β1-integrin (uttryckt på chorionic mesothelium, vilket är härlett från embryoniskt mesoderm) verkar vara oumbärlig för chorioallantoic fastsättning och fusion11,12,13. Immunhistokemisk färgning av hela-mount vildtyp embryon har visat att VCAM-1 uttrycks inom den distala tredjedelen av allantoiska stjälken ca embryonala dag (E) 7,513 (1-4 somite Stadium), och att dess uttryck är fortsatt hög under chorioallantoic fastsättning och -fusion11,12. Fel allantoiska fastsättning chorion upptäcks vanligen av histologiska analyser av livmodern knoppar. Dock allantois storlekar är fysiologiskt mycket varierande i mellan och även inom kullar av samma utvecklingsstadier14, och allantois kan endast koppla till chorion när det har nått en tillräcklig storlek för att fysisk kontakt. Återspeglar detta naturliga variationer, chorioallantoic tillbehöret äger rum någon gång mellan ~ E 8.0 och E 9.0 i livmodernoch en statistiskt tillförlitlig utvärdering av denna process med histologi är därför beroende av analysen av ett stort antal negativt att erhålla tillräckligt exemplar på lämpliga utvecklingsstadiet.
Här, beskriver vi en metod för att bedöma allantoiska fastsättning ex utero som är mindre beroende av allantois storlek. Vi påvisa dissektion av musembryon och deras allantoides från livmödrarna av dräktiga möss ~ 8 dagar post intravenösa (dpc; dpc 0,5 designerar detektion av en vaginal plugg), och den efterföljande kulturen av allantois explants på immobiliserade α4β1 integriner. Denna metod möjliggör en snabb, funktionell utvärdering av den bifogade filen och sprida uppförandet av flera allantois bladsticklingar parallellt och olika efterföljande tidpunkter. Protokollet kan användas till skärmen för effekterna av riktade mutationer, droger eller olika miljöfaktorer på allantois fastsättning ex vivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1607">
	<tbody>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:319px;">C57BL/6J wildtype mice</td>
			<td style="width:256px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:119px;">Stock No:&#160;000664</td>
			<td style="width:915px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">70 % (v/v) Ethanol</td>
			<td style="width:256px;">VWR International</td>
			<td>930031006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Standard pattern forceps</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td>11000-12</td>
			<td style="width:915px;">Forceps used to open the abdominal cavity.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Micro dissecting forceps</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11254-20</td>
			<td>Dumont # 5 medical biology forcepts with fine, sharp tip.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fine scissors&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td>14094-11</td>
			<td>Straight blades.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spring scissors&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Fine Science Tools</td>
			<td>15012-12</td>
			<td>Noyes spring scissors with 14 mm blades for the dissection of uterus buds.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Microspoon</td>
			<td style="width:256px;">Carl Roth</td>
			<td>AT18.1</td>
			<td>5 mm Spoon diameter.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Microtiter plates</td>
			<td style="width:256px;">ibidi</td>
			<td style="width:119px;">81501</td>
			<td>We use uncoated, sterile angiogenesis slides (internal volume 50 &#181;L) with a hydrophobic surface that is not tissue-culture treated to reduce non-a4b1-mediated binding to plastic.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">10 cm dish</td>
			<td style="width:256px;">Nunc</td>
			<td style="width:119px;">150350</td>
			<td>Sterile tissue culture dishes.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">3.5 cm dish</td>
			<td style="width:256px;">Nunc</td>
			<td style="width:119px;">150288</td>
			<td>Sterile tissue culture dishes.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large orifice pipette tips&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Biozym</td>
			<td style="width:119px;">VT0140X</td>
			<td>Low binding pipette tips, 200 &#181;L.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">a4b1 integrin</td>
			<td style="width:256px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:119px;">6054-A4</td>
			<td>Murine a4b1 integrin recombinantly expressed and purified from a Chinese hamster ovary cell line.</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:319px;">Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D8537</td>
			<td>Without Ca2+ and Mg2+.</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:319px;">Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:256px;">PAN Biotech</td>
			<td style="width:119px;">P04-03600</td>
			<td style="width:915px;">The formulation contains 4.5 g/L glucose, 110 mg/L sodium pyruvate and 3.7 g/L NaHCO3 but no L-glutamine, which is added separately.</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:319px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:256px;">Gibco (ThermoFisher Scientific)</td>
			<td style="width:119px;">15140-122</td>
			<td>100 x (10,000 U/mL Penicillin and 10,000 &#181;g/mL streptomycin) stock solution.&#160;Prepare and store aliquots at -20 &#176;C to avoid freeze/thaw.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:256px;">PAN Biotech</td>
			<td style="width:119px;">P04-80100</td>
			<td>100 x (200 mM) Stock solution. Prepare and store aliquots at -20 &#176;C to avoid freeze/thaw.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Fetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Biochrom</td>
			<td style="width:119px;">S 0115</td>
			<td>We use heat-inactivated FBS (heated to 56 &#176;C for 30 min with mixing to inactivate complement).</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A7030</td>
			<td>We use protease- and fatty acid-free albumin. Prepare a 0.1 % (w/v) solution in DMEM. Sterile filter the solution through a disposable cell culture filter with a 0.22 &#181;m pore size and low protein-binding membrane, and store aliquots at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;">para-Formaldehyde</td>
			<td style="width:256px;">Carl Roth</td>
			<td>0335.2</td>
			<td style="width:915px;">To make a formaldehyde solution in PBS, weigh para-formaldehyde powder in a ventilated hood, and add it to PBS preheated to ca. 60 &#176;C in a beaker on a stir plate. Add 1 N NaOH dropwise until solution clears. Let solution cool to room temperature, and filter through 0.22 mm filter syringe. Adjust pH with diluted HCl to ca. 6.9, and adjust to final volume with PBS. We aliquot and freeze the solution, but it can also be stored at 4 &#176;C for approximately four weeks.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">X100</td>
			<td>Use wide-orifice pipette tips to handle undiluted Triton X-100.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Normal goat serum</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>G9023</td>
			<td>To block non-specific binding of antibodies in immunofluorescence analyses.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">a-CD31 Antibodies</td>
			<td style="width:256px;">BD Biosciences</td>
			<td>550274</td>
			<td>Purified rat anti-mouse monoclonal antibodies, clone MEC 13.3.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Secondary goat anti-rat antibodies</td>
			<td style="width:256px;">Thermo Fisher</td>
			<td>A-11006</td>
			<td>Goat anti-rat IgG (heavy and light chains), cross-adsorbed, fluorescently labeled with Alexa Fluor 488. Other fluorescent labels are also possible.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Mowiol 4-88</td>
			<td style="width:256px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>81381</td>
			<td>Mounting medium for cytochemistry. MW ~31,000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Labovert&#160;</td>
			<td style="width:256px;">Leitz</td>
			<td style="width:119px;">Labovert&#160;</td>
			<td>Inverted phase contrast microscope equipped with a 4 x and 10 x objective for somite pair counting. Other phase contrast microscopes (such as those that are routinely used in tissue culture) are also suitable.&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">M80</td>
			<td style="width:256px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">M80</td>
			<td>Stereomicroscope with 8 : 1 zoom range (yielding a magnification between 7.5 x and 60 x) for embryo and allantois dissection.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">DM4000B</td>
			<td style="width:256px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">DM4000B</td>
			<td>Microscope system for histology with LED illumination. We use HCX PL FLUOTAR 5 x/0.15 and HC PL FLUOTAR 10 x/0.30 objectives. Other microscopes equipped phase contrast and fluorescence optics can be used to score allantois attachment.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:319px;">Digital camera</td>
			<td style="width:256px;">JVC</td>
			<td style="width:119px;">KY-F75U</td>
			<td>3-CCD digital capture camera attached to the DM4000B LED microscope. We use Diskus software (Hilgers) to operate both the microscope and the camera.</td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:319px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:256px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:119px;">SP5</td>
			<td style="width:915px;">Confocal microscope for higher-resolution imaging of endothelia in the vascular plexus of allantois explants. Immunofluorescence images were taken with a 40 x objective.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection and explant culture of murine allantois for the in vitro analysis of allantoic attachment

Moderkakan är viktigt för tillväxten och utvecklingen av däggdjur embryon. Av denna anledning, kan många genetiska förändringar och sannolikt också miljömässiga förolämpningar som stör moderkakan utveckling eller funktion orsaka tidiga missfall i möss och människor. Dock saknas enkelt in vitro- analyser till skärmen för potentiella effekter på moderkakan bildandet. Här fokuserar vi på modellering det första och avgörande steget i moderkakan formation, som består av tillbehöret av allantois till chorion. Vi beskriver en metod för att snabbt bedöma fastsättning av allantoiska bladsticklingar på immobiliserade α4β1-integrin, som fungerar som ett chorio-mimetiska substrat. Detta in vitro -metod möjliggör en kvalitativ bedömning av den bifogade filen och sprida uppförandet av flera allantois bladsticklingar vid olika på varandra följande tidpunkter. Protokollet kan användas för att undersöka effekten av målinriktade mus mutationer, droger eller olika miljömässiga faktorer som har kopplats till graviditetskomplikationer eller missfall på allantois fastsättning ex vivo.

Detta protokoll beskriver en metod att isolera och explant murina allantoides ex vivo, och detaljer den kvalitativa utvärderingen av allantois fastsättning till α4β1-integrin, en kritisk process under i vivo chorioallantoic fusion. De representativa resultat som visas i figur 1A–H visar de successiva steg av allantois isolering från gravida livmodern. Moderns vävnader som omger den livmoderns hornen,...

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment at JoVE.com

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Vi beskriver ett in vitro- test till modell chorioallantoic fastsättning, det första steget i moderkakan bildas. Protokollet visar murina allantoides på immobiliserade α4β1-integrin dissektion och explant kultur. Allantois fastsättning utvärderas mikroskopiskt vid förutbestämda tidpunkter.

Dissektion och Explant kultur av murina Allantois för In vitro- analys av allantoiska fastsättning

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

Dissekering av mänskliga glaskropp Elements för proteomik analys

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

Skin stansbiopsi Explantationsersättning Kultur för Derivering av primära humana fibroblaster

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

Kvantitativ Analys och karakterisering av aterosklerotiska lesioner i murina Aorta Sinus

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halspulsådern Tinkturer för farmakokinetiska och farmakodynamiska Analys av taxaner i möss

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

Sammanlagt Glaskroppen Dissektion för Vitreodynamic Analys

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Murin Prostate Micro-dissektion och kirurgisk kastrering

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimerad Analys av<em&gt; In Vivo</em&gt; och<em&gt; In Vitro</em&gt; Leversteatos

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Dissektion av mus bukspottkörteln för histologisk analys och metabolisk profilering

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Neonatal Murine Cochlear Explant Technique as an In Vitro Screening Tool in Hearing Research

Neonatal Murine Cochlear Explant Technique as an In Vitro Screening Tool in Hearing Research

Neonatal Murine Cochlear Explanting Technique som en<em&gt; In Vitro</em&gt; Screening Tool in Hearing Research

While there have been remarkable advances in hearing research over the past few decades, there is still no cure for Sensorineural Hearing Loss (SNHL), a ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Kvantitativa Micro-CT analys av Aortopathy i en musmodell av β-aminopropionitrile-inducerad aorta Aneurysm och dissektion

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...