Name: simultaneous distinction of monospecific and mixed dfs70 patterns during ana screening with a novel hep-2 elite/dfs70 knockout substrate
Uploaded: 2018-01-17T10:50:00
Duration: 10 min 5 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Simultaneous Distinction of Monospecific and Mixed DFS70 Patterns During ANA Screening with a Novel HEp-2 ELITE/DFS70 Knockout Substrate at JoVE.com

ونحن نشكر تسانغتشو أندرو لأداء تجارب IIF وجمع الصور.

البروتوكول يتبع المبادئ التوجيهية التي وضعتها لجنة أخلاقيات البحوث البشرية المؤسسية "الثالوث في مجال التكنولوجيا الحيوية".
1-عينة وإعداد سفلية
<ol><li>تسمح الحقائب التي تحتوي على شرائح الركازة (الزجاج الشرائح مع 12 بئرا في كل شريحة تحتوي على HEp2 أو HEp-2 + كو HEp2 خلية خليط) حجته على درجة حرارة الغرفة لتحقيق الأداء الأمثل والحيلولة دون تكاثف الرطوبة على سطح الشريحة قبل بالإضافة للعينة. وهذا ينبغي أن تأخذ تقريبا بين 10-15 دقيقة.</li>
	<li>بمجرد اكويليبراتيد لدرجة حرارة الغرفة، بعناية إزالة الشرائح الركيزة باستخدام الأصابع دون لمس الجانبين من الحقيبة.</li>
	<li>قم بتسمية الشرائح ووضعها في تشكيل غرفة حضانة (في درجة حرارة الغرفة) اصطف مع مناشف ورقية مبلل بالماء لمنع تجفيف الشرائح خلال العينة وحضانة المتقارنة. ملاحظة: تلطيخ غير محددة يمكن أن تنجم عن الآبار الجافة؛ منشفة ورقية مبللة داخل غرفة الحضانة ويوفر الرطوبة ويمنع جفاف جيدا.</li>
</ol>2-إضافة عناصر تحكم والعينات
<ol><li>الاستغناء عن حوالي 50 ميليلتر من الضوابط السلبية/الإيجابية، ومزيج من DFS70--أنا سيرا إيجابيا كما هو موضح في هذه الدراسة، أو عينات مصل دم المريض على الآبار الشرائح الفردية.</li>
	<li>الاستغناء عن control (s) والعينات في كل بئر على الشريحة.</li>
	<li>لمنع التلوث عبر جيدا، وتجنب يفعم الآبار. في حين لا يفعم الآبار، ضمان التغطية الكاملة للسطح جيدا وتجنب فقاعات الهواء. ملاحظة: وحدة التخزين الموصى بها هي 50 ميليلتر حسب الخطوة 2.1.</li>
	<li>ضع الغطاء على غرفة الحضانة واحتضان الشرائح لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. إذا كان هناك أي أنا موجودة في مصل المريض، فإنه سيتم ربط إلى الخلايا الموجودة في كل بئر خلال هذه الفترة الحضانة.</li>
	<li>بعد انتهاء فترة الحضانة، قم بإزالة الشريحة من غرفة الحضانة. عقد الشريحة في نهاية التبويب وشطف بلطف مع حوالي 10 مل مخزنة الفوسفات المالحة (PBS) يغسل المخزن المؤقت المنصوص عليها في هذه المجموعة، باستخدام ماصة أو في كوب مملوءة ببرنامج تلفزيوني عن 10-15 س. نقل الشريحة فورا في جرة كوبلين مع المخزن المؤقت للمياه والصرف الصحي برنامج تلفزيوني و (المياه والصرف الصحي نقع) لأدنى 10 كرر هذه العملية مع كافة الشرائح المتبقية. ملاحظة: عند وضع شرائح متعددة في جرة كوبلين، التأكد من عدم الاتصال الجانب خلية من الشريحة شريحة أخرى، كهذا سيؤدي إلى إتلاف الخلايا التقيد على الشريحة الزجاجية.</li>
</ol>3-إضافة المتقارن نيون
<ol><li>إزالة شريحة واحدة فقط في كل مرة من جرة كوبلين. لإزالة المخزن المؤقت يغسل PBS الزائدة من الشريحة، اضغط بلطف أو لطخة الشريحة على منشفة ورقية. وتقدم كل مجموعة مع فيتك المسمى الإنسان المضادة مفتش المتقارن الفلورسنت. إلى كل بئر، تطبق بلطف قطره 1 (حوالي 50 ميليلتر) المتقارن المقدمة.</li>
	<li>احتضان الشرائح في قاعة حضانة المصبوغة مغلقة لمدة 30 دقيقة. ملاحظة: ينصح استخدام Fc محددة مفتش المتقارن. إذا كان هناك أي أنا موجودة في مصل المريض، سيتم ربط المتقارن للخلايا الموجودة في كل بئر خلال هذه الفترة الحضانة، مما يؤدي في الأسفار محددة من الخلايا الموجودة في الآبار. المتقارن حساس للضوء. قاعة مغلقة الاحتضان يساعد على منع التدخل الخفيفة مع رد فعل المتقارنة الخلايا الموجودة في كل بئر.</li>
	<li>بعد انتهاء فترة الحضانة، قم بإزالة الشريحة من غرفة الحضانة. أمسك الشريحة في نهاية التبويب وشطف بلطف مع حوالي 10 مل برنامج تلفزيوني يغسل المخزن المؤقت المقدمة في المجموعة، باستخدام ماصة أو في كوب مليء ببرنامج تلفزيوني. نقل الشريحة فورا في جرة كوبلين مع المخزن المؤقت للمياه والصرف الصحي برنامج تلفزيوني والمياه والصرف الصحي (نقع) للحد الأدنى 10 تكرار هذه العملية مع بقية الشرائح. ملاحظة: عند وضع شرائح متعددة في جرة كوبلين، التأكد من عدم الاتصال الجانب خلية من الشريحة شريحة أخرى، كهذا سيؤدي إلى إتلاف الخلايا التقيد على الشريحة الزجاجية.</li>
	<li>ضع كوفيرسليبس التي يتم توفيرها في هذه المجموعة على منشفة ورقية جافة. وتقدم وسائل الإعلام المتزايدة مع الطقم. إلى الحافة السفلية من ساترة، تطبيق بين 3-4 قطرات من وسائل الإعلام المتزايدة في خط.</li>
	<li>إخراج شريحة واحدة في كل مرة من جرة كوبلين الذي يحتوي على المخزن المؤقت يغسل. لإزالة المخزن المؤقت فائض المياه والصرف الصحي، اضغط بلطف أو لطخة الشريحة على منشفة ورقية.</li>
	<li>خفض الشريحة بلطف إلى ساترة بوضع الحافة السفلية من الشريحة إلى حافة ساترة. هذا يسمح بتركيب وسائل الإعلام الحالية على ساترة الحافة السفلي بالتدفق إلى الحافة العلوية من الشريحة، ويقلل من تكوين فقاعات الهواء، والتي قد تتداخل مع قراءة كل بئر من الشريحة. ملاحظة: يجب استخدام ضغط الحد الأدنى لتركيب غطاء الشريحة إلى الشريحة. يمكن أن يسبب أي ضغط زائد الحركة الجانبية زلات الغطاء. يمكن أن يسبب هذا الضرر إلى إعداد أحادي الطبقة من الخلايا والنتيجة في التشويه.</li>
	<li>تخزين الشرائح في الظلام في 2-8 درجة مئوية. دراسة الشرائح بمجرد أنها هي التي شنت أو في غضون 48 ساعة. ملاحظة: قد يؤدي تخزين أطول في تدهور نمط وإشارة الفلورسنت.</li>
</ol>4-تحديد النتائج الإيجابية والسلبية
<ol><li>عرض الشرائح مع مجهر فلوري استخدام مجموعة تصفية فيتك، الموجود في غرفة مظلمة.</li>
	<li>دراسة للأسفار خضراء مشرقة محددة تحت مجهر fluorescence في بير 200 X أو أكبر لجعل التفسير النهائي فيما يتعلق بالإيجابية ونمط. مراقبة عناصر إيجابية وأخرى سلبية. ملاحظة: سيتم عرض عنصر التحكم الإيجابي الفلورية الخضراء المشرقة في النواة (الشكل 2A، متجانس). سيتم عرض عنصر تحكم السلبية لا الفلورية الخضراء محددة تحت مجهر الأسفار.</li>
	<li>تسجيل نتيجة إيجابية/سلبية لكل بئر وتشمل نمط أنا للحالات الإيجابية.</li>
</ol>

<ol>
	<li>. Position Statement. Methodology of testing for antinuclear antibodies Available from: <a target="_blank" href="https://www.rheumatology.org/Portals/0/Files/Methodology%20of%20Testing%20Antinuclear%20Antibodies%20Position%20Statement.pdf">https://www.rheumatology.org/Portals/0/Files/Methodology%20of%20Testing%20Antinuclear%20Antibodies%20Position%20Statement.pdf</a> (2011)</li><li>Meroni, P. L., Schur, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ANA+screening:+an+old+test+with+new+recommendations.">ANA screening: an old test with new recommendations.</a> Ann Rheum Dis. 69 (8), 1420-1422 (2010).</li><li>Agmon-Levin, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+recommendations+for+the+assessment+of+autoantibodies+to+cellular+antigens+referred+to+as+anti-nuclear+antibodies.">International recommendations for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as anti-nuclear antibodies.</a> Ann Rheum Dis. 73 (1), 17-23 (2014).</li><li>Chan, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Report+of+the+First+International+Consensus+on+Standardized+Nomenclature+of+Antinuclear+Antibody+HEp-2+Cell+Patterns+2014-2015.">Report of the First International Consensus on Standardized Nomenclature of Antinuclear Antibody HEp-2 Cell Patterns 2014-2015.</a> Front Immunol. 6, 412 (2015).</li><li>Malyavantham, K., Suresh, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+DFS70+pattern+and+impact+on+ANA+screening+using+a+novel+HEp-2+ELITE/DFS70+knockout+substrate.">Analysis of DFS70 pattern and impact on ANA screening using a novel HEp-2 ELITE/DFS70 knockout substrate.</a> Auto Immun Highlights. 8 (1), 3 (2017).</li><li>Sperotto, F., Seguso, M., Gallo, N., Plebani, M., Zulian, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-DFS70+antibodies+in+healthy+schoolchildren:+A+follow-up+analysis.">Anti-DFS70 antibodies in healthy schoolchildren: A follow-up analysis.</a> Autoimmun Rev. , (2017).</li><li>Ayaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+cytotoxic+anti-LEDGF+autoantibodies+in+atopic+dermatitis.">Detection of cytotoxic anti-LEDGF autoantibodies in atopic dermatitis.</a> Autoimmunity. 35 (5), 319-327 (2002).</li><li>Ochs, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+to+DFS+70+kd/transcription+coactivator+p75+in+atopic+dermatitis+and+other+conditions.">Autoantibodies to DFS 70 kd/transcription coactivator p75 in atopic dermatitis and other conditions.</a> J Allergy Clin Immunol. 105 (6 Pt 1), 1211-1220 (2000).</li><li>Watanabe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-DFS70+antibodies+in+597+healthy+hospital+workers.">Anti-DFS70 antibodies in 597 healthy hospital workers.</a> Arthritis Rheum. 50 (3), 892-900 (2004).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+immune+response+directed+against+LEDGF+in+patients+with+VKH.">Humoral immune response directed against LEDGF in patients with VKH.</a> Immunol Lett. 78 (3), 161-168 (2001).</li><li>Seelig, C. A., Bauer, O., Seelig, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+Against+DFS70/LEDGF+Exclusion+Markers+for+Systemic+Autoimmune+Rheumatic+Diseases+(SARD).">Autoantibodies Against DFS70/LEDGF Exclusion Markers for Systemic Autoimmune Rheumatic Diseases (SARD).</a> Clin Lab. 62 (4), 499-517 (2016).</li><li>Ochs, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+significance+of+autoantibodies+to+DFS70/LEDGFp75+in+health+and+disease:+integrating+basic+science+with+clinical+understanding.">The significance of autoantibodies to DFS70/LEDGFp75 in health and disease: integrating basic science with clinical understanding.</a> Clin Exp Med. 16 (3), 273-293 (2016).</li><li>Bizzaro, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+chemoluminescence+and+immunoasdorption+tests+for+anti-DFS70+antibodies+avoid+false+positive+results+by+indirect+immunofluorescence.">Specific chemoluminescence and immunoasdorption tests for anti-DFS70 antibodies avoid false positive results by indirect immunofluorescence.</a> Clin Chim Acta. 451 (Pt B), 271-277 (2015).</li><li>Bizzaro, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+the+lens+and+cornea+in+anti-DFS70-positive+subjects.">Antibodies to the lens and cornea in anti-DFS70-positive subjects.</a> Ann N Y Acad Sci. 1107, 174-183 (2007).</li><li>Daniels, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antinuclear+autoantibodies+in+prostate+cancer:+immunity+to+LEDGF/p75,+a+survival+protein+highly+expressed+in+prostate+tumors+and+cleaved+during+apoptosis.">Antinuclear autoantibodies in prostate cancer: immunity to LEDGF/p75, a survival protein highly expressed in prostate tumors and cleaved during apoptosis.</a> Prostate. 62 (1), 14-26 (2005).</li><li>Dellavance, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+spectrum+of+antinuclear+antibodies+associated+with+the+nuclear+dense+fine+speckled+immunofluorescence+pattern.">The clinical spectrum of antinuclear antibodies associated with the nuclear dense fine speckled immunofluorescence pattern.</a> J Rheumatol. 32 (11), 2144-2149 (2005).</li><li>Gundin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+anti-DFS70+antibodies+in+patients+with+ANA-associated+autoimmune+rheumatic+diseases+suspicion+is+cost-effective.">Measurement of anti-DFS70 antibodies in patients with ANA-associated autoimmune rheumatic diseases suspicion is cost-effective.</a> Auto Immun Highlights. 7 (1), 10 (2016).</li><li>Kang, S. Y., Lee, W. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+significance+of+dense+fine+speckled+pattern+in+anti-nuclear+antibody+test+using+indirect+immunofluorescence+method.">Clinical significance of dense fine speckled pattern in anti-nuclear antibody test using indirect immunofluorescence method.</a> Korean J Lab Med. 29 (2), 145-151 (2009).</li><li>Lee, H., Kim, Y., Han, K., Oh, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+anti-DFS70+antibody+and+specific+autoantibody+test+algorithms+to+patients+with+the+dense+fine+speckled+pattern+on+HEp-2+cells.">Application of anti-DFS70 antibody and specific autoantibody test algorithms to patients with the dense fine speckled pattern on HEp-2 cells.</a> Scand J Rheumatol. 45 (2), 122-128 (2016).</li><li>Mariz, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+on+the+antinuclear+antibody-HEp-2+test+is+a+critical+parameter+for+discriminating+antinuclear+antibody-positive+healthy+individuals+and+patients+with+autoimmune+rheumatic+diseases.">Pattern on the antinuclear antibody-HEp-2 test is a critical parameter for discriminating antinuclear antibody-positive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases.</a> Arthritis Rheum. 63 (1), 191-200 (2011).</li><li>Marlet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombophilia+Associated+with+Anti-DFS70+Autoantibodies.">Thrombophilia Associated with Anti-DFS70 Autoantibodies.</a> PLoS One. 10 (9), e0138671 (2015).</li><li>Mercado, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+autoantibodies+to+DSF70/LEDGFp75+in+Mexican+Hispanics+using+multiple+complementary+assay+platforms.">Detection of autoantibodies to DSF70/LEDGFp75 in Mexican Hispanics using multiple complementary assay platforms.</a> Auto Immun Highlights. 8 (1), 1 (2017).</li><li>Muro, Y., Sugiura, K., Morita, Y., Tomita, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+concomitance+of+disease+marker+autoantibodies+in+anti-DFS70/LEDGF+autoantibody-positive+patients+with+autoimmune+rheumatic+disease.">High concomitance of disease marker autoantibodies in anti-DFS70/LEDGF autoantibody-positive patients with autoimmune rheumatic disease.</a> Lupus. 17 (3), 171-176 (2008).</li><li>Muro, Y., Sugiura, K., Nakashima, R., Mimori, T., Akiyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+prevalence+of+anti-DFS70/LEDGF+antibodies+in+patients+with+dermatomyositis+and+other+systemic+autoimmune+rheumatic+diseases.">Low prevalence of anti-DFS70/LEDGF antibodies in patients with dermatomyositis and other systemic autoimmune rheumatic diseases.</a> J Rheumatol. 40 (1), 92-93 (2013).</li><li>Mutlu, E., Eyigor, M., Mutlu, D., Gultekin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confirmation+of+anti-DFS70+antibodies+is+needed+in+routine+clinical+samples+with+DFS+staining+pattern.">Confirmation of anti-DFS70 antibodies is needed in routine clinical samples with DFS staining pattern.</a> Cent Eur J Immunol. 41 (1), 6-11 (2016).</li><li>Okamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+to+DFS70/LEDGF+are+increased+in+alopecia+areata+patients.">Autoantibodies to DFS70/LEDGF are increased in alopecia areata patients.</a> J Autoimmun. 23 (3), 257-266 (2004).</li><li>Pazini, A. M., Fleck, J., dos Santos, R. S., Beck, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+relevance+and+frequency+of+cytoplasmic+and+nuclear+dense+fine+speckled+patterns+observed+in+ANA-HEp-2.">Clinical relevance and frequency of cytoplasmic and nuclear dense fine speckled patterns observed in ANA-HEp-2.</a> Rev Bras Reumatol. 50 (6), 655-660 (2010).</li><li>Schmeling, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+to+Dense+Fine+Speckles+in+Pediatric+Diseases+and+Controls.">Autoantibodies to Dense Fine Speckles in Pediatric Diseases and Controls.</a> J Rheumatol. 42 (12), 2419-2426 (2015).</li><li>Wiik, A. S., Hoier-Madsen, M., Forslid, J., Charles, P., Meyrowitsch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antinuclear+antibodies:+a+contemporary+nomenclature+using+HEp-2+cells.">Antinuclear antibodies: a contemporary nomenclature using HEp-2 cells.</a> J Autoimmun. 35 (3), 276-290 (2010).</li><li>Mahler, M., Fritzler, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Clinical+Significance+of+the+Dense+Fine+Speckled+Immunofluorescence+Pattern+on+HEp-2+Cells+for+the+Diagnosis+of+Systemic+Autoimmune+Diseases.">The Clinical Significance of the Dense Fine Speckled Immunofluorescence Pattern on HEp-2 Cells for the Diagnosis of Systemic Autoimmune Diseases.</a> Clin Dev Immunol. 2012, 494356 (2012).</li><li>Mahler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-DFS70/LEDGF+Antibodies+Are+More+Prevalent+in+Healthy+Individuals+Compared+to+Patients+with+Systemic+Autoimmune+Rheumatic+Diseases.">Anti-DFS70/LEDGF Antibodies Are More Prevalent in Healthy Individuals Compared to Patients with Systemic Autoimmune Rheumatic Diseases.</a> J Rheumatol. 39 (11), 2104-2110 (2012).</li><li>Conrad, K., Rober, N., Andrade, L. E., Mahler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Clinical+Relevance+of+Anti-DFS70+Autoantibodies.">The Clinical Relevance of Anti-DFS70 Autoantibodies.</a> Clin Rev Allergy Immunol. , (2016).</li><li>Miyara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Phenotypes+of+Patients+with+Anti-DFS70/LEDGF+Antibodies+in+a+Routine+ANA+Referral+Cohort.">Clinical Phenotypes of Patients with Anti-DFS70/LEDGF Antibodies in a Routine ANA Referral Cohort.</a> Clin Dev Immunol. 2013, 703759 (2013).</li><li>Bizzaro, N., Tonutti, E., Villalta, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognizing+the+dense+fine+speckled/lens+epithelium-derived+growth+factor/p75+pattern+on+HEP-2+cells:+not+an+easy+task!+Comment+on+the+article+by+Mariz+et+al.">Recognizing the dense fine speckled/lens epithelium-derived growth factor/p75 pattern on HEP-2 cells: not an easy task! Comment on the article by Mariz et al.</a> Arthritis Rheum. 63 (12), 4036-4037 (2011).</li></ol>

الكتاب ماليافانثام كيشور وسوريش لاكشمانان هم موظفون في "الثالوث للتكنولوجيا الحيوية"، الولايات المتحدة الأمريكية.

الأجسام المضادة على المستضدات النووية وهيولي منتشرة جداً في أمراض المناعة الذاتية جهازية. على الرغم من أن لا تحليل واحد يوفر أفضل ممكن الحساسية والنوعية، IIF HEp-2 يعتبر على نطاق واسع كأسلوب فحص حساسة للغاية وفعالة من حيث التكلفة لأمراض المناعة الذاتية الشاملة2،،من34 . على الرغم من انتشار بروتوكول IIF لأكثر من 50 عاماً، دقة التحليل IIF اعتماداً كبيرا على مهارة الفني، التنفيذ الدقيق من الخطوات الفردية للبروتوكول، والتفسير الدقيق للنتائج باستخدام عليها بشكل جيد مجهر الأسفار. تشخيص أمراض المناعة الذاتية الشاملة لا ينبغي أن تستند نتائج اختبار المصلية واحد مثل IIF HEp-2.
إعادة تشكيل الكواشف عالية الجودة باستخدام المياه (المقطر/منزوع)، واستخدام مكونات مجموعة موحدة (الشرائح مع HEp-2 خلية مونولاييرس ومخفف عينة وعناصر إيجابية وسلبية، قبل المخفف الأمثل فيتك-المتقارن وتصاعد المتوسطة) أثرا إيجابيا على النتائج. يمكن تشجيع تخطي إضافة عناصر تحكم أو عينات في الآبار تفسيرات سلبية كاذبة. تجفيف شرائح في أي وقت بعد إضافة نموذج أو عنصر تحكم يمكن أن ينتج artifactual ردود فعل إيجابية زائفة و/أو أنماط غير ملائمة. غادر المخزن المؤقت الغسيل الكثير على الشريحة أو تجفيف الآبار الشريحة قبل الإعفاء من تصاعد المتوسطة يمكن أن ينتج القطع الأثرية. يمكن أن يؤدي إضافة كمية غير كافية من تصاعد المتوسطة أو توليد فقاعات على سطح الشريحة قبل وضع ساترة ردود الفعل التي تبدو ضبابية أو خارج التركيز عند ملاحظة تحت المجهر. يجب تخزينها في 2-8 درجة مئوية الشرائح المحملة وتحليلها ضمن إطار الموصى بها من الوقت للتقليل من النتائج السلبية أو artifactual كاذبة.
استخدام مجهر فلوري epi عليها بشكل جيد الذي يضم مصدر ضوء LED/Hg/زينون مناسبة والمكونات البصرية نظيفة بما في ذلك عوامل الإثارة والانبعاثات التي لم تكن معطوبة أمر بالغ الأهمية للحصول على نتائج IIF دقيقة. المستخدم النهائي لتدريب تميز رد فعل إيجابي/سلبي كثافات وتفسير أنماط أمر بالغ الأهمية. فحوصات IIF HEp-2 عرضه لعدم توحيد في الإجراءات، ومجهر التكوين، وتدريب المستخدمين النهائيين أو المهارة. أنماط التسميات والممثل إلى توافق في الآراء وأمثلة للصور التي تم الحصول عليها باستخدام مختلف الشركات المصنعة التي تتيح بالمعهد (< www.ANApatterns.org>) لأغراض تعليمية4. هو نمط خلية HEp-2 شجرة تصنيف المقدمة من المعهد لمختلف أنماط النووية، هيولى والانقسامية موردا قيماً لمعرفة الفروق الدقيقة بين مختلف الأنماط التي قد تبدو مشابهة ل عيون غير مدربين4. أحد الأمثلة الأولى لنمط التحدي هو DFS70 التي تفتقر أيضا إلى علاقة متميزة مع شرط المناعة الذاتية، وكما تمت مناقشته في المقاطع السابقة هذا النمط شائع جداً في صحة السكان5.
تبعاً للدراسة، انتشار الأجسام المضادة DFS70 المضادة تختلف بين أفواج صحية، أنا السكان الفرز، وأنا إيجابية الأفراد مع أي دليل على وجود أمراض المناعة الذاتية الشاملة9،16،20 ،،من3031. الأجسام المضادة DFS70 أفيد أن تحدث بمعزل عن غيرها، وكذلك مع أنماط أخرى أنا المرتبطة بالمرض. معزولة أو نمط مونوسبيسيفيك DFS70 يقال في 2-22 في المائة ضوابط صحية ولكن في أقل من 1% من الحالات مع أمراض المناعة الذاتية الروماتزمية32. استناداً إلى هذه الاتجاهات، اقترح كمعيار لاستبعاد في أمراض المناعة الذاتية الروماتزمية النمط الإيجابي مونو DFS70 بالمعهد اللجنة3،،من3132. اللجنة المعهد، التي أنشئت لتعزيز المواءمة بين المصطلحات اختبار الأجسام وتفسير نتائج IIF HEp-2، يوصي بتقديم التقارير الإيجابية DFS70 حين الإبلاغ ANA فرز النتائج4.
قبل استبعاد مرض المناعة الذاتية جهازي استناداً إلى DFS70 مونو-الإيجابية، من الضروري استعراض حالة أساليب الفرز وتأكيد الحالية (لا سيما تلك المحددة ل DFS70). اتفاق بين DFS70 الإيجابية IIF HEp-2 والمرحلة الصلبة توكيدي فحوصات هما أليسا والعملية، وخط المناعة/دوت وصمة عار أساليب) تباينا كبيرا بين مختلف الدراسات13،22،25،33 . تفسير IIF والمقايسة توكيدي المعلمات التي تساهم في هذا الخلاف قد نوقش سابقا5،،من1334. نهج إيمونوادسوربشن المقترحة مؤخرا لمكافحة DFS70 جسم تأكيد يعالج بعض أوجه قصور فحوصات المرحلة الصلبة الحالية (ل DFS70) ولكن يتطلب مختبرات لإجراء خطوة إضافية في الإجراء IIF على عينات المشتبه فيها، التي يزيد الوقت التكاليف وتحول للإبلاغ عن نتائج13. هذه الخطوة الإضافية غير مطلوب عندما تستخدم الخلايا HEp-2 النخبة/DFS70 "كو" للفحص الروتيني أنا. وهذا يقلل من التكلفة الإجمالية، وعلاوة على ذلك هناك أي تأثير على الفترة الزمنية حسب نمط DFS70 هو تمييز في الفرز الأولى خطوة27. عيب إضافية استخدام الطريقة التقليدية IIF HEp-2 أنه غير قادر على التمييز بين نمط DFS70 المشترك التي تحدث مع الآخر ANA أنماط في مرحلة الفرز. ومع ذلك، هو التغلب على هذا العيب باستخدام خلايا HEp-2 "كو" النخبة/DFS7027.
التقييم المقارن ل HEp-2 التقليدية والجديدة المهندسة HEp-2 (HEp-2 النخبة/DFS70 كو) استخدام عناصر إيجابية أنا وتشكيلاتها مع عنصر تحكم DFS70 مونو-إيجابية، تثبت فائدة للركيزة الجديدة القدرة على في وقت واحد شاشة لانس وتأكيد نمط DFS70 (الشكل 1). البروتوكول IIF للركيزة الجديدة يماثل الأسلوب IIF HEp-2 التقليدية. نظام الترجمة الفورية للأمراض المرتبطة بجميع أنماط أنا غير متطابقة باستثناء نمط DFS70 (الجدول 1). تفسير أنماط DFS70 مونو-إيجابية والمختلطة كان أسهل نسبيا باستخدام أسلوب جديد وأنها لا تستدعي فحوصات إضافية (الشكل 1B). تنفيذ هذا الأسلوب الجديد في مختبر السريرية يبسط التحدي المرتبطة بتفسير نمط DFS70 ويحسن الدقة الإجمالية للفحص بمواصلة الكشف عن الأمراض المرتبطة ANA أنماط أخفى سابقا بالجيش الوطني الأفغاني DFS70 (مختلطة أنماط).

أنس السمة مميزة ل أمراض النسيج الضام الجهازية وساطة الذاتية1. وتستخدم عدة طرق للفحص وتأكيد لانس. تقنية IIF استخدام بقايا الركيزة HEp-2 الأكثر استخداماً وكثيراً ما أوصى بطريقة لفحص أنس1،2. وعلى الرغم من أوجه التقدم في منهجيات التحليل التشخيصي المرحلة الصلبة مثل إنزيم مقايسة الممتز مرتبط (أليسا) وإنزيم المناعة (تقييم الأثر البيئي) والمناعة تشيميلومينيسسينسي (العملية) وعلى أساس حبة فحوصات متعدد، هو IIF HEp-2 الفحص الأكثر انتشارا الأسلوب بسبب فائدته التشخيصية وتكلفة فعالية1،،من23. تقنيات الفحص المذكورة أعلاه تعتمد على مجموعة محدودة من أصلي المنقي أو autoantigens المؤتلف بينما الاستعدادات أحادي الطبقة خلية HEp-2 في الآبار الشرائح الزجاجية يقدم مجموعة واسعة من أوتوانتيجينس في شكلها الطبيعي، موزعة عبر النواة والسيتوبلازم، أن تتفاعل مع الأجسام المضادة من الأمصال المريض أو عناصر إيجابية، نتج عنه العديد من الأنماط التي ترتبط مع مختلف الظروف الذاتية. وتصنف هذه الأنماط إلى أنماط النووية، هيولى والانقسامية استناداً إلى موقع المستضد في الخلايا. كل نمط ودول الأمراض المرتبطة مستضد/المستضدات وهي تتسم كذلك4. في أسلوب IIF، هي المحتضنة الأمصال المريض والسيطرة على آبار الشريحة الزجاجية التي تمثل ثقافة أحادي الطبقة من الخلايا HEp-2 ثابت مناسب للحفاظ على العديد من أوتوانتيجينس في شكلها الطبيعي. مسموح الأجسام المضادة في الأمصال المريض أو عناصر إيجابية لربط autoantigens قدمها HEp-2 الخلايا على الركازة (الشريحة الزجاجية جيدا) أثناء الحضانة. وظيفة حضانة، الأجسام المضادة غير منضم يتم غسله وهي الكشف عن الأجسام منضم من فئة IgG مع فلوريسسين/fluorescein isothiocyanate (فيتك) مترافق المضادة الإنسان كاشف مفتش. المتقارن ذكرت غير منضم جرفت وتقام كوفيرسليبس الزجاج على رأس الشرائح باستخدام وسيلة متزايدة يحتفظ بردود الفعل ويسهل المراقبة تحت مجهر فلوري. يلاحظ ردود الفعل تحت مجهر الأسفار مزودة بتركيبة تصفية الانبعاثات الإثارة المناسبة التي تم تكوينها وفقا للمراسل المستخدمة (لمراسل فيتك، مجهر تشخيص عادة ما يستخدم مرشحات مع مجموعة الإثارة من 467 -498 شمال البحر الأبيض المتوسط ومجموعة انبعاثات من 513-556 nm). ويدل وجود أنا الأسفار أخضر الساطع هياكل محددة في الخلايا. خلافا لأنظمة الفحص الآلي، يعتمد المنهجية IIF في عملية شاقة للمسلسل تمييع الأمصال والبصرية الإيجابية تحديد أنماط المصبوغة التي تتطلب المستخدم كبير خبرة5،6. وبالرغم من هذه القيود، IIF HEp-2 ما زال الأكثر استخداماً وأوصى الأسلوب للفحص لانس نظراً لتوحيد الجهود المبذولة لتفسير نمط والتسميات بتوافق الآراء الدولي بشأن أنا اللجنة أنماط (المعهد)، زيادة توافر حلول التشغيل الآلي لتجهيز الشريحة IIF، ونتيجة التفسير3.
من بين العديد الأنماط الكشف عنها بواسطة الأسلوب IIF HEp-2، الأجسام المضادة التي تستهدف المنتج جين psip1 (يشار إليها أيضا ليدجف/p75/DFS70)، واكتسبت اهتماما كبيرا في السنوات الأخيرة لعدة أسباب4،5 ،،من67،،من89،10. DFS70 الأجسام المضادة موجودة في التتر عالية في ضوابط صحية، والدراسات حتى الآن قد أخفقت في إثبات ارتباط سريرية مميزة للوجود DFS70 الأجسام المضادة7،،من89 ،10،11،،من1213. معدلات الإبلاغ عن النتائج الإيجابية للأجسام المضادة DFS70 في مختلف الحالات المرضية وافواج صحية تباينا كبيرا بين الدراسات6،،من89،10،14 ،،من1516،17،،من1819،20،21،22،23 ،،من2425،26،،من2728. هو أيضا ميزت نمط مونوسبيسيفيك DFS70 من نمط متجانس أو الأرقط لكن تفسير أنماط متجانسة أرقط مختلطة، والأجسام المضادة DFS70 المضادة المشترك التي تحدث مع غيرها أنس تحديا حتى بالنسبة للقراء الخبراء. الجيل الحالي من IIF فحص الطرق وفحوصات محددة المرحلة الصلبة DFS70 ليست قادرة على التفريق بين مونوسبيسيفيك DFS70 رد فعل من أنماط مختلطة (الشكل 1A، المنطقة المظللة أصفر في الخوارزمية). التفسير الخاطئ لنمط DFS70 متجانسة، الأرقط، أو نمط مختلطة، أو العكس بالعكس، قد آثار خطيرة على رعاية المرضى. البروتوكول استخداماً الحالية كما يلي: مختبرات سريرية توظف عددا من الاختبارات المؤكدة المرحلة الصلبة لانس المرتبطة بالمرض و/أو أسلوب إيمونوادسوربشن على DFS70/ليدجف عند غرامة كثيفة أرقط نمط (AC-2) يشتبه في أنه (الشكل 1A)4،5.
والهدف من هذا البروتوكول لإثبات جدوى رواية هندسيا الركازة IIF HEp-2 (HEp-2 النخبة/DFS70 خروج المغلوب (كو)، وسوف يشار إليها باسم "النخبة" HEp-2) أن يحتفظ بجميع مزايا 2 HEp التقليدية لفحص أنس بينما في نفس الوقت التمييز بين نمط DFS70 بثقة عالية في كل من مونوسبيسيفيك وأنا مختلطة الحالات الإيجابية (الشكل 1B، المنطقة المظللة أصفر في الخوارزمية)5. الركيزة "النخبة" HEp-2 يتكون من خليط التقريبي مادة غير معدلة الخلايا HEp-2 التقليدية وهندستها خلايا خالية من مستضد ليدجف/p75/DFS70 ب نسبة 1:95. الإجراء IIF "النخبة" HEp-2 مطابق للأسلوب HEp-2 التقليدية. تكوين فريد من الركازة "النخبة" HEp-2 لا يحتفظ بجميع مزايا HEp2 التقليدية فحسب بل يمكن تمييز أنماط رد فعل مختلطة الأرقط ومتجانسة من نمط DFS70 في الفحص الأولى أو اختبار عينة (1B الشكل )5. يجب أن يكون المريض الأمصال يكون رد فعل على الشرائح مع الركازة IIF HEp-2 المخفف 01:40 مع فحص تمييع أو وفقا لمعيار مختبر الفردية. ويعتبر رد فعل محدد في 01:40 أو أعلى عيار إيجابية.
في هذه الدراسة، والأمصال الإيجابية السنترومير متجانسة، الأرقط، والنويه، هيولى شبكي/الاحتكار، وأنماط DFS70 التي تنتج إشارة إيجابية متوسطة الحجم (بالنسبة إلى مراقبة سلبية وإيجابية تحكم أنا قدمتها عدة) في الفحص واختيرت تمييع 01:40 لمحاكاة أنماط محددة مونو والمختلطة على ركائز HEp-2 (التقليدية و "النخبة" HEp-2). 01:40 المخفف DFS70 الأمصال الإيجابية كانت مختلطة مع 01:40 تخفيف أنا الفردية المرتبطة بالمرض نمط عناصر التحكم (متجانسة، الأرقط، السنترومير، النوية، أو قصره شبكي هيولى) بنسب مختلفة (التحكم: DFS70 في 100:0، 80:20، 50/50، 20:80، و 0:100) وتقييمها في التقليدية وركائز "النخبة" HEp-2 عقب القياسية IIF الإجراء المبين أدناه.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>HEp-2 ELITE / DFS70-KO 12 Well Slide sealed individually in pouch</td>
			<td>Trinity Biotech</td>
			<td>part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANA positive control</td>
			<td>Trinity Biotech&#160;</td>
			<td>part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DFS70 antibody positive control</td>
			<td>Trinity Biotech</td>
			<td>part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Negative control</td>
			<td>Trinity Biotech</td>
			<td>part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human IgG FITC conjugate containing Evan&#39;s blue counterstain</td>
			<td>Trinity Biotech</td>
			<td>part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffer diluent for serum</td>
			<td>Trinity Biotech</td>
			<td>part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Trinity Biotech</td>
			<td>part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Trinity Biotech</td>
			<td>part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips&#160;</td>
			<td>Trinity Biotech</td>
			<td>part of kit# 1108, 1108-120, 1108-240, 1103, 1103-240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmuGlo ANA HEp-2 Cells 12 well slide sealed individually in pouch</td>
			<td>Trinity Biotech</td>
			<td>part of kit# 1103, 1103-240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials used in the study but not provided by the kits</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diagnostic fluorescent microscope</td>
			<td>Nikon Eclipse 50i</td>
			<td></td>
			<td>Equipped with a spot dignostic camera, model 2.2.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubation chamber</td>
			<td>Trinity Biotech</td>
			<td></td>
			<td>provided for customers (no catalog #)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin jar</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
			<td>General labware</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
			<td>General lab supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>distilled/deionized water</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
			<td>General lab supplies</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simultaneous distinction of monospecific and mixed dfs70 patterns during ana screening with a novel hep-2 elite/dfs70 knockout substrate

أمراض النسيج الضام الجهازية الذاتية تتميز بتعميم الأجسام المضادة للنواة (ANA). على الرغم من أن هناك العديد من التكنولوجيات المتاحة لفحص ANA، يظل الفلورة غير المباشرة (IIF) باستخدام 2 الخلايا الظهارية البشرية (HEp-2) الركيزة الأسلوب الأساسي والموصى به بسبب حساسيتها الفائقة. ركائز HEp-2 يمكن الكشف عن العديد من أنماط الناجمة عن الأجسام ملزمة لمختلف أوتوانتيجينس البروتين والأحماض النووية موزعة في جميع أنحاء النواة والسيتوبلازم للخلايا. التنوع الكبير في مونوسبيسيفيك وأنماط المختلطة الناتجة عن ردود الفعل الإيجابية على الركازة HEp-2 أيضا إلى تعقيد التفسير ودقة التقارير. من الأمثلة المحددة التي تلقي أكبر قدر من الاهتمام مؤخرا هو كثافة غرامة الأرقط 70 (DFS70) نمط الناجمة عن الأجسام المضادة التي تربط على وجه التحديد لبروتين يسمى عامل النمو ظهارة المستمدة العدسة (ليدجف). عدم وجود رابطة واضحة مع أمراض المناعة الذاتية منهجية محددة ويتفشى في صحة السكان جعلت التفسير الدقيق لنمط DFS70 الهامة. تمييز دقيق DFS70 نمط من أنماط الأمراض المرتبطة باستخدام التقليدية HEp-2 الركيزة التحدي. وعلاوة على ذلك، تعقد تكرار حدوث نمط DFS70 جنبا إلى جنب مع الأنماط المرتبطة بالمرض مثل أنماط متجانسة، الأرقط والمختلطة متجانسة أرقط المشارك تفسير IIF. والهدف من هذه الورقة هو لإثبات فائدة رواية هندسيا الركازة IIF HEp-2 أن يحتفظ بجميع المزايا من الركازة HEp-2 التقليدية بينما توفر في الوقت نفسه القدرة على التمييز بين نمط DFS70 بثقة عالية في كل مونوسبيسيفيك وأنا مختلطة الأمثلة الإيجابية. كذلك الركيزة الجديدة قادرة على كشف أنماط أنا المرتبطة بالمرض سابقا أخفى بنمط DFS70.

الركيزة كو النخبة/DFS70 أبو عبدالله 2 يحافظ على أنماط أنا الكلاسيكية ويسهل تمييز واضح لنمط DFS70:
الخلايا التقليدية وهندستها على الركازة HEp-2 النخبة/DFS70 "كو" متطابقة، الحفاظ على جميع أوتوانتيجينس باستثناء ليدجف/p75. المراقبة السلبية المقدمة من عدة يرسي الأساس إشارة الفلورسنت. عناصر إيجابية لأنماط النوية والمتقدريه السنترومير متجانسة، الأرقط،، على "النخبة" HEp-2 إنتاج نمط مماثل للأنماط المتوقعة على الركازة IIF HEp-2 التقليدية (الشكل 2A). هذه الأنماط المرجعية قد وصفت بالتفصيل جنبا إلى جنب مع الرابطة كل نمط مستضد والمرض قبل4،29. وترد في الجدول 1وصفاً موجزاً للأنماط التي لوحظت في الشكل 2 ألف .
نمط DFS70 على "النخبة" HEp-2:
حوالي 10% الخلايا في كل منهما جيدا تظهر نمطاً الأرقط غرامة كثيفة (المعهد تعيين التسميات: ميلان-2) التي يمكن ملاحظتها في نواة الطور البيني، وتلطيخ الكروماتين المرتبط وينظر في نويات الانقسامية (الشكل 2). وسيكون كافة الخلايا على الركازة HEp-2 تقليدية، هذا النمط عندما تفاعلت مع عينة إيجابية DFS70. ~ 90% المتبقية من الخلايا HEp-2 الجين psip1 ترميز مستضد ليدجف خرج وذلك لن تنتج إشارة أو نمط عندما تفاعلت مع مونوسبيسيفيك DFS70 إيجابي المصل (الشكل 2). إذا كان 10% الخلايا HEp-2 بالأسفار أكثر إشراقا المقابلة لنمط DFS70 وبقية الخلايا الإضافية الأنماط الحالية (مثلاً، غرامة الأرقط أو النوية)، ثم وهذا يدل على وجود أنماط مختلطة. الفحص الدقيق لهذه الأنماط ضروري لتأكيد جميع خصائص الأجسام الموجودة بالإضافة إلى نمط DFS70. لإثبات القدرة على الركازة "النخبة" HEp-2، فريق الأمصال عينات تم إنشاؤه بتركيزات مختلفة الإيجابية DFS70 وأنا مراقبة الأمصال واختبارها على حد سواء التقليدية وركائز "النخبة" HEp-2 IIF قياسية باستخدام بروتوكول (الرقم 3 ، الرقم 4، الرقم 5، الرقم 6، رقم 7).
تفسير مونوسبيسيفيك DFS70 وردود فعل متباينة على ركائز النخبة التقليدية والتهاب الكبد-2:
لكل نمط معين أنا المرتبطة بالمرض (الرقم 3، الرقم 4، الرقم 5، الرقم 6، و رقم 7) ونمط مونوسبيسيفيك أنا على يسار العمود معظم ونمط مونوسبيسيفيك DFS70 في حق معظم العمود ويمكن ملاحظة. ثلاثة أعمدة في الوسط تمثل مختلف نسب المرتبطة بالمرض و DFS70 نمط عناصر إيجابية. أنماط المختلطة الناتجة عن تشكل تحديا لتمييز على الركازة HEp-2 التقليدية (الشكل 3، الرقم 4، الرقم 5، 6 الشكل، الشكل 7، الصف العلوي). مع رواية "النخبة" Hep-2 الركيزة، في معظم العينات، الفرق بين الخلايا غير معدلة وهندستها في كثافة غير متميزة ليس فقط مما يؤكد وجود الأجسام المضادة DFS70 (عندما تكون نسبة أكثر إشراقا لأقل الخلايا مشرق 1:9) ولكن أيضا يكشف عن نمط أنا ثانوية. وفي حالة متجانسة DFS70 أو DFS70 أرقط ردود فعل مختلطة، من المستحيل التنبؤ بثقة النمط الصحيح الذي يؤدي إلى مختبرات يختارون لتشغيل عدد من فحوصات إضافية (الشكل 1A). وفي حالة DFS70 السنترومير والنويه DFS70 مختلطة ردود الفعل، الشك DFS70 الإيجابية صعبة للغاية (الشكل 5، 6 الشكل). مع ردود الفعل النوية وهيولي شبكي/قصره، أن نمط DFS70 ليس المهيمنة حتى الأمصال نسبة تصل إلى 50%. في جميع الأمثلة، الركيزة "النخبة" HEp-2 يمكن أن يقدم هذا النمط DFS70 والنمط الثانوي الأساسي على نطاق أوسع من كثافة المستويات وهكذا يسهل تفسيراً أنا أكثر دقة.
لمراقبة عن كثب أنماط مختلطة، والنتائج لمختلف مجموعات 50: 50 من أنا و DFS70 الإيجابية كانت الضوابط الموسع (الشكل 8) على حد سواء التقليدية وركائز "النخبة" HEp-2. تشجع الدولة الطرف على مراعاة كل من الطور البيني وتلطيخ الانقسامية لجميع أنماط أنا بما في ذلك DFS70 على ركائز HEp-2 تحسين التفسير ودقة لنمط تم الإبلاغ عنها. ومع ذلك، لأنماط مختلطة، نمط التفضيلية المقدمة من تقسيم نواة الخلية قد لا تكفي تيسيرا للتفسير الدقيق. وتبين الأسهم الحمراء (الشكل 8) الأنوية الانقسامية في الخلية التقليدية وهندستها. ويمكن ملاحظة أن مختلطة DFS70 ردود فعل على تقسيم الخلايا لا تتوافق مع وضع مجموعة من القواعد لتفسير الأمراض المرتبطة ANA أنماط. تشير الأسهم الأصفر والأزرق إلى غير معدلة وهندستها نواة الخلية (DFS70 كو) HEp-2، على التوالي. في جميع تركيبات (الشكل 8)، لوحظ فرق كثافة واضحة بين خلية غير معدلة النووية المصبوغة (~ 10%) وخلية الهندسة النووية (~ 90%) نقش في نفس مجال الرؤية المجهرية، والتي تمكن الفحص المتزامن و تأكيد نمط DFS70.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56722/56722fig1.jpg"> رقم 1: أنا الفرز الخوارزميات باستخدام الأساليب التقليدية HEp-2 و HEp-2 النخبة/DFS70 كو IIF. التخطيطي (أ) كشف النقاب عن قصور IIF HEp-2 التقليدية في تحديد مونوسبيسيفيك وأنماط إيجابية DFS70 مختلطة في مرحلة الفرز (المنطقة المظللة بالأصفر) وعجزها عن استبعاد ثانوية المرتبطة بالمرض أنا على الأنماط التي قد يمكن إخفاؤها بنمط DFS70. كذلك، أن الجيل الحالي من المرحلة الصلبة محددة DFS70 فحوصات توكيدي ليست قادرة على تأكيد الإيجابية DFS70 مونوسبيسيفيك مما يؤدي إلى اختبار توكيدي إضافية لانس. التخطيطي (ب) يكشف عن قدرات "النخبة" HEp-2 للفرز لانس، تمييز واحد من مونوسبيسيفيك وردود فعل متباينة في DFS70، والقضاء على الحاجة إلى المرحلة الصلبة DFS70 تأكيد فحوصات. يبسط الجيش الوطني الأفغاني فحص خوارزمية استخدام "النخبة" HEp-2 إلى حد كبير ويقلل العدد المطلوب من تأكيد فحوصات. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56722/56722fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56722/56722fig2.jpg"> رقم 2: نمط كلاسيكي أنا و DFS70 على الركازة HEp-2 "كو" النخبة/DFS70- (أ) الركيزة "كو" النخبة/DFS70 HEp-2 يحافظ على الأنماط أنا الكلاسيكية. رد فعل متجانسة الكلاسيكية وردود الفعل الإيجابية DFS70 قد أنتجت باستخدام الضوابط الإيجابية المقدمة من هذه المجموعة. ردود أفعال أخرى قد أنتجت باستخدام الأمصال السيطرة الإيجابية المحددة سابقا الأرقط، السنترومير، النوية وهيولي شبكي/AMA ردود الفعل5. (ب) يوفر الركيزة HEp-2 "كو" النخبة/DFS70 الخلايا التقليدية وهندستها على حد سواء، مما يسهل تمييز سهلة من نمط DFS70. التخطيطي يظهر رد فعل مونوسبيسيفيك DFS70 الناجمة عن ذلك وتلطيخ نمط في الطور البيني وتقسيم نواة الخلية للخلايا (DFS70-كو) على حد سواء التقليدية وهندستها. هندسة HEp-2 الخلايا تخلو مستضد ليدجف/p75/DFS70 الذي تمكن من كشف واحد من أنماط الثانوية التي عادة ما يتم إخفاء فعل الأجسام DFS70 على ركائز HEp-2 التقليدية. سهام (أصفر) الإشارة إلى أمثلة من نواة الخلية الانقسامية. تمثل أشرطة مقياس 20 ميكرومتر. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56722/56722fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56722/56722fig3.jpg"> الشكل 3: DFS70 والأمصال متجانس في تركيبة. سيرا مونوسبيسيفيك DFS70 جنبا إلى جنب مع عنصر تحكم نمط متجانس إيجابية في نسب مختلفة (100:0، 80:20، 50/50، 20:80 و 0:100) واختبارها على ركائز (DFS70-كو) HEp-2 التقليدية وهندستها. تمثل أشرطة مقياس 20 ميكرومتر. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56722/56722fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56722/56722fig4.jpg"> الشكل 4: DFS70 ومنقط الأمصال في تركيبة. سيرا مونوسبيسيفيك DFS70 جنبا إلى جنب مع عنصر تحكم نمط الأرقط إيجابية في نسب مختلفة (100:0، 80:20، 50/50، 20:80 و 0:100) واختبارها على ركائز (DFS70-كو) HEp-2 التقليدية وهندستها. تمثل أشرطة مقياس 20 ميكرومتر. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56722/56722fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56722/56722fig5.jpg"> الرقم 5: سيرا DFS70 والسنترومير في تركيبة. سيرا مونوسبيسيفيك DFS 70 جنبا إلى جنب مع عنصر تحكم نمط السنترومير إيجابية في نسب مختلفة (100:0، 80:20، 50/50، 20:80 و 0:100) واختبارها على ركائز (DFS70-كو) HEp-2 التقليدية وهندستها. تمثل أشرطة مقياس 20 ميكرومتر. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56722/56722fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56722/56722fig6.jpg"> رقم 6: DFS70 والأمصال النوية في تركيبة. سيرا مونوسبيسيفيك DFS 70 جنبا إلى جنب مع عنصر تحكم نمط النوية إيجابية في نسب مختلفة (100:0، 80:20، 50/50، 20:80 و 0:100) واختبارها على ركائز (DFS70-كو) HEp-2 التقليدية وهندستها. تمثل أشرطة مقياس 20 ميكرومتر. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56722/56722fig6large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56722/56722fig7.jpg"> رقم 7: DFS70 والأمصال شبكي هيولى/قصره في تركيبة. سيرا مونوسبيسيفيك DFS70 جنبا إلى جنب مع عنصر تحكم نمط المتقدرية إيجابية في نسب مختلفة (100:0، 80:20، 50/50، 20:80 و 0:100) واختبارها على ركائز (DFS70-كو) HEp-2 التقليدية وهندستها. تمثل أشرطة مقياس 20 ميكرومتر. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56722/56722fig7large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56722/56722fig8.jpg"> الشكل 8: مختلطة أنماط (نسبة 50/50) تنتج عن التقليدية وركائز "النخبة" HEp-2- وكشف الاختلافات بين ركائز اثنين. وتبين الأسهم الحمراء الأنوية الانقسامية في الخلايا التقليدية وهندستها على كل ركائز. لهذه المجموعات، نمط التفضيلية المقدمة من تقسيم نواة الخلية على الركازة HEp-2 التقليدية ليست كافية للتفسير الدقيق لأنماط مختلطة. ويمكن ملاحظة أن ردود فعل مختلطة من DFS70 على تقسيم الخلايا يمكن التشويش وضع مجموعة من القواعد لتفسير الأمراض المرتبطة ANA أنماط. تشير الأسهم الأصفر والأزرق إلى غير معدلة وهندستها نواة الخلية (DFS70 كو) HEp-2، على التوالي. النتائج التي تم الحصول عليها لكافة مجموعات اختبار على الركازة المهندسة: معدلة فرق كثافة واضحة بين نمط الطور البيني النووية ينتمون إلى خلايا (~ 10%) والخلايا المحورة (~ 90%) لوحظ، مما مكن المتزامنة الكشف وتأكيدا لنمط DFS70. تمثل أشرطة مقياس 20 ميكرومتر. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56722/56722fig8large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>أنا نمط</td>
			<td colspan="2">الوصف</td>
		</tr>
<tr>
<td>متجانسة</td>
			<td colspan="2">أسرة نواة فلوريسسيس بالتساوي مع نمط المصبوغة منتشر.</td>
		</tr>
<tr>
<td>أرقط</td>
			<td colspan="2">المنفصلة، والخشنة لغرامة تلامس من فلوريس في جميع أنحاء النواة.  وقد وصف أنماط الأرقط الأرقط والخشنة.</td>
		</tr>
<tr>
<td>النوية</td>
			<td colspan="2">نوكليولي وصمة عار كالهيئات الصلبة أو الأرقط متعددة داخل النواة. وقد وصف الأنواع الفرعية سابقا.</td>
		</tr>
<tr>
<td>السنترومير</td>
			<td colspan="2">تلامس كبير لعدد محدود. مستضد رد الفعل يعزل مع مكثف الكروموسومات في الخلايا تمر بالانقسام.</td>
		</tr>
<tr>
<td>شبكي هيولى/AMA</td>
			<td colspan="2">ويبدو السيتوبلازم الحبيبية تلطيخ إيجابية من الميتوكوندريا.</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">DFS70</td>
			<td colspan="2">•Conventional HEp-2 الخلايا: يتم ملاحظة نمط الأرقط غرامة كثيفة على نواة الطور البيني والكروماتين المرتبط تلطيخ ينظر في نويات الانقسامية.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">•Engineered كو DFS70 الخلايا: إنتاج الأجسام المضادة DFS70 تلطيخ السلبية</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">النخبة HEp-2 كو DFS70 على الخلايا التقليدية وهندستها (DFS70 كو) بنسبة 1:9 تقريبا. تنتج الخلايا التقليدية النمطية DFS70 نمط وهندسة الخلايا تنتج نمطاً سلبيا عندما تفاعلت مع DFS70 مونوسبيسيفيك/معزولة من ردود إيجابية.</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 1: وصف أنماط أنا.

Watch this Scientific Journal Video about Simultaneous Distinction of Monospecific and Mixed DFS70 Patterns During ANA Screening with a Novel HEp-2 ELITE/DFS70 Knockout Substrate at JoVE.com

Simultaneous Distinction of Monospecific and Mixed DFS70 Patterns During ANA Screening with a Novel HEp-2 ELITE/DFS70 Knockout Substrate

الأجسام المضادة DFS70 تحاكي الأنماط الشائعة المرتبطة بالمرض جسم النواة مما يجعل صعبة التفسير الدقيق عند استخدام ركائز HEp-2 التقليدية. ويصف البروتوكول مزايا الرواية الركيزة HEp-2 تصميم أكثر من 2 HEp التقليدية في أنا الفرز والتمييز بين الأنماط DFS70 بثقة عالية في كل من مونوسبيسيفيك وأنا مختلطة الحالات الإيجابية.

تمييز واحد من مونوسبيسيفيك وأنماط DFS70 مختلطة أثناء الفحص أنا مع الركازة رواية خروج المغلوب النخبة/DFS70 أبو عبدالله 2

Systemic autoimmune connective tissue disorders are characterized by circulating antinuclear antibodies (ANA). Although there are several technologies ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Simple and Efficient Method to Isolate Macrophages from Mixed Primary Cultures of Adult Liver Cells

وهناك طريقة بسيطة وفعالة لعزل تقوم البلاعم من الثقافات الابتدائية المختلطة من خلايا الكبد الكبار

Kupffer cells are liver-specific resident macrophages and play an important role in the physiological and pathological functions of the liver1-3. Although ...

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

Ex vivo Imaging of T Cells in Murine Lymph Node Slices with Widefield and Confocal Microscopes

التصوير خارج الحي من خلايا تي في الفئران شرائح العقدة الليمفاوية مع Widefield ومجاهر متحد البؤر

Na&iuml;ve T cells continuously traffic to secondary lymphoid organs, including peripheral lymph nodes, to detect rare expressed antigens. The migration ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

توصيف الاستجابات الالتهابية خلال الاستعمار داخل الشرج مع الالتهاب الرئوي العقدي

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Detecting Cortex Fragments During Bacterial Spore Germination

كشف اللحاء شظايا خلال البكتيرية سبور الإنبات

The process of endospore germination in Clostridium difficile, and other Clostridia, increasingly is being found to differ from the model spore-forming ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

تحليل الخلايا الليمفاوية التسرب باستخدام<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج من الدم في الدماغ الإنسان الحاجز

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

Screening Assays to Characterize Novel Endothelial Regulators Involved in the Inflammatory Response

فحص فحوصات لوصف رواية غشائي المنظمين المتورطين في الاستجابة الالتهابية

The endothelial layer is essential for maintaining homeostasis in the body by controlling many different functions. Regulation of the inflammatory ...

Optical Screening of Novel Bacteria-specific Probes on Ex Vivo Human Lung Tissue by Confocal Laser Endomicroscopy

Optical Screening of Novel Bacteria-specific Probes on Ex Vivo Human Lung Tissue by Confocal Laser Endomicroscopy

تحقيقات الفحص البصري للرواية الخاصة بالبكتيريا في أنسجة الرئة البشرية السابقين فيفو بالليزر [كنفوكل] اندوميكروسكوبي

Improving the speed and accuracy of bacterial detection is important for patient stratification and to ensure the appropriate use of antimicrobials. To ...

Sexual Transmission of American Trypanosomes from Males and Females to Naive Mates

الاتصال الجنسي من المثقبيات الأمريكية من الذكور والإناث إلى الأصحاب ساذج

American trypanosomiasis is transmitted to humans by triatomine bugs through the ingestion of contaminated food, by blood transfusions or accidently in ...

"Liver-on-a-Chip" Cultures of Primary Hepatocytes and Kupffer Cells for Hepatitis B Virus Infection

الثقافات "الكبد على رقاقة" خلايا الكبد الأولية وخلايا كوبفر للعدوى بفيروس التهاب الكبد B

Despite the exceptional infectivity of the hepatitis B virus (HBV) in vivo, where only three viral genomes can result in a chronicity of experimentally ...

A Novel Human Epithelial Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

نموذج انتيرويد الظهارية الإنسان رواية لالتهاب الأمعاء والقولون النّاخر

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a devastating disease of newborn infants. It is characterized by multiple pathophysiologic alterations in the human ...