Name: adult mouse drg explant and dissociated cell models to investigate neuroplasticity and responses to environmental insults including viral infection
Uploaded: 2018-03-09T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Adult Mouse DRG Explant and Dissociated Cell Models to Investigate Neuroplasticity and Responses to Environmental Insults Including Viral Infection at JoVE.co

हम ईमानदारी से Midwestern विश्वविद्यालय (MWU) में इमेजिंग कोर सुविधा का धंयवाद और छात्रों के समूह [Chanmoly सेंग, क्रिस्टोफर Dipollina, डैरिल Giambalvo, और केसी Sigerson] सेल संस्कृति और इमेजिंग काम में उनके योगदान के लिए । इस शोध कार्य को MWU की अंदर ग्रांट फंडिंग द्वारा M.F. और रिसर्च स्टार्ट-अप फंड को V.T. करने का समर्थन किया गया

पशुओं के उपयोग सहित सभी प्रक्रियाओं को संस्थागत समीक्षा बोर्ड द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल (IACUC-Midwestern University) से अनुमोदित कर दिया गया है ।
1. चूहा भ्रूण से कटाई डीआरजी
<ol><li>
Euthanize द्वारा वयस्क चूहों को...

<ol>
	<li>Muratori, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+new+neurons+in+dorsal+root+Ganglia+in+adult+rats+after+peripheral+nerve+crush+injury.">Generation of new neurons in dorsal root Ganglia in adult rats after peripheral nerve crush injury.</a> Neural Plast. , 860546 (2015).</li><li>Dellarole, A., Grilli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+dorsal+root+ganglia+sensory+neurons+express+the+early+neuronal+fate+marker+doublecortin.">Adult dorsal root ganglia sensory neurons express the early neuronal fate marker doublecortin.</a> J Comp Neurol. 511 (3), 318-328 (2008).</li><li>Devor, M., Govrin-Lippmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+in+adult+rat+dorsal+root+ganglia.">Neurogenesis in adult rat dorsal root ganglia.</a> Neurosci Lett. 61 (1-2), 189-194 (1985).</li><li>Farel, P. B., Boyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+effects+of+nerve+injury+on+estimates+of+sensory+neuron+number+in+juvenile+bullfrog.">Transient effects of nerve injury on estimates of sensory neuron number in juvenile bullfrog.</a> J Comp Neurol. 410 (2), 171-177 (1999).</li><li>Geuna, S., Borrione, P., Poncino, A., Giacobini-Robecchi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+morphometrical+changes+in+dorsal+root+ganglion+neurons+innervating+the+regenerated+lizard+tail.">Morphological and morphometrical changes in dorsal root ganglion neurons innervating the regenerated lizard tail.</a> Int J Dev Neurosci. 16 (2), 85-95 (1998).</li><li>La Forte, R. A., Melville, S., Chung, K., Coggeshall, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+neurogenesis+of+adult+rat+dorsal+root+ganglion+cells.">Absence of neurogenesis of adult rat dorsal root ganglion cells.</a> Somatosens Mot Res. 8 (1), 3-7 (1991).</li><li>Pannese, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigations+on+the+Ultrastructural+Changes+of+the+Spinal+Ganglion+Neurons+in+the+Course+of+Axon+Regeneration+and+Cell+Hypertrophy+I.+Changes+during+Axon+Regeneration.">Investigations on the Ultrastructural Changes of the Spinal Ganglion Neurons in the Course of Axon Regeneration and Cell Hypertrophy I. Changes during Axon Regeneration.</a> Z Zellforsch Mikrosk Anat. 60, 711-740 (1963).</li><li>Popken, G. J., Farel, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+neuron+number+in+neonatal+and+adult+rats+estimated+by+means+of+stereologic+and+profile-based+methods.">Sensory neuron number in neonatal and adult rats estimated by means of stereologic and profile-based methods.</a> J Comp Neurol. 386 (1), 8-15 (1997).</li><li>Tandrup, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unbiased+estimates+of+number+and+size+of+rat+dorsal+root+ganglion+cells+in+studies+of+structure+and+cell+survival.">Unbiased estimates of number and size of rat dorsal root ganglion cells in studies of structure and cell survival.</a> J Neurocytol. 33 (2), 173-192 (2004).</li><li>Sarikcioglu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+severe+crush+injury+on+axonal+regeneration:+a+functional+and+ultrastructural+study.">Effect of severe crush injury on axonal regeneration: a functional and ultrastructural study.</a> J Reconstr Microsurg. 23 (3), 143-149 (2007).</li><li>Varejao, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+morphological+assessment+of+a+standardized+rat+sciatic+nerve+crush+injury+with+a+non-serrated+clamp.">Functional and morphological assessment of a standardized rat sciatic nerve crush injury with a non-serrated clamp.</a> J Neurotrauma. 21 (11), 1652-1670 (2004).</li><li>Hanack, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+blocks+pathological+but+not+acute+TRPV1+pain+signals.">GABA blocks pathological but not acute TRPV1 pain signals.</a> Cell. 160 (4), 759-770 (2015).</li><li>Pagadala, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+NR1+subunit+of+NMDARs+in+primary+sensory+neurons+leads+to+hyperexcitability+and+pain+hypersensitivity:+involvement+of+Ca(2+)-activated+small+conductance+potassium+channels.">Loss of NR1 subunit of NMDARs in primary sensory neurons leads to hyperexcitability and pain hypersensitivity: involvement of Ca(2+)-activated small conductance potassium channels.</a> J Neurosci. 33 (33), 13425-13430 (2013).</li><li>Zhang, X. L., Albers, K. M., Gold, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation-induced+increase+in+nicotinic+acetylcholine+receptor+current+in+cutaneous+nociceptive+DRG+neurons+from+the+adult+rat.">Inflammation-induced increase in nicotinic acetylcholine receptor current in cutaneous nociceptive DRG neurons from the adult rat.</a> Neuroscience. 284, 483-499 (2015).</li><li>Zhu, Y., Lu, S. G., Gold, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+inflammation+increases+GABA-induced+depolarization+of+rat+cutaneous+dorsal+root+ganglion+neurons+in+vitro.">Persistent inflammation increases GABA-induced depolarization of rat cutaneous dorsal root ganglion neurons in vitro.</a> Neuroscience. 220, 330-340 (2012).</li><li>Amir, R., Devor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+cross-excitation+between+afferent+A-+and+C-neurons+in+dorsal+root+ganglia.">Functional cross-excitation between afferent A- and C-neurons in dorsal root ganglia.</a> Neuroscience. 95 (1), 189-195 (2000).</li><li>Kim, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coupled+Activation+of+Primary+Sensory+Neurons+Contributes+to+Chronic+Pain.">Coupled Activation of Primary Sensory Neurons Contributes to Chronic Pain.</a> Neuron. 91 (5), 1085-1096 (2016).</li><li>Lancaster, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+organoids+model+human+brain+development+and+microcephaly.">Cerebral organoids model human brain development and microcephaly.</a> Nature. 501 (7467), 373-379 (2013).</li><li>Qian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-Region-Specific+Organoids+Using+Mini-bioreactors+for+Modeling+ZIKV+Exposure.">Brain-Region-Specific Organoids Using Mini-bioreactors for Modeling ZIKV Exposure.</a> Cell. 165 (5), 1238-1254 (2016).</li><li>Lowery, L. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterograde+transport+of+herpes+simplex+virus+proteins+in+axons+of+peripheral+human+fetal+neurons:+an+immunoelectron+microscopy+study.">Anterograde transport of herpes simplex virus proteins in axons of peripheral human fetal neurons: an immunoelectron microscopy study.</a> J Virol. 73 (10), 8503-8511 (1999).</li><li>Sharthiya, H., Seng, C., Van Kuppevelt, T. 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O., Hogue, I. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus+infections+in+the+nervous+system.">Virus infections in the nervous system.</a> Cell Host Microbe. 13 (4), 379-393 (2013).</li><li>Swanson, P. A., McGavern, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+diseases+of+the+central+nervous+system.">Viral diseases of the central nervous system.</a> Curr Opin Virol. 11, 44-54 (2015).</li><li>Tyler, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+viral+infections+of+the+central+nervous+system:+part+2.">Emerging viral infections of the central nervous system: part 2.</a> Arch Neurol. 66 (9), 1065-1074 (2009).</li><li>Preston, C., Efstathiou, S., Campadelli-Fiume, G., Arvin, A., Mocarski, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch+33.">Ch 33.</a> Human Herpesviruses Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis. , (2007).</li><li>Roizman, B., Whitley, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inquiry+into+the+molecular+basis+of+HSV+latency+and+reactivation.">An inquiry into the molecular basis of HSV latency and reactivation.</a> Annu Rev Microbiol. 67, 355-374 (2013).</li><li>Whitley, R., Kimberlin, . D. W., Prober, C. G., Arvin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human Herpesviruses: Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis. , (2007).</li><li>Fueshko, S., Wray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LHRH+cells+migrate+on+peripherin+fibers+in+embryonic+olfactory+explant+cultures:+an+in+vitro+model+for+neurophilic+neuronal+migration.">LHRH cells migrate on peripherin fibers in embryonic olfactory explant cultures: an in vitro model for neurophilic neuronal migration.</a> Dev Biol. 166 (1), 331-348 (1994).</li><li>Parish, C. 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P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+heparan+sulfate+and+heparanase+in+neuroinflammation.">Implications of heparan sulfate and heparanase in neuroinflammation.</a> Matrix Biol. 35, 174-181 (2014).</li><li>Du, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+GABAergic+signaling+within+sensory+ganglia+controls+peripheral+nociceptive+transmission.">Local GABAergic signaling within sensory ganglia controls peripheral nociceptive transmission.</a> J Clin Invest. 127 (5), 1741-1756 (2017).</li><li>Hughes, C. S., Postovit, L. M., Lajoie, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrigel:+a+complex+protein+mixture+required+for+optimal+growth+of+cell+culture.">Matrigel: a complex protein mixture required for optimal growth of cell culture.</a> Proteomics. 10 (9), 1886-1890 (2010).</li></ol>

पूर्व vivo डीआरजी मॉडल अत्यंत ंयूरॉन glia बातचीत के रूप में के रूप में अच्छी तरह से दोनों पर microenvironment के प्रभाव के रूप में की घटनाओं की एक व्यापक स्पेक्ट्रम की जांच उपयोगी है और glial चयापचय37। इसके अलाव...

इस पांडुलिपि में, हम एक विधि एक संरक्षित ऊतक के रूप में व्युत्पंन डीआरजी मॉडल प्रणाली के रूप में एक organotypic प्राप्त करने के लिए एक पद्धति की रिपोर्ट के लिए एक microenvironment के लिए जैविक प्रतिक्रियाओं की एक विस्तृत श्रृंखला की जांच करने के लिए पीएन की तरह ंयूरॉन से लेकर glial संपर्क, neuroplasticity, भड़काऊ मार्कर, वायरल संक्रमण के लिए । इसके अलावा, हम आगे डीआरजी-व्युत्पंन एकल संवेदी न्यूरॉन्स और उपग्रह कोशिकाओं की एक प्राथमिक सह संस्कृति बनाने के लिए एक प्रोटोकॉल विकसित की है ।
डीआरजी उपग्रह ग्रे-मैटर-स्पाइनल नसों के पृष्ठीय रीढ़ की जड़ों के साथ केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) के बाहर स्थित इकाइयों रहे हैं । डीआरजी, intervertebral foramina, घर pseudounipolar संवेदी ंयूरॉंस और उपग्रह glial कोशिकाओं की निकटता में स्थित है । pseudounipolar न्यूरॉन्स एक एकल neurite कि एक परिधीय कोशिका शरीर के लिए परिधीय लक्ष्यों से दैहिक और आंत में आदानों ले प्रक्रिया में विभाजन की सुविधा है, और एक केंद्रीय प्रक्रिया है कि सीएनएस में सेल शरीर से संवेदी जानकारी प्रस्तुत. एक संयोजी कैप्सूल को परिभाषित करता है और सीएनएस से न्यूरॉन्स और glial कोशिकाओं के इस परिधीय क्लस्टर को अलग । कोई जन्मोत्तर सेल माइग्रेशन करने के लिए या डीआरजी से कभी भी वर्णित किया गया है और एक स्थानीय स्टेम सेल आला है तंत्रिकाजन्य पूरे जीवन में होने वाली घटनाओं के लिए जिंमेदार है1। इसलिए, इस मॉडल विशेष रूप से वयस्क neurogenesis का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त है, axonogenesis, दर्दनाक घावों के जवाब, और कोशिका मृत्यु2,3,4,5,6,7 ,8,9 .
neuroregeneration के क्षेत्र में, डीआरजी में vivo और explanted इन विट्रो में से काटा axonotmesis, एक चोट की हालत में axons पूरी तरह से गंभीर हैं और न्यूरॉन सेल शरीर innervated लक्ष्य10 से डिस्कनेक्ट कर दिया गया है ,11. यह अच्छी तरह से जाना जाता है कि परिधीय तंत्रिका चोट डीआरजी में कमी हुई है और बढ़ जीन अभिव्यक्ति पैदा कर सकता है और इन परिवर्तनों के कई reअपक्षयी प्रक्रियाओं का परिणाम है, लेकिन कई भी प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया या गैर से एक और प्रतिक्रिया का परिणाम हो सकता है-न्यूरॉन्स कोशिकाओं. अलग डीआरजी के एक पूर्व vivo प्रणाली का उपयोग करके, इस जटिलता के कुछ हटा दिया है और यंत्रवत रास्ते और अधिक आसानी से जांच की जा सकती है ।
सीएनएस के लिए संवेदी आदानों संदेश में अपनी केंद्रीय भूमिका के अलावा, गाबा सहित कई न्यूरोट्रांसमीटर के लिए रिसेप्टर्स की बहुतायत12,13,14,15 न्यूरॉन्स के स्तर पर के रूप में अच्छी तरह के रूप में उत्तेजना का सबूत है कि डीआरजी संवेदी निविष्टियां16,17के परिष्कृत प्रारंभिक एकीकरण सुझाव दे सकते हैं । इन नए निष्कर्षों डीआरजी explant के लिए एक मिनी-न्यूरॉन नेटवर्क प्रणाली अन्य "मिनी मस्तिष्क" मॉडल है, जो तंत्रिका-ऊतक-विशिष्ट organoids जांच और चिकित्सीय के व्यापक प्रायोगिक क्षेत्रों के लिए इस्तेमाल किया जाता है के समान की विशेषताओं को प्रदान मस्तिष्क संबंधी बीमारियों के लिए दृष्टिकोण18,19. इन सबूतों के साथ एक साथ तथ्य यह है कि डीआरजी एक असतत और अच्छी तरह से परिभाषित एक संयोजी कैप्सूल से घिरा हुआ ऊतक के क्लस्टर है, यह एक उपयुक्त अंग बनाने के लिए पूर्व vivo ट्रांसप्लांटेशन.
संवर्धन माउस डीआरजी प्रजातियों के बीच संरचनात्मक और आनुवंशिक समानता के कारण मॉडल मानव pathophysiologies के लिए एक आकर्षक कोशिकीय विकल्प प्रस्तुत करता है । इसके अतिरिक्त, ट्रांसजेनिक माउस उपभेदों का एक बड़ा भंडार भविष्य यंत्रवत अध्ययन के लिए अत्यधिक अनुकूल है । Neurite विस्तार दोनों विकास के दौरान और चोट के बाद विकास शंकु और सब्सट्रेट20,21के बीच यांत्रिक बातचीत की आवश्यकता है । नैनो और सूक्ष्म नमूनों सब्सट्रेट उपकरणों के रूप में इस्तेमाल किया गया है प्रत्यक्ष neurite वृद्धि और उनकी क्षमता का प्रदर्शन करने के लिए उनके microenvironments में स्थलाकृतिक सुविधाओं का जवाब । न्यूरॉन्स के लिए जीवित रहने के लिए दिखाया गया है, पालन, प्रवास, और उनके axons सब्सट्रेट्स22,23में खांचे के रूप में सतह सुविधाओं नेविगेट करने के लिए ओरिएंट. हालांकि, इन अध्ययनों से आम तौर पर प्रसंस्कृत सेल लाइनों का उपयोग किया है और यह कैसे प्राथमिक न्यूरॉन्स कोशिकाओं को अच्छी तरह से परिभाषित करने के लिए जवाब देगा की भविष्यवाणी करने के लिए मुश्किल है, vivo में शारीरिक cues या पूर्व vivo.
इस प्रस्ताव के लिए इस्तेमाल किया माउस डीआरजी के पूर्व vivo explant मॉडल असली सेल सेल संपर्क और जैव रासायनिक cues बढ़ती axons आसपास नकल करता है । कई अलग प्रयोगात्मक axonal पुनर्जनन, neurosphere उत्पादन, neuroinflammation से लेकर मानदंड के अलावा, डीआरजी explant मॉडल संवेदी के भीतर वायरल संक्रमण और विलंबता पहलू की जांच करने के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण के रूप में सेवा करने के लिए जारी गैंग्लिया२४,२५,२६,२७.
तंत्रिका तंत्र (एनएस) सामान्य रूप से वायरल संक्रमण28,29,30के लिए लक्ष्य है । अधिकांश वायरस उपकला और endothelial सेल सतहों को संक्रमित और परिधीय तंत्रिका संवेदी और मोटर फाइबर के माध्यम से एनएस को सतह के ऊतकों से उनके रास्ते बनाते हैं । विशेष रूप से, दाद सिंप्लेक्स वायरस प्रकार 1 (एचएसवी-1) उपकला कोशिकाओं में एक प्रारंभिक संक्रमण के बाद संवेदी गैंग्लिया अधिमानतः में एक जीवन भर विलंबता स्थापित करता है, पीएन के डीआरजी31,32. एचएसवी-1 neuroptropic पीएन को संक्रमित करने की क्षमता अंततः स्नायविक रोगों की ओर जाता है33.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adult Mice NIH/Swiss</td>
			<td>Harlan Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35mm petri dish</td>
			<td>Cell Treat</td>
			<td>229635</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel ECM</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E1270</td>
			<td>gelatinous protein mixture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F12 Media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11765-054</td>
			<td>*Part of SFM media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22um filter</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10888-022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504-044</td>
			<td>Supplement for neuronal culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PSN antibiotics</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15640-055</td>
			<td>*Part of SFM media 
			Antibiotic mixture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7513</td>
			<td>*Part of SFM media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NGF</td>
			<td>Alomone Labs</td>
			<td>N-100</td>
			<td>Nerve growth factor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin coated coverslide</td>
			<td>Neuvitro</td>
			<td>GG-14-Laminin</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ONPG subtrate</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>34055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-gal</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15520034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody anti-B-tubulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8328</td>
			<td>1:2000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibody anti-peripherin</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB1530</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst dye</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>62249</td>
			<td>1.5 &#181;M final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-heparan sulfate</td>
			<td>US Biological</td>
			<td>H1890-10</td>
			<td>0.180555556</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti gD antibody</td>
			<td>Virostat</td>
			<td>196</td>
			<td>1:10 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2153-100G</td>
			<td>*Part of SFM media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BME</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21010-046</td>
			<td>*Part of SFM media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021-1KG</td>
			<td>*Part of SFM media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KIT (Insulin-transferrin-Selenium-A)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>51300-044</td>
			<td>*Part of SFM media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitamin-C</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4403</td>
			<td>*Part of SFM media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Putrescine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7505</td>
			<td>*Part of SFM media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488 (goat anti-mouse)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3 (goat anti-rabbit)</td>
			<td>Jackson Immunoresearch laboratories</td>
			<td>111-165-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Goat serum&#160;</td>
			<td>Vector</td>
			<td>S-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin Solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT5014-120ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9284-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VectaShield</td>
			<td>Vector</td>
			<td>H-1500</td>
			<td>Flurescence mount</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond White Glass Coverslides</td>
			<td>Globe Scientific</td>
			<td>1380-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adult mouse drg explant and dissociated cell models to investigate neuroplasticity and responses to environmental insults including viral infection

इस प्रोटोकॉल का वर्णन एक पूर्व वीवो माउस के मॉडल-पृष्ठीय रूट गैंग्लिया (डीआरजी) explant और इन विट्रो डीआरजी-व्युत्पंन सह-संस्कृति असंबद्ध संवेदी ंयूरॉंस और glial सैटेलाइट कोशिकाओं । ये उपयोगी और बहुमुखी मॉडल है जैविक प्रतिक्रियाओं की एक किस्म की जांच करने के लिए शारीरिक और परिधीय तंत्रिका तंत्र (पीएन) से लेकर ंयूरॉन-glial बातचीत, neuroplasticity के रोग की स्थिति के साथ जुड़े, neuroinflammation, और वायरल संक्रमण । डीआरजी explant का उपयोग वैज्ञानिक रूप से कई कारणों के लिए सरलीकृत एकल कोशिकाओं के मॉडल की तुलना में लाभप्रद है । उदाहरण के लिए, एक organotypic संस्कृति के रूप में, डीआरजी explant सभी ंयूरॉंस और microenvironment कार्यों में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा है कि extracellular glial सहित एक पूरे ंयूरॉंस नेटवर्क के पूर्व vivo हस्तांतरण की अनुमति देता है । इसके अलावा, डीआरजी explants भी कई दिनों के लिए पूर्व vivo बनाए रखा जा सकता है और संस्कृति की स्थिति के रूप में वांछित परेशान जा सकता है । इसके अलावा, काटा डीआरजी आगे असंबद्ध में एक इन विट्रो सह-संस्कृति प्राथमिक संवेदी न्यूरॉन्स और उपग्रह glial कोशिकाओं की जांच करने के लिए न्यूरॉन-glial बातचीत, neuritogenesis, axonal शंकु extracellular के साथ संपर्क में हो सकता है microenvironment, और अधिक सामांय, किसी भी पहलू के साथ जुड़े ंयूरॉन चयापचय । इसलिए, डीआरजी-explant प्रणाली एक लागत प्रभावी ढंग से जैविक, शारीरिक और रोग की स्थिति से संबंधित घटनाओं की एक विस्तृत सरणी का अध्ययन करने के लिए लचीलापन का एक बड़ा सौदा प्रदान करता है ।

neuroplasticity और ंयूरॉन के कई पहलुओं-पर्यावरण संपर्क डीआरजी और एक एकल असंबद्ध सेल संस्कृति मॉडल का उपयोग कर जांच की जा सकती है । हम एक डीआरजी explant और डीआरजी-व्युत्पंन असंबद्ध कोशिकाओं के रूप में योजनाबद्ध रूप से...

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Adult Mouse DRG Explant and Dissociated Cell Models to Investigate Neuroplasticity and Responses to Environmental Insults Including Viral Infection

इस रिपोर्ट में, organotypic संस्कृतियों और माउस के असंबद्ध प्राथमिक संस्कृतियों के लाभ-पृष्ठीय रूट गैंग्लिया व्युत्पंन के साथ जुड़े तंत्र की एक विस्तृत श्रृंखला की जांच करने के लिए प्रकाश डाला जाता है ंयूरॉन glial बातचीत, neuroplasticity, neuroinflammation, और वायरल संक्रमण के लिए प्रतिक्रिया ।

वयस्क माउस डीआरजी Explant और असंबद्ध सेल मॉडल वायरल संक्रमण सहित पर्यावरण अपमान को Neuroplasticity और प्रतिक्रियाओं की जांच करने के लिए

This protocol describes an ex vivo model of mouse-derived dorsal root ganglia (DRG) explant and in vitro DRG-derived co-culture of dissociated sensory ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Mouse Models of Periventricular Leukomalacia

Periventricular Leukomalacia के माउस मॉडल

We describe a protocol for establishing mouse models of periventricular leukomalacia (PVL). PVL is the predominant form of brain injury in premature ...

Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses

एक तुलनात्मक प्रजाति दृष्टिकोण का उपयोग करने के लिए पैतृक प्रतिक्रियाएँ के तंत्रिका जीव विज्ञान की जाँच

A goal of behavioral neuroscience is to identify underlying neurobiological factors that regulate specific behaviors.  Using animal models to accomplish ...

Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection

वयस्क माउस पौधे क सेल और Adenovirus - मध्यस्थता सहायक सेल संक्रमण का विच्छेदन

Hearing loss and balance disturbances are often caused by death of mechanosensory hair cells, which are the receptor cells of the inner ear.  Since there ...

Isolation of CA1 Nuclear Enriched Fractions from Hippocampal Slices to Study Activity-dependent Nuclear Import of Synapto-nuclear Messenger Proteins

Hippocampal स्लाइस से सीए 1 परमाणु समृद्ध भागों के अलगाव Synapto परमाणु मैसेंजर प्रोटीन की गतिविधि पर निर्भर परमाणु आयात अध्ययन

Studying activity dependent protein expression, subcellular translocation, or phosphorylation is essential to understand the underlying cellular ...

Stab Wound Injury of the Zebrafish Adult Telencephalon: A Method to Investigate Vertebrate Brain Neurogenesis and Regeneration

Zebrafish वयस्क telencephalon की चाकू मार चोट: हड्डीवाला मस्तिष्क Neurogenesis और पुनर्जनन जांच के लिए एक विधि

Adult zebrafish have an amazing capacity to regenerate their central nervous system after injury. To investigate the cellular response and the molecular ...

Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

Neurodegenerative रोग के माउस मॉडल के लिए घ्राण Assays

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process ...

Stripe Assay to Study the Attractive or Repulsive Activity of a Protein Substrate Using Dissociated Hippocampal Neurons

धारी परख एक प्रोटीन सब्सट्रेट Dissociated hippocampal न्यूरॉन्स के प्रयोग के आकर्षक या प्रतिकारक गतिविधि का अध्ययन करने के लिए

Growing axons develop a highly motile structure at their tip, termed the growth cone. The growth cone contacts extracellular environmental cues to ...

A Novel Behavioral Assay to Investigate Gustatory Responses of Individual, Freely-moving Bumble Bees (Bombus terrestris)

A Novel Behavioral Assay to Investigate Gustatory Responses of Individual, Freely-moving Bumble Bees Bombus terrestris

एक उपन्यास व्यवहार परख व्यक्ति की स्वाद जवाब, स्वतंत्र रूप से चलती Bumble मधुमक्खियों जांच करने के लिए (<em&gt; Bombus terrestris</em&gt;)

Generalist pollinators like the buff-tailed bumble bee, Bombus terrestris, encounter both nutrients and toxins in the floral nectar they collect from ...

Use of Synaptic Zinc Histochemistry to Reveal Different Regions and Laminae in the Developing and Adult Brain

Synaptic जस्ता Histochemistry का उपयोग विकासशील और वयस्क मस्तिष्क में विभिन्न क्षेत्रों और Laminae को प्रकट करने के लिए

Characterization of anatomical and functional brain organization and development requires accurate identification of distinct neural circuits and regions ...

Light-Induced Molecular Adsorption of Proteins Using the PRIMO System for Micro-Patterning to Study Cell Responses to Extracellular Matrix Proteins

प्रोटीन के प्रकाश-प्रेरित आण्विक अवशोषण माइक्रो-पैटर्निंग के लिए प्राइमो सिस्टम का उपयोग करने के लिए अध्ययन सेल जवाब करने के लिए extracellular मैट्रिक्स प्रोटीन

Cells sense a variety of extracellular cues, including the composition and geometry of the extracellular matrix, which is synthesized and remodeled by the ...