Name: establishment of a primary culture of patient-derived soft tissue sarcoma
Uploaded: 2018-04-11T13:00:00
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Les auteurs tiennent à remercier Gráinne Tierney pour aide à la rédaction.

STS cellules sont isolées d’une tumeur masse chirurgicalement excisée de patients atteints de STS. Le protocole a été approuvé par le Comité d’éthique Local et s’effectue selon des lignes directrices de bonnes pratiques cliniques et la déclaration d’Helsinki. Tous les patients ont donné le consentement éclairé pour participer à l’étude. Les spécimens chirurgicaux sont analysées par un pathologiste expérimenté sarcome et traitées dans un délai de 3 heures de chirurgie.
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Les modèles précliniques bien définis sont nécessaires pour élucider le fond moléculaire des tumeurs, prédire le pronostic et élaborer de nouvelles stratégies thérapeutiques pour les patients atteints de cancer. Ceci est particulièrement important pour des tumeurs rares tels que STS dont forte hétérogénéité en termes de morphologie, un comportement agressif, clinique et potentiel défis notre compréhension de la biologie de STS et de gestion des patients21. Par ailleurs, les quelq...

Sarcomes des tissus mous (STS) incluent un éventail de lésions hétérogènes de la comptabilité d’origine mésenchymateuse à 1 % de toutes les tumeurs solides1,2, et la nouvelle classification de l’Organisation mondiale de la santé reconnaît la présence de plus de 50 3de différents sous-types. Parmi ceux-ci, les plus courantes histotypes sont sarcome d’adipocytes ou liposarcome et leiomyosarcomes, représentant 15 % et 11 % de toutes les mailles adultes, respectivement4,5. Bien que STS peuvent développer dans différentes parties du corps, les extrémités et rétropéritoine sont les sites les plus communs, qui se produisent dans les 60 % et 20 % des cas, respectivement de6.
La pierre angulaire du traitement pour maladie localisée est la résection chirurgicale large, tandis que les avantages de la chimiothérapie adjuvante et néoadjuvante sont encore peu clairs et ne sont considérées que dans certains cas7. Dans le cadre métastatique, une chimiothérapie est la norme de diligence mais montre des résultats limités,8. Une meilleure compréhension de la biologie moléculaire des STS contribuerait à améliorer le diagnostic différentiel actuel, d’optimiser les traitements disponibles et identifier de nouvelles cibles pour la thérapie.
Dans ce contexte, la recherche sur le cancer a été exécutée pendant de nombreuses années, l’utilisation de lignées cellulaires immortalisées9. Ces modèles expérimentaux sont normalement cultivés en monocouche standard prend en charge ou implantés dans immunodéficientes rongeurs d’établir en vivo xénogreffe modèles10. Lignées cellulaires immortalisées représentent un matériau facile à gérer et facile-à-store avec qui un grand nombre des expériences de recherche peut être effectué. Ils sont, en fait, le moins cher et plus couramment outil dans les études précliniques11.
Cependant, modèles de cancer lignée cellulaire basée ont également certaines limites, par exemple prolongé la culture dans un système monocouche avec un nombre croissant de passages induit phénotypique et dérive génétique, fabrication de cellules moins probablement pour récapituler les principales tumeurs caractéristiques. En outre, les cultures de cellules ligne ne parviennent pas à reproduire l’interaction cellule-cellule et la signalisation diaphonie de molécule qui imitent le comportement biologique des tumeurs et de caractériser le microenvironnement tumoral. Ces questions forment la base de l’écart existant entre les résultats cliniques et précliniques12.
Compte tenu de ce qui précède, l’intérêt dans les cultures primaires dérivés de patients a augmenté de13. En effet, l’excision des tissus normales et malignes réduit le risque de perdre le phénotype cellulaire du cancer et l’hétérogénéité, offrant ainsi une matière première qui est plus représentatif du microenvironnement tumoral. En outre, l’utilisation des échantillons de tumeur fraîches récoltées dans les patients subissant une résection chirurgicale permet d’enquêter sur les tumeurs unique et de comparer différentes lésions de la même partie d’un patient corps14. Pour les motifs qui précèdent, les cultures de cellules provenant de tissus fournissent une matière précieuse pour étudier les tumeurs physiopathologie et pharmacologie15,16,17, notamment en STS dans des lignées cellulaires qui disponible dans le commerce de sarcome sont limitées18. Nous avons ainsi optimisé une méthode pour établir une culture de cellules primaires de STS dérivé de patient à partir de tissu de tumeur excisées chirurgicalement13,19,20. Notre méthode consiste à la désagrégation de l’échantillon de la tumeur en petits fragments tissulaires suivies d’une nuit ou plus dissociation enzymatique de tissu pour obtenir une suspension de cellules du même. Le lendemain, la digestion enzymatique est arrêtée en ajoutant les frais des milieux de culture et de la suspension obtenue est filtrée pour enlever des fragments tissulaires, cellule-agrégats et excès de matrice ou débris. Enfin, une fraction des cellules tumorales isolées est cytospinned sur lames de verre, fixé et stockés pour analyse en aval visée à confirmer la création de STS culture primaire de cytomorphologiques, immunohistochimiques et évaluation cytogénétique moléculaire (p. ex. analyse de poissons d’amplification de MDM2 représente le diagnostic différentiel standard pour un liposarcome bien différencié et le liposarcome dédifférenciée) 4. les cellules restantes sont ensemencées dans une culture monocouche standard pour les études de profilage et pharmacologiques d’expression des gènes. Toutes les expériences sont effectuées à l’aide de faible passage cultures primaires afin d’éviter la sélection de cancer spécifique sous-clones et analysés par un pathologiste expérimenté sarcome. Nous avons donc créé un entièrement humain m ex vivo modèle13,19,20. Cette très polyvalent, facile à poignée modèle pourrait constituer un outil utile pour différents types de recherche préclinique, par exemple pour identifier de nouveaux marqueurs moléculaires pour le diagnostic et le pronostic ou pour acquérir une meilleure compréhension de l’activité et les mécanismes de action de standards et les nouveaux médicaments utilisés dans le traitement des mailles.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:599px;" width="597">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:163px;">DMEM High Glucose</td>
			<td style="width:180px;">EuroClone</td>
			<td style="width:111px;">ECB7501L</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:163px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:180px;">EuroClone</td>
			<td style="width:111px;">ECS0180D</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:163px;">Glutamine</td>
			<td style="width:180px;">Gibco</td>
			<td style="width:111px;">25030-024</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="112">
			<td height="112" style="height:112px;width:163px;">Paraformaldehyde 4% aqueous solution, EM grade</td>
			<td style="width:180px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:111px;">157-4-100</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:163px;">Penicillin streptomycin</td>
			<td style="width:180px;">Gibco</td>
			<td style="width:111px;">15140122</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:163px;">Triazol reagent</td>
			<td style="width:180px;">Ambion Life-Technologies</td>
			<td style="width:111px;">15596018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;">Trypsin</td>
			<td>EuroClone</td>
			<td style="width:111px;">ECB3052D</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of a primary culture of patient-derived soft tissue sarcoma

Sarcomes des tissus mous (STS) représentent un éventail de malignités hétérogènes avec un diagnostic difficile, classification et gestion. A ce jour, plus de 50 sous-types histologiques de ces rares tumeurs solides ont été identifiés. Ainsi, en raison de leur extraordinaire diversité et la faible incidence, notre compréhension de la biologie de ces tumeurs est encore limitée. Dérivé de patient cultures représentent la plate-forme idéale pour étudier la pharmacologie et physiopathologie de la STS. Nous avons donc développé un humain modèle préclinique de mailles à partir de spécimens de tumeur provenant de patients devant subir une résection chirurgicale. Patient provenant des cultures de cellules STS ont été obtenues à partir de spécimens chirurgicales par digestion de collagénase et isolés par filtration. Cellules ont été comptés, épépinées et laissés pendant 14 jours dans des cultures monocouches standard et ensuite traitées par analyse en aval. Avant de procéder à des analyses moléculaires ou pharmaceutiques, la mise en place de cultures primaires STS a été confirmée par le biais de l’évaluation des caractéristiques cytomorphologic et, lorsque disponibles, les marqueurs immunohistochimiques. Cette méthode représente un outil utile 1) afin d’étudier l’histoire naturelle de ces tumeurs malignes mal explorées et 2) pour tester les effets des différentes drogues dans le but de mieux connaître leurs mécanismes d’action.

Nous avons conçu une méthode simple pour obtenir la mise en place d’une culture primaire de sarcome des tissus mous dérivé de patient et signaler ici un exemple des résultats obtenus sur un histotype spécifique de m13. Le protocole a été utilisé pour la mise en place de cultures primaires de différentes mailles histotypes y compris liposarcome bien différencié, dédifférenciées production liposarcome, liposarcome, myxofibrosarcoma, indifférencié, ...

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Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma

Le protocole suivant est axé sur la mise en place d’une culture primaire de sarcome des tissus mous dérivé de patient (STS). Ce modèle pourrait nous aider à mieux comprendre la base moléculaire et le profil pharmacologique de ces tumeurs malignes rares et pourrait constituer un point de départ pour poursuivre les recherches visant à améliorer la gestion de STS.

Mise en place d’une Culture primaire de sarcome des tissus mous dérivé de Patient

Soft tissue sarcomas (STS) represent a spectrum of heterogeneous malignancies with a difficult diagnosis, classification, and management. To date, more ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Développement et maintenance d&#39;une tumeur du patient Préclinique dérivé modèle de xénogreffe de l&#39;enquête de Novel Anti-Cancer Therapies

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Recherche

Recherche en cancérologie

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

Étiquetage des xénogreffes de patients dérivés cancer du sein avec traçables Reporters pour la croissance tumorale et la métastase études

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

Isolement et caractérisation des cellules initiatrices de tumeurs des xénogreffes dérivées du sarcome

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Ostéosarcome utilisant le Syndrome de Li-Fraumeni cellules souches de pluripotentes induites Patient dérivé de modélisation

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

Un modèle de xénogreffe dérivé du mélanome

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Établissement de modèles de xénogreffe dérivés du cancer gastrique et de lignées cellulaires primaires

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Dépistage de drogue des xénogreffes dérivées de tumeur de patient primaire dans le poisson-zèbre

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

The Establishment and Utilization of Patient Derived Xenograft Models of Central Nervous System Metastasis

L’établissement et l’utilisation de modèles de xénogreffes dérivés de patients de métastases du système nerveux central

The development of novel therapies for central nervous system (CNS) metastasis has been hindered by the lack of preclinical models that accurately ...

Establishment and Culture of Patient-Derived Breast Organoids

Établissement et culture d’organoïdes mammaires dérivés de patientes

Breast cancer is a complex disease that has been classified into several different histological and molecular subtypes. Patient-derived breast tumor ...

Establishment of Zebrafish Patient-Derived Xenografts from Pancreatic Cancer for Chemosensitivity Testing

Mise en place de xénogreffes de poisson zèbre provenant de patients atteints d’un cancer du pancréas pour des tests de chimiosensibilité

Cancer is one of the main causes of death worldwide, and the incidence of many types of cancer continues to increase. Much progress has been made in terms ...