Name: establishment of a primary culture of patient-derived soft tissue sarcoma
Uploaded: 2018-04-11T13:00:00
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Los autores desean agradecer a Gráinne Tierney por asistencia editorial.

STS células están aisladas de un tumor suprimido masa quirúrgico de pacientes con STB. El protocolo ha sido aprobado por el Comité de ética Local y se realiza según las directrices de buena práctica clínica y la declaración de Helsinki. Todos los pacientes dieron consentimiento informado para participar en el estudio. Los especímenes quirúrgicos son analizados por un patólogo experimentado sarcoma y procesados dentro de 3 horas de cirugía.
1. tumor recogida de muestras y procesamien...

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Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+vegf+gene+knockdown+on+growth+of+the+murine+sarcoma+cell+line+MS-K.">Effect of vegf gene knockdown on growth of the murine sarcoma cell line MS-K.</a> Cells. 16 (6), 625-638 (2011).</li><li>Kidani, T., Yasuda, R., Miyawaki, J., Oshima, Y., Miura, H., Masuno, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bisphenol+A+Inhibits+Cell+Proliferation+and+Reduces+the+Motile+Potential+of+Murine+LM8+Osteosarcoma+Cells.">Bisphenol A Inhibits Cell Proliferation and Reduces the Motile Potential of Murine LM8 Osteosarcoma Cells.</a> Anticancer Res. 37 (4), 1711-1722 (2017).</li><li>Sugiyasu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radio-sensitization+of+the+murine+osteosarcoma+cell+line+LM8+with+parthenolide,+a+naturalinhibitor+of+NF-&#954;B.">Radio-sensitization of the murine osteosarcoma cell line LM8 with parthenolide, a naturalinhibitor of NF-&#954;B.</a> Oncol Lett. 2 (3), 407-412 (2011).</li><li>Daigeler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+in+vitro+effects+of+doxorubicin+on+gene+expression+in+primary+human+liposarcoma+cultures.">Heterogeneous in vitro effects of doxorubicin on gene expression in primary human liposarcoma cultures.</a> BMC Cancer. 29 (8), 313 (2008).</li></ol>

Modelos preclínicos bien definidos son necesarios para dilucidar el fondo molecular de tumores, predecir pronóstico pobre y desarrollar nuevas estrategias terapéuticas para pacientes con cáncer. Esto es especialmente importante para los tumores raros como STS cuya alta heterogeneidad en términos de morfología, comportamiento agresivo de la clínico y potencial desafía nuestra comprensión de la biología de STS y tratamiento del paciente21. Por otra parte, las líneas de células de sarcoma...

Sarcomas de tejidos blandos (STB) incluyen un espectro de lesiones heterogéneas de origen mesenquimal representa 1% de todos los tumores sólidos1,2, y la nueva clasificación de la Organización Mundial de la salud reconoce la presencia de más de 50 diferentes subtipos3. Entre estos, los histotypes más comunes son sarcoma del adipocito o liposarcoma y el leiomiosarcoma, representando el 15% y 11% de todos adultos STS, respectivamente4,5. Aunque STS puede desarrollar en diferentes partes del cuerpo, las extremidades y retroperitoneo son los sitios más comunes, que ocurren en el 60% y el 20% de los casos, respectivamente6.
La piedra angular de la terapia para la enfermedad localizada es la resección quirúrgica amplia, mientras que los beneficios de la quimioterapia adyuvante y neoadyuvante aún no están claros y son considerados sólo en casos seleccionados7. En el entorno metastásico, la quimioterapia es el estándar de cuidado pero muestra resultados limitados8. Una mejor comprensión de la biología molecular de STS ayudaría a mejorar el diagnóstico diferencial actual, optimizar los tratamientos disponibles e identificar nuevas dianas para el tratamiento.
En este contexto, se ha realizado investigación en cáncer durante muchos años con líneas de células inmortalizadas9. Estos modelos experimentales normalmente son cultivados en monocapa estándar soporta o implantados en roedores inmunodeficientes para establecer modelos de xenoinjerto en vivo 10. Líneas celulares inmortalizadas representan un material manejable y fácil a las tiendas con las que se puede realizar un amplio número de experimentos de investigación. Son, de hecho, el menos costoso y más ampliamente utilizado herramienta de estudios preclínicos11.
Sin embargo, modelos de línea celular en cáncer también tienen algunas limitaciones, por ejemplo prolongada cultura en un sistema de monocapa junto con un número cada vez mayor de pasajes induce fenotípica y deriva genética, que hace menos probable células recapitular tumor clave características. Por otra parte, cultivos de la línea de celulares no reproducir la interacción célula a célula y señalización interferencia de molécula que imitan el comportamiento biológico de los tumores y caracterizar el microambiente tumoral. Estos temas constituyen la base de la brecha existente entre los resultados preclínicos y clínicos12.
Dado lo anterior, ha aumentado el interés en cultivos primarios derivados del paciente13. De hecho, la supresión del tejido maligno y normal reduce el riesgo de perder el fenotipo de la célula de cáncer y de la heterogeneidad, ofreciendo material de partida que es más representativo del microambiente tumoral. Por otra parte, el uso de muestras de tumor fresco cosechado de pacientes sometidos a resección quirúrgica nos permite investigar los tumores individuales y comparar diversas lesiones de la misma parte del cuerpo de un paciente14. Por las razones expuestas, cultivos de células derivadas de tejido proporcionan un valioso material para estudiar tumor Fisiopatología y Farmacología15,16,17, especialmente en el STB en que líneas de células de sarcoma comercialmente disponibles son limitado18. Así hemos optimizado un método para establecer una cultura de célula primaria de STS paciente derivado a partir de la excisión quirúrgica del tumor tejido13,19,20. Nuestro método consiste en desagregar a la muestra de tumor en los fragmentos pequeños de tejido seguidas por la disociación enzimática de tejido durante la noche para obtener una suspensión unicelular. Al día siguiente, la digestión enzimática se detiene mediante la adición de medio fresco de cultivo y la suspensión obtenida se filtra para remover fragmentos de tejido, agregados de la célula y exceso de matriz material o escombros. Por último, una fracción de las células tumorales aisladas es cytospinned sobre portaobjetos de vidrio, fijos y almacenados para análisis posteriores destinadas a confirmar el establecimiento del cultivo primario STS cytomorphological, immunohistochemical y evaluación citogenética molecular (p. ej. análisis de los pescados de MDM2 amplificación representa el estándar diagnóstico diferencial de un liposarcoma bien diferenciado y liposarcoma dedifferentiated) 4. las células restantes se siembran en una cultura estándar monocapa para estudios farmacológicos y perfiles de expresión génica. Todos los experimentos se realizan con bajos pasajes cultivos primarios para evitar la selección de subclones de cáncer específico y analizan por un patólogo experimentado sarcoma. Así hemos creado un humano STS vivo ex modelo13,19,20. Este versátil, fácil de manija modelo podría representar una herramienta útil para diferentes tipos de investigación preclínica, por ejemplo, para identificar nuevos marcadores moleculares para el diagnóstico y pronóstico o para obtener una comprensión más profunda de la actividad y los mecanismos de acción de estándar y nuevos fármacos utilizados en el tratamiento del STB.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:599px;" width="597">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:163px;">DMEM High Glucose</td>
			<td style="width:180px;">EuroClone</td>
			<td style="width:111px;">ECB7501L</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:163px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:180px;">EuroClone</td>
			<td style="width:111px;">ECS0180D</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:163px;">Glutamine</td>
			<td style="width:180px;">Gibco</td>
			<td style="width:111px;">25030-024</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="112">
			<td height="112" style="height:112px;width:163px;">Paraformaldehyde 4% aqueous solution, EM grade</td>
			<td style="width:180px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:111px;">157-4-100</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:163px;">Penicillin streptomycin</td>
			<td style="width:180px;">Gibco</td>
			<td style="width:111px;">15140122</td>
			<td style="width:145px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:163px;">Triazol reagent</td>
			<td style="width:180px;">Ambion Life-Technologies</td>
			<td style="width:111px;">15596018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;">Trypsin</td>
			<td>EuroClone</td>
			<td style="width:111px;">ECB3052D</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of a primary culture of patient-derived soft tissue sarcoma

Sarcomas de tejidos blandos (STB) representan un espectro de neoplasias heterogéneas con un difícil diagnóstico, clasificación y gestión. Hasta la fecha, se han identificado más de 50 subtipos histológicos de estos raros tumores sólidos. Así, debido a su extraordinaria diversidad y baja incidencia, nuestra comprensión de la biología de estos tumores es todavía limitada. Paciente derivados de culturas representan la plataforma ideal para el estudio de la farmacología y patofisiología de STS. Así desarrollamos un modelo humano de preclínico de STS a partir de muestras tumorales de pacientes sometidos a resección quirúrgica. Paciente derivado STS cultivos celulares fueron obtenidos de los especímenes quirúrgicos por digestión de colagenasa y aislados por filtración. Las células cuentan, semillas y quedaban durante 14 días en cultivos monocapa estándar y luego procesadas por análisis aguas abajo. Antes de realizar el análisis moleculares o la farmacia, el establecimiento de cultivos primarios STS fue confirmado a través de la evaluación de características cytomorphologic y, cuando esté disponible, marcadores immunohistochemical. Este método representa una herramienta útil 1) para estudiar la historia natural de estas neoplasias pobremente explorados y 2) para probar los efectos de diferentes fármacos en un esfuerzo para aprender más sobre sus mecanismos de acción.

Hemos diseñado un método sencillo para obtener el establecimiento de un cultivo primario de sarcoma de tejidos blandos derivados del paciente e informar aquí un ejemplo de los resultados obtenidos en un determinado histotype de STS13. El protocolo fue utilizado para el establecimiento de cultivos primarios de diferentes histotypes de STS como liposarcoma bien-distinguido, dedifferentiated liposarcoma, liposarcoma mixoide, liposarcoma pleomórfico, myxofibrosarco...

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Establishment of a Primary Culture of Patient-derived Soft Tissue Sarcoma

El siguiente protocolo se centra en el establecimiento de un cultivo primario de sarcoma de tejidos blandos derivados del paciente (STS). Este modelo podría ayudarnos a entender mejor el fondo molecular y perfil farmacológico de estos raros tumores malignos y podría representar un punto de partida para futuras investigaciones destinadas a mejorar la gestión de STS.

Establecimiento de un cultivo primario de Sarcoma de tejidos blandos derivados del paciente

Soft tissue sarcomas (STS) represent a spectrum of heterogeneous malignancies with a difficult diagnosis, classification, and management. To date, more ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Desarrollo y mantenimiento de un tumor del paciente preclínicos Derivado modelo de xenoinjerto para la Investigación de Novela Anti-Cancer Therapies

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Investigación

Investigación sobre el cáncer

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

Etiquetado de los xenoinjertos derivados de los pacientes con cáncer de mama Trazables Reporteros para el crecimiento tumoral y la metástasis Estudios

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Isolation and Characterization of Tumor-initiating Cells from Sarcoma Patient-derived Xenografts

Aislamiento y caracterización de células que inician tumores a partir de xenoinjertos derivados del paciente de sarcoma

The existence and importance of tumor-initiating cells (TICs) have been supported by increasing evidence during the past decade. These TICs have been ...

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Modelado de Osteosarcoma usando las células de vástago de Pluripotent inducido derivados del paciente el síndrome de Li-Fraumeni

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

Un modelo de xenoinjerto derivado del paciente de melanoma

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Establecimiento de modelos de xenoinjerto saqueos derivados del paciente y líneas celulares primarias

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Examen de drogas de xenoinjertos de tumores derivados del paciente primario en peces cebra

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

The Establishment and Utilization of Patient Derived Xenograft Models of Central Nervous System Metastasis

El establecimiento y la utilización de modelos de xenoinjerto derivados del paciente de metástasis del sistema nervioso central

The development of novel therapies for central nervous system (CNS) metastasis has been hindered by the lack of preclinical models that accurately ...

Establishment and Culture of Patient-Derived Breast Organoids

Establecimiento y cultivo de organoides mamarios derivados de pacientes

Breast cancer is a complex disease that has been classified into several different histological and molecular subtypes. Patient-derived breast tumor ...

Establishment of Zebrafish Patient-Derived Xenografts from Pancreatic Cancer for Chemosensitivity Testing

Establecimiento de xenoinjertos derivados de pacientes con pez cebra de cáncer de páncreas para pruebas de quimiosensibilidad

Cancer is one of the main causes of death worldwide, and the incidence of many types of cancer continues to increase. Much progress has been made in terms ...