Name: quantitative measurement of &#947;-secretase-mediated amyloid precursor protein and notch cleavage in cell-based luciferase reporter assay platforms
Uploaded: 2018-01-25T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Measurement of ÃŽÂ³-Secretase-mediated Amyloid Precursor Protein and Notch Cleavage in Cell-based Luciferase Reporter Assay Platforms at JoVE.com

Yazarlar çekirdek tesis cep Enstitüsü ve Organismic biyoloji, Academia Sinica, teknik destek için teşekkür ederiz. Bu Çalışma Bakanlığı bilim ve teknoloji, Tayvan (Y.-F. için en 103-2320-B-001-016-MY3 tarafından desteklenmiştir L.), Program translasyonel biyofarmasotik geliştirme-Platform eksen destekleyen teknoloji yenilik için Düzen (Y.-Tayback için NP7) ve Academia Sinica (Y.-Tayback için).

1. Luciferase gazeteci sinyalleri, γ-Secretase bölünme APP-C99 veya NΔE için karşılık gelen ölçümü
Not: Lütfen CG ve NG hücreleri20,21nesil ayrıntılı açıklamaları için önceki yayınlara bakın.
<ol><li>
Tohum hücreleri NG veya CG (20, 000 hücre/iyi) 96-şey Mikroplaka 200 μL/kuyuda Dulbecco'nın modifiye kartal orta (DMEM) artı % 10 fetal sığır serum (FBS), 5 μg/mL blasticidin, 250 μg/mL antibiy...

<ol>
	<li>Selkoe, D. J., Hardy, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+amyloid+hypothesis+of+Alzheimer's+disease+at+25+years.">The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease at 25 years.</a> EMBO Mol Med. 8 (6), 595-608 (2016).</li><li>Wolfe, M. S., Guenette, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=APP+at+a+glance.">APP at a glance.</a> J Cell Sci. 120 (Pt 18), 3157-3161 (2007).</li><li>Karran, E., Mercken, M., De Strooper, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+amyloid+cascade+hypothesis+for+Alzheimer's+disease:+an+appraisal+for+the+development+of+therapeutics.">The amyloid cascade hypothesis for Alzheimer's disease: an appraisal for the development of therapeutics.</a> Nat Rev Drug Discov. 10 (9), 698-712 (2011).</li><li>Citron, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alzheimer's+disease:+strategies+for+disease+modification.">Alzheimer's disease: strategies for disease modification.</a> Nat Rev Drug Discov. 9 (5), 387-398 (2010).</li><li>Vassar, R., Kovacs, D. M., Yan, R., Wong, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+beta-secretase+enzyme+BACE+in+health+and+Alzheimer's+disease:+regulation,+cell+biology,+function,+and+therapeutic+potential.">The beta-secretase enzyme BACE in health and Alzheimer's disease: regulation, cell biology, function, and therapeutic potential.</a> J Neurosci. 29 (41), 12787-12794 (2009).</li><li>Parks, A. L., Curtis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presenilin+diversifies+its+portfolio.">Presenilin diversifies its portfolio.</a> Trends Genet. 23 (3), 140-150 (2007).</li><li>Kukar, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrate-targeting+gamma-secretase+modulators.">Substrate-targeting gamma-secretase modulators.</a> Nature. 453 (7197), 925-929 (2008).</li><li>Kounnas, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+gamma-secretase+reduces+beta-amyloid+deposition+in+a+transgenic+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Modulation of gamma-secretase reduces beta-amyloid deposition in a transgenic mouse model of Alzheimer's disease.</a> Neuron. 67 (5), 769-780 (2010).</li><li>Thathiah, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+orphan+G+protein-coupled+receptor+3+modulates+amyloid-beta+peptide+generation+in+neurons.">The orphan G protein-coupled receptor 3 modulates amyloid-beta peptide generation in neurons.</a> Science. 323 (5916), 946-951 (2009).</li><li>Flajolet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+Alzheimer's+disease+amyloid-beta+formation+by+casein+kinase+I.">Regulation of Alzheimer's disease amyloid-beta formation by casein kinase I.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (10), 4159-4164 (2007).</li><li>Eisele, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gleevec+increases+levels+of+the+amyloid+precursor+protein+intracellular+domain+and+of+the+amyloid-beta+degrading+enzyme+neprilysin.">Gleevec increases levels of the amyloid precursor protein intracellular domain and of the amyloid-beta degrading enzyme neprilysin.</a> Mol Biol Cell. 18 (9), 3591-3600 (2007).</li><li>He, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gamma-secretase+activating+protein+is+a+therapeutic+target+for+Alzheimer's+disease.">Gamma-secretase activating protein is a therapeutic target for Alzheimer's disease.</a> Nature. 467 (7311), 95-98 (2010).</li><li>Haapasalo, A., Kovacs, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+substrates+of+presenilin/gamma-secretase.">The many substrates of presenilin/gamma-secretase.</a> J Alzheimers Dis. 25 (1), 3-28 (2011).</li><li>Gillman, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+and+Evaluation+of+BMS-708163,+a+Potent,+Selective+and+Orally+Bioavailable+gamma-Secretase+Inhibitor.">Discovery and Evaluation of BMS-708163, a Potent, Selective and Orally Bioavailable gamma-Secretase Inhibitor.</a> ACS Med Chem Lett. 1 (3), 120-124 (2010).</li><li>Hopkins, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ACS+chemical+neuroscience+molecule+spotlight+on+Begacestat+(GSI-953).">ACS chemical neuroscience molecule spotlight on Begacestat (GSI-953).</a> ACS Chem Neurosci. 3 (1), 3-4 (2012).</li><li>Yang, T., Arslanova, D., Gu, Y., Augelli-Szafran, C., Xia, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+gamma-secretase+modulation+differentiates+inhibitor+compound+selectivity+between+two+substrates+Notch+and+amyloid+precursor+protein.">Quantification of gamma-secretase modulation differentiates inhibitor compound selectivity between two substrates Notch and amyloid precursor protein.</a> Mol Brain. 1, 15 (2008).</li><li>McKee, T. D., Loureiro, R. M., Dumin, J. A., Zarayskiy, V., Tate, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+cell-based+method+for+determining+the+gamma-secretase+enzyme+activity+against+both+Notch+and+APP+substrates.">An improved cell-based method for determining the gamma-secretase enzyme activity against both Notch and APP substrates.</a> J Neurosci Methods. 213 (1), 14-21 (2013).</li><li>Basi, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid+precursor+protein+selective+gamma-secretase+inhibitors+for+treatment+of+Alzheimer's+disease.">Amyloid precursor protein selective gamma-secretase inhibitors for treatment of Alzheimer's disease.</a> Alzheimers Res Ther. 2 (6), 36 (2010).</li><li>Liao, Y. F., Tang, Y. C., Chang, M. Y., Wang, B. J., Hu, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+small+molecular+(D)-leucinamides+as+potent,+Notch-sparing+gamma-secretase+modulators.">Discovery of small molecular (D)-leucinamides as potent, Notch-sparing gamma-secretase modulators.</a> Eur J Med Chem. 79, 143-151 (2014).</li><li>Liao, Y. F., Wang, B. J., Cheng, H. T., Kuo, L. H., Wolfe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+necrosis+factor-alpha,+interleukin-1beta,+and+interferon-gamma+stimulate+gamma-secretase-mediated+cleavage+of+amyloid+precursor+protein+through+a+JNK-dependent+MAPK+pathway.">Tumor necrosis factor-alpha, interleukin-1beta, and interferon-gamma stimulate gamma-secretase-mediated cleavage of amyloid precursor protein through a JNK-dependent MAPK pathway.</a> J Biol Chem. 279 (47), 49523-49532 (2004).</li><li>Wang, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ErbB2+regulates+autophagic+flux+to+modulate+the+proteostasis+of+APP-CTFs+in+Alzheimer's+disease.">ErbB2 regulates autophagic flux to modulate the proteostasis of APP-CTFs in Alzheimer's disease.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (15), E3129-E3138 (2017).</li><li>Sevigny, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antibody+aducanumab+reduces+Abeta+plaques+in+Alzheimer's+disease.">The antibody aducanumab reduces Abeta plaques in Alzheimer's disease.</a> Nature. 537 (7618), 50-56 (2016).</li><li>Golde, T. E., Koo, E. H., Felsenstein, K. M., Osborne, B. A., Miele, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=gamma-Secretase+inhibitors+and+modulators.">gamma-Secretase inhibitors and modulators.</a> Biochim Biophys Acta. 1828 (12), 2898-2907 (2013).</li><li>Coric, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+Prodromal+Alzheimer+Disease+With+Avagacestat:+A+Randomized+Clinical+Trial.">Targeting Prodromal Alzheimer Disease With Avagacestat: A Randomized Clinical Trial.</a> JAMA Neurol. 72 (11), 1324-1333 (2015).</li><li>Mitani, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+between+gamma-secretase+inhibitors+and+modulators+on+cognitive+function+in+amyloid+precursor+protein-transgenic+and+nontransgenic+mice.">Differential effects between gamma-secretase inhibitors and modulators on cognitive function in amyloid precursor protein-transgenic and nontransgenic mice.</a> J Neurosci. 32 (6), 2037-2050 (2012).</li><li>Penninkilampi, R., Brothers, H. M., Eslick, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+Agents+Targeting+gamma-Secretase+Increase+Risk+of+Cancer+and+Cognitive+Decline+in+Alzheimer's+Disease+Patients:+A+Systematic+Review+and+Meta-Analysis.">Pharmacological Agents Targeting gamma-Secretase Increase Risk of Cancer and Cognitive Decline in Alzheimer's Disease Patients: A Systematic Review and Meta-Analysis.</a> J Alzheimers Dis. 53 (4), 1395-1404 (2016).</li></ol>

Aducanumab immünoterapi evre 1b deneme reklam için gelen umut verici sonuçlar sıkıca Aβ kritik rolü yılında22 patogenezinde kurduk ve anti-Aβ yaklaşımlar hala Anti-reklam uyuşturucu gelişimi için uygun bir strateji olduğunu göstermektedir. Burada γ-secretase-katalize proteolizis APP-C99 ve ateş böceği luciferase muhabir sistemleri kullanarak NΔE miktarının için hücre tabanlı deneyleri tarif. APP-C99 ve NΔE iki en iyi okudu γ-secretase yüzeylerde ve birlikte γ-secreta...

Amiloid-β (Aβ) oligomeric formları ateş hastalarda Alzheimer hastalığı (Ah)1' den beynindeki başlıca nedeni olduğuna inanılmaktadır. Aβ peptitler β-secretase ve γ-secretase2tarafından ilk amiloid precursor protein (APP), kademeli bir bölünme tarafından üretilmektedir. Son on yılda, reklam tedavisinde doğru tedavi yaklaşımları Aβ üretim3önlenmesi üzerinde odaklanmıştır. Çalışmalar çoğunluğu γ-secretase bölünme app engel ve böylece Aβ üretimi veya β-ve/veya γ-secretase faaliyetleri4inhibisyonu azaltır α-secretase etkinlik, her iki büyütme üzerinde odaklanmıştır. Ne yazık ki, non-selektif kaçınılmaz yan etkileri sonuçlarında β veya γ secretases inhibisyonu β ve γ secretase5,6diğer fizyolojik yüzeylerde, işleyişi ile girişim bu kaynaklanmaktadır. γ-secretase inhibitörleri ile ilgili son çalışmalar bir dizi üzerinde çentik7 temel γ-secretase-aracılı işlenmesi ihmal edilebilir etkileri uygulamakla süre Aβ üretim düzenleyen kimyasal ve genetik modülatörler keşfi bildirdin ,8,9,10,11,12, ancak, başarılı tedavi değil henüz geliştirilmiştir. Böylece, daha fazla sistematik ekranlar seçici APP işleme γ-secretase-aracılı modüle roman genetik ve kimyasal değiştiricileri bulmak için garanti altındadır.
Γ-Secretase 90'dan fazla farklı proteinler membran bağlantılı ayırmak olduğu bilinmektedir. Bu yüzeyler arasında düzeydedir, olan faaliyet hücre kaderini belirleme farklılaşma geliştirme13sırasında için önemlidir. Seçmeli olarak γ-secretase-katalize APP olmaması durumunda işleme oransal çentik etkileyen işleme minimizing çentik ile ilgili yan etkileri için γ-secretase inhibitörleri gerekli olacak ve bu seçicilik olacak birincil faktör olduğu düşünülmektedir Reklam kronik tedavisi için potansiyel γ-secretase modülatörler biyolojik etkinliği dikte. Arylsulfonamide türevleri, GSI-953 (begacestat) ve BMS-708163 (avagacestat), γ-secretase14,15güçlü ve seçici inhibisyonu sergilemek bulunmuş gibi bir dizi olmuştur. Bir önceki çalışma γ-secretase dekolte APP ve çentik fark inhibisyon Zebra balığı16kullanarak vivo içinde validation ile birleşimiyle ELISA tabanlı bir nicel tahlil gözlenen göstermiştir. Ayrıca, hücre tabanlı tahlil paradigmalar γ-secretase APP ve çentik17,18doğru olası substrat selectivity gidermek amacıyla kurulmuştur. Burada açıklananlar için benzer protokolleriyle, biz son zamanlarda yeni bir sınıf (d) keşfettim-kuvvetli APP γ-secretase bölünme çentik tutumlu seçicilik19ile modüle leucinamides. Birlikte, bu çalışmaların bir kanıtı-of-substrat seçicilik/kullanılabilirliğini γ-secretase kimyasal modülasyon ve deneysel doğrulama tabi olabilir fikri destekleyen concept sağlar. Ancak, bu tahlil platformlar çoğunlukla nispeten düşük işlem hacmi dökümanları ve ilaç bulma programları için endüstri standartlarını karşılamıyor olabilir emek yoğun yaklaşımlar kullanır.
Biz-si olmak son zamanlarda oluşturmak kantitatif γ-secretase iki farklı yüzeylerde, APP (APP-C99) 99-amino asit C-terminal parçası ve ekstraselüler katalitik aktivitesini belirleyebilirsiniz hücre tabanlı luciferase muhabir gen deneyleri Çentik peptid (NΔE) etki alanı silindi. APP-C99 ve NΔE olarak γ-secretase çeşitli deneyleri içinde doğrudan yüzeylerde yaygın olarak kullanılmaktadır. Homojen ve tutarlı luciferase muhabir gen deneyleri için APP-C99 veya NΔE γ-secretase bölünme üretmek için yapısal bir Gal4 ateş böceği organizatörü tahrik luciferase muhabir (ifade eder bir istikrarlı hücre HEK elde edilen satır (CG) oluşturulan Gal4-Luc) ve Gal4/VP16-öğesini APP-C99 füzyon protein (C99-GV). Buna ek olarak, yapısal Gal4-Luc ve NΔE (NΔE-GV) Gal4/VP16-öğesini ifade başka bir istikrarlı hücre HEK elde edilen satır (NG) oluşturulan. Bu roman substrat özgü γ-secretase deneyleri kullanarak, biz şimdi ölçmek ve γ-secretase farklı yüzeylerde (CG hücrelerindeki APP-C99) veya NΔE NG hücrelere doğru katalitik aktivitesini ayırt etmek için bir yöntem sağlar. Ayrıca, substrat özgü γ-secretase deneyleri yüksek içerik tarama platformları için elverişli olması için tasarlanmıştır. Bu yeni oluşturulan γ-secretase deneyleri bilişsel işlev yeni nesil tedavisi için istenmeyen çentik inhibisyon alabilme olmadan Aβ üretim baskılayarak artırabilirsiniz roman γ-secretase modülatörler keşfi için önünü açabilir Reklam.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>VictorLight luminescence plate reader</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>2030-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II, Type 2 Biological Safety Cabinet</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1300 Series A2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CL-387,785</td>
			<td>EMD Calbiochem</td>
			<td>233100-1MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPT</td>
			<td>Merck</td>
			<td>565770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12100046</td>
			<td>main compnent of growth medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blasticidin</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A1113903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeocin</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>R25005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hygromycin B</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10687010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytomer</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>BR717805 Aldrich</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well microplate</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>156545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetracycline</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T7660</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steady-Glo luciferase assay reagent</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E2510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidified CO2 incubator</td>
			<td>Revco</td>
			<td>Ultima II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-REx293 cell line</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>R71007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wallac 1420 software version 3.0</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td>instrument control software of the luminescence microplate reader</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative measurement of &#947;-secretase-mediated amyloid precursor protein and notch cleavage in cell-based luciferase reporter assay platforms

Biz hücre tabanlı muhabir gen deneyleri kantitatif farklı yüzeylerde γ-secretase bölünme ölçmek için bir çift geliştirdik. Bu el yazması γ-secretase-aracılı bölünme APP-C99 veya çentik, bir Gal4 ateş böceği organizatörü tahrik luciferase muhabir sistemi kullanarak izlemek için kullanılan yordamları açıklar. Bu deneyleri stabil CO HEK293 hücreleri Gal4 tahrik luciferase muhabir gen ve app (APP-C99; Gal4/VP16-tagged C-terminal parça transfecting tarafından kuruldu CG hücreleri), veya Gal4/VP16-etiketli çentik-ΔE (NΔE; NG hücreleri). Bu muhabir deneyleri paralel olarak kullanarak, biz bu göstermiştir bir ErbB2 inhibitörü CL-387,785, tercihen γ-secretase bölünme APP-C99 CG hücrelerdeki ama değil NΔE NG hücrelerdeki bastırmak. CL-387,785 ile tedavi ederken CG ve NG hücreleri tarafından sergilenen fark yanıt γ-secretase modülatörler için tercih edilen bir karakteristik, hem de bu yanıtları γ-secretase DAPT tarafından indüklenen pan inhibisyonu alışılmışın tersine olan. Çalışmalarımız γ-secretase faaliyetleri farklı yüzeylerde doğru hücresel bir bağlamda farklılaşmış doğrudan kanıt sağlar. Bu yeni deneyleri bu nedenle ilaç keşif geliştirilmiş AD tedaviler için yararlı araçlar olabilir.

İnhibisyon ErbB2 CL-387,785 tarafından differentially APP-C99 tarafından işlenmesini teşvik γ -secretase çentik bölünme etkilemeden Kantitatif belirli γ-secretase substrat proteolitik bölünme ölçebilirsiniz hücre tabanlı bir tahlil oluşturmak için biz oluşturulan CG HEK293 elde edilen hücre kültürünü bir tetrasiklin-indüklenebilir C-ölümcül Gal4/VP16-öğesini, istikrarlı co transfection tarafından APP-C99...

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Measurement of ÃŽÂ³-Secretase-mediated Amyloid Precursor Protein and Notch Cleavage in Cell-based Luciferase Reporter Assay Platforms at JoVE.com

Quantitative Measurement of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³-Secretase-mediated Amyloid Precursor Protein and Notch Cleavage in Cell-based Luciferase Reporter Assay Platforms

Amiloid habercisi γ-Secretase-aracılı Protein ve çentik bölünme hücre tabanlı Luciferase muhabir tahlil platformlarda nicel ölçüm

İki substrat özgü γ-secretase deneyleri başarılı bir şekilde üretilip. Burada sunulan her iki hücre tabanlı deneyleri γ-secretase enzimatik faaliyetleri yolu ile ateş böceği luciferase gazetecilere verim ölçmek için tasarlanmıştır.

We have developed a pair of cell-based reporter gene assays to quantitatively measure &#947;-secretase cleavage of distinct substrates. This manuscript ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Quantitative Measurement of &#947;-Secretase-mediated Amyloid Precursor Protein and Notch Cleavage in Cell-based Luciferase Reporter Assay Platforms

Selection of Aptamers for Amyloid &beta;-Protein, the Causative Agent of Alzheimer&#39;s Disease

Selection of Aptamers for Amyloid ÃƒÅ½Ã‚Â²-Protein, the Causative Agent of Alzheimer's Disease

Amiloid beta-Protein, Alzheimer hastalığının etkeni Aptamers Seçimi

Alzheimer's disease (AD) is a progressive, age-dependent, neurodegenerative disorder with an insidious course that renders its presymptomatic diagnosis ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

A Galvanotaxis Assay for Analysis of Neural Precursor Cell Migration Kinetics in an Externally Applied Direct Current Electric Field

Dıştan Uygulanan Doğru Akım Elektrik Alanında Nöral Prekürsör Hücre Göç Kinetik Analizi için galvanotaksis Assay

The discovery of neural stem and progenitor  cells (collectively termed neural precursor cells) (NPCs) in the adult  mammalian brain has led to a body of ...

High-throughput Analysis of Mammalian Olfactory Receptors: Measurement of Receptor Activation via Luciferase Activity

Lusiferaz aktivitesi ile reseptör aktivasyonunun bir ölçümü: Memeli Koku reseptörünün yüksek throughput Analizi

Odorants create unique and overlapping patterns of olfactory receptor activation, allowing a family of approximately 1,000 murine and 400 human receptors ...

Detection of In Situ Protein-protein Complexes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction Using Proximity Ligation Assay

Detection of In Situ Protein-protein Complexes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction Using Proximity Ligation Assay

Algılama<em&gt; In Situ</emEn&gt; Protein-protein kompleksleri<em&gt; Drosophila</emProximity ligasyon Testi Kullanımı&gt; Larva Nöromüsküler Junction

Discs large (Dlg) is a conserved member of the membrane-associated guanylate kinase family, and serves as a major scaffolding protein at the larval ...

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Fare Hippocampus içine Oligomerik Amiloid-beta Stereotaksik İnfüzyon

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

Quantitative Measurement of Relative Retinoic Acid Levels in E8.5 Embryos and Neurosphere Cultures Using the F9 RARE-Lacz Cell-based Reporter Assay

F9 NADİR-LacZ Hücre tabanlı Muhabir Test kullanma E8.5 Embriyolar ve Neurosphere Kültürleri Bağıl Retinoik Asit Düzeylerinin Kantitatif Ölçümü

Retinoic acid (RA) is an important developmental morphogen that coordinates anteroposterior and dorsoventral axis patterning, somitic differentiation, ...

Modeling Amyloid-&#946;42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

Modeling Amyloid-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

Amiloid β42 toksisite ve ateş yetişkin Zebra balığı beyinde modelleme

Alzheimer's disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease in which accumulation of toxic amyloid-&#946;42 (A&#946;42) peptides leads to ...

Assay Development for High Content Quantification of Sod1 Mutant Protein Aggregate Formation in Living Cells

Yüksek içerik miktar Sod1 canlı hücreler Mutant Protein toplama oluşumu için tahlil geliştirme

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc ...

Quantitative Autoradiographic Method for Determination of Regional Rates of Cerebral Protein Synthesis In Vivo

Serebral protein sentezi In vivo bölgesel oranlarının belirlenmesi için nicel Autoradiographic yöntemi

Protein synthesis is required for development and maintenance of neuronal function and is involved in adaptive changes in the nervous system. Moreover, it ...