Name: detection and quantification of plasmodium falciparum in aqueous red blood cells by attenuated total reflection infrared spectroscopy and multivariate data analysis
Uploaded: 2018-11-02T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection and Quantification of Plasmodium falciparum in Aqueous Red Blood Cells by Attenuated Total Reflection Infrared Spectroscopy and Multivariate Data An

تم توفير التمويل للمؤلفين من قبل "مجلس البحوث الأسترالية" (مستقبل الزمالة FT120100926 إلى برو)، الوطنية الصحية والطبية البحوث مجلس أستراليا (برنامج المنح و "زمالة للبحث أقدم" للبنوك؛ أوائل الوظيفي زمالات جسر؛ البنية التحتية للبحوث معاهد دعم نظام المنح للمعهد برنيت)، ودعم البنية التحتية التشغيلية حكومة الدولة الفيكتوري منحة لمعهد برنيت. ونسلم السيد فينلي شانكس لدعم دور فعال.

الرجاء استشارة مناسبة صحائف بيانات سلامة المواد (MSDS) والتماس السلامة الأحيائية المستوى 2 (BSL-2) توفير التدريب المناسب. يجب القيام بجميع الخطوات تثقيف في خزانة BSL-2 استخدام تقنية العقيم، بمعنى أن هناك خطر تعرض للأشعة فوق البنفسجية الضارة من خطوات إزالة التلوث والإصابة بإبرة عصا الإصابات، وال?...

<ol>
	<li>Hommel, M., Gilles, H., Collier, L., Balows, A., Sussman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+20.">Chapter 20.</a> Topley &amp; Wilson's Microbiology and Microbial Infections. Vol. 5 Parasitology. , 361 (1998).</li><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> World Malaria Report 2016. , (2016).</li><li>Rogers, W., Murray, P., Baron, E., Pflaller, M., Tenover, F., Yolken, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+105.">Chapter 105.</a> Manual of Clinical Microbiology. , 1355 (1999).</li><li>White, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+9.">Chapter 9.</a> Manson's Tropical Infectious Diseases. 23, 532-600 (2014).</li><li>Lindblade, K. A., Steinhardt, L., Samuels, A., Kachur, S. P., Slutsker, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+silent+threat:+asymptomatic+parasitemia+and+malaria+transmission.">The silent threat: asymptomatic parasitemia and malaria transmission.</a> Expert Rev Anti Infect Ther. 11 (6), 623-639 (2013).</li><li>Hanscheid, T., Grobusch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+useful+is+PCR+in+the+diagnosis+of+malaria.">How useful is PCR in the diagnosis of malaria.</a> Trends Parasitol. 18 (9), 395-398 (2002).</li><li>Joanny, F., L&#246;hr, S. J., Engleitner, T., Lell, B., Mordm&#252;ller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limit+of+blank+and+limit+of+detection+of+Plasmodium+falciparum+thick+blood+smear+microscopy+in+a+routine+setting+in+Central+Africa.">Limit of blank and limit of detection of Plasmodium falciparum thick blood smear microscopy in a routine setting in Central Africa.</a> Malar J. 13 (1), 234-241 (2014).</li><li>World Health Organisation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Malaria Rapid Diagnostic Test Performance: results of WHO product testing of malaria RDTs: round 6 (2014-2015). , (2014).</li><li>Khoshmanesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+quantification+of+early-stage+malaria+parasites+in+laboratory+infected+erythrocytes+by+attenuated+total+reflectance+infrared+spectroscopy+and+multivariate+analysis.">Detection and quantification of early-stage malaria parasites in laboratory infected erythrocytes by attenuated total reflectance infrared spectroscopy and multivariate analysis.</a> Anal Chem. 86, 4379-4386 (2014).</li><li>Martin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+common+anticoagulants+in+detection+and+quantification+of+malaria+parasitemia+in+human+red+blood+cells+by+ATR-FTIR+spectroscopy.">The effect of common anticoagulants in detection and quantification of malaria parasitemia in human red blood cells by ATR-FTIR spectroscopy.</a> Anal. 142 (8), 1192-1199 (2017).</li><li>Fabian, H., M&#228;ntele, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Vibrational Spectroscopy. , (2006).</li><li>Whelan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+the+reversible+B+to+A-like+transition+of+DNA+in+eukaryotic+cells+using+Fourier+transform+infrared+spectroscoptMonitoring+the+reversible+B+to+A-like+transition+of+DNA+in+eukaryotic+cells+using+Fourier+transform+infrared+spectroscopy.">Monitoring the reversible B to A-like transition of DNA in eukaryotic cells using Fourier transform infrared spectroscoptMonitoring the reversible B to A-like transition of DNA in eukaryotic cells using Fourier transform infrared spectroscopy.</a> Nucleic Acid Res. 39 (13), 5439-5448 (2011).</li><li>Wood, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+hydration+and+DNA+conformation+in+interpreting+infrared+spectra+of+cells+and+tissues.">The importance of hydration and DNA conformation in interpreting infrared spectra of cells and tissues.</a> Chem Soc Rev. 45, 1980-1998 (1980).</li><li>Plyler, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infrared+spectra+of+methanol,+ethanol,+and+rn-propanol.">Infrared spectra of methanol, ethanol, and rn-propanol.</a> J Res Natl Bur Stand. 48 (4), (1952).</li></ol>

نموذج الثابتة والمتنقلة-R هو أسلوب متعدد المتغيرات تحت إشراف يرى وجود علاقة خطية، Y = bX + ه، بين المتغيرات التنبؤية X (هنا، امتصاص في كل وافينومبير) ومستمر متغير Y (هنا، ومستوى تطفلن). وباختصار، النموذج يجمع بين المتغيرات في العاشر لإنشاء مجموعة جديدة من المتغيرات الكامنة (LVs) أن القبض على الفر?...

الملاريا من بين الأمراض الأكثر تدميرا في عصرنا؛ ويعيش أكثر من نصف السكان المعرضين للخطر في المناطق الموبوءة، وأنها تشكل عبئا غير متناسب الفقراء1،2،،من34. جزء كبير من هذه المسألة هو أعراض الناقلين وأوائل المرحلة المرضى التي تعمل كخزانات للبعوضة الناقلة5، تسبب طفرات عدوى خلال مواسم الرطب ويسمح لها بالاستمرار في المجتمعات المحلية. بسبب الملاريا خمسة المتصورة الطفيليات، وهي الأكثر دموية التي المنجلية التي تسبب أشد أشكال المرض2.
تقنيات لتشخيص الملاريا حاليا أقل من الكمال. يمكن كشف بصرية مجهرية، معيار الذهب الحالي، فقط 62-88/ميليلتر الطفيليات اعتماداً على الطريقة المستخدمة6. وعلاوة على ذلك، نظراً لكثافة والمهارة العالية المطلوبة، في العديد من مناطق الفحص المجهري ميسدياجنوسيس > 50% حالات، لا سيما المصابين بالطفيليات تدني المستويات2، التي يمكن أن تعزى مباشرة إلى الافتقار إلى الموارد في المنطقة والنتائج في إساءة استخدام العقاقير المضادة للملاريا. 2 الرئيسية التشخيص أساليب أخرى هي "الاختبارات التشخيصية السريعة" (اختبارات)، التي تستخدم الأجسام المضادة للكشف، وفحوصات Polymerase سلسلة من ردود الفعل (الاسترداد)، التي تنطوي على تمييز وتحديد كمية الطفيليات من الحمض النووي. اختبارات حاليا فقط قادراً على الكشف عن المنجلية و النشيطة P. للطفيليات على الأقل 100/ميليلتر من الدم أدى إلى أشكال أكثر ندرة هذا المرض دون علاج. 7 , 8 وفي المقابل، تميز فحوصات بكر والتحديد الكمي للأنواع المختلفة من المتصورة في حساسية 0.0004-5 الطفيليات/ميليلتر دم. ومع ذلك، يتطلب الكواشف باهظة الثمن، والمعدات والمهارات التقنية، وهكذا ليست مناسبة للتطبيق الميداني.
تقنية بالغة الحساسية، ويمكن الاعتماد عليها ومعقولة أمر أساسي لتحسين تشخيص مرات، وبالتالي تحسين نتائج المرضى ومما يجعل من الممكن القضاء على المرض. مجموع انعكاس فورييه الموهنة التحويل (أية تي آر-فتير) التحليل الطيفي يقدم حل محتملة لهذه المشكلة. العمل السابقة قد أظهرت أنه من الممكن لكشف وتحديد المنجلية في الميثانول الثابتة الأفلام الدم تحقيق حدود الكشف < 1 الطفيلي/ميليلتر من الدم (< تطفلن 0.0002 ٪)9، وشبيهة بطرق PCR. وقد أظهرت الدراسات الأخيرة أن من الممكن للكشف والتحديد الكمي للطفيليات في عينات مائي وبالتالي القضاء على خطوة التثبيت. ومع ذلك، عوامل مثل بخار الماء والضوضاء الطيفية ومعالجة البيانات بحاجة إلى أن تؤخذ في الاعتبار لتحقيق أفضل النتائج10.
هذا البروتوكول يهدف إلى إظهار المستخدمين الجدد كيفية اكتساب الأطياف ATR-فتير وإعداد نموذج انحدار للكشف عن المنجلية من العينات المائية في "خلايا الدم الحمراء" (RBC)10.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Donor blood</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Must be collected by a trained medical practitioner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stock blood</td>
			<td>Australian Red Cross`</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D7 Plasmodium falciparum</td>
			<td>The Burnet Institute</td>
			<td>-</td>
			<td>Laboratory strain wild type equivalent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 media with L-hepes without Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R6504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albumax (Gibco)</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>E003000PJ</td>
			<td>Aliquot into 50 mL falcon tubes and store in freezer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Giemsa Stain</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>48900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorbitol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S1876</td>
			<td>Must be filtered before use in culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blood collection tubes (Vacutainers)</td>
			<td>Becton, Dickonson and Company</td>
			<td>367671</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immersion Oil</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>M3004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL culture dishes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25mL pipette tips</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>357515</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10mL pipette tips</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>357530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S8902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes 50 mL</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T2318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated pipette controller</td>
			<td>Integra-biosciences</td>
			<td>155 015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend X1R Centrifuge</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>75004260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forma&#8482; 310 Direct Heat CO2 Incubators</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>310TS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse E-100 Binocular Microscope</td>
			<td>Nikon Instruments</td>
			<td>E100_2CE-MRTK-1</td>
			<td>When purchasing ensure that the 100x lens is an oil immersion lens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bruker Alpha Ft-IR Spectrometer with ATR Quick Snap Attachment</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>9308-3700</td>
			<td>Be sure to request &#34;Eco-ATR&#34; attachment when purchasing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matlab</td>
			<td>Mathworks Inc</td>
			<td></td>
			<td>Multivariate data analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The Unscrambler X</td>
			<td>CAMO</td>
			<td></td>
			<td>Multivariate data analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLS-Toolbox</td>
			<td>Mathworks, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>GUI for Matlab</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection and quantification of plasmodium falciparum in aqueous red blood cells by attenuated total reflection infrared spectroscopy and multivariate data analysis

نظهر أسلوب القياس الكمي والكشف عن الطفيليات في مائي خلايا الدم الحمراء (كرات الدم الحمراء) باستخدام benchtop بسيطة مطياف "يخفف مجموع انعكاس فورييه تحويل الأشعة تحت الحمراء" (أية تي آر-فتير) بالاشتراك مع (تحليل البيانات متعددة مفدا). 7 3 المنجلية مثقف للطفيليات مرحلة خاتم تطفلن 10% ويستخدم لارتفاع كرات الدم الحمراء المانحة جديدة معزولة لإنشاء إضعاف سلسلة بين 0 – 1%. ووضعت 10 ميليلتر لكل عينة في وسط النافذة الماس ATR للحصول على الطيف. وعولج نموذج البيانات لتحسين إشارة إلى نسبة الضوضاء وإزالة مساهمة المياه، وثم طبق المشتقة الثانية لحل الخصائص الطيفية. ثم حللت البيانات باستخدام نوعين من مفدا: الأولى الرئيسية مكون تحليل (PCA) لتحديد أي القيم المتطرفة ومن ثم "انحدار المربعات الجزئية" (الثابتة والمتنقلة-R) بناء نموذج القياس الكمي.

ارسم المربعات الجزئية (الثابتة والمتنقلة-R) ولها متجه الانحدار المرتبطة بها، و الشكل 1a و 1b على التوالي، تبين أن الإشارة من الطفيليات متميزة ما يكفي من كرات الدم الحمراء التي يمكن استخدامها للنموذج نموذج انحدار خطي لاستخدامها التنبؤ بالطفيليات ف?...

Watch this Scientific Journal Video about Detection and Quantification of Plasmodium falciparum in Aqueous Red Blood Cells by Attenuated Total Reflection Infrared Spectroscopy and Multivariate Data An

Detection and Quantification of Plasmodium falciparum in Aqueous Red Blood Cells by Attenuated Total Reflection Infrared Spectroscopy and Multivariate Data Analysis

الكشف والتحديد الكمي المنجلية في "مائي خلايا الدم الحمراء" بتخفيف مجموع انعكاس الأشعة تحت الحمراء الطيفي وتحليل البيانات متغير

نقدم هنا، على بروتوكول للكشف والتحديد الكمي المنجلية في المصابين خلايا الدم الحمراء مائي استخدام الانعكاس الكلي الموهنة مطياف الأشعة تحت الحمراء وتحليل بيانات متعددة المتغيرات.

We demonstrate a method of quantification and detection of parasites in aqueous red blood cells (RBCs) by using a simple benchtop Attenuated Total ...

الهدف العام لهذا الإجراء هو بناء نموذج انحداري للتنبؤ بطفيليات الملاريا باستخدام التحليل الطيفي ATR-FTIR مع تحليل البيانات متعددة المتغيرات. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في تسريع تشخيص نقاط الرعاية التي يمكن أن تساعد في تحسين نتائج المرضى في المستقبل. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هو أنه في حين أن النموذج قد يستغرق بعض الوقت لبناء, فمن المحمولة للغاية, سهلة الاستعمال, حساسة للغاية, ومنخفضة التكلفة.وعلى الرغم من أن هذه الطريقة تمكن من تحديد كمية طفيليات الملاريا، إلا أنه يمكن استخدامها أيضاً لمراقبة استجابة الظاهريات للتغيرات البيئية مثل التغيرات في تكوين الطفيليات بسبب العوامل المضادة للميكروبات. الفكرة تطورت من العمل الذي قمنا به في السنكروترون الأسترالي على الخلايا المصابة بالملاريا. كان هذا على مستوى الخلية الواحدة.من هناك، قررنا استخدام التحليل الطيفي ATR-FTIR لتطوير الاختبار التشخيصي في الواقع. قبل البدء في إجراء التزامن ، والثقافة 30 ملليلتر من 3D7 سلالة الطفيليات فالسيباروم Plasmodium كما هو موضح في بروتوكول النص. باستخدام ماصة مؤتمتة، resuspend الثقافة ونقلها إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر.أجهزة الطرد المركزي في الثقافة في 300 إلى 400 مرة ز في ظل ظروف المختبر القياسية لمدة خمس دقائق. إزالة المابير عن طريق رسمها مع ماصة الآلي دون إزعاج بيليه. تجاهل وسائل الإعلام النفايات في حل 10٪التبييض.إضافة ببطء 12 إلى 15 ملليلتر من محلول السوربيتول 4٪ إلى بيليه وخلط الثقافة عن طريق تغطية وعكس الأنبوب حتى الثقافة متجانسة. احتضان الثقافة في 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. بعد 15 دقيقة، جهاز طرد مركزي الثقافة لمدة خمس دقائق.استخدام ماصة الآلي لإزالة افرات دون إزعاج بيليه. إضافة 10 إلى 15 ملليلتر من 0.9٪ ملحي إلى بيليه وخلط الحل عن طريق وضع حد لمعادلة وعكس الأنبوب حتى تكون الثقافة متجانسة. كرر الطرد المركزي والمحلول الملحي غسل مرتين أكثر لإزالة جميع بقايا السوربيتول.لبدء هذا الإجراء، الطرد المركزي مخزون خلايا الدم الحمراء، أو RBCs. إزالة افرنح وغسل مع 0.9٪ المالحة ما مجموعه ثلاث مرات. الطرد المركزي الأسهم RBCs والثقافة في 300 إلى 400 مرات ز لمدة خمس دقائق والتخلص من افرط من كل أنبوب.تسمية ثمانية أنابيب microcentrifuge كما هو مبين. ثم استخدم ماصة 0.2 إلى 20 ميكرولتر لإضافة الكمية المناسبة من الثقافة لكل أنبوب. بعد ذلك ، أضف الكمية المناسبة من الأسهم RBCs لكل أنبوب للحصول على تخفيف الطفيليات المرغوب فيها.أجهزة الطرد المركزي الدم المتبرع الطازجة التي تم جمعها في أنابيب تخثر في 1، 200 مرة ز والظروف المختبرية القياسية لمدة 10 دقائق. إزالة البلازما عن طريق رسمها مع ماصة والتخلص منه في حل 10٪التبييض. إضافة 900 ميكرولترات من RBCs المانحة المعزولة في كل أنبوبrifuge microcentuge ومزيج دقيق عن طريق عكس 10 مرات.وسيتم استخدام بسيطة benchtop atuated الانعكاس الكلي فورييه تحويل الأشعة تحت الحمراء، أو مطياف ATR-FTIR للحصول على الطيف. إعداد وتنظيف الكريستال باستخدام مناديل خالية من الوبر مبللة بالماء النقي جدا لفرك بلطف الكريستال في حركة دائرية. ثم، استخدام آخر مسح خالية من الوبر لتجفيف بدقة الكريستال.اتخاذ قياس الخلفية من الهواء عن طريق النقر فوق قياس الخلفية. كل 20 دقيقة، وتنظيف الكريستال وتكرار هذا القياس. افتح العرض المباشر بالنقر فوق معاينة.لاحظ خط أساس أفقي مسطح يشير إلى أن البلورة نظيفة. Pipette 10 ميكرولترات من المياه ديوند مباشرة على منتصف الكريستال وانقر فوق قياس العينة. جفف الكريستال باستخدام مسح خال من الوبر والحركة الدائرية اللطيفة.Pipette 10 ميكرولترات من عينة على منتصف الكريستال وانقر فوق قياس العينة. تنظيف الكريستال بين العينات. في هذا العرض التوضيحي، سيتم إجراء تحليل البيانات متعددة المتغيرات باستخدام MATLAB.لبدء معالجة البيانات، تحليل الإدخال في إطار الأوامر لفتح واجهة مستخدم الرسومات. انقر بزر الماوس الأيمن فوق المربع س للعثور على استيراد البيانات. حدد نوع الملف للتحليل.استيراد العينة والمياه وأطياف الأساس كـ مجموعات بيانات في مكان العمل عن طريق تحديد كل الأطياف في كل مجموعة على حدة، والنقر فوق فتح، وإعطاء كل مجموعة اسمًا قصيرًا. انقر فوق متغير جديد في إطار الأوامر وإعطاء ناقلات اسم الطفيليات. إدخال الطفيليات من كل عينة.انقر بزر الماوس الأيمن فوق المربع X للبحث عن بيانات الرسم. انقر فوق رمز بيانات الرسم لرسم البيانات. فحص الأطياف لتأثيرات بخار الماء عن طريق النقر على التكبير والتكبير على 1، 800 إلى 1، 400 لكل سنتيمتر، لوحظ بشكل واضح على أنها قصيرة، حادة، قمم ضيقة على طول سفوح النطاقات أميد الأول وأيديش الثاني.في حالات بخار الماء الشديد، افتح علامة التبويب تحرير البيانات قبل المعالجة وحدد النعومة. تقليل الضوضاء و / أو مساهمات بخار الماء القوية عن طريق تجانس العينة وأطياف المياه. بعد معالجة البيانات كما هو موضح في بروتوكول النص، افتح علامة التبويب تحرير البيانات، وفي متغيرات الأعمدة، حدد 2980 إلى 2800 لكل سنتيمتر ومن 1750 إلى 850 لكل سنتيمتر عن طريق التأكد من وضع علامة على مربعاتها فقط.البيانات جاهزة الآن للتحليل. لتنفيذ تحليل المكون الأساسي أو PCA، انقر فوق تحليل التحليل وحدد PCA. انقر فوق إنشاء طراز.مراقبة حد الثقة 95٪، حلقة متقطعة، على مؤامرة عشرات بين PC 1 و PC 2. استخدم أداة تحديد الأطياف لتحديد أطياف العينة مع الدرجات التي تحدث خارج الحد كتهامات خارجية محتملة. لتنفيذ انحدار مربعات جزئية أقل، أو PLSR، انقر فوق تحليل الانحدار وحدد PLSR.انقر بزر الماوس الأيمن فوق كتلة Y وحدد نموذج بناء الطفيليات المتجهة. تحليل نموذج الانحدار و متجه الانحدار وتحديد النطاقات البيولوجية. جزئية أقل المربعات مخطط الانحدار من RBCs ارتفعت بين صفر إلى واحد في المئة Parasitemia ولدت قيمة R-تربيع من 0.87 و جذر متوسط مربع خطأ التحقق من صحة الصليب من 0.13٪ الطفيلي.وهذا يدل على قدرة النموذج على التنبؤ الطفيلي في كل عينة مع الطفيليات المعروفة على محور س و الطفيليات المتوقعة على المحور ص. ويصف معامل الانحدار المرتبط به مساهمة كل نطاق في القدرة التنبؤية للنموذج. كلما كان النطاق أكثر كثافة ، كلما ساهم في النموذج ، وبالتالي ، كيف يغير الطفيلي التركيب الكيميائي للدم.وتبين النتائج أن الإشارة من الطفيليات متميزة بما فيه الكفاية عن الـ RBCs بحيث يمكن استخدامها لتشكيل نموذج انحدار خطي للتنبؤ بالطفيليات في مجموعات البيانات المستقبلية. بمجرد اتقانها، يمكن أن تستغرق هذه التقنية أقل من ثلاث دقائق لكل عينة إذا تم تنفيذها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نتذكر لتنظيف بلورات ATR من جميع المخلفات.بعد هذا الإجراء، يمكن نمسخ أنواع أخرى من الملاريا مثل P vivax و P الملاريا من أجل الإجابة على مثل هذه الأسئلة مثل، هل ATR-FTIR الطيفي حساسة بما يكفي للتمييز بين الأنواع؟ بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الفحص البيولوجي لاستكشاف الكشف عن وتكميم مسببات الأمراض الأخرى المنقولة بالدم وحتى التحليل في الدم مثل الجلوكوز واليوريا. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد للطيفية ATR -FTIR وتحليل NVDA لبناء نموذج الانحدار.لا تنس أن العمل مع عينات دم المريض والملاريا يمكن أن يكون خطيرا، وينبغي دائما التدريب المناسب على مستوى السلامة الحيوية والاحتواء عند محاولة هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Detection and Quantification of Plasmodium falciparum in Aqueous Red Blood Cells by Attenuated Total Reflection Infrared Spectroscopy and Multivariate Data Analysis

In Situ SIMS and IR Spectroscopy of Well-defined Surfaces Prepared by Soft Landing of Mass-selected Ions

In Situ SIMS and IR Spectroscopy of Well-defined Surfaces Prepared by Soft Landing of Mass-selected Ions

في الموقع سيمز والأشعة تحت الحمراء الطيفي من السطوح محددة جيدا من إعداد لينة الهبوط من الأيونات اختيارها قداس-

Soft landing of mass-selected ions onto surfaces is a powerful approach for the highly-controlled preparation of materials that are inaccessible using ...

Radiolabeling and Quantification of Cellular Levels of Phosphoinositides by High Performance Liquid Chromatography-coupled Flow Scintillation

Radiolabeling والكمي لمستويات الخلايا من Phosphoinositides التي كتبها التلألؤ تدفق عالية الأداء اللوني السائل الديناميكي

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular ...

Construction of Models for Nondestructive Prediction of Ingredient Contents in Blueberries by Near-infrared Spectroscopy Based on HPLC Measurements

بناء نماذج التنبؤ تدميري من مكونات المحتويات في العنب البري بواسطة التحليل الطيفي القريبة من الأشعة تحت الحمراء بناء على قياسات HPLC

Nondestructive prediction of ingredient contents of farm products is useful to ship and sell the products with guaranteed qualities. Here, near-infrared ...

In Situ Detection and Single Cell Quantification of Metal Oxide Nanoparticles Using Nuclear Microprobe Analysis

In Situ Detection and Single Cell Quantification of Metal Oxide Nanoparticles Using Nuclear Microprobe Analysis

في الموقع الكشف والتحديد الكمي خلية مفردة لجسيمات نانوية أكسيد المعدن باستخدام تحليل ميكروبروبي النووية

Micro-analytical techniques based on chemical element imaging enable the localization and quantification of chemical composition at the cellular level. ...

Electrochemical Impedance Spectroscopy as a Tool for Electrochemical Rate Constant Estimation

المعاوقة الكهروكيميائية التحليل الطيفي كأداة لتقدير معدل الكهروكيميائية المستمر

Electrochemical impedance spectroscopy (EIS) was used for advanced characterization of organic electroactive compounds along with cyclic voltammetry (CV). ...

DNA-magnetic Particle Binding Analysis by Dynamic and Electrophoretic Light Scattering

الحمض النووي-المغناطيسي الجسيمات ربط التحليل بتشتت الضوء الديناميكي والغرواني الكهربي

Isolation of DNA using magnetic particles is a field of high importance in biotechnology and molecular biology research. This protocol describes the ...

Total Internal Reflection Absorption Spectroscopy (TIRAS) for the Detection of Solvated Electrons at a Plasma-liquid Interface

Total Internal Reflection Absorption Spectroscopy TIRAS for the Detection of Solvated Electrons at a Plasma-liquid Interface

التأمل الداخلي الإجمالي الامتصاص الطيفي (تيرس) للكشف عن ومذاوبة الإلكترونات في واجهة سائل البلازما

The total internal reflection absorption spectroscopy (TIRAS) method presented in this article uses an inexpensive diode laser to detect solvated ...

Elemental-sensitive Detection of the Chemistry in Batteries through Soft X-ray Absorption Spectroscopy and Resonant Inelastic X-ray Scattering

الكشف عن عنصري المراعية لمادة الكيمياء في البطاريات عن طريق التحليل الطيفي امتصاص الأشعة السينية اللينة، وتبعثر الأشعة السينية غير مرن رنانة

Energy storage has become more and more a limiting factor of today's sustainable energy applications, including electric vehicles and green electric grid ...

Characterizing Lewis Pairs Using Titration Coupled with In Situ Infrared Spectroscopy

توصيف لويس أزواج باستخدام المعايرة إلى جانب التحليل الطيفي الأشعة تحت الحمراء في الموقع

Lewis acid-activation of carbonyl-containing substrates is a fundamental basis for facilitating transformations in organic chemistry. Historically, ...

Covalent Attachment of Single Molecules for AFM-based Force Spectroscopy

مرفق التكافؤ من جزيئات واحدة للتنظير الطيفي للقوة المستندة إلى AFM

Atomic force microscopy (AFM)-based single molecule force spectroscopy is an ideal tool for investigating the interactions between a single polymer and ...