Name: a western blotting protocol for small numbers of hematopoietic stem cells
Uploaded: 2018-08-22T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Western Blotting Protocol for Small Numbers of Hematopoietic Stem Cells at JoVE.com

מכוני הבריאות הלאומיים הענק R01 CA149976 (גיל חזן) נתמך עבודה זו.

כל ההליכים חייב להתבצע על פי הנחיות טיפול ושימוש בבעלי חיים מוסדיים. ההליך פותחה עבור הניתוח של מאתר hematopoietic גזע תאים וקדמון (HSCs ו HPs), אך ניתן להתאים לניתוח של אוכלוסיות תאים אחרים.
1. לזרום Cytometry בידוד HSCs מאתר ו HPs
<ol><li>קציר תאים במח העצם מאתר כמתואר ב-6ספרות. הער?...

<ol>
	<li>Krutzik, P. O., Clutter, M. R., Nolan, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinate+analysis+of+murine+immune+cell+surface+markers+and+intracellular+phosphoproteins+by+flow+cytometry.">Coordinate analysis of murine immune cell surface markers and intracellular phosphoproteins by flow cytometry.</a> J Immunol. 175 (4), 2357-2365 (2005).</li><li>Du, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+profiling+at+the+single-cell+level+identifies+a+distinct+signaling+signature+in+murine+hematopoietic+stem+cells.">Signaling profiling at the single-cell level identifies a distinct signaling signature in murine hematopoietic stem cells.</a> Stem Cells. 30 (7), 1447-1454 (2012).</li><li>Signer, R. A., Magee, J. A., Salic, A., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haematopoietic+stem+cells+require+a+highly+regulated+protein+synthesis+rate.">Haematopoietic stem cells require a highly regulated protein synthesis rate.</a> Nature. 509 (7498), 49-54 (2014).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+differentiation+checkpoint+limits+hematopoietic+stem+cell+self-renewal+in+response+to+DNA+damage.">A differentiation checkpoint limits hematopoietic stem cell self-renewal in response to DNA damage.</a> Cell. 148 (5), 1001-1014 (2012).</li><li>Hoshii, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTORC1+is+essential+for+leukemia+propagation+but+not+stem+cell+self-renewal.">mTORC1 is essential for leukemia propagation but not stem cell self-renewal.</a> J Clin Invest. 122 (6), 2114-2129 (2012).</li><li>Signer, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rate+of+protein+synthesis+in+hematopoietic+stem+cells+is+limited+partly+by+4E-BPs.">The rate of protein synthesis in hematopoietic stem cells is limited partly by 4E-BPs.</a> Genes Dev. 30 (15), 1698-1703 (2016).</li><li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Runx1+deficiency+decreases+ribosome+biogenesis+and+confers+stress+resistance+to+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells.">Runx1 deficiency decreases ribosome biogenesis and confers stress resistance to hematopoietic stem and progenitor cells.</a> Cell Stem Cell. , (2015).</li><li>Loven, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+global+gene+expression+analysis.">Revisiting global gene expression analysis.</a> Cell. 151 (3), 476-482 (2012).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+a+Hemoacytometer+to+Count+Cells.">Using a Hemoacytometer to Count Cells.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2017).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separating+Protein+with+SDS-PAGE.">Separating Protein with SDS-PAGE.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2017).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Western+Blot.">The Western Blot.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2017).</li><li>Jackson, R. J., Hellen, C. U., Pestova, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanism+of+eukaryotic+translation+initiation+and+principles+of+its+regulation.">The mechanism of eukaryotic translation initiation and principles of its regulation.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 11 (2), 113-127 (2010).</li><li>Eaton, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+modern+quantitative+fluorescent+western+blotting+with+troubleshooting+strategies.">A guide to modern quantitative fluorescent western blotting with troubleshooting strategies.</a> J Vis Exp. (93), e52099 (2014).</li></ol>

סופג המערבי הוא שיטה מקובלת לגילוי חלבונים ספציפיים והפעלה של איתות המסלולים רקמות או תאים. על ידי הצגת שינויים קטנים הליך נפוץ, היינו מסוגלים לזהות באופן שגרתי חלבונים שונים 15 (טבלה של חומרים) ב- 15,000 HSCs, ובחלק מן המקרים תוך 500 HSCs. The most השלבים הקריטיים של פרוטוקול זה הם: ספירת התאים ?...

תאי גזע hematopoietic (HSCs) הם תאים עצמי המתחדש יכולים להצמיח כל דם שושלות. הם נדירים יחסית תאים במח העצם, עיבוד ביוכימי ניתוחים קשים. גישות מתאימים לניתוח תאים נדירים, כמו cytometry זרימה, היה מאוד שימושי עבור לכימות כמויות יחסיות של סמני פני שטח התא, חלבונים תאיים. עם זאת, הניתוח של חלבונים תאיים מחייבת את השימוש בטכניקות permeabilization תא כדי לאפשר גישה נוגדן, ולשרוד לא כל epitopes משטח תאים אלה הליכים1,2. בנוסף, נוגדנים מפלים בין מוצרי איזופורמים או ביקוע חלבונים שונים לעיתים קרובות אינם זמינים עבור cytometry זרימה, ולכן החוקרים עדיין מסתמכים על שהכלים המערבי בוודאות סוגים של ניתוחים.
תספיג חלבון ניתוח של תא lysates הוא הליך שגרתי במעבדות רוב. התאים יכולים להיטהר בתנאים מקומיים המשמרים את epitopes של מולקולות על פני התא, תא lysates לאחר מכן ניתן להכין, מנותח. עם זאת, הניתוח של חלבונים בתא יסודי נדיר אוכלוסיות על-ידי המערב כתם תוכל לדרוש המתות חסד מספרים גדולים של בעלי חיים כדי להשיג מספיק תאים. על ידי ביצוע שינויים קטנים במספר שלבים, פרוטוקול blotting המערבית המקובלת היה מסוגל לזהות חלבונים מספר קטן יחסית של HSCs (500-15,000, בהתאם החלבון עניין). ההתאמות כוללים במדויק ספירת תאי, בזהירות הטיפול בגדר תא, הפחתת העברות של תאים בין צינורות כדי למזער את אובדן התא, ו lysing מספר מוגדר של תאים עם טעינה מרוכז מאגר המכיל פרוטאוזום ו מעכבי פוספטאז. דיווחים שפורסמו רבים כוללים שהכלים המערבי שהושג עם 20,000 או יותר HSCs3,4,5,6,7; נוהל פשוט זה יקטין את מספר התאים ואת חיות ניסוי הדרושה להפקת נתונים שווה ערך לפי בין קיפול 4 ו- 40. הפרוטוקול נועד לנרמל את התוצאות על בסיס לכל תא, במקום של בקרה פנימית. פעולה זו מאפשרת זיהוי של הכללית הפחתות רמות חלבון אשר ניתן להתעלם אם הנתונים הם מנורמל לפקד פנימי. החשיבות של נרמול על בסיס לכל תא תוארה לניתוח של ג'ין ביטוי נתונים8, אותו העיקרון חל לכימות חלבונים על ידי תספיג חלבון. פרוטוקול ממוטבת זה צריך להיות שימושי עבור כל מי שזקוק לנתח מספר קטן של תאים.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>sodium dodecyl sulfate (SDS)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP166-500</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEMED</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP150-20</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Acrylamidel Bis solution</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610158</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5M Tris-HCl pH8.8</td>
			<td>TEKNOVA</td>
			<td>T1588</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.0M Tris-HCl pH6.8</td>
			<td>TEKNOVA</td>
			<td>T1068</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Persulfate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP179-25</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mini-protean 3 comb</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1653360</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td> 
			Mini-PROTEAN Tetra Cell</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1658005EDU&#160;</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Transfer System</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1704155EDU</td>
			<td>transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerPac HC Power Supply</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1645052EDU&#160;</td>
			<td>electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging System</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1708195&#160;</td>
			<td>signal detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x Laemmli Sample Buffer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610747EDU&#160;</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x Tris/Glycine/SDS Electrophoresis Buffer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610732EDU&#160;</td>
			<td>electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610710EDU</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;RTA Mini PVDF Transfer Kit, for 40 blots</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1704272&#160;</td>
			<td>transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>11697498001</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphatase Inhibitor Cocktailrs</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>GB-450-1</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EIF4G</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>2469</td>
			<td>WB antibody, validated in 1000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): Fig2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-Rps6</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>4858</td>
			<td>WB antibody,validated in 1000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): Fig2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>actin(HRP conjugated)</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab49900</td>
			<td>WB antibody,validated in 500 cells 
			antibody concentration: 1:5000 
			reference(figure): Fig1, Fig2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC-3</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab48394</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (Fig5)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S6</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2317</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (Fig4)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4EBP1</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9644</td>
			<td>WB antibody, validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (Fig4)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-4EBP1</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2855</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (Fig4)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSC2</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>4308</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (Fig4)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HSP90</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>4877</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (Fig5)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9188</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (FigS1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTOR</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2983</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (FigS1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-mTOR</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5536</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (FigS1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PP2AB</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>4953</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (FigS1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-AMPKa</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2535</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (FigS1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>actin</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-47778</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:3000 
			reference(figure): ref5 (Fig4)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lineage depletion kit (mouse)</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-858</td>
			<td>hematopoietic stem and progenitor cells purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS columns</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-041-305</td>
			<td>hematopoietic stem and progenitor cells purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>250-03</td>
			<td>phosphorylation stimulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 c-kit antibody</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A15423</td>
			<td>cell sorting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-B220</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>48-0452-82</td>
			<td>cell sorting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD3e</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>48-0031-82</td>
			<td>cell sorting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mac1</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>48-0112-82</td>
			<td>cell sorting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Gr1</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>48-5931-82</td>
			<td>cell sorting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Ter119</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>48-5921-82</td>
			<td>cell sorting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spacer Plates with 1.0 mm Integrated Spacers</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1653311</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Research Products International</td>
			<td>A30075</td>
			<td>membrane blocking</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>serum</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>A12450</td>
			<td>medium supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell counter</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMQAF1000</td>
			<td>cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemocytometer</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>&#160;S17040</td>
			<td>cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flim</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>E3012</td>
			<td>signal detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>medical film processor</td>
			<td>Konica</td>
			<td>SRC-101A</td>
			<td>signal detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supersignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate</td>
			<td>Therom Scientific</td>
			<td>34096</td>
			<td>signal detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allegra X-15R Centrifuge (Rotor SX4750A)</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>X-15R</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BLUEstain protein ladder</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>P007-500</td>
			<td>electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td>FACSAria II</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incublock</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>I0510</td>
			<td>electrophoresis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a western blotting protocol for small numbers of hematopoietic stem cells

תאי גזע hematopoietic (HSCs) הם תאים נדירה, עם מח העצם העכבר המכיל רק ~ 25,000 פנוטיפי ארוך המונח לאכלס מחדש HSCs. פרוטוקול blotting המערבי היה ממוטבת ומתאים הניתוח של מספר קטן של HSCs (500-15,000 תאים). HSCs פנוטיפי מטוהרים, לספור במדויק, ולא ישירות lysed במאגר מדגם Laemmli. Lysates המכיל מספר שווה של תאים נותחו על ידי נתרן dodecyl סולפט לזיהוי בג'ל (מרחביות-עמוד), האבן החשופה היה מוכן ומעובד בעקבות מערבי רגיל סופג פרוטוקולים. באמצעות פרוטוקול זה, $2,000-5,000 HSCs ניתן לנתח באופן שגרתי, במקרים מסוימים נתונים ניתן להשיג גם 500 תאים, לעומת התאים 20,000 עד 40,000 דיווחו רוב הפרסומים בהיקף. פרוטוקול זה צריך להיות חלים באופן כללי לתאים אחרים hematopoietic, המאפשרת ניתוח שגרתי של מספר קטן של תאים באמצעות הליכים מעבדה סטנדרטיים.

התוצאות נציג מ 500-2000 מטוהרים HSCs ו HPs מוצגים באיור 1 ו- 2 איור. האות β-אקטין באיור 1 ניתן להבחין בין מעטים כמו 500 HSCs וטיהרו HPs ממח העצם של עכבר אחד. שימו לב כי להעמיס את lysates לתוך בארות 1.5 מ מ המיוצר אות חזק הרבה יותר מ- 500 HPs מאשר טעינה...

Watch this Scientific Journal Video about A Western Blotting Protocol for Small Numbers of Hematopoietic Stem Cells at JoVE.com

A Western Blotting Protocol for Small Numbers of Hematopoietic Stem Cells

מערבון רגיל סופג פרוטוקול היה אופטימיזציה עבור ניתוח גם 500 hematopoietic גזע או ובתאים בהיקף. אופטימיזציה כרוך זהיר טיפול המדגם תא, הגבלת העברות בין צינורות ו ישירות lysing התאים במאגר מדגם Laemmli.

מערבון סופג פרוטוקול עבור מספר קטן של תאי גזע Hematopoietic

Hematopoietic stem cells (HSCs) are rare cells, with the mouse bone marrow containing only ~25,000 phenotypic long term repopulating HSCs. A Western ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

באמצעות הפיגום ליפוזומים כדי לשקם אינטראקציות ליפידים-הפרוקסימלי חלבונים<em&gt; במבחנה</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

SorLA and CLC:CLF-1-dependent Downregulation of CNTFR&#945; as Demonstrated by Western Blotting, Inhibition of Lysosomal Enzymes, and Immunocytochemistry

SorLA and CLC:CLF-1-dependent Downregulation of CNTFRÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â± as Demonstrated by Western Blotting, Inhibition of Lysosomal Enzymes, and Immunocytochemistry

SorLA ו CLC: downregulation CLF-1-תלוי של CNTFRα כפי שהוכח על ידי המערב סופג, עיכוב של ליזוזומלית אנזימים, ו Immunocytochemistry

The heterodimeric cytokine Cardiotrophin-like Cytokine:Cytokine-like Factor-1 (CLC:CLF-1) targets the glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

Microgravimetry dissipative ללמוד את הדינמיקה איגוד של פוספוליפיד איגוד חלבון Annexin A2 כדי Bilayers השומנים הנתמכות על-ידי מוצק באמצעות מהוד קוורץ

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

Robust Comparison of Protein Levels Across Tissues and Throughout Development Using Standardized Quantitative Western Blotting

השוואה חזקים של רמות החלבון על פני רקמות וברחבי פיתוח באמצעות מתוקננת כמותיים המערבי סופג

Western blotting is a technique that is commonly used to detect and quantify protein expression. Over the years, this technique has led to many advances ...

A Semi-High-Throughput Adaptation of the NADH-Coupled ATPase Assay for Screening Small Molecule Inhibitors

הסתגלות למחצה בתפוקה גבוהה של מעכבי הנדח ביחד לסינון מולקולה קטנה

ATPase enzymes utilize the free energy stored in adenosine triphosphate to catalyze a wide variety of endergonic biochemical processes in vivo that would ...

A Rapidly Incremented Tethered-Swimming Maximal Protocol for Cardiorespiratory Assessment of Swimmers

פרוטוקול מקסימלי בעל שחייה בצמיחה מהירה באמצעות שחיה על הערכת שחיינים

Incremental exercise testing is the standard means of assessing cardiorespiratory capacity of endurance athletes. While the maximal rate of oxygen ...

A High-Throughput Enzyme-Coupled Activity Assay to Probe Small Molecule Interaction with the dNTPase SAMHD1

Sterile alpha motif and HD domain-containing protein 1 (SAMHD1) is a pivotal regulator of intracellular deoxynucleoside triphosphate (dNTP) pools, as this ...

Development of a Lateral Flow Immunochromatographic Strip for Rapid and Quantitative Detection of Small Molecule Compounds

פיתוח רצועה חיסונית של זרימה רוחבית לגילוי מהיר וכמותי של תרכובות מולקולות קטנות

Membrane-based lateral flow immunochromatographic strips (ICSs) are useful tools for low-cost self-diagnosis and have been efficiently applied to toxin, ...

Generating Self-Assembling Human Heart Organoids Derived from Pluripotent Stem Cells

יצירת אורגנוידים של לב אנושי המורכבים בעצמם המופקים מתאי גזע פלוריפוטנטיים

The ability to study human cardiac development in health and disease is highly limited by the capacity to model the complexity of the human heart in ...

Synthesis of Masarimycin, a Small Molecule Inhibitor of Gram-Positive Bacterial Growth

סינתזה של מסארימיצין, מעכב מולקולה קטנה של צמיחת חיידקים גראם חיובית

Peptidoglycan (PG) in the cell wall of bacteria is a unique macromolecular structure that confers shape, and protection from the surrounding environment. ...