Name: a western blotting protocol for small numbers of hematopoietic stem cells
Uploaded: 2018-08-22T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Western Blotting Protocol for Small Numbers of Hematopoietic Stem Cells at JoVE.com

국립 보건원 부여 R01 CA149976 (N.A.S)이이 작업을 지원 합니다.

모든 절차는 기관 동물 사용 및 관리 지침에 따라 수행 되어야 합니다. 절차 murine 조 혈 줄기와 조상 세포 (HSCs, HPs)의 분석을 위해 개발 되었다 그러나 다른 세포 인구의 분석을 위해 적응 시킬 수 있다.
1. 교류 Cytometry 절연 Murine HSCs 및 HPs의
<ol><li>문학6에 설명 된 대로 murine 골 수 세포를 수확. 참고: 그림 1 과 그림 2</s...

<ol>
	<li>Krutzik, P. O., Clutter, M. R., Nolan, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinate+analysis+of+murine+immune+cell+surface+markers+and+intracellular+phosphoproteins+by+flow+cytometry.">Coordinate analysis of murine immune cell surface markers and intracellular phosphoproteins by flow cytometry.</a> J Immunol. 175 (4), 2357-2365 (2005).</li><li>Du, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+profiling+at+the+single-cell+level+identifies+a+distinct+signaling+signature+in+murine+hematopoietic+stem+cells.">Signaling profiling at the single-cell level identifies a distinct signaling signature in murine hematopoietic stem cells.</a> Stem Cells. 30 (7), 1447-1454 (2012).</li><li>Signer, R. A., Magee, J. A., Salic, A., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haematopoietic+stem+cells+require+a+highly+regulated+protein+synthesis+rate.">Haematopoietic stem cells require a highly regulated protein synthesis rate.</a> Nature. 509 (7498), 49-54 (2014).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+differentiation+checkpoint+limits+hematopoietic+stem+cell+self-renewal+in+response+to+DNA+damage.">A differentiation checkpoint limits hematopoietic stem cell self-renewal in response to DNA damage.</a> Cell. 148 (5), 1001-1014 (2012).</li><li>Hoshii, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTORC1+is+essential+for+leukemia+propagation+but+not+stem+cell+self-renewal.">mTORC1 is essential for leukemia propagation but not stem cell self-renewal.</a> J Clin Invest. 122 (6), 2114-2129 (2012).</li><li>Signer, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rate+of+protein+synthesis+in+hematopoietic+stem+cells+is+limited+partly+by+4E-BPs.">The rate of protein synthesis in hematopoietic stem cells is limited partly by 4E-BPs.</a> Genes Dev. 30 (15), 1698-1703 (2016).</li><li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Runx1+deficiency+decreases+ribosome+biogenesis+and+confers+stress+resistance+to+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells.">Runx1 deficiency decreases ribosome biogenesis and confers stress resistance to hematopoietic stem and progenitor cells.</a> Cell Stem Cell. , (2015).</li><li>Loven, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+global+gene+expression+analysis.">Revisiting global gene expression analysis.</a> Cell. 151 (3), 476-482 (2012).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+a+Hemoacytometer+to+Count+Cells.">Using a Hemoacytometer to Count Cells.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2017).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separating+Protein+with+SDS-PAGE.">Separating Protein with SDS-PAGE.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2017).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Western+Blot.">The Western Blot.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2017).</li><li>Jackson, R. J., Hellen, C. U., Pestova, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanism+of+eukaryotic+translation+initiation+and+principles+of+its+regulation.">The mechanism of eukaryotic translation initiation and principles of its regulation.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 11 (2), 113-127 (2010).</li><li>Eaton, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+modern+quantitative+fluorescent+western+blotting+with+troubleshooting+strategies.">A guide to modern quantitative fluorescent western blotting with troubleshooting strategies.</a> J Vis Exp. (93), e52099 (2014).</li></ol>

서 부 럽 조직 또는 세포에 특정 단백질 및 신호 통로의 활성화를 탐지 하기 위한 일반적인 기술입니다. 작은 조정에 일반적으로 사용 되는 절차를 도입 하 여 정기적으로 15000 HSCs, 그리고 경우에 따라 몇 가지로 500 HSCs 15 다른 단백질 (자료 테이블)을 감지할 수 있었습니다. The most이 프로토콜의 중요 한 단계는: 1) 정확 하 게 계산 셀, 2) 튜브, 사이 전송의 수를 최소화 및 3) lysing Laemmli ?...

조 혈 줄기 세포 (HSCs)는 모든 혈액 계보를 야기할 수 있는 각자 경신 세포 이다. 그들은 생 화 확 적인 분석을 어려운 렌더링 골 수에서 비교적 드문 셀입니다. 접근 cytometry, 같은 희귀 세포 분석을 위한 적합 한 세포 표면 마커 및 세포내 단백질의 상대적인 양을 측정 하는 데 매우 유용 했습니다. 그러나, 항 체 접근을 사용 하 셀 permeabilization 절차의 사용을 필요로 하는 세포내 단백질의 분석 하 고 모든 세포 표면 epitopes 살아이 절차1,2. 또한, 다른 단백질 isoforms 또는 분열 제품을 구분 하는 항 체는 종종 cytometry, 사용할 수 없습니다 그리고 그러므로 조사 여전히 의존 서쪽 오 점 특정 유형의 분석.
세포 lysates의 서쪽 오 점 분석은 대부분 실험실에서 일상적인 절차입니다. 세포 세포 표면 분자의 epitopes를 유지 하는 기본 조건에서 순화 될 수 있다 그리고 세포 lysates 수 이후에 준비 하 고 분석 했다. 그러나, 서쪽에 의해 인구 오 점 드문 기본 셀에 단백질의 분석 euthanizing 충분 한 세포를 얻기 위해 동물의 많은 수를 요구할 수 있습니다. 여러 단계로 작은 조정 함으로써, 기존의 서쪽 더 럽 히 프로토콜 HSCs (관심사의 단백질에 따라 500-15000)의 상대적으로 작은 숫자에 단백질을 감지할 수 있었습니다. 조정 포함 셀, 셀 손실 최소화 하기 위해 튜브 사이 세포의 전송을 감소 셀 펠 릿을 신중 하 게 처리를 정확 하 게 계산 하 고 포함 프로테아좀 버퍼 lysing 집중 로드 셀의 정의 수 고 인산 가수분해 효소 억제제입니다. 많은 게시 된 보고서 포함 20000 이상의 HSCs3,,45,6,7; 얻은 서쪽 오 점 이 간단한 절차는 세포와 실험 동물 4와 40 배 사이 해당 데이터를 생성 하는 데 필요한 수를 줄일 것입니다. 프로토콜은 결과 셀 당 기준 보다는 내부 통제를 정상화 하도록 설계 되었습니다. 내부 컨트롤에 데이터 정규화는 간과 될 수 있는 단백질 수준에서 전반적인 감소의 검색 수 있습니다. 셀 당 기준 표준화의 중요성 유전자 표현 데이터8의 분석에 대 한 설명 했다 그리고 동일한 원리 서쪽 오 점 하 여 단백질을 측정에 적용 됩니다. 이 최적화 된 프로토콜은 세포의 작은 숫자를 분석할 필요가 누군가 위해 유용 해야 한다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>sodium dodecyl sulfate (SDS)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP166-500</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEMED</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP150-20</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Acrylamidel Bis solution</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610158</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5M Tris-HCl pH8.8</td>
			<td>TEKNOVA</td>
			<td>T1588</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.0M Tris-HCl pH6.8</td>
			<td>TEKNOVA</td>
			<td>T1068</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Persulfate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP179-25</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mini-protean 3 comb</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1653360</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td> 
			Mini-PROTEAN Tetra Cell</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1658005EDU&#160;</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Transfer System</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1704155EDU</td>
			<td>transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerPac HC Power Supply</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1645052EDU&#160;</td>
			<td>electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaging System</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1708195&#160;</td>
			<td>signal detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x Laemmli Sample Buffer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610747EDU&#160;</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x Tris/Glycine/SDS Electrophoresis Buffer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610732EDU&#160;</td>
			<td>electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610710EDU</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;RTA Mini PVDF Transfer Kit, for 40 blots</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1704272&#160;</td>
			<td>transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>11697498001</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphatase Inhibitor Cocktailrs</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>GB-450-1</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EIF4G</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>2469</td>
			<td>WB antibody, validated in 1000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): Fig2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-Rps6</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>4858</td>
			<td>WB antibody,validated in 1000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): Fig2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>actin(HRP conjugated)</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab49900</td>
			<td>WB antibody,validated in 500 cells 
			antibody concentration: 1:5000 
			reference(figure): Fig1, Fig2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC-3</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab48394</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (Fig5)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S6</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2317</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (Fig4)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4EBP1</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9644</td>
			<td>WB antibody, validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (Fig4)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-4EBP1</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2855</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (Fig4)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSC2</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>4308</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (Fig4)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HSP90</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>4877</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (Fig5)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9188</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (FigS1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTOR</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2983</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (FigS1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-mTOR</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5536</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (FigS1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PP2AB</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>4953</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (FigS1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p-AMPKa</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2535</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:1000 
			reference(figure): ref5 (FigS1)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>actin</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-47778</td>
			<td>WB antibody,validated in 15000 cells 
			antibody concentration: 1:3000 
			reference(figure): ref5 (Fig4)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lineage depletion kit (mouse)</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-858</td>
			<td>hematopoietic stem and progenitor cells purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS columns</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-041-305</td>
			<td>hematopoietic stem and progenitor cells purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>250-03</td>
			<td>phosphorylation stimulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-Cy7 c-kit antibody</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A15423</td>
			<td>cell sorting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-B220</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>48-0452-82</td>
			<td>cell sorting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD3e</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>48-0031-82</td>
			<td>cell sorting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Mac1</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>48-0112-82</td>
			<td>cell sorting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Gr1</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>48-5931-82</td>
			<td>cell sorting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Ter119</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>48-5921-82</td>
			<td>cell sorting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spacer Plates with 1.0 mm Integrated Spacers</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1653311</td>
			<td>&#160;SDS-PAGE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Research Products International</td>
			<td>A30075</td>
			<td>membrane blocking</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>serum</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>A12450</td>
			<td>medium supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell counter</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMQAF1000</td>
			<td>cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemocytometer</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>&#160;S17040</td>
			<td>cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flim</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>E3012</td>
			<td>signal detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>medical film processor</td>
			<td>Konica</td>
			<td>SRC-101A</td>
			<td>signal detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supersignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate</td>
			<td>Therom Scientific</td>
			<td>34096</td>
			<td>signal detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allegra X-15R Centrifuge (Rotor SX4750A)</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>X-15R</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BLUEstain protein ladder</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>P007-500</td>
			<td>electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td>FACSAria II</td>
			<td>sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incublock</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>I0510</td>
			<td>electrophoresis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a western blotting protocol for small numbers of hematopoietic stem cells

조 혈 줄기 세포 (HSCs)는 드문 셀, 오래만 25000 ~ phenotypic 포함 된 마우스 골 수와 함께 다시 채우기 HSCs 용어. 서쪽 더 럽 히 프로토콜 최적화 되었고 HSCs (500-15000 셀)의 작은 숫자의 분석에 적합 합니다. Phenotypic HSCs 정화, 정확 하 게 계산, 고 직접 Laemmli 샘플 버퍼에서 lysed. Lysates 셀의 동등한 숫자를 포함 하는 나트륨 라우릴 황산 염의 polyacrylamide 젤 전기 이동 법 (SDS 페이지)에 의해 분석 되었다 오 점 준비 하 고 더럽혀 프로토콜 표준 서에 따라 처리. 이 프로토콜, 2000-5000를 사용 하 여 HSCs는 정기적으로 분석 될 수 있다, 그리고 어떤 경우에 데이터는 몇 가지 대부분의 출판물에 20000 ~ 40, 000 셀에 비해 500 셀으로에서 얻을 수 있습니다. 이 프로토콜 다른 조 혈 모 세포에 일반적으로 적용 되 고 표준 실험실 절차를 사용 하 여 셀의 작은 숫자의 일상적인 분석을 수 있습니다.

500-2000 순화 HSCs와 HPs에서 대표적인 결과 그림 1 과 그림 2에 표시 됩니다. 그림 1 에서 β-말라 신호에서 몇 가지 500 HSCs로 검출 될 수 있다 고 HPs 한 마우스의 골 수에서 정화. Note는 3.0 m m 우물에 로드 보다 500 HPs에서 훨씬 더 강력한 신호 생산 로드는 lysates 1.5 m m 우물. 그림 2 은 EIF4G의 ...

Watch this Scientific Journal Video about A Western Blotting Protocol for Small Numbers of Hematopoietic Stem Cells at JoVE.com

A Western Blotting Protocol for Small Numbers of Hematopoietic Stem Cells

프로토콜 blotting 표준 서 500 조 혈 줄기 또는 조상 세포로 몇 가지 분석을 위해 최적화 되었다. 최적화 포함 셀 샘플의 처리, 튜브, 사이 전송 제한 및 직접 Laemmli 샘플 버퍼에 세포를 lysing 주의 한다.

조 혈 줄기 세포의 작은 숫자에 대 한 프로토콜을 더럽혀 서 부

Hematopoietic stem cells (HSCs) are rare cells, with the mouse bone marrow containing only ~25,000 phenotypic long term repopulating HSCs. A Western ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

비계 리포좀을 사용하여 근위 지질 단백질 - 단백질 상호 작용을 재구성<em&gt; 체외</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

연구

생화학

SorLA and CLC:CLF-1-dependent Downregulation of CNTFR&#945; as Demonstrated by Western Blotting, Inhibition of Lysosomal Enzymes, and Immunocytochemistry

SorLA and CLC:CLF-1-dependent Downregulation of CNTFRÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â± as Demonstrated by Western Blotting, Inhibition of Lysosomal Enzymes, and Immunocytochemistry

SorLA 및 CLC : 웨스턴 블로 팅, 리소좀 효소의 억제 및 면역 세포에 의해 입증으로 CNTFRα의 CLF-1에 의존 하향 조절

The heterodimeric cytokine Cardiotrophin-like Cytokine:Cytokine-like Factor-1 (CLC:CLF-1) targets the glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

인지질 단백질 Annexin a 2 석 영 공명 기를 사용 하 여 지원 되는 고체 지질 Bilayers에 바인딩의 바인딩 역학 공부 되는 낭비 적인 Microgravimetry

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

Robust Comparison of Protein Levels Across Tissues and Throughout Development Using Standardized Quantitative Western Blotting

단백질 수준 및 개발 표준화 양적 부 럽을 사용 하 여 전체 조직에 걸쳐 강력한 비교

Western blotting is a technique that is commonly used to detect and quantify protein expression. Over the years, this technique has led to many advances ...

A Semi-High-Throughput Adaptation of the NADH-Coupled ATPase Assay for Screening Small Molecule Inhibitors

소분자 억제제 스크리닝을 위한 NADH 결합 ATPase 분석의 반 높은 처리량 적응

ATPase enzymes utilize the free energy stored in adenosine triphosphate to catalyze a wide variety of endergonic biochemical processes in vivo that would ...

A Rapidly Incremented Tethered-Swimming Maximal Protocol for Cardiorespiratory Assessment of Swimmers

수영 선수의 심폐 평가를위한 급속하게 증가 된 테더 드 수영 최대 프로토콜

Incremental exercise testing is the standard means of assessing cardiorespiratory capacity of endurance athletes. While the maximal rate of oxygen ...

A High-Throughput Enzyme-Coupled Activity Assay to Probe Small Molecule Interaction with the dNTPase SAMHD1

Sterile alpha motif and HD domain-containing protein 1 (SAMHD1) is a pivotal regulator of intracellular deoxynucleoside triphosphate (dNTP) pools, as this ...

Development of a Lateral Flow Immunochromatographic Strip for Rapid and Quantitative Detection of Small Molecule Compounds

소분자 화합물의 신속하고 정량적 검출을 위한 측면 흐름 면역크로모그래피 스트립 개발

Membrane-based lateral flow immunochromatographic strips (ICSs) are useful tools for low-cost self-diagnosis and have been efficiently applied to toxin, ...

Generating Self-Assembling Human Heart Organoids Derived from Pluripotent Stem Cells

다능성 줄기 세포에서 파생된 자가 조립 인간 심장 오르가노이드 생성

The ability to study human cardiac development in health and disease is highly limited by the capacity to model the complexity of the human heart in ...

Synthesis of Masarimycin, a Small Molecule Inhibitor of Gram-Positive Bacterial Growth

그람 양성 박테리아 성장의 소분자 억제제 인 Masarimycin의 합성

Peptidoglycan (PG) in the cell wall of bacteria is a unique macromolecular structure that confers shape, and protection from the surrounding environment. ...