Name: an in vivo murine sciatic nerve model of perineural invasion
Uploaded: 2018-04-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion at JoVE.com

लेखक आणविक cytology सुविधा और मेमोरियल Sloan Kettering कैंसर केंद्र की पशु सुविधा द्वारा प्रदान की गई तकनीकी सेवाओं को स्वीकार करते हैं । यह काम NIH अनुदान CA157686 (R.J. वोंग) और P30 CA008748 (मेमोरियल Sloan Kettering कैंसर सेंटर सहायता अनुदान) द्वारा समर्थित किया गया था ।

पशु विषयों के साथ प्रक्रियाओं के सभी मेमोरियल Sloan Kettering कैंसर सेंटर में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया ।
1. कैंसर की कोशिकाओं को तैयार करना
<ol><li>हार्वेस्ट उप-धाराप्र?...

<ol>
	<li>Liebig, C., Ayala, G., Wilks, J. A., Berger, D. H., Albo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perineural+invasion+in+cancer.">Perineural invasion in cancer.</a> Cancer. 115 (15), 3379-3391 (2009).</li><li>Bapat, A. A., Hostetter, G., Von Hoff, D. D., Han, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perineural+invasion+and+associated+pain+in+pancreatic+cancer.">Perineural invasion and associated pain in pancreatic cancer.</a> Nat Rev Cancer. 11 (10), 695-707 (2011).</li><li>Deborde, S., Wong, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+Schwann+cells+facilitate+cancer+progression+in+nerves.">How Schwann cells facilitate cancer progression in nerves.</a> Cell Mol Life Sci. 341 (177-186), 1236361-1236416 (2017).</li><li>Abiatari, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consensus+transcriptome+signature+of+perineural+invasion+in+pancreatic+carcinoma.">Consensus transcriptome signature of perineural invasion in pancreatic carcinoma.</a> Mol Cancer Ther. 8 (6), 1494-1504 (2009).</li><li>Ayala, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+dorsal+root+ganglia+and+human+prostate+cell+line+interaction:+redefining+perineural+invasion+in+prostate+cancer.">In vitro dorsal root ganglia and human prostate cell line interaction: redefining perineural invasion in prostate cancer.</a> Prostate. 49 (3), 213-223 (2001).</li><li>Gil, Z., Cavel, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracrine+regulation+of+pancreatic+cancer+cell+invasion+by+peripheral+nerves.">Paracrine regulation of pancreatic cancer cell invasion by peripheral nerves.</a> J Natl Cancer Inst. 102 (2), 107-118 (2010).</li><li>Deborde, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cells+induce+cancer+cell+dispersion+and+invasion.">Schwann cells induce cancer cell dispersion and invasion.</a> J Clin Invest. 126 (4), 1538-1554 (2016).</li><li>Pour, P. M., Egami, H., Takiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+growth+and+metastases+of+induced+pancreatic+cancer+in+relation+to+the+prognosis+and+its+clinical+implications.">Patterns of growth and metastases of induced pancreatic cancer in relation to the prognosis and its clinical implications.</a> Gastroenterology. 100 (2), 529-536 (1991).</li><li>Eibl, G., Reber, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+xenograft+nude+mouse+model+for+perineural+invasion+and+recurrence+in+pancreatic+cancer.">A xenograft nude mouse model for perineural invasion and recurrence in pancreatic cancer.</a> Pancreas. 31 (3), 258-262 (2005).</li><li>Stopczynski, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroplastic+changes+occur+early+in+the+development+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">Neuroplastic changes occur early in the development of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Cancer Res. 74 (6), 1718-1727 (2014).</li><li>Gil, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve-sparing+therapy+with+oncolytic+herpes+virus+for+cancers+with+neural+invasion.">Nerve-sparing therapy with oncolytic herpes virus for cancers with neural invasion.</a> Clin Cancer Res. 13 (21), 6479-6485 (2007).</li><li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections.">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), 655-658 (2014).</li><li>Cremer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+the+N-CAM+gene+in+mice+results+in+size+reduction+of+the+olfactory+bulb+and+deficits+in+spatial+learning.">Inactivation of the N-CAM gene in mice results in size reduction of the olfactory bulb and deficits in spatial learning.</a> Nature. 367 (6462), 455-459 (1994).</li><li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemokine+(CCL2-CCR2)+signaling+axis+mediates+perineural+invasion.">The chemokine (CCL2-CCR2) signaling axis mediates perineural invasion.</a> Mol Cancer Res. 13 (2), 380-390 (2015).</li><li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFR&#945;1+released+by+nerves+enhances+cancer+cell+perineural+invasion+through+GDNF-RET+signaling.">GFR&#945;1 released by nerves enhances cancer cell perineural invasion through GDNF-RET signaling.</a> P Natl Acad Sci USA. , 02944 (2014).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल में हम पेरिनेरियल आक्रमण है कि अग्नाशय के कैंसर की कोशिकाओं द्वारा sciatic तंत्रिका आक्रमण के ठहराव के लिए अनुमति देता है की vivo murine मॉडल में एक का वर्णन । इस मॉडल तंत्रिका आक्रमण के आणविक तंत?...

नसों एक विशिष्ट ट्यूमर microenvironment है कि कैंसर के विकास और प्रवासन1,2,3उत्तेजित करता है । पेरिनेरियल आक्रमण (्नि) प्रक्रिया है जिसके माध्यम से कैंसर कोशिकाओं में और नसों के आसपास आक्रमण । यह मेटास्टेसिस के एक अनूठे मार्ग के रूप में माना जा सकता है के बाद से कैंसर आक्रमण मूल की साइटों से दूर नसों के साथ फैली हुई है । ्नि अग्नाशय, प्रोस्टेट, सिर और गर्दन, लार, ग्रीवा, और एक 22% से १००%1,2से लेकर घटना के साथ कोलोरेक्टल कैंसर सहित कई प्रकार के कैंसर में पाया जाता है । ्नि दर्द के साथ जुड़ा हुआ है और गरीब पूर्वानुमान और बदतर जीवित रहने की दर1,2के साथ संबद्ध है ।
पेरिनेरियल आक्रमण के मॉडल का विकास इस प्रक्रिया के सेलुलर और आणविक तंत्र स्पष्ट करने के लिए आवश्यक है, और ्नि कमी करने के लिए उंमीदवार चिकित्सकीय एजेंटों का परीक्षण करने के लिए । इन विट्रो में कैंसर और नसों के बीच बातचीत का अध्ययन करने के तरीकों सह तंत्रिका explants4के साथ कैंसर कोशिकाओं की संस्कृति, पृष्ठीय रूट ganglions के साथ5,6,7, या विशिष्ट कोशिकाओं के साथ शामिल तंत्रिका microenvironment से ऐसे Schwann कोशिकाओं के रूप में7। vivo में दृष्टिकोण, तथापि, और अधिक शारीरिक रूप से प्रासंगिक हैं, कैंसर माउस मॉडल जिसमें कैंसर प्रेरित किया गया है या प्रत्यारोपण और पूरे तंत्रिका microenvironment के लिए लेखांकन का लाभ है के उपयोग में शामिल हैं । अग्नाशय या प्रोस्टेट कैंसर के orthotopic मॉडलों में ्नि की सूचना दी गई है8,9,10 और ्नि की घटनाएं दर्ज हो सकती हैं, लेकिन उन अंगों में नसों के छोटे आकार की वजह से यह देखना मुश्किल होता है पूरी तंत्रिका और इसलिए ्नि की हद तक बढ़ाता है । हम यहां का वर्णन मॉडल एक सरल शल्य प्रक्रिया11के माध्यम से चूहों के sciatic तंत्रिका में इंजेक्ट कर रहे है जिसमें कैंसर की कोशिकाओं ्नि के एक vivo में मॉडल है । heterotopic प्रत्यारोपण रीढ़ की हड्डी की ओर तंत्रिका के भीतर आक्रमण । रीढ़ की हड्डी के लिए इंजेक्शन की साइट से तंत्रिका आक्रमण की लंबाई मापा जा सकता है, साथ ही तंत्रिका के भीतर कैंसर की मात्रा । महत्वपूर्ण बात, हमला तंत्रिका भी सूक्ष्म सहित परख की एक किस्म के लिए एकत्र किया जा सकता है, और आणविक विश्लेषण । कैंसर कोशिकाओं की एक किस्म का परीक्षण किया जा सकता है, और मेजबान चूहों कि आनुवंशिक रूप से संशोधित किया गया है या विशिष्ट यौगिकों के साथ इलाज किया जा सकता है के रूप में अच्छी तरह से इस्तेमाल किया । इस शक्तिशाली परख कैंसर की कोशिकाओं और मेजबान microenvironment के लिए अनुमति देता है ्नि के तंत्र में जांच के लिए संशोधित किया जाएगा ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:973px;" width="973">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:340px;">Mouse</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:344px;"></td>
			<td style="width:167px;">Number and age variable depending on experimental needs</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cell culture media (PBS, Trypsin, and DMEM+10% FBS)</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td>Steps 1.1, 1.2, 1.3.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Conical centrifuge tube, 50 mL</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352098</td>
			<td>Step 1.1</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Microcentrifuge tube 1.5 mL</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C-S</td>
			<td>Step 1.2</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Electric razor</td>
			<td>WAHL</td>
			<td>9962</td>
			<td>Step 2.1. Can be substituted with commercial hair removal agent</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane, 250 mL</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>1001936060</td>
			<td>Step 2.2</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Hypoallergenic surgical tape</td>
			<td>3M Blenderm</td>
			<td>70200419342</td>
			<td>Step 2.3</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Betadine Swapsticks</td>
			<td>PDI</td>
			<td>SKU 41350</td>
			<td>Step 2.4</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Webcol Alcohol Preps</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>5110</td>
			<td>Step 2.4</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sterile surgical tools (scissors and forceps)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Steps 2.4, 2.5, 3.3, 3.4, 3.5</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">10 &#956;L Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80308</td>
			<td>Steps 2.7, 2.8</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Steel Micro spatula</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S50823</td>
			<td>Step 2.7</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Dissecting microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Step 2.7</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Bupivacine, 1 g</td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>BML-NA139-0001</td>
			<td>Step 2.9. Reconstitute to 0.5%</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">5-0 Nylon suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>698H</td>
			<td>Step 2.9</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-930</td>
			<td>Step 4.1</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Tissue-Tek Cryomold Molds</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-916</td>
			<td>Step 4.1</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in vivo murine sciatic nerve model of perineural invasion

कैंसर की कोशिकाओं को एक प्रक्रिया पेरिनेरियल आक्रमण (्नि), जिसमें कैंसर कोशिकाओं पैदा करना और तंत्रिका microenvironment में विस्थापित के माध्यम से नसों पर आक्रमण । आक्रमण के इस प्रकार के कैंसर के प्रकार की एक किस्म द्वारा प्रदर्शित किया जाता है, और बहुत बार अग्नाशय के कैंसर में पाया जाता है । माउस अग्ंयाशय के भीतर तंत्रिका तंतुओं के सूक्ष्म आकार orthotopic murine मॉडल में ्नि मुश्किल का अध्ययन renders । यहां, हम ्नि के वीवो मॉडल में एक heterotopic का वर्णन है, जहां हम H7 murine तंत्रिका में syngeneic अग्नाशय के कैंसर सेल लाइन Panc02-sciatic सुई । इस मॉडल में, anesthetized चूहों की sciatic नसों को उजागर कर रहे हैं और कैंसर कोशिकाओं के साथ इंजेक्शन । कैंसर की कोशिकाओं के इंजेक्शन के बिंदु से रीढ़ की हड्डी की ओर समीपस्थ नसों में आक्रमण । हमला sciatic नसों तो निकाले जाते है और जमे हुए अनुभाग के लिए OCT के साथ कार्रवाई की । एच एंड ई और इम्यूनोफ्लोरेसेंस इन वर्गों के दाग दोनों के ठहराव की डिग्री आक्रमण और प्रोटीन अभिव्यक्ति में परिवर्तन की अनुमति देते हैं । इस मॉडल को अपनी बहुमुखी प्रतिभा दी ्नि पर अध्ययन की एक किस्म के लिए लागू किया जा सकता है । विभिंन आनुवंशिक संशोधनों और/या कैंसर कोशिकाओं के विभिंन प्रकार के साथ चूहों का उपयोग सेलुलर और ्नि के आणविक तंत्र की जांच के लिए और विभिंन प्रकार के कैंसर के लिए अनुमति देता है । इसके अलावा, तंत्रिका आक्रमण पर चिकित्सकीय एजेंटों के प्रभाव इन चूहों के लिए उपचार लागू करने के द्वारा अध्ययन किया जा सकता है ।

इस विधि murine sciatic तंत्रिका में अग्नाशय के कैंसर की कोशिकाओं के सर्जिकल आरोपण का वर्णन करने के लिए quantifiable तंत्रिका आक्रमण के vivo में मॉडल बनाने के लिए । चित्रा 1 sciatic तंत्रिका और इंजेक्...

Watch this Scientific Journal Video about An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion at JoVE.com

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

पेरिनेरियल आक्रमण के Vivo Murine Sciatic तंत्रिका मॉडल में एक

हम sciatic तंत्रिका में syngeneic अग्नाशय के कैंसर कोशिकाओं इंजेक्शन द्वारा पेरिनेरियल आक्रमण के vivo murine मॉडल में एक का वर्णन । मॉडल तंत्रिका आक्रमण की हद के ठहराव के लिए अनुमति देता है, और सेलुलर और पेरिनेरियल आक्रमण के आणविक तंत्र की जांच का समर्थन करता है ।

Cancer cells invade nerves through a process termed perineural invasion (PNI), in which cancer cells proliferate and migrate in the nerve ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

An In Vivo Murine Sciatic Nerve Model of Perineural Invasion

Coculture Assays to Study Macrophage and Microglia Stimulation of Glioblastoma Invasion

Coculture Assays अध्ययन करने के लिए ग्लयोब्लास्टोमा आक्रमण की बृहतभक्षककोशिका और Microglia उत्तेजना

Glioblastoma multiforme (grade IV glioma) is a very aggressive human cancer with a median survival of 1 year post diagnosis. Despite the increased ...

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

सिर और गर्दन के स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा में Perineural आक्रमण के लिए एक मॉडल

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

थकान के एक माउस मॉडल परिधीय विकिरण से प्रेरित

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

ऊपर की ओर बढ़ रहा है: एक सरल और लचीले इन विट्रो में तीन आयामी आक्रमण परख प्रोटोकॉल

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

Vivo में पीएच के EPR आकलन, पीओ2, Redox स्थिति, और ट्यूमर में फॉस्फेट और Glutathione की सांद्रता Microenvironment

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping के Orthotopic Homograft (Syngeneic) के Murine प्राथमिक KPC अग्नाशय वाहिनीई ग्रंथिकर्कटता द्वारा प्रवाह Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

स्वचालित लाइव-सेल Imager का उपयोग करके एक साधारण माइग्रेशन/

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

An Orthotopic Endometrial Cancer Model with Retroperitoneal Lymphadenopathy Made From In Vivo Propagated and Cultured VX2 Cells

एक Orthotopic एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल Retroperitoneal Lymphadenopathy के साथ Vivo Propagated और संस्कृति VX2 कोशिकाओं में से बनाया

Endometrial cancer is the most common gynecologic malignancy in North America and the incidence is rising worldwide. Treatment consists of surgery with or ...

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

स्थानिक और अस्थाई Mutant मेलेनोमा के नियंत्रण से उत्परिवर्ती Melanocyte स्टेम कोशिकाओं

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

Machine Learning Algorithms for Early Detection of Bone Metastases in an Experimental Rat Model

एक प्रयोगात्मक चूहा मॉडल में बोन मेटास्टेस की शुरुआती पहचान के लिए मशीन लर्निंग एल्गोरिदम

Machine learning (ML) algorithms permit the integration of different features into a model to perform classification or regression tasks with an accuracy ...