Name: breast milk enhances growth of enteroids: an ex vivo model of cell proliferation
Uploaded: 2018-02-15T12:30:00
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MG은 K08DK101608와 R03DK111473는 건강의 국가 학회 3 월의 천 재단 보조금 No. 5-FY17-79, 어린이 디스커버리 연구소의 워싱턴 대학, 세인트 루이스 아동 병원과의 학과에서 교부 금에 의해 지원 됩니다. 워싱턴 대학 대학원 의학의 세인트 루이스에서 소아과. CJL R01DK104946에 의해 지원 됩니다 (PI: 실버), 어린이 디스커버리 연구소의 워싱턴 대학 및 St. 루이 아동 병원.

이 연구에서 모든 동물 절차는 세인트 루이스 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (20160187 프로토콜) 또는 피츠버그 대학 제도 동물 보호와 사용 위원회 (14103918 프로토콜)에 워싱턴 대학에 의해 승인 되었다. 24 주 미만의 임신에서 인간의 태아 소장 기관 검토 위원회 승인 (PRO14100537 프로토콜)의 대학에서 후 피츠버그 대학 해 부 조직 조달 지침에 따라 얻은 피츠버그는 정직한 브로커 시스템을 통해 건?...

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장 상피 직감 장벽 무결성을 유지 하는 병원 체에 대 한 호스트 방어를 제공 하 고 여러 질병의 병 인에 위반 될 수 있는 많은 세포질 하위 구성 됩니다. 동물 모델 질병의 몇 가지 측면을 정리 수 있습니다, 하는 동안 생쥐와 인간의 작은 창 자에서 파생 된 enteroids의 비보 전 모델 다양 한 치료의 효과 테스트 플랫폼을 제공 합니다. Enteroid 모델의 중요성 문화 순진한 또는 병에 걸린 동물과 기...

Necrotizing enterocolitis (NEC)에 영향을 미치는 거의 1/10 유아 29 주 태동1,2,3전에 태어난 조산에 위장 질환에서 죽음의 주요 원인입니다. 생존은 단지 10-304,5가장 심각한 형태를 NEC 진행과 유아의 반은. 미국에는 약된 2-3 십억 달러/년 소비 하는 NEC6,7, 유아 치료 아직 생존 율도 치료는 지난 30 년 동안 변경 되었습니다. 그러나 NEC의 병 장 부상으로 특징은 점 막 치유8,,910,11,, 신호 경로 악화를 선도 염증 반응 및 메커니즘 염증을 불완전 하 게 이해 남아 있습니다.
인간의 모유의 조산에 대 한 NEC에 대 한 유일한 보호 전략 발견 되었습니다. 우리는 이전 유 방 우유는 표 피 성장 인자 수용 체 (EGFR) 신호 통로11를 통해 장 상피에 타고 난 면역 수용 체 통행세 같이 수용 체 4 (TLR4)의 억제를 통해 NEC 개발에 대 한 보호 나타났습니다. 실험 NEC 수식 모유의 보충 감쇠 NEC enterocyte apoptosis의 억제 및 복원 enterocyte 확산 했다 표 피 성장에 의존 하는 방식으로 여로 염증 반응 인자 (EGF) 고 EGFR11. 또 다른 연구에서는 그것은 표시 했다 질 산, 모유의 다른 구성 요소, 분유, 질산염 부족 하 고 NEC에의 증가 주파수에 기여할 수에 비해 장 관류를 변조 하 여 자연 보호에 기여 수식 먹이 유아12,13. 선관위에 대 한 보호에서 포함 되기 위하여 보였다 다른 화합물 모유에 존재 인간의 우유 oligosaccharides, 등 L-아르기닌, 글루타민, lactoferrin14,,1516, 17,,1819. 유 방 우유의 이러한 유익한 요소 NEC의 예방에 있는 그것의 사용의 필요성을 공개 하지만 또한 신호 경로, 및 세포 효과 모유는 선관위에 대 한 보호를 중재 하는 방법에 관련 된 메커니즘의 중요성을 강조 .
진학 하기 위해서는, NEC의 마우스 모델에서 모유의 보호 속성 우리 소설, 사용 하기 쉬운 기술을 개발 모유는 전기 인간 유 방 펌프11,12 사용 하 여 마 취 댐에서 추출 수 있는 마우스에 의해 . 마우스 모유 인수의이 전략이 아니다 유리한, 인간 유 방 펌프 쉽게 사용할 수 있으며 유 방 우유의 조달에 효율적인 뿐만 아니라 종의 유 방 우유 분석을 위해이 방법을 수 있기 때문에 때문에. 결과적으로, 우리 그 표현된 인간의 모유 마우스 유 방 우유의 효과 비교할 수 있습니다 뿐만 아니라 종의 모델에서 우유 은행에서 인간 기증자 우유를 저온 살 균. 이 기술은 NEC 예방으로 그들의 공헌에 관하여 유 방 우유 구성의 연구에 대 한 수 있습니다. 그러나 다른 조사 유 방 우유 추출 방법 개발,, 이러한 기술은 수동는 일반적으로 하나 이상의 연구소 회원20,,2122필요. 여기는 마우스에서 우유를 수집 하는 인간의 전기 유 방 펌프를 수정 하 여 활용할 수 있는 쉬운 기술 제공 됩니다. 이 기술은 또한 다른 종에 적용할 수 있습니다.
가 적절 하 게 신호 경로 NEC와 관련된, 모델 시스템의 질병 과정에 영향을 받을 것으로 알려져 다른 세포 유형 모두 평가 필요 합니다. 여기, 우리가 같은 모델 시스템-enteroids-및 마우스 및 인간의 소장에서 그들의 설립 하나 설명합니다. 인간의 장 enteroids (HIEs)는 혁신, 유전으로 다양 한 비보 전 인간의 모델 위장에서 자리를 차지할 pathophysiological 프로세스의 연구에 도움을 제안 하기 때문에 특히 중요 한 약속를 제공합니다 23. Enteroids 장기 배양 될 발견 되었습니다 나중 사용23, 얼 수 있다 그리고 누구의 문화는 유도할 수 있는 만능 줄기 세포에서 개발 하 고, 인간의 장 Organoids (HIOs), 달리 enteroids 줄기 세포에서 생성 되 고립된 장 지하실24내. Enteroids 유지 일 수 있다25, 신속 하 게 감염 하 고 이후 장 지하실 HIOs23보다 더 분화 된다 쉽게 설정할 수 있습니다. 따라서, HIEs 인간의 위장 상피23의 지역별 구성 및 기능적 속성을 전시 하기 위하여 개발 될 수 있기 때문에 기존 기술을 통해 많은 이점을 제공 합니다. Enteroids 사용 하 여 지역별 제한 및 사용의 용이성에 대 한 준수와 내장의 인간의 모델 필요 때 매우 효과적인 선택입니다. 여기 분리 하 고 기본 줄기 세포 유래 작은 창 자 enteroids 생쥐와 인간의 조산에서 유지 하는 기술을 보여 줍니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM) with 4.5 g/L Glucose and L-Glutamine</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>12-604F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humulin N (Insulin)</td>
			<td>Eli Lilly And Company</td>
			<td>0002-8315</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline (DPBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15750-060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15290-026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 M Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), pH 8.0</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15575-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Advanced DMEM/F-12</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12634-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 mM L-Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 M N-2-Hydroxyethylpiperazine-N-2-Ethane Sulfonic Acid (HEPES)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Acetylcysteine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x N-2 Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50x B-27 Supplement Minus Vitamin A</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>08-0085SA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x ROCK Inhibitor Y-27632, Dihydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Y0503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse Wnt3a Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>1324-WN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Murine Noggin</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>250-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse R-Spondin 1</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>3474-RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Murine Epidermal Growth Factor (EGF)</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>315-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Growth Factor Reduced Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 x 10 mm Cell Culture Petri Dish</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>0030700112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>0030722116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48-Well Cell Culture Plate</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>0030723112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-Well Nunc Lab-Tek II Chamber Slide System</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>154534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#956;M Sterile Cell Strainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#956;M Sterile Cell Strainer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Phosphate-Buffered Saline (PBS), pH 7.2</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>20012-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16% Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum (NDS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride (DAPI)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glass</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope Leica TCS SP8 X</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop CS6</td>
			<td>Adobe Systems</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 G 1.5 Inch Needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>792632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxytocin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O3251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Double Electric Breast Pump</td>
			<td>Lansinoh</td>
			<td>044677530163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Round Bottom Test Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Stoppers</td>
			<td>Frey Scientific</td>
			<td>560761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ki67 Antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>AB15580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Mki67 primer F: 5&#39;-GACCTCAAACTGGCTCCTAATC-3&#39; R: 5&#39;-GCTGCCAGATAGAGTCAGAAAG-3&#39;</td>
			<td>Integrated DNA Technologies</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

breast milk enhances growth of enteroids: an ex vivo model of cell proliferation

인간의 작은 창 자 enteroids는 지하실에서 파생 되 고 줄기 세포 틈새 시장에서 성장 하는 때 모든 상피 세포 유형을 포함. 인간의 enteroid ex vivo 문화 시스템을 설정 하는 기능 모델 장 이상 하 고 특정 세포 응답 관련된 공부에 중요 하다. 최근 몇 년 동안, 쥐와 인간 enteroids 되 고 교양, passaged, 그리고 은행 떨어져 여러 실험실에서 나중에 사용에 대 한 전 세계에 걸쳐. 이 enteroid 플랫폼은 다양 한 치료와 약물의 효과 및 어떤 효과 소장에 다른 세포 유형에가 해지는 테스트를 사용할 수 있습니다. 여기, 신생아 쥐에서 파생 된 기본 줄기 세포 유래 작은 창 자 enteroids를 설정 하기 위한 프로토콜 이며 조 인간의 내장 제공 됩니다. 또한,이 enteroid 문화 시스템 종의 유 방 우유의 효과 테스트에 이용 되었다. 마우스 모유 수정된 인간 유 방 펌프를 사용 하 여 효율적으로 얻을 수 있다 고 표현된 마우스 우유 추가 연구 실험을 위해 사용할 수 있습니다. 우리 이제 표현된 마우스, 인간의 효과 입증 하 고 성장 및 enteroids의 확산에 기증자 모유 신생아 쥐 또는 조 인간의 작은 창 자에서 파생 된.

우리는 먼저 인간의 모유를 표현 하는 여부를 조사 하고자 또는 저온 살 균된 기증자 모유 작은 장 enteroids에 영향을 했다. 실제로, 인간 유 방 우유와 모유 기증자 신생아 마우스 (그림 1A)와 조 인간의 파생된 enteroids (그림 1B)의 성장을 증가 했다.
인간의 모유 증가 작은 창 자 enteroids...

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Breast Milk Enhances Growth of Enteroids: An Ex Vivo Model of Cell Proliferation

유 방 우유 Enteroids의 성장을 강화: 세포 증식의 Ex Vivo 모델

이 프로토콜에서는 쥐에서 우유를 수집 하는 효율적인 방법 뿐만 아니라 신생아 마우스 또는 조 인간의 창 자에서 enteroid 문화 시스템을 설정 하는 방법을 설명 합니다.

Human small intestinal enteroids are derived from the crypts and when grown in a stem cell niche contain all of the epithelial cell types. The ability to ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Breast Milk Enhances Growth of Enteroids: An Ex Vivo Model of Cell Proliferation

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연구

의학

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