Name: partial bile duct ligation in the mouse: a controlled model of localized obstructive cholestasis
Uploaded: 2018-03-28T13:00:00
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박사 칸 NIH/NICHD K12HD052892, 알파-1 재단, 힐만 재단, 그리고 피츠버그 간 연구 센터에서 보조금 지원을 인정 한다. 박사 Michalopoulos는 NIH/NIDDK P01DK096990에서 보조금 지원을 인정합니다. 앤 오 어의 우수 하 고 관대 한 기술 지원 부탁 드립니다. 우리는 또한 이식/설치류 미세 실험실에 대 한 액세스를 제공 하기 위한 박사 데이비드 A. 겔러에 감사입니다.

모든 절차는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 피츠버그 대학교의 윤리 지침에 따라 실시 했다.
1. 기본 기술 및 공통 절차
<ol><li>압력솥 사용 하기 전에 모든 microsurgical 장비.</li>
	<li>마우스 마 취에 의해 살해를 방지 하려면 신중 하 게 그것의 호흡 패턴을 확인 합니다.</li>
	<li>터치 기관 및 내장 기관 손상 및 출혈을 일으키는 방지 하기 위해 가능한 한 작은. 젖은 면봉 이나 거 즈 스폰지 출혈 ...

<ol>
	<li>Higgins, G. M., Anderson, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+pathology+of+the+liver+-+Restoration+of+the+liver+of+the+white+rat+following+partial+surgical+removal.">Experimental pathology of the liver - Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal.</a> Arch Pathol. 12, 186-202 (1931).</li><li>Cameron, G. R., Oakley, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligation+of+the+common+bile+duct.">Ligation of the common bile duct.</a> The Journal of Pathology and Bacteriology. 35 (5), 769-798 (1932).</li><li>Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transdifferentiation+of+rat+hepatocytes+into+biliary+cells+after+bile+duct+ligation+and+toxic+biliary+injury.">Transdifferentiation of rat hepatocytes into biliary cells after bile duct ligation and toxic biliary injury.</a> Hepatology. 41 (3), 535-544 (2005).</li><li>Dipaola, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+intramural+epithelial+networks+linked+to+peribiliary+glands+that+express+progenitor+cell+markers+and+proliferate+after+injury+in+mice.">Identification of intramural epithelial networks linked to peribiliary glands that express progenitor cell markers and proliferate after injury in mice.</a> Hepatology. 58 (4), 1486-1496 (2013).</li><li>Guyot, C., Combe, C., Desmouliere, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+common+bile+duct+ligation+in+rat:+A+relevant+in+vivo+model+to+study+the+role+of+mechanical+stress+on+cell+and+matrix+behaviour.">The common bile duct ligation in rat: A relevant in vivo model to study the role of mechanical stress on cell and matrix behaviour.</a> Histochem Cell Biol. 126 (4), 517-523 (2006).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+bile+duct+ligation+on+bile+acid+composition+in+mouse+serum+and+liver.">Effect of bile duct ligation on bile acid composition in mouse serum and liver.</a> Liver Int. 32 (1), 58-69 (2012).</li><li>Tag, C. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accumulation+of+PiZ+alpha+1-antitrypsin+causes+liver+damage+in+transgenic+mice.">Accumulation of PiZ alpha 1-antitrypsin causes liver damage in transgenic mice.</a> J Clin Invest. 83 (4), 1183-1190 (1989).</li><li>Sifers, R. N., Finegold, M. J., Woo, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-1-antitrypsin+deficiency:+accumulation+or+degradation+of+mutant+variants+within+the+hepatic+endoplasmic+reticulum.">Alpha-1-antitrypsin deficiency: accumulation or degradation of mutant variants within the hepatic endoplasmic reticulum.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 1 (5), 341-345 (1989).</li><li>Rudnick, D. A., Shikapwashya, O., Blomenkamp, K., Teckman, J. 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S., Alpini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+the+cholehepatic+shunt+as+a+potential+therapy+for+primary+sclerosing+cholangitis.">Activation of the cholehepatic shunt as a potential therapy for primary sclerosing cholangitis.</a> Hepatology. 49 (6), 1795-1797 (2009).</li><li>Gurpinar, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+sulindac+derivative+inhibits+lung+adenocarcinoma+cell+growth+through+suppression+of+Akt/mTOR+signaling+and+induction+of+autophagy.">A novel sulindac derivative inhibits lung adenocarcinoma cell growth through suppression of Akt/mTOR signaling and induction of autophagy.</a> Mol Cancer Ther. 12 (5), 663-674 (2013).</li><li>Alpini, G. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+in+vivo+bioimaging+of+hepatocyte+transcription+factor+activity+following+cholestatic+liver+injury+in+mice.">Longitudinal in vivo bioimaging of hepatocyte transcription factor activity following cholestatic liver injury in mice.</a> Sci Rep. 7, 41874 (2017).</li><li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homing+of+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+mediated+by+sphingosine+1-phosphate+contributes+to+liver+fibrosis.">Homing of bone marrow mesenchymal stem cells mediated by sphingosine 1-phosphate contributes to liver fibrosis.</a> J Hepatol. 50 (6), 1174-1183 (2009).</li><li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+released+from+cholestatic+rat+livers+possibly+involved+in+inducing+bone+marrow+hepatic+stem+cell+priming.">Factors released from cholestatic rat livers possibly involved in inducing bone marrow hepatic stem cell priming.</a> Stem Cells Dev. 17 (1), 143-155 (2008).</li><li>Sharma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propitious+role+of+bone+marrow-derived+mononuclear+cells+in+an+experimental+bile+duct+ligation+model:+potential+clinical+implications+in+obstructive+cholangiopathy.">Propitious role of bone marrow-derived mononuclear cells in an experimental bile duct ligation model: potential clinical implications in obstructive cholangiopathy.</a> Pediatr Surg Int. 29 (6), 623-632 (2013).</li></ol>

CBDL cholestasis 폐쇄성에 대 한 가장 일반적인 실험 기술 이지만, 그것은 설치류에 여러 과제를 제시할 수 있습니다. 끝점을 달성 하는 데 필요한 수술 일 수에 따라 동물 중요 한 병 적 상태와 사망률 진행으로 경험할 수 있습니다. 조직 상해 및 담 즙 괴 사 정도 간 질병의 비정상적인 간 실질 및 기준선에서 기능을 설명 하는 몇 가지 유전자 변형 마우스 모델에서 작업할 때 더 악화 됩니다. CBDL에 비?...

급성 간 손상 및 수리, 부분 hepatectomy 등 일반적인 담 관 결 찰 (cBDL)의 외과 모델 간 재생 pathobiology1,2를 공부 하 고 설치류에 수십 년 동안 사용 되었습니다. CBDL에서 일반적인 담 관 (간에 서 생산 하는 모든 담 즙을 빼낸)는 출혈, 폐쇄성 cholestasis, 염증과 섬유 증 수술, 간 경 변3최종 진행 후 첫 2-3 주에 결과. 담 즙 덕트 확산, transdifferentiation, 및 주민 간 조상 세포의 유도 또한 cBDL4,5의 기능. 비록 cBDL 보통 잘 재현할 결과 야생-타입 마우스와 정상적인 간 은6,,78그 긴장 특징이 있는 폐쇄성 cholangiopathy의 특정 메커니즘에 절차는 높은 사망률 및 사망 시간이 지남에 담 즙 방해의 예상 보다 더 많은 동물을 요구 하는 간 질환의 일부 유전자 변형 마우스 모델에 기술적으로 요구 될 수 있습니다. 이 기술은 또한 유전자 변형 생쥐 기본 간 질병, 그렇지 않으면 장기간된 시간 과정 실험 cBDL 다음의 스트레스를 용납 하지 않을 수 있습니다 공부에 대 한 도움이 됩니다.
pBDL는 이러한 문제 들을 극복할 수 있도록 적당 한 대안을 제공할 수 있습니다. 초기 pBDL 로컬 행동 및 조직의 염증9의 중재자를 구별 하는 목적으로 야생-타입 쥐에 있는 학문. PBDL에서 일반적인 담 관 위에 좌우 간 담 관의 담 즙 주 합류는 hilum에서 신중 하 게 시각 이다 고만 왼쪽된 간 담 즙 덕트 지역화 된 폐쇄성 cholestasis 생성 하 출혈. pBDL은 cBDL에 여러 이점을 제공합니다. PBDL에서 unligated 오른쪽 엽 합자 왼쪽된 엽, 영양 상태 등 요소를 순환 같은 조직의 효과를 받게에 대 한 동일 하 게 일치 하는 내부 통제 역할을 합니다. 조직 프로-염증 성 중재자 존재 했지만, 오 사와 외 적은 섬유 증 및 unligated 돌출부에 괴 사를 관찰 하지만 염증 성 세포와 변형 성장 인자-β 표현의 합자 엽9증가.
더 최근에, pBDL는 유지 담 즙10간 parenchymal 효과 연구 재정의 되었다. 내부 제어 (unligated "가짜") 및 실험적인 그룹 같은 동물을 사용 하 여 pBDL는 효과적으로 차례 차례로 더 비용 효율적인 실험 당 필요한 동물의 수를 반. 이상적인 시간 과정 실험 (≥2 주) 합자 엽에서 달성 될 수 있다 그래야 쥐 훨씬, pBDL의 효과 용납. 가장 중요 한 것은, pBDL의 폐쇄성 cholestasis 직접 intrahepatic 효과 구분할 수 있습니다 하 고 합자 엽, unligated 제어 엽에 비해 담 즙 구성 요소를 유지. 전반적으로, pBDL 간에서 지역화 cholestasis의 엽 특정 효과 공부 하는 매력적인 방법입니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1040px;" width="1039">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Microscope-Leica Wild M650, 6&#8211;40&#215; magnification</td>
			<td style="width:336px;">Leica Microsystems</td>
			<td style="width:195px;">n/a</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tec 3 isoflurane funnel fill vaporizer</td>
			<td>General Anesthetic Services</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stevens Tenotomy Scissors</td>
			<td>Accurate Surgical &#38; Scientific Instruments Corporation</td>
			<td>ASSI.9193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Adson Forceps</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>11006-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mosquito classic delicate hemostatic forceps</td>
			<td>Codman</td>
			<td>30-4472</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro-retractor</td>
			<td>Murdock; Roboz Surgical Instrument</td>
			<td>RS-6550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nonwoven gauze sponges</td>
			<td>Fisherband</td>
			<td>870-PC-DBL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Puritan 6&#8221; Small Cotton Swab w/Wooden Handle</td>
			<td>Puritan Medical Products Company</td>
			<td>868-WCS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dumont SS Forceps - Standard Tips/Straight/Inox/13.5cm</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>11203-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dumont SS Forceps - Standard Tips/Angled 45&#176;/Inox/13.5cm</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>11203-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vannas Spring Scissors - 3mm Cutting Edge</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microneedle holder</td>
			<td>Aesculap Surgical Instruments</td>
			<td>FD231R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro AROSuture, sterile 10-0 nylon suture, 70 &#181;m, TAP points</td>
			<td>AROSurgical Instruments Corporation</td>
			<td>T4A10N07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-0 Vicryl</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J662H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5-ml Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Falcon tissue culture dish, 60 &#215; 15 mm</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:343px;">Isoflurane, United States Pharmacopeia (USP) liquid for inhalation, 250 ml</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td>NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Buprenex injectable (buprenorphine hydrochloride)</td>
			<td>Reckitt Benckiser Pharmaceuticals</td>
			<td>NDC 12496-0757-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cefazolin for injection , USP</td>
			<td>APP Pharmaceuticals</td>
			<td>NDC 63323-238-61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PVP scrub solution (povidone&#8211;iodine 7.5%)</td>
			<td>Medline</td>
			<td>NDC 12496-0757-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">70% Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2716</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:343px;">Phosphate Buffered Saline Without Calcium or Magnesium</td>
			<td style="width:336px;">LONZA</td>
			<td style="width:195px;">17-516F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Sirius Red</td>
			<td style="width:336px;">Sigma</td>
			<td style="width:195px;">365548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Hematolxylin</td>
			<td style="width:336px;">Fisher (Richard-Allan Scientific)</td>
			<td style="width:195px;">22-050-111 (7211)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Eosin</td>
			<td style="width:336px;">Anatech (Fisher)</td>
			<td style="width:195px;">832 (NC9686037)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:343px;">Formalin</td>
			<td style="width:336px;">Fisher</td>
			<td style="width:195px;">SF100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

partial bile duct ligation in the mouse: a controlled model of localized obstructive cholestasis

설치류, 일반적인 담 관의 완전 한 담 관 결 찰 (cBDL)에서는 폐쇄성 cholestasis 및 담 즙 덕트 확산 연구 설립된 수술 방법입니다. 그러나, 장기 실험 증가 병 적 상태와 사망률 이어질 수 있습니다. 선택 마우스 기본 간 질환과 긴장, 의미 있는 비교 동물 손실 및 비용을 줄일 수 있는 간, 단일 엽의 결 찰으로도 만들 수 있습니다. 여기, 우리 왼쪽된 엽만 하지 나머지 돌출부에 담 즙 방해를 일으키는 부분 담 관 결 찰 (pBDL)는 간 담 즙 덕트 왼쪽된만 출혈은, 마우스에서 설명 합니다. 주의 microsurgical 기법, pBDL 실험 수 비용, 같은 동물에 동일한 조건을 복종 때 unligated 엽 합자 돌출부를 내부 통제 역할 때문. CBDL, 달리 별도 운영 하는 가짜 제어 그룹 필요 하지 않습니다. pBDL은 cholestasis 및 기타 유지 담 즙 구성 요소 조직의 효과 대 지역화 직접 비교에 매우 유용 합니다. pBDL 또한 메커니즘 약물 및 세포 마이그레이션에 관련 된 조사를 새로운 방법으로 repurposed 수 있습니다.

이 전형적인 실험에 대 한 pBDL (A1AT) 알파-1 antitrypsin 결핍에서 발견 인간의 간 질환 정리는 triplicate 피 즈 유전자 변형 생쥐에서 수행 되었다. 피 즈 마우스 overexpresses transgene 조각의 여러 genomic DNA의 돌연변이 인간 A1AT 유전자, introns 및 업스트림 및 다운스트림 영역14, 측면의 ~ 2 kilobases 발기인의 코딩 영역을 포함 하는 구성 된 15....

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Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis

여기, 선물이 간 부상 및 설치류에서 중생의 외과 모델로 부분 담 관 결 찰.

마우스에 부분적 담 관 결 찰: 지역화 된 폐쇄성 Cholestasis의 제어 모델

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile ...

Research

JoVE Journal

Biology

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Microfluidic 프로브 : 운영 및 현지화된 표면 처리에 사용

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연구

생물학

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

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In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

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Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

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The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Visualization of Endoplasmic Reticulum Localized mRNAs in Mammalian Cells

포유류의 세포에서 Endoplasmic 소포체 현지화 mRNAs의 시각화

In eukaryotes, most of the messenger RNAs (mRNAs) that encode secreted and membrane proteins are localized to the surface of the endoplasmic reticulum ...

Intraductal Injection for Localized Drug Delivery to the Mouse Mammary Gland

마우스 유선 화 된 약물 전달을위한 췌관 주입

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

사용<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em&gt; 다세포 생물의 단백질 항상성을 연구하는 모델 시스템으로

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

마우스 모델의 유효성 검사는 세포 고유의 방식으로 LINC 단지를 방해

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...