Name: combining x-ray crystallography with small angle x-ray scattering to model unstructured regions of nsa1 from s. cerevisiae
Uploaded: 2018-01-10T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Combining X-Ray Crystallography with Small Angle X-Ray Scattering to Model Unstructured Regions of Nsa1 from S. Cerevisiae at JoVE.com

Beugung im Südosten regionale kooperative Zugriffsteam (SER-CAT) 22-ID und 22-BM Beamlines an der Advanced Photon Source (APS), Argonne National Laboratory Daten. Die SAXS Daten wurden auf die SIBYLLEN Strahlrohr im Voraus Licht Quelle (ALS), Lawrence Berkeley National Laboratory. Wir möchten den Mitarbeitern bei der SIBYLLEN Strahlrohr für ihre Hilfe bei remote-Datenerfassung und-Verarbeitung danken. Wir sind dankbar für die National Institute of Environmental Health Sciences (NIEHS) Mass Spectrometry Forschung und Selbsthilfegruppe für Hilfe bei der Bestimmung der Protein-Domänengrenzen. Diese Arbeit wurde durch das uns nationale Institute der Gesundheit intramuralen Forschungsprogramm unterstützt; US National Institute of Environmental Health Sciences (NIEHS) (ZIA ES103247, R. E. S.) und den kanadischen Institutes of Health Research (CIHR, 146626, M.C.P). Verwendung der APS wurde unterstützt durch das US Department of Energy, Office of Science, Büro der grundlegenden Energiewissenschaften unter Vertragsnr. W-31-109-DEU-38. Verwendung von Advanced Light Source (ALS) wurde unterstützt durch die Direktor des Office of Science, Büro von Energie Grundlagenwissenschaften, des US-Department of Energy unter Vertragsnr. DE-AC02-05CH11231. Zusätzlicher Unterstützung für die SIBYLLEN SAXS Strahlrohr kommt aus dem National Institute of Health Projekt MINOS (R01GM105404) und eine High-End-Instrumentierung Grant S10OD018483. Wir möchten auch Danke Andrea Moon und Dr. Sara Andres für ihre kritischen Lektüre des Manuskripts.

(1) rekombinante Protein-Produktion und Reinigung des Nsa 1
<ol><li>Nsa1 Expression Plasmid Design und Klonen<ol>
<li>Erhalten oder S. Cerevisiae genomischen DNA zu kaufen.</li>
		<li>PCR verstärken die Zielsequenzen Nsa1 (Nsa1FL, Rückstände 1-463) und C-terminalen abgeschnitten Nsa1 (Nsa1ΔC, Rückstände 1-434) mit entsprechenden Grundierungen mit genomische DNA isoliert von S. Cerevisiae und eine Schmelztemperatur von ca. 60 ° C mit einer Verlängerung von 1-2 min. Die fol...

Unter Verwendung dieses Protokolls, wurde rekombinante Nsa1 aus S. Cerevisiae für strukturelle Studien durch Röntgen-Kristallographie und SAXS generiert. Nsa1 war brav in Lösung und in mehreren Kristallformen kristallisiert. Bei der Optimierung dieser Kristalle entdeckte man, dass der C-Terminus des Nsa1 empfindlich auf Protease-Abbau war. Die hohe Auflösung, orthorhombic Kristallform konnte nur mit C-terminale abschneiden Varianten der Nsa1, wahrscheinlich dupliziert werden, weil der flexible C-Terminus des...

Ribosomen sind große Ribonucleoprotein Maschinen, die die wesentliche Rolle der Übersetzung von mRNA in Proteine in allen lebenden Zellen durchführen. Ribosomen bestehen aus zwei Untereinheiten, die in einem aufwändigen Verfahren bezeichnet Ribosom Biogenese1,2,3,4hergestellt werden. Eukaryotische Ribosom Versammlung stützt sich auf die Hilfe von Hunderten von wesentlichen ribosomale Montage Faktoren2,3,5. Nsa1 (Nop7 verbunden 1) ist ein eukaryotische Ribosom Versammlung-Faktor, der speziell für die Produktion der großen ribosomalen Untereinheit6erforderlich ist, und ist bekannt als WD-Wiederholung, 74 (WDR74) in höheren Organismen7enthält. WDR74 hat gezeigt, dass für die Blastozyste Bildung in Mäusen8erforderlich und der WDR74-Promoter ist häufig in Krebs Zellen9mutiert. Die Funktion und die genauen Mechanismen der Nsa1/WDR74 im Ribosom Versammlung sind jedoch noch weitgehend unbekannt. Um zu beginnen, die Rolle der Nsa1/WDR74 während der Reifung eukaryotische Ribosom aufzudecken, wurden mehrere strukturelle Analysen durchgeführt, einschließlich Röntgen-Kristallographie und kleinen Winkel x-ray Scattering (SAXS)10.
Röntgen-Kristallographie, Kernresonanzspektroskopie (NMR), Elektronenmikroskopie und SAXS sind alle wichtigen Techniken für makromolekulare Struktur zu studieren. Größe, Form, Verfügbarkeit und Stabilität der Makromoleküle Einflüsse der Strukturbiologie Methode, für die ein bestimmtes Makromolekül wird am besten sein, geeignet, jedoch kombiniert mehrere Techniken durch einen sogenannten "Hybrid"-Ansatz ist immer ein immer vorteilhaft Werkzeug11. Insbesondere sind Röntgen-Kristallographie und SAXS kraftvoll und ergänzende Methoden zur Strukturaufklärung von Makromolekülen12.
Kristallographie bietet hochauflösende atomare Strukturen von kleinen Molekülen bis hin zu großen zellulären Maschinerie wie das Ribosom und führte zu zahlreichen Durchbrüchen in das Verständnis der biologischen Funktionen von Proteinen und anderen Makromoleküle13. Darüber hinaus nutzt Struktur basierende Wirkstoff-Design die Kraft der Kristallstrukturen zum molekularen Andocken von Berechnungsmethoden, Droge-Entdeckung und Entwicklung14eine kritische Dimension hinzuzufügen. Trotz seiner breiten Anwendbarkeit sind flexibel und ungeordneten Systeme schwer zu beurteilen von Kristallographie da Kristall Verpackung behindert kann oder Elektron Dichte Karten möglicherweise unvollständig oder von schlechter Qualität. Umgekehrt ist SAXS ein lösungsorientierter und mit niedriger Auflösung struktureller Ansatz in der Lage, flexible Systeme, die ungeordneten Schlingen und Termini bis hin zu intrinsisch ungeordneten Proteine12,15,16, zu beschreiben. Wenn man bedenkt, dass es kompatibel mit einer breiten Palette von Teilchen Größen12, kann SAXS synergistisch arbeiten mit Kristallographie, biologische Fragestellungen erweitert, die durch strukturelle Studien behandelt werden können.
Nsa1 eignet sich für ein Hybrid-strukturellen Ansatz, denn es enthält eine gut strukturierte WD40 Domäne gefolgt von einer funktionalen, aber flexible C-Terminus nicht Röntgen-Kristallographie Methoden zugänglich ist. Es folgt ein Protokoll für das Klonen, Ausdruck und Reinigung von S. Cerevisiae Nsa1 für Hybrid Strukturaufklärung durch Röntgen-Kristallographie und SAXS. Dieses Protokoll kann angepasst werden, um die Strukturen von anderen Proteinen zu studieren, die aus einer Kombination von geordneten und ungeordneten Regionen bestehen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Molecular Cloning of Nsa1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pMBP2 parallel vector</td>
			<td>Sheffield et al, Protein Expression and Purification 15, 34-39 (1999)</td>
			<td></td>
			<td>We used a modified version of pMBP2 which included an N-terminal His-tag (pHMBP)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S. cerevisiae genomic DNA</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>204508D-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers for cloning Nsa1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SC_Nsa1_FLFw</td>
			<td>IDT</td>
			<td></td>
			<td>CGC CAA AGG CCT 
			ATGAGGTTACTAGTCAGCTGTGT 
			GGATAG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SC_Nsa1_FLRv</td>
			<td>IDT</td>
			<td></td>
			<td>AATGCAGCGGCCGCTCAAATTTT 
			GCTTTTCTTACTGGCTTTAGAAGC 
			AGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SC_Nsa1_DeltaCFw</td>
			<td>IDT</td>
			<td></td>
			<td>GGGCGCCATGGGATCCATGAGG 
			TTACTAGTCAGCTGTGTGG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SC_Nsa1_DeltaCRv</td>
			<td>IDT</td>
			<td></td>
			<td>GATTCGAAAGCGGCCGCTTAAAC 
			CTTCCTTTTTTGCTTCCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Protein Production and Purification of Nsa1</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli BL21 (DE3) Star Cells</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C601003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pMBP- NSA1 and various truncations</td>
			<td>Lo et al., 2017</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Selenomethionine</td>
			<td>Molecular Dimensions</td>
			<td>MD12-503B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPTG, Dioxane-Free</td>
			<td>Promega</td>
			<td>V3953</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA Free Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>4693159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Caledon Laboratory Chemicals</td>
			<td>7560-1-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Buffer, 1 M pH7.5</td>
			<td>KD Medical</td>
			<td>RGF-3340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15514-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>beta-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1M Imidazole, pH 8.0</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>I6980-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Talon Affinity Resin</td>
			<td>Clonetech</td>
			<td>635503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra 15 mL Centrifugal Filter (MWCO 10K)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC901024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiLoad 16/600 Superdex 200 Prep Grade Gel Filtration Column</td>
			<td>GE-Healthcare</td>
			<td>28989335</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEV Protease</td>
			<td>Prepared by NIEHS Protein Expression Core</td>
			<td>Expression plasmid provided by NCI (Tropea et al. Methods Mol Biology, 2009)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-15% Mini-PROTEAN TGX Precast Protein Gels</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>456-8056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystallization, Proteolytic Screening</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal Screen</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal Screen 2</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salt Rx</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Index&#160; Screen</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG/Ion Screen</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JCSG+</td>
			<td>Molecular Dimensions</td>
			<td>MD1-37</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wizard Precipitant Synergy&#160;</td>
			<td>Molecular Dimensions</td>
			<td>MD15-PS-T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swissci 96-well 3-drop UVP sitting drop plates</td>
			<td>TTP Labtech</td>
			<td>4150-05823</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3inch Wide Crystal Clear Sealing Tape</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR4-506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proti-Ace Kit</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG 1500</td>
			<td>Molecular Dimensions</td>
			<td>MD2-100-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEG 400</td>
			<td>Molecular Dimensions</td>
			<td>MD2-100-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES/sodium hydroxide pH 7.5</td>
			<td>Molecular Dimensions</td>
			<td>MD2-011-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Citrate tribasic</td>
			<td>Molecular Dimensions</td>
			<td>MD2-100-127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 mm x 0.22 mm Siliconized Coverslides</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR3-231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Well Plates with sealant (VDX Plate with Sealant)</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR3-172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;18 mM Mounted Nylon Loops (0.05 mm to 0.5 mM)</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR4-945, HR4-947, HR4-970, HR4-971</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seed Bead Kit</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR2-320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Crystal Caps</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR4-779</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Cryo Wand</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR4-729</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogenic Foam Dewar</td>
			<td>Hampton Research</td>
			<td>HR4-673</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal Puck System</td>
			<td>MiTeGen</td>
			<td>M-CP-111-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Full Skirt 96 well Clear Plate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10011-228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AxyMat Sealing Mat</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10011-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UVEX-m</td>
			<td>JAN Scientific, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop Lite Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito Robot</td>
			<td>TTP Labtech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software/Websites</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HKL2000</td>
			<td>Otwinoski and Minor, 1997</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenix</td>
			<td>Adams et al., 2010</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coot</td>
			<td>Emsley et al., 2010</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATSAS</td>
			<td>Petoukhov et al., 2012</td>
			<td></td>
			<td>https://www.embl-hamburg.de/biosaxs/atsas-online/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scatter</td>
			<td>Rambo and Tainer, 2013</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pymol</td>
			<td>The PyMOL Molecular Graphics System, Version 1.8 Schr&#246;dinger, LLC.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BUNCH</td>
			<td>Petoukhov and Svergun, 2005</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CRYSOL</td>
			<td>Svergun et al, 1995</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRIMUS</td>
			<td>Konarev et al, 2003</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EOM</td>
			<td>Tria et al, 2015</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

combining x-ray crystallography with small angle x-ray scattering to model unstructured regions of nsa1 from s. cerevisiae

Bestimmung der Struktur der Ribosom Versammlung Faktor Nsa1 von Saccharomyces Cerevisiae (S. Cerevisiae) in voller Länge ist schwierig wegen der ungeordneten und Protease labil C-Terminus des Proteins. Dieses Manuskript beschreibt die Methoden um rekombinante Nsa1 aus S. Cerevisiae für Baustatik durch Röntgen-Kristallographie und SAXS zu reinigen. Röntgen-Kristallographie wurde eingesetzt, um die Struktur der wohlgeordneten WD40 N-terminale Domäne des Nsa1 zu lösen, und dann SAXS wurde verwendet, um die Struktur des C-Terminus des Nsa1 in Lösung zu beheben. Lösung Streuung Daten wurden von in voller Länge Nsa1 in Lösung. Die theoretische Streuung Amplituden wurden von der hochauflösenden Kristallstruktur des Geschäftsfeldes WD40 berechnet, und dann offenbart eine Kombination des steifen Körpers und ab-initio -Modellierung der C-Terminus des Nsa1. Durch diesen Hybridansatz wurde die quartäre Struktur des gesamten Proteins rekonstruiert. Die hier vorgestellten Methoden sollten in der Regel für die Hybrid-Strukturaufklärung anderer Proteine, bestehend aus einer Mischung aus strukturierten und unstrukturierten Domänen gelten.

Nsa1 war PCR verstärkt aus S. Cerevisiae genomischer DNA und subcloned in einen Vektor mit einer N-terminalen 6 X-Histidin Affinität Tag gefolgt von MBP und ein TEV Protease-Website. Nsa1 verwandelte sich in E. Coli BL21(DE3) Zellen und hohe Erträge der Proteinexpression wurden nach Induktion mit IPTG und Wachstum bei 25 ° C über Nacht (Abb. 1A). Nsa1 war Affinität auf immobilisierte Kobalt Affinität Harz, gefolgt von MBP Spaltung mit...

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Combining X-Ray Crystallography with Small Angle X-Ray Scattering to Model Unstructured Regions of Nsa1 from S. Cerevisiae

Diese Methode beschreibt die Klonen, Ausdruck und Reinigung von rekombinanten Nsa1 zur Strukturaufklärung durch Röntgen-Kristallographie und kleine Winkel Röntgenstreuung (SAXS) und gilt für die Hybrid-Strukturanalyse von anderen Proteinen mit beiden bestellt und Domänen ungeordnet.

Kombination von Röntgen-Kristallographie mit kleinen Winkel Röntgenstreuung, unstrukturierte Regionen der Nsa1 aus S. Cerevisiae zu modellieren

Determination of the full-length structure of ribosome assembly factor Nsa1 from Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) is challenging because of the ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Combining X-Ray Crystallography with Small Angle X-Ray Scattering to Model Unstructured Regions of Nsa1 from S. Cerevisiae

Characterization of Glycoproteins with the Immunoglobulin Fold by X-Ray Crystallography and Biophysical Techniques

Charakterisierung von Glykoproteinen mit dem Immunglobulin-Falz durch Röntgen-Kristallographie und biophysikalischen Techniken

Glycoproteins on the surface of cells play critical roles in cellular function, including signalling, adhesion and transport. On leukocytes, several of ...

Forschung

Biochemie

Contrast-Matching Detergent in Small-Angle Neutron Scattering Experiments for Membrane Protein Structural Analysis and Ab Initio Modeling

Contrast-Matching Detergent in Small-Angle Neutron Scattering Experiments for Membrane Protein Structural Analysis and Ab Initio Modeling

Kontrast-passende Reinigungsmittel im Small-Angle Neutron Streuexperimente für Membrane Protein strukturelle Analyse und Modellierung von Ab Initio

The biological small-angle neutron scattering instrument at the High-Flux Isotope Reactor of Oak Ridge National Laboratory is dedicated to the ...

Structural Studies of Macromolecules in Solution using Small Angle X-Ray Scattering

Strukturelle Studien von Makromolekülen in Lösung mit kleinen Winkel Röntgenstreuung

Protein-protein interactions involving proteins with multiple globular domains present technical challenges for determining how such complexes form and ...

Ion Exchange Chromatography (IEX) Coupled to Multi-angle Light Scattering (MALS) for Protein Separation and Characterization

Ion Exchange Chromatography IEX Coupled to Multi-angle Light Scattering MALS for Protein Separation and Characterization

Ionenaustausch-Chromatographie (IEX) gekoppelt an Multiwinkel Lichtstreuung (MALS) für Protein Trennung und Charakterisierung

Ion-exchange chromatography with multi-angle light scattering (IEX-MALS) is a powerful method for protein separation and characterization. The combination ...

Characterization of Proteins by Size-Exclusion Chromatography Coupled to Multi-Angle Light Scattering (SEC-MALS)

Characterization of Proteins by Size-Exclusion Chromatography Coupled to Multi-Angle Light Scattering SEC-MALS

Charakterisierung von Proteinen durch Größen-Ausschluss-Chromatographie gekoppelt an Multi-Angle Light Scattering (SEC-MALS)

Analytical size-exclusion chromatography (SEC), commonly used for the determination of the molecular weight of proteins and protein-protein complexes in ...

An All-in-one Sample Holder for Macromolecular X-ray Crystallography with Minimal Background Scattering

Ein All-in-One-Probenhalter für makromolekulare Röntgenkristallographie mit minimaler Hintergrundstreuung

Macromolecular X-ray crystallography (MX) is the most prominent method to obtain high-resolution three-dimensional knowledge of biological macromolecules. ...

Cell Culture on Silicon Nitride Membranes and Cryopreparation for Synchrotron X-ray Fluorescence Nano-analysis

Zellkultur auf Siliziumnitridmembranen und Kryovorbereitung für Synchrotron-Röntgenfluoreszenz Nano-Analyse

Very little is known about the distribution of metal ions at the subcellular level. However, those chemical elements have essential regulatory functions ...

X-Ray Crystallography to Study the Oligomeric State Transition of the Thermotoga maritima M42 Aminopeptidase TmPep1050

X-Ray Crystallography to Study the Oligomeric State Transition of the Thermotoga maritima M42 Aminopeptidase TmPep1050

Röntgenkristallographie zur Untersuchung des oligomeren Zustandsübergangs der Thermotoga maritima M42 Aminopeptidase TmPep1050

The M42 aminopeptidases form functionally active complexes made of 12 subunits. Their assembly process appears to be regulated by their metal ion ...

Fixed Target Serial Data Collection at Diamond Light Source

Feste serielle Zieldatenerfassung an der Diamond Light Source

Serial data collection is a relatively new technique for synchrotron users. A user manual for fixed target data collection at I24, Diamond Light Source is ...

Motility of Single Molecules and Clusters of Bi-Directional Kinesin-5 Cin8 Purified from S. cerevisiae Cells

Motility of Single Molecules and Clusters of Bi-Directional Kinesin-5 Cin8 Purified from S. cerevisiae Cells

Motilität einzelner Moleküle und Cluster von bidirektionalem Kinesin-5 Cin8, gereinigt aus S. cerevisiae-Zellen

The mitotic bipolar kinesin-5 motors perform essential functions in spindle dynamics. These motors exhibit a homo-tetrameric structure with two pairs of ...