Name: real-time measurement of epithelial barrier permeability in human intestinal organoids
Uploaded: 2017-12-18T15:00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids at JoVE.com

लेखक डीआरएस का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं । स्टेफ़नी Spohn और बेसल Abuaita पर कई उपयोगी चर्चा के लिए organoid microinjection. JRS आंत्र स्टेम सेल कंसोर्टियम (U01DK103141), मधुमेह और पाचन और गुर्दे की बीमारियों के राष्ट्रीय संस्थान (NIDDK) और एलर्जी और संक्रामक रोगों के राष्ट्रीय संस्थान (NIAID) द्वारा वित्त पोषित एक सहयोगी अनुसंधान परियोजना द्वारा समर्थित है । JRS और VBY NIAID उपंयास, दर्ज रोगों (NAMSED) कंसोर्टियम (U19AI116482) के लिए वैकल्पिक मॉडल प्रणालियों द्वारा समर्थित हैं । DRH एलर्जी और संक्रामक रोग के राष्ट्रीय संस्थान से माइक्रोबियल रोगजनन प्रशिक्षण अनुदान के तंत्र का समर्थन किया है (NIAID, T32AI007528) और नैदानिक और स्वास्थ्य के लिए मिशिगन संस्थान को नैदानिक और शोधों विज्ञान पुरस्कार रिसर्च (UL1TR000433) ।
इस पांडुलिपि में उपयोग किया गया पूरा डेटा फ़ाइलें और डेटा विश्लेषण कोड https://github.com/hilldr/HIO_microinjection पर उपलब्ध हैं ।

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	<li>Standring, S., Borley, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Gray's anatomy: The anatomical basis of clinical practice. , (2008).</li><li>Buckley, A., Turner, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+biology+of+tight+junction+barrier+regulation+and+mucosal+disease.">Cell biology of tight junction barrier regulation and mucosal disease.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. , (2017).</li><li>Clayburgh, D. R., Shen, L., Turner, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+porous+defense:+The+leaky+epithelial+barrier+in+intestinal+disease.">A porous defense: The leaky epithelial barrier in intestinal disease.</a> Lab Invest. 84, 282-291 (2004).</li><li>Turner, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+mucosal+barrier+function+in+health+and+disease.">Intestinal mucosal barrier function in health and disease.</a> Nat Rev Immunol. 9, 799-809 (2009).</li><li>Bischoff, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+permeability-a+new+target+for+disease+prevention+and+therapy.">Intestinal permeability-a new target for disease prevention and therapy.</a> BMC Gastroenterol. 14, 189 (2014).</li><li>Odenwald, M. A., Turner, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+epithelial+barrier:+A+therapeutic+target?.">The intestinal epithelial barrier: A therapeutic target?.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 14, 9-21 (2017).</li><li>Krugliak, P., Hollander, D., Schlaepfer, C. C., Nguyen, H., Ma, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+sites+of+mannitol+permeability+of+small+and+large+intestine+in+the+rat.">Mechanisms and sites of mannitol permeability of small and large intestine in the rat.</a> Dig Dis Sci. 39, 796-801 (1994).</li><li>Johnston, S. D., Smye, M., Watson, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+permeability+tests+in+coeliac+disease.">Intestinal permeability tests in coeliac disease.</a> Clin Lab. 47, 143-150 (2001).</li><li>Salles Teixeira, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+permeability+measurements:+General+aspects+and+possible+pitfalls.">Intestinal permeability measurements: General aspects and possible pitfalls.</a> Nutr Hosp. 29, 269-281 (2014).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+to+determine+intestinal+permeability+and+bacterial+translocation+during+liver+disease.">Methods to determine intestinal permeability and bacterial translocation during liver disease.</a> J Immunol Methods. 421, 44-53 (2015).</li><li>Donato, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+permeability+in+a+commonly+used+epithelial+cell+line:+T84+intestinal+epithelial+cells.">Studying permeability in a commonly used epithelial cell line: T84 intestinal epithelial cells.</a> Methods Mol Biol. 763, 115-137 (2011).</li><li>Balimane, P. V., Chong, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+culture-based+models+for+intestinal+permeability:+A+critique.">Cell culture-based models for intestinal permeability: A critique.</a> Drug Discov Today. 10, 335-343 (2005).</li><li>Vidyasagar, S., MacGregor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ussing+chamber+technique+to+measure+intestinal+epithelial+permeability.">Ussing chamber technique to measure intestinal epithelial permeability.</a> Methods Mol Biol. 1422, 49-61 (2016).</li><li>Herrmann, J. R., Turner, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+Ussing's+chambers:+contemporary+thoughts+on+integration+of+transepithelial+transport.">Beyond Ussing's chambers: contemporary thoughts on integration of transepithelial transport.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 310, C423-C431 (2016).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459, 262-265 (2009).</li><li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+development+and+disease+with+organoids.">Modeling development and disease with organoids.</a> Cell. 165, 1586-1597 (2016).</li><li>Drost, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+culture+systems+for+prostate+epithelial+and+cancer+tissue.">Organoid culture systems for prostate epithelial and cancer tissue.</a> Nat Protoc. 11, 347-358 (2016).</li><li>Rookmaaker, M. B., Schutgens, F., Verhaar, M. C., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+application+of+human+adult+stem+or+progenitor+cell+organoids.">Development and application of human adult stem or progenitor cell organoids.</a> Nat Rev Nephrol. 11, 546-554 (2015).</li><li>Spence, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+intestinal+tissue+in+vitro.">Directed differentiation of human pluripotent stem cells into intestinal tissue in vitro.</a> Nature. 470, 105-109 (2011).</li><li>Aurora, M., Spence, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HPSC-derived+lung+and+intestinal+organoids+as+models+of+human+fetal+tissue.">HPSC-derived lung and intestinal organoids as models of human fetal tissue.</a> Dev Biol. 420, 230-238 (2016).</li><li>Dedhia, P. H., Bertaux-Skeirik, N., Zavros, Y., Spence, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+gastrointestinal+development+and+disease.">Organoid models of human gastrointestinal development and disease.</a> Gastroenterology. 150, 1098-1112 (2016).</li><li>Dye, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+generation+of+human+pluripotent+stem+cell+derived+lung+organoids.">In vitro generation of human pluripotent stem cell derived lung organoids.</a> Elife. 4, (2015).</li><li>Dye, B. R., Miller, A. J., Spence, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+grow+a+lung:+Applying+principles+of+developmental+biology+to+generate+lung+lineages+from+human+pluripotent+stem+cells.">How to grow a lung: Applying principles of developmental biology to generate lung lineages from human pluripotent stem cells.</a> Curr Pathobiol Rep. 4, 47-57 (2016).</li><li>McCracken, K. W., Howell, J. C., Wells, J. M., Spence, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generating+human+intestinal+tissue+from+pluripotent+stem+cells+in+vitro.">Generating human intestinal tissue from pluripotent stem cells in vitro.</a> Nat Protoc. 6, 1920-1928 (2011).</li><li>Leslie, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+and+toxin+production+by+clostridium+difficile+within+human+intestinal+organoids+result+in+disruption+of+epithelial+paracellular+barrier+function.">Persistence and toxin production by clostridium difficile within human intestinal organoids result in disruption of epithelial paracellular barrier function.</a> Infect Immun. 83, 138-145 (2015).</li><li>Leslie, J. L., Young, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+whole+new+ball+game:+Stem+cell-derived+epithelia+in+the+study+of+host-microbe+interactions.">A whole new ball game: Stem cell-derived epithelia in the study of host-microbe interactions.</a> Anaerobe. 37, 25-28 (2016).</li><li>Zachos, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+enteroids/Colonoids+and+intestinal+organoids+functionally+recapitulate+normal+intestinal+physiology+and+pathophysiology.">Human enteroids/Colonoids and intestinal organoids functionally recapitulate normal intestinal physiology and pathophysiology.</a> J Biol Chem. 291, 3759-3766 (2016).</li><li>Hill, D. R., Spence, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrointestinal+organoids:+Understanding+the+molecular+basis+of+the+host-microbe+interface.">Gastrointestinal organoids: Understanding the molecular basis of the host-microbe interface.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 3, 138-149 (2017).</li><li>Miyoshi, H., Stappenbeck, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+expansion+and+genetic+modification+of+gastrointestinal+stem+cells+in+spheroid+culture.">In vitro expansion and genetic modification of gastrointestinal stem cells in spheroid culture.</a> Nat Protoc. 8, 2471-2482 (2013).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon,+adenoma,+adenocarcinoma,+and+barrett's+epithelium.">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141, 1762-1772 (2011).</li><li>Engevik, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+nHE3+alters+gut+microbiota+composition+and+influences+bacteroides+thetaiotaomicron+growth.">Loss of nHE3 alters gut microbiota composition and influences bacteroides thetaiotaomicron growth.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 305, G697-G711 (2013).</li><li>Forbester, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+salmonella+enterica+serovar+typhimurium+with+intestinal+organoids+derived+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Interaction of salmonella enterica serovar typhimurium with intestinal organoids derived from human induced pluripotent stem cells.</a> Infect Immun. 83, 2926-2934 (2015).</li><li>Engevik, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+clostridium+difficile+infection:+Inhibition+of+nHE3+and+microbiota+profile.">Human clostridium difficile infection: Inhibition of nHE3 and microbiota profile.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 308, G497-G509 (2015).</li><li>Bancroft, J., Gamble, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Theory and practice of histological techniques. , (2008).</li><li>Kennedy, S., Oswald, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> PCR troubleshooting and optimization: The essential guide. , (2011).</li><li>Kurien, B., Scofield, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Western blotting: Methods and protocols. , (2015).</li><li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NIH+image+to+imageJ:+25+years+of+image+analysis.">NIH image to imageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9, 671-675 (2012).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+An+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: An open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9, 676-682 (2012).</li><li>Winston, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Microsoft excel data analysis and business modeling. , (2016).</li><li>R Core Team. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+language+and+environment+for+statistical+computing.">A language and environment for statistical computing.</a> R Foundation for Statistical Computing. , (2017).</li><li>Rosenbaum, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Basic pharmacokinetics and pharmacodynamics: An integrated textbook and computer simulations. , (2016).</li><li>Selden, L. A., Estes, J. E., Gershman, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tightly+bound+divalent+cation+regulates+actin+polymerization.">The tightly bound divalent cation regulates actin polymerization.</a> Biochem Biophys Res Commun. 116, 478-485 (1983).</li><li>Vojdani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=For+the+assessment+of+intestinal+permeability,+size+matters.">For the assessment of intestinal permeability, size matters.</a> Altern Ther Health Med. 19, 12-24 (2013).</li><li>Karve, S. S., Pradhan, S., Ward, D. V., Weiss, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+organoids+model+human+responses+to+infection+by+commensal+and+shiga+toxin+producing+escherichia+coli.">Intestinal organoids model human responses to infection by commensal and shiga toxin producing escherichia coli.</a> PLoS One. 12, e0178966 (2017).</li></ol>

लेखकों कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों या हित के अंय संघर्ष का खुलासा किया है ।

इस प्रोटोकॉल hPSC-व्युत्पंन HIOs और ऊतक व्युत्पंन आंत्र organoids और वास्तविक समय में उपकला बाधा पारगम्यता की माप के microinjection के लिए एक सामान्य प्रयोजन विधि स्थापित करता है । हम भी विश्लेषण और इन तरीकों का उपयोग कर उत्पंन डेटा की व्याख्या करने के लिए हमारे दृष्टिकोण का प्रदर्शन किया है । आंतों organoids मॉडल सिस्टम की बढ़ती गोद16,20,21,28 और एक शारीरिक रूप से प्रासंगिक कार्यात्मक के रूप में आंतों बाधा पारगम्यता में लंबे समय से ब्याज को देखते हुए परिणाम3,4,5,6, हमें आशा है कि इस क्षेत्र में काम कर रहे दूसरों को लागू करने और इन तरीकों पर निर्माण करने में सक्षम हो जाएगा ।
कई कदम है जो इस तकनीक के आवेदन के लिए महत्वपूर्ण हैं । उच्च गुणवत्ता hPSC-या ऊतक व्युत्पंन हीयो ऊतक microinjection के साथ व्यापक प्रयोग करने से पहले स्थापित किया जाना चाहिए करने के लिए उपयोग । हीयो macrostructure हो सकता है heterogenous, दोनों आकार और आकार में भिन्नता के साथ, हालांकि ऊतक पहचान और सेलुलर आकृति विज्ञान अत्यधिक प्रतिलिपि है जब स्थापित पद्धति का उपयोग करने के लिए HIOs24उत्पन्न. गोलाकार HIOs एक एकल अर्द्ध पारदर्शी लुमेन से मिलकर और लगभग माप 1 मिमी व्यास में microinjection और वास्तविक समय में चमकदार प्रतिदीप्ति की माप के लिए आदर्श होते हैं । कुछ मामलों में, microinjection, हीयो या इंजेक्शन सामग्री के स्पष्ट रिसाव के पतन में जिसके परिणामस्वरूप विफल हो जाएगा । विफल HIOs एक मानक micropipette का उपयोग कर उपयोगकर्ता के विवेक पर अच्छी तरह से संस्कृति से हटाया जा सकता है । microinjection और इमेजिंग के लिए HIOs का चयन करते समय एक इमेजिंग प्लेटफॉर्म पर उपलब्ध उद्देश्य लेंस पर विचार करें । सामांय में, 2 4x उद्देश्य लेंस पूरा हीयो फ्लोरोसेंट संकेत पर कब्जा करने के लिए आदर्श होते हैं, हालांकि एक 10x उद्देश्य इस्तेमाल किया जा सकता है अगर कम पावर लेंस उपलब्ध नहीं है या यदि उपलब्ध HIOs & #60; व्यास में 1 मिमी । इमेजिंग सॉफ्टवेयर समय के साथ परिभाषित बिंदुओं पर फ्लोरोसेंट छवियों के स्वचालित कब्जा के लिए अनुमति चाहिए ।
इस प्रोटोकॉल के कई संशोधनों के क्रम में प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुरूप संभव हो रहे हैं । उदाहरण के लिए, बैरियर समारोह परीक्षणों के परिणामों का उपयोग४३ में यौगिकों के आणविक आकार पर निर्भर हो सकता है और यह आणविक वजन बदलती की dextran तैयारियों का परीक्षण करने के लिए उपयुक्त हो सकता है । इसके अलावा, brightfield इमेजिंग ऊतक के समग्र संरचनात्मक अखंडता के एक संकेतक के रूप में प्रतिदीप्ति इमेजिंग के अलावा किया जा सकता है25। जब जीवित जीवाणुओं के microinjection प्रदर्शन25,28,31,३२,३३,४४, यह पेनिसिलिन जोड़ने के लिए आवश्यक हो सकता है और streptomycin या gentamicin करने से पहले या बाद में हीयो कल्चर मीडिया को microinjection । microcapillary के बाहर बैक्टीरियल संस्कृति निलंबन के साथ भरने के दौरान दूषित हो जाएगा और यह हीयो मीडिया को हस्तांतरित किया जा सकता है । वैकल्पिक रूप से, microinjection मीडिया के बिना extracellular मैट्रिक्स (जैसे, Matrigel) में निलंबित HIOs पर किया जा सकता है, microinjection पूरा होने के बाद मीडिया को जोड़ने । इस extracellular मैट्रिक्स और हीयो के बाहरी चेहरे को प्रदूषित सीमा हो सकती है । जब माइक्रोबियल विकास परख की योजना बना, यह 1-2 एच के बाद मीडिया में एंटीबायोटिक दवाओं को दूर करने के लिए धीमी गति से बचने या microinjected जीवों के विकास को रोकने के लिए आवश्यक हो सकता है ।
अंत में, पहचानने कि नहीं सभी शोधकर्ताओं ने सूक्ष्म उपकरणों के लिए उपयोग होगा इन विट्रो इमेजिंग में करने के लिए उपयुक्त है, यह कहना महत्वपूर्ण है कि प्रतिदीप्ति डेटा इकट्ठा करने के लिए इस प्रोटोकॉल में उल्लिखित प्रक्रियाओं छवियों के लिए लागू किया जा सकता है फिक्स्ड timepoints पर स्वचालित छवि पर कब्जा या पर्यावरण नियंत्रण के बिना मानक epifluorescent माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर । इस दृष्टिकोण के उदाहरण Leslie और हुआंग एट अल द्वारा रिपोर्टों में पाया जा सकता है । 25, जो hPSC-व्युत्पन्न आंत्र organoids में सी. डिफीसाइल विष गतिविधि की जांच की, और कर्वे और Pradan एट अल. ४४, जो इसी तरह hPSC में उपकला बाधा पारगम्यता की जांच की-लाइव ई. कोलाईके साथ आंत्र organoids microinjected व्युत्पंन । इमेजिंग उपकरण के मैनुअल आपरेशन अधिक भिंनता में परिणाम और फ्लोरोसेंट संकेत सामांय में कठिनाई हो सकती है । जब FITC के मैनुअल इमेजिंग प्रदर्शन-dextran इंजेक्शन HIOs यह निश्चित आवर्धन, फ्लोरोसेंट उत्तेजना तीव्रता बनाए रखने के लिए आवश्यक है, और प्रयोग भर में जोखिम बार फ्लोरोसेंट तीव्रता माप बदरंग से बचने के लिए ।

आंतों उपकला एक चयनात्मक बाधा है कि पोषक तत्वों के दिशात्मक परिवहन, एच2ओ, आयनों, और अपशिष्ट उत्पादों जबकि गैर विशिष्ट प्रसार-लुमेन और के बीच अन्य कणों की मध्यस्थता विनिमय को कम करने के लिए फार्म mesenchymal ऊतक या रक्त की आपूर्ति1,2. आंत्र उपकला बाधा के विशिष्ट पारगम्यता लंबे समय दोनों स्वास्थ्य और रोग में एक महत्वपूर्ण कार्यात्मक पैरामीटर माना गया है3,4,5,6, की दर को दर्शाता है कि paracellular अंतरिक्ष के माध्यम से उपकला भर में छोटे अणुओं के प्रसार. उपकला बाधा पारगम्यता का मापन पशु मॉडल7 में और मानव रोगियों में8 lactulose की घूस, जो जठरांत्र संबंधी मार्ग में कोई विशेष ट्रांसपोर्टर है के माध्यम से आयोजित किया जा सकता है, और बाद में संग्रह और परिधीय रक्त में lactulose सांद्रता का मापन. इस तरह के फ्लोरोसेंट लेबल कार्बोहाइड्रेट के रूप में बाधा समारोह के वैकल्पिक घूस मार्करों भी उपलब्ध है9,10। इस दृष्टिकोण आंत्र उपकला कोशिका Transwell पर उगाया संस्कृतियों के लिए अनुकूलित किया गया है11का समर्थन करता है, एक सरलीकृत दृष्टिकोण है कि अधिक से अधिक प्रयोगात्मक नियंत्रण के लिए अनुमति देता है, लेकिन यह भी vivo में एक गरीब कारक के रूप में आलोचना की गई है विभेदक उपकला उपप्रकार और ऊतक संरचना के अभाव के कारण पारगम्यता12. कक्षों का उपयोग अभी तक एक और दृष्टिकोण का प्रतिनिधित्व करते हैं और पूरे आंत्र म्यूकोसा में उपकला बाधा समारोह की माप के लिए अनुमति पूर्व vivo13. इस तकनीक के आवेदन अक्सर ऊतक उपलब्धता और हालत13,14द्वारा सीमित है । इस प्रकार नए तरीकों जो संतुलन reproducibility और शारीरिक प्रासंगिकता के साथ प्रवाह आवश्यक हैं ।
इन विट्रो organogenesis में हाल की घटनाओं में 3 डी ऊतक संस्कृति के गोद लेने के लिए नेतृत्व किया है recapitulating जटिल ऊतकों की गतिशीलता के लिए एक परिष्कृत मंच के रूप में मॉडल सिस्टम15,16,17 ,18,19,20,21,22,23। विशेष रूप से, मानव pluripotent स्टेम सेल (hPSC) व्युत्पन्न मानव आंत्र organoids (HIOs)19,24 मेजबान के अध्ययन के लिए एक प्रतिलिपि और प्रयोग करने योग्य मॉडल प्रणाली के रूप में उभरा है माइक्रोबियल बातचीत और उपकला बैरियर गतिशीलता25,26,27,28. इसी प्रकार, मानव ऊतक-व्युत्पंन organoids (enteroids के रूप में भी जाना जाता है) एक सरल बायोप्सी प्रक्रिया से व्युत्पंन किया जा सकता है और मानव शरीर क्रिया विज्ञान और रोग15,29,30का अध्ययन करने के लिए एक तंत्र के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है । Microinjection मानव आंत्र organoids प्रायोगिक यौगिकों के वितरण के लिए अनुमति देता है25 या जीवित रोगाणुओं25,31,३२,३३ शिखर उपकला के लिए organoid लुमेन की सतह । Leslie और हुआंग एट अल. 25 हाल ही में इस तकनीक को अनुकूलित करने के लिए fluorescein isothiocyanate (FITC) के साथ HIOs microinjected में बाधा पारगम्यता को मापने जीवाणु विषाक्त पदार्थों को dextran के बाद प्रदर्शन लेबल ।
इस प्रोटोकॉल hPSC में उपकला बाधा पारगम्यता की माप के लिए एक गाइड के रूप में करना है-व्युत्पन्न HIOs और ऊतक-फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग कर HIOs व्युत्पंन. मामूली संशोधनों के साथ, यह भी प्रयोगात्मक यौगिकों के साथ HIOs के microinjection पर एक सामान्य प्राइमर के रूप में सेवा कर सकते हैं. उपयोगकर्ताओं को microinjection के बाद अतिरिक्त या वैकल्पिक बहाव अनुप्रयोगों के साथ इस प्रोटोकॉल के पूरक हो सकता है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EGTA 0.5 M sterile (pH 8.0)</td>
			<td>Bioworld</td>
			<td>405200081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell matrix solution (Matrigel)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deltavision RT live cell imaging system</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>29065728</td>
			<td>http://www.gelifesciences.com/webapp/wcs/stores/servlet/catalog/en/GELifeSciences/brands/deltavision/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>29065728</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>softWoRx Imaging software</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>29065728</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety cabinet</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>Cell Logic+</td>
			<td>http://www.labconco.com/product/purifier-cell-logic-class-ii-type-a2-biosafety-cabinets-2/4262</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X PBS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM-F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634-010</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement (50X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504044</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine (100X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15630080</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manipulator</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>UM-3C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>UM-1PF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Holder</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>UP-1</td>
			<td>Alternate to Xenoworks pipette holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stand</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>GJ-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SX61</td>
			<td>Recommended scope, although other models are likely compatible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus IX71 Fluorescent microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoolSNAP HQ2</td>
			<td>Photometrics</td>
			<td>29065728</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant C. difficile Toxin A/TcdA Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>8619-GT-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R-spondin 1</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>4645-RS</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noggin</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>6057-NG</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-dextran (4 kDa)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>46944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>P-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Lab-Tek II Chamber Slides</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>154526PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass filaments</td>
			<td>WPI</td>
			<td>TW100F-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette holder</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>BR-MH2</td>
			<td>Preferred device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analog Tubing kit</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>BR-AT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/16 in clear ferrule</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>V001104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-1.2 mm O-ring</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>V300450</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time measurement of epithelial barrier permeability in human intestinal organoids

बायोप्सी के माध्यम से प्राप्त या pluripotent स्टेम सेल द्वारा निर्देशित विभेद के माध्यम से उत्पन्न आंतों के ऊतकों की 3 डी संस्कृति में अग्रिम, आंत्र म्यूकोसा के इन विट्रो मॉडल में परिष्कृत में हुई है । इन उभरते मॉडल प्रणालियों का लाभ उपकरण और 2 डी संस्कृति प्रणालियों और जानवरों के लिए विकसित तकनीकों के अनुकूलन की आवश्यकता होगी । यहाँ, हम वास्तविक समय में मानव आंत्र organoids में उपकला बाधा पारगम्यता को मापने के लिए एक तकनीक का वर्णन. यह epifluorescent फिल्टर के साथ लगे एक औंधा माइक्रोस्कोप पर फ्लोरोसेंट-लेबल dextran और इमेजिंग के microinjection द्वारा पूरा किया जाता है । आंत्र organoids में बाधा पारगम्यता के वास्तविक समय मापन मानव आंत्र उपकला ऊतक में उच्च संकल्प लौकिक डेटा की पीढ़ी की सुविधा, हालांकि इस तकनीक को भी तय timepoint इमेजिंग दृष्टिकोण के लिए लागू किया जा सकता है. इस प्रोटोकॉल को औषधीय एजेंटों, बैक्टीरियल उत्पादों या विषाक्त पदार्थों, या जीवित सूक्ष्मजीवों के लिए जोखिम के बाद उपकला बाधा पारगम्यता की माप के लिए आसानी से अनुकूलनीय है. मामूली संशोधनों के साथ, इस प्रोटोकॉल भी आंतों organoids के microinjection पर एक सामान्य प्राइमर के रूप में सेवा कर सकते हैं और उपयोगकर्ताओं को microinjection निम्नलिखित अतिरिक्त या वैकल्पिक बहाव अनुप्रयोगों के साथ इस प्रोटोकॉल के पूरक करने के लिए चुन सकते हैं.

HIOs मानव pluripotent स्टेम कोशिकाओं और कोशिका मैट्रिक्स समाधान में प्रसंस्कृत से विभेदित के रूप में पहले वर्णित19,24थे । संस्कृति में 4 सप्ताह के बाद, HIOs पर्याप्त विस्तार किया था microinjection के लिए अनुमति देते हैं । HIOs के साथ microinjected गए थे जिनमें से 4 केडीए FITC-संयुग्मित dextran में निलंबित किए गए पंजाब या पंजाबियों से युक्त क्लोस्ट्रीडियम डिफीसाइल विष TcdA. C. डिफीसाइल एक अवसरवादी जठरांत्र रोगज़नक़ कि HIOs25में विष की मध्यस्थता उपकला विषाक्तता प्रदर्शित करता है । एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में, EGTA के एक सबसेट में हीयो संस्कृति मीडिया को जोड़ा गया था HIOs का इंजेक्शन के साथ पंजाबियों और FITC-dextran । EGTA एक कैल्शियम chelator है जो actin cytoskeleton४२के रैपिड डे-बहुलकीकरण का कारण बनता है । FITC प्रतिदीप्ति एक नियंत्रित पर्यावरण चैंबर और छवियों के भीतर एक जीवित इमेजिंग माइक्रोस्कोप पर वास्तविक समय में निगरानी की गई 10 मिनट के अंतराल में कब्जा कर लिया गया था ।
इमेजिंग डेटा के बाद हॉक विश्लेषण FITC प्रतिदीप्ति की अवधारण में पर्याप्त अंतर का पता चला (चित्र 5) । HIOs पंजाब के साथ इंजेक्शन लगभग फ्लोरोसेंट संकेत के सभी टी = 0 पर मौजूद बनाए रखा, लेकिन HIOs कि भी EGTA के साथ इलाज के TcdA के साथ इंजेक्शन थे 8 घंटे के बाद से फ्लोरोसेंट तीव्रता में काफी कमी का प्रदर्शन-microinjection (चित्रा 5 ए). इमेजिंग डेटा प्रत्येक प्रयोगात्मक स्थिति (चित्रा 5B) में समय के साथ फ्लोरोसेंट तीव्रता में सापेक्ष परिवर्तन का प्रतिनिधित्व करने के लिए एक उच्च संकल्प डेटासेट उत्पन्न करने के लिए सभी समय बिंदुओं पर सभी HIOs के लिए मात्रा थे. उपकला पारगम्यता में अंतर प्रत्येक उपचार समूह (तालिका 1) और समूहों के बीच टी टी1/2 में मतभेद की तुलना करने के लिए FITC का मतलब उन्मूलन समय (टी1/2 ) की गणना करके मूल्यांकन किया गया छात्र का t-परीक्षण उपयोग कर रहा है । नियंत्रण इलाज HIOs अधिक से अधिक 16 घंटे (टी1/2 = 17 ± ०.३ ज) के लिए FITC फ्लोरोसेंट संकेत के बहुमत बनाए रखा । EGTA के साथ उपचार काफी कम FITC-dextran उन्मूलन समय के सापेक्ष नियंत्रण HIOs (t1/2 = २.६ ± ०.२ h; P = १.३ x 10-8). पहले प्रकाशित परिणामों के साथ सुसंगत25, TcdA के microinjection काफी वृद्धि हुई उपकला बाधा पारगम्यता नियंत्रण उपचार (t1/2 = ७.६ ± ०.६ एच के सापेक्ष; P = ५.४ x 10-4). इस प्रकार, दोनों बाहरी (EGTA) और microinjected (TcdA) यौगिकों HIOs में उपकला बाधा पारगम्यता में महत्वपूर्ण परिवर्तन उत्प्रेरण करने में सक्षम हैं. इन परिणामों का सुझाव है कि औषधीय एजेंटों की एक विस्तृत श्रृंखला के प्रभाव, चयापचयों, बैक्टीरियल उत्पादों, साइटोकिंस, विकास कारकों, और उपकला बाधा समारोह पर अन्य यौगिकों इस दृष्टिकोण का उपयोग कर मूल्यांकन किया जा सकता है.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>उपचार</td>
			<td>आधा जीवन (ज)</td>
			<td>SEM (h)</td>
			<td>लोअर ९५% CI (एच)</td>
			<td>ऊपरी ९५% CI (एच)</td>
			<td>एन</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>नियंत्रण</td>
			<td>१७.११</td>
			<td>०.३</td>
			<td>१६.४५</td>
			<td>१७.७८</td>
			<td>11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>२.५८</td>
			<td>०.१९</td>
			<td>१.७८</td>
			<td>३.३८</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TcdA</td>
			<td>७.५६</td>
			<td>०.६३</td>
			<td>५.९३</td>
			<td>९.१८</td>
			<td>6</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
तालिका 1: मतलब उंमूलन समय (टी1/2) के लिए FITC-dextran में EGTA या TcdA के साथ इलाज HIOs। इकाइयां घंटों बाद microinjection हैं ।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig1.jpg"> 
चित्र 1: हीयो microinjection के लिए एक microinjector और micromanipulator का मूल लेआउट. इस छवि HIOs के microinjection प्रदर्शन के लिए इस्तेमाल किया उपकरणों की पूरी पूरक से पता चलता है. मुख्य घटक लेबल और आदेश जानकारी सामग्री तालिका में पाया जा सकता है । <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig1large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig2.jpg"> 
चित्रा 2: Micropipette खींचने. कॉपर हीटिंग का तार hc, शीर्ष क्लैंप c1, नीचे दबाना (c2), खींचने बांह (pa), हीट सेलेक्शन टॉगल (एचटी) तीर से पहचाने जाते हैं. हीट 1 और PULL के लिए सही सेटिंग लाल पाठ में इंगित की गई हैं । इनसेट में एक सही ढंग से घुड़सवार ग्लास रेशा हीटिंग के लिए तैयार दिखाता है । <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig2large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig3.jpg"> 
चित्रा 3: एक ऊतक के प्रतिनिधि छवियों-व्युत्पंन हीयो FITC-dextran के साथ इंजेक्शन । (एक) कांच microcapillary की स्थिति का प्रदर्शन बस हीयो और microinjection में प्रवेश करने से पहले छवि । (ख) एक ऊतक की Brightfield छवि-व्युत्पंन मानव आंत्र organoids के microinjection के बाद FITC-dextran । प्रतिदीप्ति संकेत भी एक विशिष्ट फिल्टर सेट के उपयोग के बिना स्पष्ट है कि ध्यान दें । कधी रंगाई एड्स microinjection काटेकोर. 3x आवर्धन <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig3large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig4.jpg"> 
चित्र 4: लाइव इमेजिंग कार्यप्रवाह. (A) खुर्दबीन पैरामीटर सेट करने के लिए आवश्यक कदम illustrating स्क्रीनशॉट, स्लाइड पर HIOs मिल जाए, और प्रत्येक हीयो के लिए मंच की स्थिति को बचाने के लिए छवि बनाई जा करने के लिए । (B) में निर्दिष्ट प्रत्येक स्थान पर नियमित अंतराल पर FITC चैनल कैप्चरिंग के लिए Pre-इमेजिंग सेटिंग्स (C) के बाद-इमेजिंग निर्यात DV प्रारूप डेटा फ़ाइलों के रूप में एक tiff छवि के साथ tiff छवियां के रूप में हीयो प्रति समय बिंदु ।<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig4large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig5.jpg"> 
चित्र 5: प्रतिनिधि परिणाम । (क) स्टेम सेल व्युत्पंन मानव आंत्र organoids (हीयो) microinjected के साथ 2 मिलीग्राम/एमएल FITC-dextran (4 केडीए) 20 घंटे के लिए छवि । HIOs भी पंजाब (नियंत्रण) या क्लोस्ट्रीडियम डिफीसाइल विष TcdA (१२.८ एनजी/µ एल) या 2 मिमी EGTA के साथ इलाज के साथ microinjected थे बाहरी संस्कृति मीडिया में जोड़ा । 4x बढ़ाई । (ख) पंजाब (नियंत्रण), TcdA, या EGTA के साथ इलाज HIOs में समय के साथ अर्थ सामान्यीकृत FITC तीव्रता की साजिश । त्रुटि पट्टियां S.E.M. और n = 11 HIOs (नियंत्रण), 3 HIOs (EGTA), 6 HIOs (TcdA) का प्रतिनिधित्व करती हैं । <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig5large.jpg" target="_blank">कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।</a>

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Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids

इस प्रोटोकॉल मानव आंत्र organoids में औषधीय उपचार के बाद फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी और लाइव सेल माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर वास्तविक समय में उपकला बाधा पारगम्यता की माप का वर्णन करता है.

मानव आंत्र Organoids में उपकला बाधा पारगम्यता के वास्तविक समय माप

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