Name: real-time measurement of epithelial barrier permeability in human intestinal organoids
Uploaded: 2017-12-18T15:00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids at JoVE.com

저자 박사 스테파니 Spohn과 바젤 Abuaita organoid microinjection에 많은 유용한 토론에 감사 하 고 싶습니다. 주니어 장 줄기 세포 컨소시엄 (U01DK103141), 공동 연구 프로젝트는 국립 연구소의 당뇨병과 소화와 신장 질병 (NIDDK) 알레르기의 국가 학회 및 감염 증 (NIAID)에 의해 자금 지원 됩니다. 주니어 및 VBY NIAID 소설, 장의 질병 (NAMSED) 컨소시엄 (U19AI116482)에 대 한 대안 모델 시스템에 의해 지원 됩니다. DRH 지원 메커니즘의 미생물 병 인 교육 부여 알레르기의 국가 학회 및 감염 증 (NIAID, T32AI007528)와 임상, 번역 상 과학 상 미시간 연구소 임상 및 건강에 대 한 연구 (UL1TR000433)입니다.
완전 한 데이터 파일 및 데이터 분석 코드가이 원고에 사용 된 https://github.com/hilldr/HIO_microinjection에서 사용할 수 있습니다.

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저자 아무 경쟁 금융 관심사 또는 다른 충돌 공개할 수 있다.

이 프로토콜 실시간으로 hPSC 파생 HIOs 및 조직 파생 장 organoids의 microinjection 및 상피 장벽 침투성의 측정을 위한 범용 메서드를 설정합니다. 우리는 또한 우리의 접근 방식을 분석 하 고 이러한 메서드를 사용 하 여 생성 하는 데이터의 해석 설명 했다. 준 장 organoids의 성장 채택 모델 시스템16,20,,2128 및 장의 장벽 침투성으로 순수 관련 기능에 오랜 관심 결과3,,45,6, 우리는이 분야에서 일하고 다른 사람 적용 하 고 이러한 방법에 따라 만들 수 있을 것입니다 예상.
이 기술의 응용 프로그램에 중요 한 몇 가지 단계가 있습니다. 고품질 hPSC-또는 파생된 HIO 조직 microinjection와 광범위 한 실험 전에 설치 되어야 하는 조직에 접근. HIO macrostructure 조직 정체성과 세포 형태학은 높은 재현성 HIOs24를 생성 하기 위해 설립 된 방법론을 활용 하면 이기종, 크기와 모양, 변형 될 수 있습니다. 구형 HIOs 단일 반투명 루멘 이루어져 고 직경에서 약 1 m m microinjection 및 실시간 luminal 형광의 측정에 이상적입니다. 경우에 따라 microinjection는 하이 오의 붕괴 또는 주입 된 물자의 분명 한 누설의 결과로 실패 합니다. 실패 한 HIOs 표준 micropipette를 사용 하 여 사용자의 판단에 따라 잘 문화에서 제거할 수 있습니다. Microinjection 및 이미징 HIOs 선택할 때 이미징 플랫폼에서 사용할 수 있는 대물 렌즈를 고려 하십시오. 일반적으로 2-4 X 렌즈는 완전 한 HIO 형광 신호 캡처에 이상적 저전력 렌즈는 사용할 수 없거나 사용 가능한 HIOs 10 X 목표 사용할 수 있지만 &#60; 직경에서 1 m m. 이미징 소프트웨어 시간이 지남에 정의 된 지점에서 형광 이미지의 자동된 캡처 허용 해야 합니다.
이 프로토콜의 여러 수정 실험 요구 사항에 맞게 하기 위해 수 있습니다. 예를 들어 장벽 기능 테스트 결과 사용43 화합물의 분자 크기에 따라 있을 수 있습니다 그리고 그것은 다양 한 분자량의 dextran 준비를 테스트 하려면 적절 한 수 있습니다. 또한, 명시 이미징 조직25의 전반적인 구조적 무결성의 지표로 서 형광 이미징 뿐만 아니라 수행할 수 있습니다. 그것은 페니실린을 추가 해야 할 수 있습니다 라이브 박테리아25,28,31,32,,3344의 microinjection를 수행할 때와 스 또는 gentamicin HIO 문화 미디어 이전에 또는 microinjection 후에. microcapillary의 외부 세균성 문화 중단 작성 하는 동안 오염 될 것 이다 하 고이 하이 오 미디어에 전송 될 수 있습니다. 또는, microinjection HIOs 미디어 하지 않고, 세포 외 기질 (예를 들어, Matrigel)에 정지에 microinjection 완료 되는 미디어를 추가에 수행할 수 있습니다. 이 기질을 하는 오의 외부 얼굴 오염을 제한할 수 있습니다. 미생물 성장 분석 실험을 계획할 때 그것을 감속 하거나 방지 microinjected 생물의 성장을 피하기 위해 1-2 h 후 미디어에서 항생제를 제거 필요할 수 있습니다.
마지막으로, 모든 연구원 생체 외에서 영상에 적합 한 현미경 장비에 접근이 있을 것을 인식, 그것은 촬영 한 이미지에 형광 데이터를 수집 하기 위해이 프로토콜에서 설명 하는 절차를 적용할 수 있습니다 지적 하는 것이 중요 자동된 이미지 캡처 또는 환경 컨트롤 없이 표준 epifluorescent 현미경 검사 법을 사용 하 여 고정된 timepoints에서. 이 방법의 예는 레슬리와 황 외 에 의해 보고서에서 찾을 수 있습니다. 25, 누가 hPSC 파생 장 organoids, 그리고 Karve 및 Pradan 외. C. 남과 어울리지 않는 독 소 활동 검사 44, 유사한 hPSC 파생 장 organoids 라이브 대장균을 microinjected에 상피 장벽 침투성을 검사 들. 이미징 장비의 수동 조작 큰 변화와 어려움 형광 신호를 정상화 될 수 있습니다. HIOs 주입 FITC dextran의 수동 이미징 수행 때 고정된 배율, 형광 흥분 강도, 형광 강도 측정을 왜곡 하지 않도록 하는 실험 내내 노출 시간을 유지 하기 위해 필수적 이다.

장 상피 형성 선택적 장벽 영양소, H2O, 이온, 및 폐기물의 방향 전송 루멘 사이 다른 입자의 일반적인 보급 중재 교환 최소화 하면서 중재 하 고 중간 엽 조직 또는 혈액 공급1,2. 장 상피 방 벽의 일반적인 침투성 오래 간주 되었습니다 건강 및 질병3,,45,6의 속도 반영 하는 주요 기능 매개 변수 작은 분자 paracellular 공간 통해 상피에 걸쳐 확산 상피 장벽 침투성의 측정에서 지휘 될 수 있다 동물 모델7 과 lactulose의 섭취를 통해 인간의 환자8 , 위장, 그리고 이후의 컬렉션에 없는 특정 전송이 그리고 주변 혈액에 있는 농도 lactulose의 측정입니다. 장벽 기능 붙일 레이블된 탄수화물 등의 대체 섭취 마커 사용 가능한9,10도 있습니다. 이 방법은 장 상피 세포 배양 Transwell 지원11, 실험 제어에 대 한만 비보 의 가난한 예언자로 강평 되었다 또한 단순화 된 접근에 대 한 적응 되었습니다. 차별화 된 상피 하위 및 조직 구조12의 부재로 인해 침투성. 챔버를 사용 하 여 또 다른 접근 방식을 나타내고 전체 장 점 막 전 비보13상피 장벽 기능 측정에 대 한 허용. 이 기술의 응용 프로그램은 자주 조직의 가용성 및 조건13,14에 의해 제한 됩니다. 따라서 새로운 방법 생리 관련성 재현성 및 처리량의 균형은 필요 합니다.
Organogenesis 생체 외에서 최근 개발 업과 복잡 한 조직15,16,17의 역학에 대 한 정교한 플랫폼으로 3 차원 조직 배양 모델 시스템의 도입을 이끈 ,18,19,20,21,,2223. 특히, 인간 만능 줄기 세포 (hPSC) 파생 된 인간의 창 자 organoids (HIOs)19,24 호스트 미생물 상호 작용의 연구에 대 한 재현 하 고 실험적으로 세공 모델 시스템으로 등장 하 고 상피 장벽은 역학25,26,,2728. 마찬가지로, 인간의 조직 파생 된 organoids (일컬어 enteroids) 간단한 생 검 절차에서 파생 될 수 있다 고 연구 인간 생리학 및 질병15,,2930세공 시스템으로 사용할 수 있습니다. 인간의 장 organoids의 microinjection 실험적인 화합물25 의 배달에 대 한 허용 또는 미생물25,31,,3233 는 꼭대기에 상피 라이브 organoid 루멘의 표면입니다. 레슬리와 황 외. 25 는 최근 HIOs fluorescein isothiocyanate (FITC) 세균 독 소에 노출 다음 dextran을 표시와 함께 microinjected에 장벽 침투성 측정에이 기술을 적응.
이 프로토콜은 hPSC 파생 HIOs 및 형광 현미경 검사 법을 사용 하 여 조직 파생 HIOs 상피 장벽 침투성의 측정을 위한 가이드 것입니다. 사소한 수정, 그것은 또한 실험적인 화합물과 HIOs의 microinjection에 대 한 일반적인 입문서로 사용할 수 있습니다. 사용자가 microinjection 후 추가 또는 대체 다운스트림 응용 프로그램이 프로토콜을 보충 수 있습니다.

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		<tr>
			<td>EGTA 0.5 M sterile (pH 8.0)</td>
			<td>Bioworld</td>
			<td>405200081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell matrix solution (Matrigel)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deltavision RT live cell imaging system</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>29065728</td>
			<td>http://www.gelifesciences.com/webapp/wcs/stores/servlet/catalog/en/GELifeSciences/brands/deltavision/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>29065728</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>softWoRx Imaging software</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>29065728</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety cabinet</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>Cell Logic+</td>
			<td>http://www.labconco.com/product/purifier-cell-logic-class-ii-type-a2-biosafety-cabinets-2/4262</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X PBS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM-F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634-010</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement (50X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504044</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine (100X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15630080</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manipulator</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>UM-3C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>UM-1PF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Holder</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>UP-1</td>
			<td>Alternate to Xenoworks pipette holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stand</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>GJ-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SX61</td>
			<td>Recommended scope, although other models are likely compatible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus IX71 Fluorescent microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoolSNAP HQ2</td>
			<td>Photometrics</td>
			<td>29065728</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant C. difficile Toxin A/TcdA Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>8619-GT-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R-spondin 1</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>4645-RS</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noggin</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>6057-NG</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-dextran (4 kDa)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>46944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>P-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Lab-Tek II Chamber Slides</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>154526PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass filaments</td>
			<td>WPI</td>
			<td>TW100F-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette holder</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>BR-MH2</td>
			<td>Preferred device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analog Tubing kit</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>BR-AT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/16 in clear ferrule</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>V001104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-1.2 mm O-ring</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>V300450</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time measurement of epithelial barrier permeability in human intestinal organoids

장 조직 생 검을 통해 얻은 또는 감독된 차별화를 통해 만능 줄기 세포에서 생성의 3D 문화 발전 장 점 막의 정교한 생체 외에서 모델에서 이어지고 있다. 이러한 신흥 모델 시스템을 활용 하 여 도구와 2D 문화 시스템 및 동물을 위해 개발 된 기술의 적응이 필요 합니다. 여기, 우리가 실시간으로 인간의 장 organoids에 상피 장벽 침투성을 측정 하기 위한 기술을 설명 합니다. 이것은 붙일 표시 된 dextran 및 epifluorescent 필터를 장착 한 거꾸로 한 현미경에 이미징의 microinjection에 의해 수행 됩니다. 장 organoids에 장벽 침투성의 실시간 측정이이 기술은 고정된 timepoint 이미징 접근에도 적용할 수 있지만 인간의 창 자 상피 조직에서 고해상도 임시 데이터의 생성을 촉진 한다. 이 프로토콜은 쉽게 상피 장벽 침투성 pharmacologic 대리인, 세균성 제품 또는 독 소, 또는 라이브 미생물에 노출 다음의 측정에 대 한 적응력입니다. 약간의 수정이이 프로토콜도 장 organoids의 microinjection에 대 한 일반적인 입문서로 사용할 수 있습니다와 사용자 추가 또는 대체 다운스트림 응용 프로그램 microinjection 다음이 프로토콜을 보완 하도록 선택할 수 있습니다.

HIOs 인간의 pluripotent 줄기 세포에서 분화 되었다 고 설명한19,24셀 매트릭스 솔루션으로 이전에 양식. 4 주 후에 문화, 여 HIOs microinjection 수 있도록 충분히 확장 했다. HIOs 4 kDa FITC 활용 된 dextran PBS 또는 Clostridium 남과 어울리지 않는 독 소 TcdA를 포함 하는 PBS에와 microinjected 했다. C. 남과 어울리지 않 는 HIOs25독 소 중재 상피 독성을 전시 하는 기회 위장 병원 체 이다. 긍정적인 컨트롤로 EGTA HIOs PBS와 FITC dextran 주입의 하위 집합에서 하이 오 문화 미디어에 추가 되었습니다. EGTA 말라 골격42의 급속 한 탈 중 합을 일으키는 칼슘 chelator입니다. FITC 형광은 제어 환경 챔버 내에서 라이브 영상 현미경에 실시간으로에서 모니터링 하 고 이미지에서 10 분 간격으로 체포 되었다.
영상 데이터의 post hoc 분석 FITC 형광 (그림 5)의 보존에 상당한 차이 밝혔다. 그러나 HIOs PBS와 주입 거의 모든 t 에 형광 신호 유지 = 0, 또한 주입 했다의 TcdA와 EGTA 치료 HIOs 8 시간 후 microinjection (그림에 의해 형광 강도에 상당한 감소를 전시 5A). 영상 데이터는 각 실험 조건 (그림 5B) 시간이 지남에 형광 강도 상대적인 변화를 나타내는 고해상도 데이터 집합을 생성 하는 모든 시간 지점에서 모든 HIOs에 대 한 계량 했다. 상피 침투성에 차이 각 치료 그룹 (표 1) FITC의 평균 제거 시간 (t1/2 )를 계산 하 고 t t1/2 그룹 간의 차이 비교 하 여 평가 했다 학생의 t를 사용 하 여-테스트. 제어 처리 HIOs 유지 16 시간 이상 FITC 형광 신호의 대부분 (t1/2 = 17 ± 0.3 h). EGTA 치료 크게 제어 HIOs 상대적인 FITC dextran 제거 시간 감소 (1/2 t = 2.6 ± 0.2 h; P = 10-8x 1.3). 일치 결과 이전에 게시25, TcdA의 microinjection 크게 증가 제어 치료 기준으로 상피 장벽 침투성 (t1/2 = 7.6 ± 0.6 h; P = 5.4 x 10-4). 따라서, 외부 (EGTA) 및 microinjected (TcdA) 화합물 HIOs에서 상피 장벽 침투성에 유도 하는 중요 한 변경 할 수 있다. 이러한 결과 상피 장벽 기능에 다양 한 약리학 적인 대리인, 대사 산물, 세균성 제품, cytokines, 성장 요인, 및 다른 화합물의 효과 평가 될 수이 접근을 사용 하 여 것이 좋습니다.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>치료</td>
			<td>반감기 (h)</td>
			<td>SEM (h)</td>
			<td>낮은 95 %CI (h)</td>
			<td>위 95 %CI (h)</td>
			<td>n</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>제어</td>
			<td>17.11</td>
			<td>0.3</td>
			<td>16.45</td>
			<td>17.78</td>
			<td>11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>2.58</td>
			<td>0.19</td>
			<td>1.78</td>
			<td>3.38</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TcdA</td>
			<td>7.56</td>
			<td>0.63</td>
			<td>5.93</td>
			<td>9.18</td>
			<td>6</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 1: 제거 시간을 의미 (t1/2) FITC-dextran HIOs에서 EGTA 또는 TcdA 치료에 대 한. 단위는 시간 후 microinjection.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig1.jpg"> 
그림 1: microinjector와 micromanipulator HIO microinjection에 대 한 기본 레이아웃. 이 이미지는 장비 HIOs의 microinjection를 수행 하는 데 사용의 완전 한 보완을 보여줍니다. 주요 구성 요소는 표시 하 고 주문 정보 자료 테이블에서 찾을 수 있습니다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig2.jpg"> 
그림 2: Micropipette 끌어당기는. 구리 난방 코일 hc, 탑 클램프 c1, 하단 클램프 (c2), 끌어당기는 팔 (pa), 열 선택 토글 (ht) 화살표로 식별 됩니다. 열 1과 풀에 대 한 올바른 설정은 빨간색 텍스트로 표시 됩니다. 삽입 된 난방에 대 한 준비가 제대로 탑재 유리 필 라 멘 트를 보여 줍니다. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig3.jpg"> 
그림 3: 조직의 파생 HIO FITC dextran 주사의 대표 이미지. (A) 이미지 하이 오와 microinjection에 삽입 직전 유리 microcapillary의 위치를 보여주는. (B)는 조직에서 파생 된 인간 창 자 organoids FITC dextran의 microinjection 후의 명시 이미지. 형광 신호는 특정 필터 집합의 사용 없이 명백한 참고. 이 채색 microinjection 정밀 에이즈. 3 배 확대 <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig4.jpg"> 
그림 4: 라이브 이미징 워크플로. (A) 스크린샷 현미경 매개 변수를 설정, 슬라이드에는 HIOs 찾을 이미지 수를 각 하이 오에 대 한 무대의 위치를 저장 하는 데 필요한 단계를 설명. 각 위치에서 일정 한 간격 FITC 채널 캡처에 대 한 (B) 사전 영상 설정을 DV 포맷 데이터의 대답 (C) 후 이미징 수출에 시간 포인트 당 HIO 당 한 TIFF 이미지를 TIFF 이미지 파일 지정.<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig5.jpg"> 
그림 5: 대표적인 결과. (A) 줄기 세포 파생 인간의 창 자 organoids (HIO) 2 mg/mL FITC dextran와 microinjected (4 kDa) 20 시간에 대 한 군데. HIOs 했다 또한 PBS (제어) 또는 Clostridium 남과 어울리지 않는 독 소 TcdA microinjected (12.8 ng / µ L) 2mm EGTA 외부 문화 미디어에 추가 된 취급. 4 X 확대입니다. (B) 줄거리 HIOs에서 시간이 지남에 의미 정규화 FITC 강도의 PBS (제어), TcdA, 또는 EGTA 취급. 오차 막대를 나타내는 S.E.M.과 n = 11 HIOs (제어), 3 HIOs (EGTA), 6 HIOs (TcdA). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids at JoVE.com

Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids

이 프로토콜 상피 장벽 침투성 형광 현미경 검사 법을 사용 하 여 인간의 창 자 organoids에서 실시간 다음 약리학 적인 치료에서의 측정을 설명 하 고 라이브 셀 현미경 검사 법.

인간의 장 Organoids에 상피 장벽 침투성의 실시간 측정

Advances in 3D culture of intestinal tissues obtained through biopsy or generated from pluripotent stem cells via directed differentiation, have resulted ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Kinetic Measurement and Real Time Visualization of Somatic Reprogramming

체세포 재 프로그래밍의 운동 측정 및 실시간 시각화

Somatic reprogramming has enabled the conversion of adult cells to induced pluripotent stem cells (iPSC) from diverse genetic backgrounds and disease ...

연구

발생학

Generation of iPSC-derived Human Brain Organoids to Model Early Neurodevelopmental Disorders

IPSC 파생 된 인간의 두뇌 Organoids의 세대는 초기 신경 발달 장애를 모델링하기

The restricted availability of suitable in vitro models that can reliably represent complex human brain development is a significant bottleneck that ...

Immuno-fluorescent Labeling of Microtubules and Centrosomal Proteins in Ex Vivo Intestinal Tissue and 3D In Vitro Intestinal Organoids

Immuno-fluorescent Labeling of Microtubules and Centrosomal Proteins in Ex Vivo Intestinal Tissue and 3D In Vitro Intestinal Organoids

Microtubules 및 전 비보 장 조직 및 장 Organoids 3 차원 생체 외에서 Centrosomal 단백질의 면역 형광 라벨

The advent of 3D in vitro organoids that mimic the in vivo tissue architecture and morphogenesis has greatly advanced the ability to study key biological ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

냉동 절편을 위한 자기 나노입자 전착 바이러스성 벡터를 사용하여 1 차적인 마우스 장 오르가노이드의 유전 공학

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Generation of Multicellular Human Primary Endometrial Organoids

다세포 인간 1 차 자궁 내막 오르가노이드의 생성

The human endometrium is one of the most hormonally responsive tissues in the body and is essential for the establishment of pregnancy. This tissue can ...

Real-time Bioluminescence Imaging of Notch Signaling Dynamics during Murine Neurogenesis

뮤린 신경 발생 시 노치 신호 역학의 실시간 생물 발광 이미징

Notch signaling regulates the maintenance of neural stem/progenitor cells by cell-cell interactions. The components of Notch signaling exhibit dynamic ...

Recapitulating Suckling-to-Weaning Transition In Vitro using Fetal Intestinal Organoids

태아 장 오르가노이드를 사용하여 시험관내 빨기-위닝 전환 반복

At the end of the suckling period, many mammalian species undergo major changes in the intestinal epithelium that are associated with the capability to ...

In Vitro Culture of Epithelial Cells from Different Anatomical Regions of the Human Amniotic Membrane

인간 양막의 다른 해부학 적 영역에서 상피 세포의 시험관 내 배양

Several protocols have been reported in the literature for the isolation and culture of human amniotic epithelial cells (HAEC). However, these assume that ...

Generation of a Human iPSC-Based Blood-Brain Barrier Chip

인간 iPSC 기반 혈액-뇌 장벽 칩 생성

The blood brain barrier (BBB) is formed by neurovascular units (NVUs) that shield the central nervous system (CNS) from a range of factors found in the ...