Name: real-time measurement of epithelial barrier permeability in human intestinal organoids
Uploaded: 2017-12-18T15:00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids at JoVE.com

Os autores gostaria de agradecer os Drs Stephanie Spohn e Basileia Abuaita para muitas discussões úteis na microinjeção de organoides. JRS é suportado pelo Intestinal células estaminais Consortium (U01DK103141), um projeto colaborativo de pesquisa financiado pelo Instituto Nacional de Diabetes e digestivo e doenças do rim (NIDDK) e o Instituto Nacional de alergia e doenças infecciosas (NIAID). JRS e VBY são suportados pelo romance NIAID, sistemas de modelo alternativo para o consórcio de doenças entéricas (NAMSED) (U19AI116482). DRH tem suporte a mecanismos de patogénese microbiana formação concessão do Instituto Nacional de alergia e doenças infecciosas (NIAID, T32AI007528) e o prêmio de ciência translacional e clínica ao Instituto Michigan para clínica e saúde Pesquisa (UL1TR000433).
Os arquivos de dados completos e o código de análise de dados usado neste manuscrito estão disponíveis em https://github.com/hilldr/HIO_microinjection.

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Os autores têm sem concorrentes interesses financeiros ou outros conflitos de interesse a divulgar.

Este protocolo estabelece um método de uso geral para a microinjeção de HIOs hPSC-derivados e derivados de tecido intestinal organoids e a medição da permeabilidade da barreira epitelial em tempo real. Também demonstrámos a nossa abordagem para análise e interpretação dos dados gerados usando estes métodos. Dada a crescente adoção do organoids intestinal sistemas modelo16,20,21,28 e o interesse de longa data na permeabilidade da barreira intestinal como um fisiologicamente relevantes funcional resultado3,4,5,6, prevemos que outras pessoas que trabalham neste campo será capazes de aplicar e construir sobre esses métodos.
Há várias etapas que são essenciais para a aplicação desta técnica. Acesso ao hPSC de alta qualidade - ou tecido derivada HIO de tecido deve ser estabelecido antes da experimentação extensiva com microinjeção. HIO macrostructure pode ser heterogêneo, com variação no tamanho e na forma, embora a identidade de tecido e a morfologia celular é altamente reprodutível quando utilizando a metodologia estabelecida para gerar HIOs24. HIOs esféricas, consistindo de um único lúmen semi-transparente e medindo aproximadamente 1 mm de diâmetro são ideais para microinjeção e medição de fluorescência luminal em tempo real. Em alguns casos, microinjeção irá falhar, resultando em colapso do HIO ou óbvio vazamento de material injetado. HIOs falhadas podem ser removidos da cultura bem a critério do usuário usando uma micropipeta padrão. Considere as lentes objetivas disponíveis em uma plataforma de imagem ao selecionar HIOs para microinjeção e imagem. Em geral, 2-4 X objectivas são ideais para capturar o sinal fluorescente completo do HIO, embora um objetivo X 10 pode ser utilizado se as lentes de baixa potência não estiverem disponíveis ou se o HIOs disponíveis são &#60; 1 mm de diâmetro. Software de imagem deve permitir a captura automatizada de imagens fluorescentes em pontos definidos ao longo do tempo.
Diversas modificações do presente protocolo são possíveis a fim de atender às necessidades de experimentais. Por exemplo, os resultados dos testes de função de barreira podem ser dependentes do tamanho molecular dos compostos em uso43 e pode ser apropriado testar preparações de dextrano de variação de peso molecular. Além disso, pode efectuar-se a imagem brightfield além de imagens de fluorescência como um indicador da integridade estrutural global do tecido25. Ao executar a microinjeção de bactérias vivas25,28,31,32,33,44, pode ser necessário adicionar penicilina e estreptomicina ou gentamicina para os meios de cultura HIO antes ou depois da microinjeção. Fora da conta vai ser contaminada durante o enchimento com a suspensão da cultura bacteriana e isto poderá ser transferido para a mídia HIO. Alternadamente, microinjeção pode ser executada em HIOs suspendidos na matriz extracelular (por exemplo, Matrigel) sem mídia, adicionando a mídia após a conclusão da microinjeção. Isto pode limitar a contaminação para a matriz extracelular e a face externa do HIO. Ao planejar a ensaios de crescimento microbiano, pode ser necessário remover os antibióticos na mídia após 1-2 h para evitar, retardar ou impedir o crescimento de organismos microinjected.
Finalmente, reconhecendo que nem todos os pesquisadores terão acesso a equipamentos de microscopia, adequado para a imagem latente em vitro , é importante salientar que os procedimentos descritos no presente protocolo para coleta de dados de fluorescência podem ser aplicados a imagens tomadas em momentos fixos usando microscopia epifluorescente padrão sem captura automatizada de imagem ou controles ambientais. Exemplos desta abordagem podem ser encontrados nos relatórios por Leslie e Huang et al . 25, que examinaram a atividade de toxina de c. difficile no hPSC-derivado organoids intestinal e Karve e Pradan et al 44, que examinaram a permeabilidade da barreira epitelial em semelhante organoids intestinal hPSC-derivado, injetadas ao vivo e. coli. Operação manual do equipamento de imagem pode resultar em maior variação e dificuldade na normalização do sinal fluorescente. Quando executar imagem manual do FITC-dextran injetado HIOs é essencial para manter a ampliação fixa, intensidade de excitação fluorescente e tempos de exposição em todo o experimento para evitar distorcer as medições de intensidade fluorescente.

O epitélio intestinal forma uma barreira seletiva que medeia o direcional transporte de nutrientes, H2O, íons e resíduos de produtos, minimizando inespecífica troca mediada por difusão de outras partículas entre o lúmen e o mesenquimais tecido ou sangue fornecimento1,2. A permeabilidade inespecífica da barreira epitelial intestinal tem sido considerada um parâmetro chave funcional na saúde e na doença,3,4,5,6, que reflete a taxa de difusão de pequenas moléculas através do epitélio através do espaço paracellular. Medição da permeabilidade da barreira epitelial pode efectuar-se em animal modelos7 e em pacientes humanos8 através da ingestão de lactulose, que não tem nenhum transportador específico no tracto gastrointestinal e a coleção subsequente e a medição das concentrações de lactulose no sangue periférico. Marcadores ingeridos alternativos da função de barreira, tais como hidratos de carbono fluorescente etiquetadas também estão disponíveis9,10. Esta abordagem foi adaptada para a célula epitelial intestinal culturas cultivadas em Transwell suporta11, uma abordagem simplificada que permite maior controle experimental, mas também tem sido criticada como um preditor pobre da vivo em permeabilidade devido à ausência de subtipos epiteliais diferenciados e estrutura de tecido12. Utilizando câmaras representam ainda uma outra abordagem e permitir a medição da função de barreira epitelial na mucosa intestinal todo ex vivo13. Aplicação desta técnica é frequentemente limitada pelo tecido disponibilidade e condição13,14. Assim, novos métodos que equilibrem a reprodutibilidade e a taxa de transferência com relevância fisiológica são necessários.
Desenvolvimentos recentes na organogênese em vitro conduziram à adopção de sistemas de cultura de tecido 3D modelo como uma plataforma sofisticada para recapitulando a dinâmica de tecidos complexos15,16,17 ,18,19,20,21,22,23. Em particular, células-tronco (hPSC) derivada de pluripotentes humanas organoids intestinal humana (HIOs)19,24 surgiram como um sistema reprodutível e experimentalmente tractable modelo para o estudo das interações hospedeiro-microbiana e barreira epitelial dinâmica25,26,,27,28. Da mesma forma, organoids de derivado de tecido humano (também conhecido como enteroids) pode ser derivado de um procedimento de biópsia simples e pode ser usado como um sistema tractable para estudar a fisiologia humana e doença15,29,30. Microinjeção de organoids intestinal humano permite a entrega de compostos experimentais25 ou vive micróbios25,31,32,33 para a apical epiteliais superfície do lúmen de organoides. Leslie e Huang et al . 25 recentemente adaptado a esta técnica para medir a permeabilidade de barreira em HIOs injetadas com isotiocianato de fluoresceína (FITC) rotulado dextrano após a exposição a toxinas bacterianas.
Este protocolo destina-se como um guia para a medição da permeabilidade da barreira epitelial em HIOs hPSC-derivados e derivados de tecido HIOs usando microscopia fluorescente. Com pequenas modificações, ele também pode servir como um primer geral na microinjeção de HIOs com compostos experimentais. Os usuários podem complementar este protocolo com aplicações a jusante adicionais ou alternativos após microinjeção.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>EGTA 0.5 M sterile (pH 8.0)</td>
			<td>Bioworld</td>
			<td>405200081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell matrix solution (Matrigel)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deltavision RT live cell imaging system</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>29065728</td>
			<td>http://www.gelifesciences.com/webapp/wcs/stores/servlet/catalog/en/GELifeSciences/brands/deltavision/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>29065728</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>softWoRx Imaging software</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>29065728</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety cabinet</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>Cell Logic+</td>
			<td>http://www.labconco.com/product/purifier-cell-logic-class-ii-type-a2-biosafety-cabinets-2/4262</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X PBS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM-F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634-010</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement (50X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504044</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine (100X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15630080</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manipulator</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>UM-3C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>UM-1PF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Holder</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>UP-1</td>
			<td>Alternate to Xenoworks pipette holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stand</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>GJ-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SX61</td>
			<td>Recommended scope, although other models are likely compatible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus IX71 Fluorescent microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoolSNAP HQ2</td>
			<td>Photometrics</td>
			<td>29065728</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant C. difficile Toxin A/TcdA Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>8619-GT-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R-spondin 1</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>4645-RS</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noggin</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>6057-NG</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-dextran (4 kDa)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>46944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>P-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Lab-Tek II Chamber Slides</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>154526PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass filaments</td>
			<td>WPI</td>
			<td>TW100F-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette holder</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>BR-MH2</td>
			<td>Preferred device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analog Tubing kit</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>BR-AT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/16 in clear ferrule</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>V001104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-1.2 mm O-ring</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>V300450</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time measurement of epithelial barrier permeability in human intestinal organoids

Avanços na cultura 3D dos tecidos intestinais, obtidos através de biópsia ou gerados a partir de células-tronco pluripotentes através de diferenciação direcionada, resultaram em modelos sofisticados em vitro da mucosa intestinal. Aproveitar estes sistemas emergentes do modelo exigirá adaptação de ferramentas e técnicas desenvolvidas para animais e sistemas de cultura 2D. Aqui, descrevemos uma técnica para medir a permeabilidade da barreira epitelial no organoids intestinal humana em tempo real. Isso é realizado pela microinjeção de dextrano fluorescente-etiquetadas e imagem em um microscópio invertido equipado com filtros de epifluorescente. Medição em tempo real da permeabilidade de barreira no organoids intestinal facilita a geração de dados de alta resolução temporais, no tecido epitelial intestinal humano, embora esta técnica também pode ser aplicada a Commit fixo abordagens de imagem. Este protocolo é facilmente adaptável para a medição da permeabilidade de barreira epitelial após a exposição a agentes farmacológicos, produtos bacterianos ou toxinas ou microorganismos vivos. Com pequenas modificações, esse protocolo também pode servir como um primer geral na microinjeção de organoids intestinal e os usuários podem escolher completar esse protocolo com aplicações a jusante adicionais ou alternativas após microinjeção.

HIOs eram diferenciadas das células-tronco pluripotentes humanas e cultivadas em solução de matriz celular como anteriormente descrito19,24. Após 4 semanas de cultura, os HIOs tinham expandido suficientemente para permitir a microinjeção. HIOs foram injetadas com 4 kDa conjugado FITC dextrano suspenso em PBS ou PBS contendo toxina de Clostridium difficile TcdA. C. difficile é um micróbio patogénico oportunista gastrointestinal que apresenta toxicidade epitelial mediada por toxina em HIOs25. Como um controle positivo, EGTA foi adicionado para os meios de cultura HIO em um subconjunto de HIOs injetado com PBS e FITC-dextrano. EGTA é um quelante de cálcio que provoca rápida de polimerização do citoesqueleto de actina42. Fluorescência FITC foi monitorizada em tempo real em um microscópio de imagens ao vivo dentro de uma câmara de ambiente controlado e imagens foram capturadas em intervalos de 10 minutos.
Análise post-hoc de dados de imagem revelou diferenças substanciais na retenção de fluorescência FITC (Figura 5). HIOs injetados com PBS mantido quase todos do sinal fluorescente presente em t = 0, porém HIOs que também foram injetados com TcdA de tratados com EGTA exibiram um decréscimo substancial na intensidade fluorescente por microinjeção de 8 horas pós (Figura 5a). dados de imagens de foram quantificados para HIOs todos em todos os pontos de tempo gerar um conjunto de dados de alta resolução, que representa a mudança relativa em intensidade fluorescente ao longo do tempo em cada condição experimental (Figura 5B). Diferenças na permeabilidade epitelial avaliaram-se calcular o tempo médio de eliminação (t1/2 ) de FITC para cada grupo de tratamento (tabela 1), e comparando as diferenças em t t1/2 entre grupos usando o Student t-teste. Controle-Tratado HIOs reteve a maioria do sinal fluorescente de FITC por mais de 16 horas (t1/2 = 17 ± 0,3 h). Tratamento com EGTA reduziu significativamente o tempo de eliminação FITC-dextrano relativo controle HIOs (t1/2 = 2,6 ± 0,2 h; P = 1,3 x 10-8). Consistente com os resultados publicados anteriormente25, microinjeção de TcdA aumentou significativamente permeabilidade da barreira epitelial em relação ao tratamento controle (t1/2 = 7,6 ± 0,6 h; P = 5,4 x 10-4). Assim, tanto externo (EGTA) e microinjected (TcdA) compostos são capazes de induzir alterações significativas na permeabilidade da barreira epitelial em HIOs. Estes resultados sugerem que os efeitos de uma vasta gama de agentes farmacológicos, metabólitos, produtos bacterianos, citocinas, fatores de crescimento e outros compostos na função de barreira epitelial podem ser avaliados usando esta abordagem.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tratamento</td>
			<td>Meia-vida (h)</td>
			<td>SEM (h)</td>
			<td>Inferior a 95% CI (h)</td>
			<td>Superior a 95% CI (h)</td>
			<td>n</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Controle</td>
			<td>17,11</td>
			<td>0.3</td>
			<td>16.45</td>
			<td>17.78</td>
			<td>11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>2,58</td>
			<td>0,19</td>
			<td>1.78</td>
			<td>3.38</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TcdA</td>
			<td>7.56</td>
			<td>0,63</td>
			<td>5.93</td>
			<td>9.18</td>
			<td>6</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1: tempo de eliminação (t1/2) para FITC-dextran em HIOs tratados com EGTA ou TcdA. As unidades são pós-microinjeção de horas.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig1.jpg"> 
Figura 1: layout básico de uma microinjector e micromanipulador para microinjeção de HIO. Esta imagem mostra o complemento total de equipamentos utilizados para a realização de microinjeção de HIOs. Componentes-chave são rotulados e ordenação de informações pode ser encontrado na tabela de materiais. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig2.jpg"> 
Figura 2: extrator de micropipeta. O cobre, aquecimento da bobina hc, braçadeira superior c1, braçadeira inferior (c2), braço extrator (pa), alavanca de seleção de calor (ht) são identificados pelas setas. A configuração correta para o HEAT 1 e puxe são indicadas no texto em vermelho. A inserção mostra um filamento de vidro corretamente montado pronto para o aquecimento. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig3.jpg"> 
Figura 3: imagens representativas de um derivado de tecido HIO injetado com FITC-dextrano. Imagem do (A) demonstrando o posicionamento da conta de vidro apenas antes da inserção no HIO e microinjeção. (B) Brightfield imagem de um derivado de tecido humano intestinal organoids depois da microinjeção de FITC-dextrano. Note que o sinal de fluorescência é aparente mesmo sem o uso de um conjunto de filtro específico. Esta coloração auxilia precisão microinjeção. 3 ampliação X <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig3large.jpg" target="_blank">, por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig4.jpg"> 
Figura 4: viver o trabalho de imagem. (A) Screenshot ilustrando as etapas necessárias para definir os parâmetros de microscópio, encontrar os HIOs no slide e salvar a posição da fase para cada HIO ser fotografada. Configurações de pré-imagem (B) para capturar o canal FITC em intervalos regulares em cada uma das posições especificadas na exportação de pós-imagens r. (C) de dados em formato DV arquivos como imagens TIFF com uma imagem TIFF por HIO por ponto de tempo.<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig4large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig5.jpg"> 
Figura 5: resultados representativos. (A)-células tronco derivadas organoids intestinal humana (HIO) injetadas com FITC-dextrano de 2 mg/mL (4 kDa) fotografada por 20 horas. HIOs também foram injetadas com PBS (controle) ou toxina Clostridium difficile TcdA (12,8 ng / µ l) ou tratados com 2mm EGTA adicionado à cultura mídia externa. Ampliação de 4x. (B) parcela de média intensidade FITC normalizada ao longo do tempo em HIOs tratados com PBS (controle), TcdA ou EGTA. Barras de erro representam no MEV mostrou e n = 11 HIOs (controle), 3 HIOs (EGTA), 6 HIOs (TcdA). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig5large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

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Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids

Este protocolo descreve a medição da permeabilidade da barreira epitelial em tempo real seguir tratamento farmacológico em organoids intestinal humana, usando microscopia fluorescente e vive microscopia de célula.

Medição em tempo real da permeabilidade da barreira epitelial no Organoids Intestinal humana

Advances in 3D culture of intestinal tissues obtained through biopsy or generated from pluripotent stem cells via directed differentiation, have resulted ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Kinetic Measurement and Real Time Visualization of Somatic Reprogramming

Kinetic Medição e visualização em tempo real de Reprogramação Somatic

Somatic reprogramming has enabled the conversion of adult cells to induced pluripotent stem cells (iPSC) from diverse genetic backgrounds and disease ...

Biologia do Desenvolvimento

Generation of iPSC-derived Human Brain Organoids to Model Early Neurodevelopmental Disorders

Geração de iPSC-derivado do cérebro Organóides Humanos para modelar alterações precoces do desenvolvimento neurológico

The restricted availability of suitable in vitro models that can reliably represent complex human brain development is a significant bottleneck that ...

Immuno-fluorescent Labeling of Microtubules and Centrosomal Proteins in Ex Vivo Intestinal Tissue and 3D In Vitro Intestinal Organoids

Immuno-fluorescent Labeling of Microtubules and Centrosomal Proteins in Ex Vivo Intestinal Tissue and 3D In Vitro Intestinal Organoids

Imuno-fluorescente rotulagem de microtúbulos e proteínas Centrosomal em tecido Intestinal Ex Vivo e 3D em Vitro Intestinal Organoids

The advent of 3D in vitro organoids that mimic the in vivo tissue architecture and morphogenesis has greatly advanced the ability to study key biological ...

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Engenharia genética de organóides intestinais do camundongo primário usando vetores virais de transdução de nanopartículas magnéticas para seccionamento congelado

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At the end of the suckling period, many mammalian species undergo major changes in the intestinal epithelium that are associated with the capability to ...

In Vitro Culture of Epithelial Cells from Different Anatomical Regions of the Human Amniotic Membrane

In Vitro Cultura das Células Epitelias de diferentes regiões anatômicas da membrana amniótica humana

Several protocols have been reported in the literature for the isolation and culture of human amniotic epithelial cells (HAEC). However, these assume that ...

Generation of a Human iPSC-Based Blood-Brain Barrier Chip

Geração de um chip de barreira hematoencefálica baseada no iPSC humano

The blood brain barrier (BBB) is formed by neurovascular units (NVUs) that shield the central nervous system (CNS) from a range of factors found in the ...