Name: real-time measurement of epithelial barrier permeability in human intestinal organoids
Uploaded: 2017-12-18T15:00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids at JoVE.com

Los autores desean agradecer a los Drs. Stephanie Spohn y Basilea Abuaita muchas discusiones útiles en microinyección organoide. JRS es apoyado por el consorcio de células madre intestinales (U01DK103141), un proyecto de investigación financiado por el Instituto Nacional de Diabetes y digestivo y Kidney Diseases (NIDDK) y el Instituto Nacional de alergias y enfermedades infecciosas (NIAID). JRS y VBY son apoyados por el NIAID novela, sistemas de modelo alternativo para Consorcio de enfermedades entéricas (NAMSED) (U19AI116482). DRH se admite la concesión de la formación de mecanismos de patogénesis microbiana desde el Instituto Nacional de alergias y enfermedades infecciosas (NIAID, T32AI007528) y el Premio de ciencia traslacional y clínica al Instituto Michigan de clínica y salud Investigación (UL1TR000433).
Los archivos de información y código de análisis de datos utilizados en este manuscrito están disponibles en https://github.com/hilldr/HIO_microinjection.

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Los autores tienen ninguna competencia intereses financieros u otros conflictos de interés divulgar.

Este Protocolo establece un método general para la microinyección de HIOs hPSC-derivados y derivados de tejido intestinal organoides y la medición de la permeabilidad de la barrera epitelial en tiempo real. También hemos demostrado nuestro enfoque de análisis e interpretación de los datos generados mediante estos métodos. Dada la creciente adopción de organoides intestinal sistemas modelo16,20,21,28 y el interés de muchos años en la permeabilidad de la barrera intestinal como fisiológicamente relevantes funcional resultado3,4,5,6, esperamos que otras personas que trabajan en este campo serán capaces de aplicar y aprovechar estos métodos.
Hay varios pasos que son fundamentales para la aplicación de esta técnica. Acceso a alta calidad hPSC - o tejido tejido derivado de HIO debe establecerse antes de la extensa experimentación con microinyección. HIO macroestructura puede ser heterogéneo, con variación de tamaño y forma, aunque la identidad del tejido y la morfología celular es altamente reproducible cuando utilizando la metodología establecida para generar HIOs24. HIOs esféricas que consta de una sola luz semi transparente y mide aproximadamente 1 mm de diámetro son ideales para la medición de la fluorescencia luminal en tiempo real y microinyección. En algunos casos, fallará microinyección, dando por resultado derrumbamiento del HIO u obvia salida del material inyectado. HIOs pueden quitarse de la cultura bien a discreción del usuario utilizando una micropipeta estándar. Considere las lentes del objetivo disponibles en una plataforma de proyección de imagen al seleccionar HIOs de microinyección y la proyección de imagen. En general, 2-4 X lentes del objetivo son ideales para la captura de la señal fluorescente completada de HIO, aunque un objetivo de X 10 se puede utilizar si no se dispone de lentes de baja potencia o si los HIOs disponibles son &#60; 1 mm de diámetro. Software de imágenes debe permitir la captura automática de imágenes fluorescentes en los puntos definidos en el tiempo.
Varias modificaciones de este protocolo son posibles con el fin de satisfacer las necesidades experimentales. Por ejemplo, los resultados de pruebas de la función de barrera pueden ser dependientes en el tamaño molecular de los compuestos de uso43 y puede ser apropiado probar preparaciones de dextrano de peso molecular variable. Además, la proyección de imagen trasmitida puede realizarse además de imágenes de fluorescencia como indicador de la integridad estructural general del tejido25. Cuando se realiza la microinyección de bacterias vivas25,28,31,32,33,44, puede ser necesario añadir penicilina y estreptomicina o gentamicina a los medios de cultivo HIO antes o después de la microinyección. El exterior de la microcapillary que se contaminan durante el llenado con la suspensión del cultivo bacteriano y esto puede ser transferido a los medios de comunicación HIO. Alternativamente, puede realizarse microinyección en HIOs suspendidas en la matriz extracelular (por ejemplo, Matrigel) sin medios de comunicación, agregando a los medios de comunicación una vez finalizada la microinyección. Esto puede limitar la contaminación a la matriz extracelular y la cara externa de la HIO. Al planificar el análisis de crecimiento microbiano, puede ser necesario retirar antibióticos en los medios de comunicación después de 1-2 h para evitar frenar o prevenir el crecimiento de organismos microinyectados.
Finalmente, reconociendo que no todos los investigadores tendrán acceso a equipo de microscopía para proyección de imagen en vitro , es importante señalar que los procedimientos descritos en este protocolo de recogida de datos de fluorescencia pueden ser aplicados a imágenes tomadas en los puntos de tiempo fijados utilizando microscopía epifluorescente estándar sin controles ambientales o captura de imágenes automatizado. Ejemplos de este enfoque pueden encontrarse en los informes por Leslie y Huang et al. 25, que examinaron la actividad de toxina de C. difficile en organoides intestinales derivados de hPSC y Karve y Pradan et al. 44, que examinó la permeabilidad de la barrera epitelial en similares derivados de hPSC organitas intestinal microinyectados con en e. coli. Operación manual de equipos puede resultar en una mayor variación y dificultad en la normalización de la señal fluorescente. Cuando se realiza la proyección de imagen manual de FITC-los dextranos inyecta HIOs es esencial mantener aumento fijo, la intensidad de excitación fluorescente y tiempos de exposición durante todo el experimento para evitar la distorsión de las mediciones de intensidad fluorescente.

El epitelio intestinal forma una barrera selectiva que media el transporte direccional de nutrientes, H2O, iones y residuos minimizando el intercambio inespecífica mediada por la difusión de otras partículas entre la luz y la mesenquimales tejido o sangre fuente1,2. La permeabilidad de la barrera epitelial intestinal ha sido considerado como un parámetro funcional clave en salud y enfermedad3,4,5,6, que refleja la tasa de difusión de moléculas pequeñas a través del epitelio mediante el espacio paracelular. Medición de la permeabilidad de la barrera epitelial puede llevarse a cabo en7 modelos animales y en pacientes humanos8 a través de la ingestión de la lactulosa, que ningún transportador específico en el tracto gastrointestinal y la posterior colección y medición de las concentraciones de lactulosa en sangre periférica. Alternativos ingeridos marcadores de la función de barrera tales como fluorescencia de etiquetado carbohidratos también están disponibles9,10. Este enfoque ha sido adaptado para las culturas de célula epitelial intestinal en Transwell soporta11, un enfoque simplificado que permite un mayor control experimental, pero también ha sido criticado como un pobre predictor de en vivo permeabilidad debido a la ausencia de subtipos epiteliales diferenciados y tejido estructura12. Usando cámaras representan otro enfoque y permitir la medición de la función de barrera epitelial en mucosa intestinal todo ex vivo13. Aplicación de esta técnica es frecuentemente limitado por tejido disponibilidad y condiciones de13,14. Así son necesarios nuevos métodos que balancear rendimiento y reproducibilidad con relevancia fisiológica.
Novedades en vitro organogénesis han conducido a la adopción de sistemas de cultivo de tejidos 3D modelo como una sofisticada plataforma para recapitular la dinámica de los complejos tejidos15,16,17 ,18,19,20,21,22,23. En particular, han surgido humanas pluripotentes células madre (hPSC) derivados organitas intestinal humano (HIOs)19,24 como modelo experimental manejable y reproducible para el estudio de las interacciones microbianas en host y barrera epitelial dinámica25,26,27,28. Del mismo modo, organoides derivados de tejido humano (también conocido como enteroids) se pueden derivar de un procedimiento de biopsia simple y pueden utilizarse como un sistema manejable para estudiar la fisiología humana y la enfermedad15,29,30. Microinyección de organoides intestinal humana permite la entrega de compuestos experimentales25 o vive microbios25,31,32,33 a la apical epitelial superficie del lumen del organoide. Leslie y Huang et al. 25 recientemente adaptado esta técnica para medir la permeabilidad de la barrera en HIOs microinyectados con isotiocianato de fluoresceína (FITC) etiquetado dextrán después de la exposición a las toxinas bacterianas.
Este protocolo pretende ser una guía para la medición de la permeabilidad de la barrera epitelial en derivados hPSC HIOs y HIOs derivados de tejido mediante microscopía fluorescente. Con pequeñas modificaciones, también puede servir como un manual general de microinyección de HIOs con compuestos experimentales. Usuarios pueden complementar este protocolo con aplicaciones posteriores adicionales o alternativas después de la microinyección.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>EGTA 0.5 M sterile (pH 8.0)</td>
			<td>Bioworld</td>
			<td>405200081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell matrix solution (Matrigel)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deltavision RT live cell imaging system</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>29065728</td>
			<td>http://www.gelifesciences.com/webapp/wcs/stores/servlet/catalog/en/GELifeSciences/brands/deltavision/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>29065728</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>softWoRx Imaging software</td>
			<td>GE Life Sciences</td>
			<td>29065728</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosafety cabinet</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>Cell Logic+</td>
			<td>http://www.labconco.com/product/purifier-cell-logic-class-ii-type-a2-biosafety-cabinets-2/4262</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X PBS</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM-F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634-010</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 supplement (50X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504044</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine (100X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15630080</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manipulator</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>UM-3C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>UM-1PF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Holder</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>UP-1</td>
			<td>Alternate to Xenoworks pipette holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stand</td>
			<td>Narshge</td>
			<td>GJ-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SX61</td>
			<td>Recommended scope, although other models are likely compatible</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus IX71 Fluorescent microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoolSNAP HQ2</td>
			<td>Photometrics</td>
			<td>29065728</td>
			<td>Included with Deltavision system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant C. difficile Toxin A/TcdA Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>8619-GT-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R-spondin 1</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>4645-RS</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noggin</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>6057-NG</td>
			<td>Component of ENR media; see McCraken et al. 24</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-dextran (4 kDa)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>46944</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>P-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc Lab-Tek II Chamber Slides</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>154526PK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass filaments</td>
			<td>WPI</td>
			<td>TW100F-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette holder</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>BR-MH2</td>
			<td>Preferred device</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analog Tubing kit</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>BR-AT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/16 in clear ferrule</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>V001104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-1.2 mm O-ring</td>
			<td>Xenoworks</td>
			<td>V300450</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time measurement of epithelial barrier permeability in human intestinal organoids

Avances en la cultura 3D de tejidos intestinales obtenidos mediante biopsia o generados a partir de células pluripotentes mediante diferenciación dirigida, han resultado en modelos sofisticados en vitro de la mucosa intestinal. Aprovechamiento de estos sistemas emergentes del modelo requerirá la adaptación de herramientas y técnicas desarrolladas para los animales y los sistemas de cultivo 2D. Aquí, describimos una técnica para medir la permeabilidad de la barrera epitelial en organoides intestinal humano en tiempo real. Esto se logra mediante microinyección de dextrano marcada con fluorescencia y la proyección de imagen en un microscopio invertido con filtros epifluorescente. Medición en tiempo real de la permeabilidad de la barrera en organoides intestinal facilita la generación de datos temporales de alta resolución en tejido epitelial intestinal humano, aunque esta técnica puede aplicarse también a punto fijo de enfoques. Este protocolo es fácilmente adaptable para la medición de la permeabilidad de la barrera epitelial después de la exposición a agentes farmacológicos, productos bacterianos, toxinas o microorganismos vivos. Con pequeñas modificaciones, este protocolo también puede servir como un manual general de microinyección de organoides intestinal y los usuarios pueden elegir complementar este protocolo con aplicaciones posteriores adicionales o alternativas después de microinyección.

HIOs se diferencian de células madre humanas pluripotentes y cultivan en solución de matriz celular anteriormente descrito19,24. Después de 4 semanas en la cultura, los HIOs habían ampliado suficientemente para permitir la microinyección. HIOs fueron microinyectados con dextrano conjugado con FITC de 4 kDa suspendido en PBS o en PBS con TcdA de la toxina de Clostridium difficile . C. difficile es un patógeno oportunista gastrointestinal que exhibe toxicidad epitelial mediada por toxina en HIOs25. Como control positivo, el EGTA fue agregado a los medios de cultivo HIO en un subconjunto de HIOs inyectado con PBS y FITC-los dextranos. EGTA es un quelante de calcio que causa la rápida polimerización de la actinia citoesqueleto42. La fluorescencia FITC fue monitoreada en tiempo real en un microscopio de proyección de imagen vivo dentro de una cámara ambiental controlada e imágenes fueron capturadas en intervalos de 10 minutos.
Análisis post-hoc de los datos de proyección de imagen reveló diferencias sustanciales en la retención de fluorescencia FITC (figura 5). HIOs inyectados con PBS conservan casi la totalidad de la señal fluorescente presente en t = 0, sin embargo HIOs que también fueron inyectados con TcdA de tratados con EGTA exhibieron una disminución substancial en la intensidad fluorescente por microinyección después de 8 horas (figura 5A). datos de la proyección de imagen fueron cuantificados para que los HIOs en todos los puntos de tiempo generar un conjunto de datos de alta resolución que representan el cambio relativo de intensidad fluorescente con el tiempo en cada condición experimental (figura 5B). Se evaluaron las diferencias en la permeabilidad epitelial calcular el tiempo medio de eliminación (t1/2 ) de FITC para cada grupo de tratamiento (tabla 1) y comparando las diferencias en t t1/2 entre grupos uso del estudiante t-pruebas. Tratados con control HIOs retuvo la mayoría de la señal fluorescente FITC para más de 16 horas (t1/2 = 17 ± 0.3 h). Tratamiento con EGTA redujo significativamente el tiempo de eliminación de FITC-los dextranos con respecto control HIOs (t1/2 = 2,6 ± 0,2 h; P = 1.3 x 10-8). De acuerdo con los resultados previamente publicados25, microinyección de TcdA aumentó significativamente la permeabilidad de la barrera epitelial en relación con tratamiento de control (t1/2 = ± 7,6 0,6 h; P = 5.4 x 10-4). Así, microinyectados compuestos (TcdA) y externos (EGTA) son capaces de inducir alteraciones significativas en la permeabilidad de la barrera epitelial en HIOs. Estos resultados sugieren que los efectos de una amplia gama de agentes farmacológicos, metabolitos, productos bacterianos, citocinas, factores de crecimiento y otros compuestos en función de la barrera epitelial pueden evaluarse utilizando este enfoque.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tratamiento</td>
			<td>Vida media (h)</td>
			<td>SEM (h)</td>
			<td>IC del 95% (h) de inferior</td>
			<td>Superior 95% IC (h)</td>
			<td>n</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Control</td>
			<td>17.11</td>
			<td>0.3</td>
			<td>16.45</td>
			<td>17,78</td>
			<td>11</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>2.58</td>
			<td>0.19</td>
			<td>1.78</td>
			<td>3.38</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TcdA</td>
			<td>7,56</td>
			<td>0,63</td>
			<td>5,93</td>
			<td>9.18</td>
			<td>6</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 1: tiempo de eliminación (t1/2) para FITC-los dextranos en HIOs trataron con EGTA o TcdA. Las unidades son microinyección después de horas.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig1.jpg"> 
Figura 1: diseño básico de un microinyector y un micromanipulador para microinyección HIO. Esta imagen muestra el complemento completo del equipo utilizado para realizar la microinyección de HIOs. Componentes clave son etiquetados y ordenar la información se puede encontrar en la tabla de materiales. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig2.jpg"> 
Figura 2: tirador de la micropipeta. El cobre bobina hc, abrazadera superior c1, abrazadera inferior (c2), la calefacción brazo extractor (pa), palanca de selección de calor (ht) se identifican por las flechas. El ajuste correcto de 1 calor y tracción se indican en el texto en rojo. El recuadro muestra un filamento de vidrio correctamente montado listo para calentar. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig3.jpg"> 
Figura 3: imágenes representativas de un HIO derivados del tejido inyectado con FITC-los dextranos. (A) imagen que demuestra el posicionamiento de la microcapillary de cristal justo antes de la inserción en el HIO y microinyección. (B) imagen trasmitida de un derivado de tejido organitas intestinal humana después de la microinyección de FITC-los dextranos. Tenga en cuenta que la señal de fluorescencia es evidente incluso sin el uso de un sistema de filtro específico. Esta coloración ayuda a la precisión de la microinyección. 3 aumentos <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig3large.jpg" target="_blank">haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig4.jpg"> 
Figura 4: flujo de trabajo de proyección de imagen en vivo. (A) captura de pantalla que ilustran los pasos necesarios para configurar los parámetros de microscopio, encontrar los HIOs de la diapositiva y guardar la posición de la etapa para cada HIO a ser reflejada. (B) configuración de la proyección de imagen para capturar el canal FITC a intervalos regulares en cada una de las posiciones habían especificado en A. (C) después de la proyección de imagen de exportación de datos en formato DV archivos como imágenes TIFF con una imagen TIFF por HIO por momento.<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig4large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56960/56960fig5.jpg"> 
Figura 5: resultados representativos. (A) célula de vástago derivado organitas intestinal humano (HIO) microinyectados con 2 mg/mL de FITC-los dextranos (4 kDa) reflejada por 20 horas. HIOs también fueron microinyectados con PBS (control) o la toxina de difficile del Clostridium TcdA (12.8 ng/μL) o tratados con 2 mM EGTA añadido a los medios externos de la cultura. 4 aumentos. (B) parcela de media intensidad FITC normalizado con el tiempo en HIOs tratados con PBS (control), TcdA o EGTA. Barras de error representan SEM y n = 11 HIOs (Control), 3 HIOs (EGTA), 6 HIOs (TcdA). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56960/56960fig5large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

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Real-time Measurement of Epithelial Barrier Permeability in Human Intestinal Organoids

Este protocolo describe la medición de la permeabilidad de la barrera epitelial en el tratamiento farmacológico siguiente en tiempo real en humanos organitas intestinal mediante microscopía fluorescente y vivo microscopia celular.

Medición en tiempo real de la permeabilidad de la barrera epitelial en organoides Intestinal humano

Advances in 3D culture of intestinal tissues obtained through biopsy or generated from pluripotent stem cells via directed differentiation, have resulted ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Kinetic Measurement and Real Time Visualization of Somatic Reprogramming

Cinética Medición y visualización en tiempo real de la reprogramación somática

Somatic reprogramming has enabled the conversion of adult cells to induced pluripotent stem cells (iPSC) from diverse genetic backgrounds and disease ...

Investigación

Biología del Desarrollo

Generation of iPSC-derived Human Brain Organoids to Model Early Neurodevelopmental Disorders

Generación de derivados de IPSC organoides cerebro humano para modelar los trastornos del neurodesarrollo temprano

The restricted availability of suitable in vitro models that can reliably represent complex human brain development is a significant bottleneck that ...

Immuno-fluorescent Labeling of Microtubules and Centrosomal Proteins in Ex Vivo Intestinal Tissue and 3D In Vitro Intestinal Organoids

Immuno-fluorescent Labeling of Microtubules and Centrosomal Proteins in Ex Vivo Intestinal Tissue and 3D In Vitro Intestinal Organoids

Inmuno-fluorescente etiquetado de microtúbulos y proteínas centrosómicas en tejido Intestinal Ex Vivo y 3D In Vitro Intestinal organitas

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Cultivo In Vitro de Células Epiteliales de Diferentes Regiones Anatómicas de la Membrana Amniótica Humana

Several protocols have been reported in the literature for the isolation and culture of human amniotic epithelial cells (HAEC). However, these assume that ...

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Generación de un chip de barrera hematoencefálica basada en iPSC humana

The blood brain barrier (BBB) is formed by neurovascular units (NVUs) that shield the central nervous system (CNS) from a range of factors found in the ...