Name: large-area scanning probe nanolithography facilitated by automated alignment and its application to substrate fabrication for cell culture studies
Uploaded: 2018-06-12T13:30:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Large-area Scanning Probe Nanolithography Facilitated by Automated Alignment and Its Application to Substrate Fabrication for Cell Culture Studies at JoVE.com

著者認める支援から各種ソースなど英国工学物理科学研究会議 (refs を付与します。EP/K011685/1, EP/K024485/1) と JH; の大学院学生の身分Leverhulme 信頼 (RPG-2014-292);Wellcome の信頼機関の戦略的支援ファンド (105610/Z/14/Z);ブリティッシュ ・ カウンシル (216196834);マンチェスターの研究所 (UMRI ポンプのプライミング基金) と博士アンドレアス Lieb (ナノサーフ AG) によって南西技術支援する大統領博士奨学金の大学、マンチェスター大学が認められても感謝。

<ol>
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アライメント アルゴリズムとソフトウェアによって、開発された、マンチェスター大学に独自します。それは http://www.click2go.umip.com/ でダウンロード可能です。

このプロトコルは nanolithographic 高い均一性と制御機能のサイズ大きい上パターンを迅速に行う便利な方法をユーザーに提供する機能 (cm2) エリア。これらの大面積 nanopatterns を支持基板はことができますさまざまなアプリケーションの更なる精緻化。この技術の 1 つの主要なアプリケーションは、細胞表面の相互作用研究のナノファブリケーション曲面の生成です。このレポートは、ナノファブリケーション基板によって立体的形態制御を示すことこれらの材料に細胞培養のいくつかの実例を示します。
このプロトコルの主要な enabler は、表面に、細胞培養実験急速な売り上げ高をできるナノ分解能を特徴の非常に均一で高スループットの生産を可能にする配置手順 (手順 4) の自動化です。この配置のアルゴリズムを使用して実施高分子ペン リソグラフィは約 30 分以内のナノスケールの機能を生成することができます。自動位置合わせの精度とこうしてパターン フィーチャーの均一性と再現性はしかし批判的に、プローブのアレイの品質に依存生産 (手順 1 と 2)。鈍、破損または不足しているプローブ; 場合は、準備の任意の欠陥閉じ込められた空気など泡 (ステップ 1.5) またはマスター (ステップ 1.8) からプローブの不適切な分離は、不正確な配置と質の悪いリソグラフィで起因できます。
これは、メソッドを共有共通のフォース フィードバックに依存するその他の配置方法の制限を報告しました。プローブが表面と接触しているときの正確な定量は、周囲の環境、サンプル段階の動きによって引き起こされる背景の振動を考慮する必要性によって制限されます。一般に、センサー フォース感度 µN 政権 (この場合は 2 µN) がだけ任意の 'の偽陽性の結果を避けるために、プローブと表面の間の決定的な連絡先として少なくとも 490 µN の力を登録する配置アルゴリズムを設計バック グラウンド ノイズからティンします。大特集 (1-2 μ m) を生成する傾向がある13したがって、このメソッド プローブは、 zに大きな距離を拡張する必要がありますので-軸 (結果として高い力) 連絡先を登録するために。Zを減らすことによって補うために、小さな機能を生成できます-軸距離旅リソグラフィ段階 (例えば、5 μ m の代わりに 3 μ m ステップ 5.2.3.2 で '黒' の設定を入力)。
それにもかかわらず、この制限があっても自動化アルゴリズム、並列スキャン プローブ リソグラフィー法のアプリケーションの重要な側面に対処することができる配置された以前、最も要求の厳しい、不正確なの時間ステップ、これらのテクニックを実装します。今この自動化は、平版の執筆自体に配置から作製プロセスの律速段階をシフトします。このプロトコルは、皆さんにこの配置手順のアプリケーションを示します、フレームワークが脂質 DPN26マトリックス支援リソグラフィ27と潜在的な未来の触媒など SPL テクニックの数に適用されます。プローブ システム。28

ナノテクノロジーの発展は、効率的かつ確実に加工表面にナノスケールの機能が可能な技術の開発に依存しています。1,2ただし、生成など広い領域 (複数 cm2) 以上確実に備わりで比較的低コスト以外の些細な努力。半導体産業から派生したほとんどの既存技術は、'ハード' 材料を作製するアブレーション フォトリソグラフィに依存します。最近では、リソグラフィ技術走査プローブ顕微鏡 (SPM) から派生は、ナノスケール デザインのラピッドプロトタイピング用の便利で汎用性の高いアプローチとして浮上しています。3 SPM ベースのテクニックは、便利かつ迅速に '書く' 任意のユーザー定義のパターンことが。ディップペンナノリソグラフィー (DPN) ・ マーキンら4分子 'のインクを執筆に類似した方法で機能を生産面に転送する、'ペン' として走査型プローブを使用するによって開拓はこれらの最も有名です。周囲条件下でプローブの表面をスキャン 'インク' 分子に転送されます、表面を介して水のメニスカス プローブと表面 (図 1) を形成します。DPN したがって、'の柔らかい' 等高分子及び生体分子を含む材料の広い範囲の nanolithographic 蒸着を使用できます。5チャネルの流体、設計のプローブを使用して関連の技術いろいろと呼ばれる 'ピペット' と 'ナノ万年筆' も報告されています。6,7,8
SPM 派生リソグラフィの広いアプリケーションに主要な障害は、します一つのプローブ パターン センチ スケール領域に過度に長い時間を必要とするスループット。この問題に対処するための早い努力は、' の 1 つ - 次元 ' とセンチ サイズのエリアの露光が報告される '次元 (2 D) プローブ アレイのカンチレバ型 DPN の並列化に焦点を当てた。5,9ただし、これらカンチレバー アレイに比較的複雑な多段階製造方法により生産されて、比較的壊れやすい。高分子ペン リソグラフィ (PPL) の発明標準 SPM カンチレバーをスライド ガラスに結合ソフト シロキサン エラストマー プローブの 2D 配列に置き換えることでこの問題に対処します。10この単純なプローブのセットアップがアプリケーションの広い範囲にナノリソグラフィ開放に広い領域にパターンの複雑さとコスト大幅低下します。このカンチレバーの無料のアーキテクチャは、先端ハード ソフト スプリング リソグラフィ、柔らかいエラストマー裏付けのハイブリッドは、ソフトを使用して制作のパターンと比較して改良された解像度を与えるハード シリコン チップ11に拡張されています。エラストマーのヒント。
これらの 2D 配列の技術の実行に重大な要因プローブ アレイなければならないことです基板の表面に平行に丁度すべてのプローブが接触表面に露光を利用すると場合、は、同時に。小さなミスアライメントが発生機能サイズに大きな差配列の 1 つの側面から他にいくつかのプローブまたはすべてではない、他が接触に来る間、配列の降下中に表面が付いている接触来る。12正確なアライメントはソフトなエラストマー プローブの変形による PPL で特に重要なプローブの表面を以前連絡を圧縮する表面に大きな足跡を残しています。
PPL の初期の作品は、表面が付いている接触を持っていたピラミッド型のプローブの変形を観察するアレイ上に取付けられるカメラを使用して配置プロセスをガイドする純粋に視覚的検査を採用しました。10配置はプローブのどちら側に触れた表面最初に、観察し、角度を調整するまで接触プローブの各側の差は、反復的な方法で手順を繰り返してによって判断されました。目に区別がつかない。この配置の手順は、オペレーターによって主観的な検査に依存する、再現性が低いです。
その後、表面にプローブの接触時に適用される力を測定するための基板の下に装着した力センサーから成るより客観的なアプローチを開発されています。12配置すべてのプローブを同時に接触したが、加えられた力を最大化する角度を調整することによって達成されました。この方法を示した表面の平行の 0.004 ° 以内に配置が可能であります。この '力フィードバック水準測量の今 2 つの独立したレポートで完全に自動化されたシステムに実装されています。13,14両方力センサー基板の下にまたはアレイ上にマウントのトライアドを使用し、力発揮にプローブのアレイと表面間の接触の量を測定します。これらのシステムは、高精度、1 cm の長さのスケール、14 ≦ 0.0003 1.4 cm13これらの自動アライメント システムも提供上 ° オペレーター時間と完了にかかる全体的な時間の節約の主要な以上 ≤0.001 ° のずれを報告を与える、リソグラフィ プロセス。
この技術により高スループット表面加工の 1 つの主要なアプリケーションは、細胞培養基板の世代です。それはよく確立されて今細胞と表面機能の間の最初の相互作用を制御することによってその細胞の表現型を操作できる、これはナノスケールで高めることができます。15具体的には、走査型プローブのリソグラフィ手法が示されている様々 なこのような細胞培養実験のナノファブリケーション表面を生成する安易な方法であること。16などの分化誘導される表面のナノスケール材料のナノ改質材の可能性を研究する PPL と DPN によるタンパク質のテンプレートが使用されている自己組織化単分子膜と細胞外マトリックスのパターンを紹介幹細胞。17
このプロトコルでは、大面積の PPL を可能にする変更された原子間力顕微鏡 (AFM) システムの使用率について説明します。我々 は、繰り返し配置プロセスを自動化するアルゴリズムと組み合わせてのプローブ表面接触を判断する手段として複数の力センサーを用いた力の検出を詳しく説明します。細胞外マトリックス蛋白質フィブロネクチンでこれらのパターンの後続機能化とヒト間葉系幹細胞 (立体的) の文化は、細胞培養の応用 PPL 加工表面のデモンストレーションとして記述されます。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlexAFM mounted on a motorised 5-axis (XYZ&#920;&#934;) translation and goniometer stage</td>
			<td>NanoSurf</td>
			<td>P40008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AFM control software</td>
			<td>NanoSurf</td>
			<td>C3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Engraving pen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z225568</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma Cleaner</td>
			<td>Harrick plasma</td>
			<td>PDC-32G-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PlasmaFlo</td>
			<td>Harrick plasma</td>
			<td>PDC-FMG-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Economy Dry Oxygen Service Pump</td>
			<td>Harrick plasma</td>
			<td>PDC-OPE-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube Rotator</td>
			<td>Stuart</td>
			<td>SB3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Desiccator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>5311-0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q Water Purification System</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>ZRXQ015WW</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modular Humidity Generator</td>
			<td>proUmid</td>
			<td>MHG32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proline Plus Pipette 100-1000 &#181;L</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>728070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon masters</td>
			<td>NIL Technology</td>
			<td>custom-made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright snapshot fluorescence microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope objectives</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>10x and 60x UPlan FLN &#8734;/-/FN 26.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright bright field microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DM 2500M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonicator</td>
			<td>Ultrawave Ltd.</td>
			<td>U95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spreadsheet for recording and intepreting automated alignment results</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>Excel</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-propanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34863</td>
			<td>FLAMMABLE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Sildes, Clear, Ground</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>451000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(7&#8211;8% vinylmethylsiloxane)-dimethylsiloxane copolymer, trimethylsiloxy-terminated</td>
			<td>Gelest</td>
			<td>VDT-731</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,3,5,7-tetramethyl-1,3,5,7-tetravinylcyclotetrasiloxane</td>
			<td>Gelest</td>
			<td>SIT7900.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum(0)-1,3-divinyl-1,1,3,3-tetramethyldisiloxane complex solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>479527</td>
			<td>HARMFUL, TOXIC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(25&#8211;35% methylhydrosiloxane)-dimethylsiloxane copolymer, trimethylsiloxane-terminated</td>
			<td>Gelest</td>
			<td>HMS-301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh Boat 100 mL</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies</td>
			<td>BALI828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette</td>
			<td>Appleton Woods</td>
			<td>KS230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>82.1473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ST10-031T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive Carbon Tape</td>
			<td>Agar scientific</td>
			<td>AGG3939</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16-Mercaptohexadecanoic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>448303-1G</td>
			<td>HARMFUL, TOXIC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34852</td>
			<td>FLAMMABLE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold coated microscope slide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>643203</td>
			<td>Once opened gold will remain reactive to thiols for at least 1 month</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiourea</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8656</td>
			<td>HARMFUL, TOXIC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron(III) nitrate nonahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>529303</td>
			<td>HARMFUL, TOXIC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84415</td>
			<td>HARMFUL, TOXIC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(11-Mercaptoundecyl)hexa(ethylene glycol)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>675105</td>
			<td>HARMFUL, TOXIC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin from human plasma</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F0895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalt(II) nitrate hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>203106</td>
			<td>HARMFUL, TOXIC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MSCGM Mesenchymal Stem Cell Growth Medium</td>
			<td>Lonza UK</td>
			<td>PT-3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Mesenchymal Stem Cells</td>
			<td>Lonza UK</td>
			<td>PT-2501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T4174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heraeus Multifuge X1 Centrifuge</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>75004210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CELLSTAR Centrifuge Tubes</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>188261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P/0840/53</td>
			<td>HARMFUL, TOXIC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Phalloidin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A12379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td>&#34;Detergent&#34; in manuscript</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium with DAPI</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-fibronectin antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab2413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 594</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R37117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A3912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10253041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 tissue culture flask</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10790113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cantilever</td>
			<td>BudgetSensor</td>
			<td>ContAl-G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

large-area scanning probe nanolithography facilitated by automated alignment and its application to substrate fabrication for cell culture studies

走査プローブ顕微鏡と、ナノメートル スケールの特徴の建設的な ('添加物') トップダウン作製法の多様性の創出が有効になります。歴史的には、走査の主な欠点は、単一のプローブ システムの本質的にスループットをされています。これは、増加ナノリソグラフィ スループットを有効にする複数のプローブの配列の使用されてに取り組みました。すべてのプローブを作るので、そのような並列ナノリソグラフィーを実装するために基板表面とプローブ アレイの正確なアライメントが重要なリソグラフィ パターンの開始時に同時に表面と接触。このプロトコルでは、センチ メートル サイズ領域にプローブ アレイの迅速、正確、かつ自動化された配置のアルゴリズムの使用によって容易にわたってナノメータ スケールの機能を生成する高分子ペン リソグラフィの使用率について説明します。ここでは、金基板上のチオール基のナノリソグラフィは高い均一性と機能の生成を示します。これらのパターンは表面に向かう細胞形態研究のコンテキストで使用するためのフィブロネクチンと官能基化します。

自動配置が成功したかどうかをチェックするには、(ステップ 4.8 からスプレッドシート) のアライメント データからプロット グラフを調べた。配置プロセスが成功した場合、試料ステージ、θ と φ の軸に傾いています角度に対応する 2 つのプロットはの上昇と下降のデータ ポイントのシリーズを示した。各プロット、データ ポイントの 2 つの線形近似を示した明確に定義された交差を示すzの最大の「ピーク」の拡張子と対応する角度で配置された実現 (図 4 a および 4 b)。このプロセスは繰り返し 4 回 (すなわち、軸ごとに 2 回) と 4 つの座標のセットとしてプロットします。座標の各ペアの積集合はこうして全面的な最適角度 (図 4) を示しています。13配置が成功しなかった場合、それが観察できること彼らの対応する θ と φ 角度プロット良質の直線近似を与えるかまたは (図 5) を交差していません。このような失敗した線形は、通常正しくトリムまたはプローブ ホルダー (1.7, 1.8 と 2.2 の手順) にマウントされている配列の結果として。これらのケースで配列が破棄された新しいもの用意して (手順 1 と 2) をマウントし、配置プロセスを繰り返す (ステップ 4)。
パターン化された金基板は成功した配置と PPL によって MHA とリソグラフィ、時に、沈着が起こったかどうかを調べる水平力顕微鏡を用いたをイメージしました。印刷面の大きい領域検討は基板の光学顕微鏡によって堆積したチオール (図 6および図 7) によって保護されていない金のエッチング後も行われました。しかし、エッチングのパターンはさらに高機能化は使用できません、パターニングを用いたプリント基板の表面用のバッチの代表的なサンプルを確認にのみ使用してください。エッチングのパターンは、個々 のペン (図 8) に対応する空白の領域を示す、この結果はプローブ アレイの生産は正常に行われていないと、いくつかのプローブが破損または不足していることを示します。フッ素コーティングが離れて着用する (手順 1.3)、古いマスターの使用のためこの不均質性プローブの可能性がありますいくつかのプローブの配列は、マスターから分離されている場合離れて引き裂かれての結果します。これらの場合、新しいマスターを使用してください。ガラス基材とマスター (ステップ 1.5) の間閉じ込められた泡またはかどうかプローブ アレイないきれいに分離されたマスターから (ステップ 1.8) 硬化後、空気の存在によりその結果にはあります。
培養 hMSCs もフィブロネクチンの機能面の蛍光顕微鏡観察画像収集 (図 9)。一般に、すべての基板は体外培養環境の中で安定していた、セルが付いていて、機能の小さい隔離された 20 x 20 配列の場合プリント パターンに彼らの形態を適応しました。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56967/56967fig1.jpg"> 図 1。プローブ先端に分子インク トランスポートを介して水のメニスカスを示す高分子ペン リソグラフィの略図。(A) 図、(B) ポリマー ペン配列の平面図、プローブと基板表面が完全に整列する、すべてのプローブ接触表面同時に並列化リソグラフィにおける結果を示します。<a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56967/56967fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56967/56967fig2.jpg"> 図 2。高分子ペン リソグラフィの模式図を設置す(実験のセットアップ準備プローブ アレイのプローブ ・ ホルダーに接続されているし、AFM スキャナーにマウントされているどこの A) 拡張の側面図です。ステージに基板を配置、センサーを強制的に 3 つ下に位置しています。(B) 試料ステージを基準にして原子間力顕微鏡のスキャン ヘッドを示す組み立て計装の表現。(C) 底面力センサー位置を示します。<a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56967/56967fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56967/56967fig3.jpg"> 図 3。配置手順の分光法プログラムを描いた略図。AFM スキャナーは、10 μ m、100 ミリ秒以内 250 ms の位置にある 100 ms 以内で 10 μ m の後退に続いて、開催引っ込んだ位置に 250 ms の距離によってサンプルに向かってプローブを移動する設定です。動きが配置プロセス全体で繰り返されます。<a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56967/56967fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56967/56967fig4.jpg"> 図 4。成功した配置を示すグラフ。● は、実際の値の測定を表し+ 、最高を示して傾斜角度 (A) θ と φ (B) 正常なアライメントの z 位置のグラフは、最小二乗法と合います。(C) θ と φ のグラフは、最大の z 位置が到達した 4 つのポイントで角度を装着しました。マーク交点、両方の軸にまたがる最終的な最適傾斜角度です。<a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56967/56967fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56967/56967fig5.jpg"> 図 5。失敗した配置を示すグラフ。● は、実際の値の測定を表し+ 、最高を示して傾斜角度 (A) θ と φ (B)、失敗した配置の z 位置のグラフは、最小二乗法と合います。(C) θ と φ のグラフは、最大の z 位置が到達した 4 つのポイントで角度を装着しました。ない明確なオプティマまたは交点を観察、したがって最適な位置合わせ角度は解決されません。<a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56967/56967fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56967/56967fig6.jpg"> 図 6。例示の光学顕微鏡と整列 PPL 配列による MHA とパターン化され、エッチング、金基板の原子間力顕微鏡像。(A) と (B) は、エッチングされたパターンの順次拡大光学顕微鏡画像(C) パターンの単一のグリッドの原子間力顕微鏡トポグラフィ画像です。<a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56967/56967fig6large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56967/56967fig7.jpg"> 図 7。金基板整列 PPL 配列による MHA とパターン化され、エッチングの説明光学顕微鏡画像。(A) と (B) は、エッチングされたパターンの順次拡大光学顕微鏡画像と (C) は、大面積に均一なパターンを示しています下の拡大画像。<a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56967/56967fig7large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56967/56967fig8.jpg"> 図 8。均等にない MHA でパターン化され、エッチング、金基板表面の例示の光学顕微鏡画像。(挿入図に示すように) 意図されていたパターンが、 zの増加によって生成されるすべての 2 行、20 行に配置された 20 のドット線のグリッドを繰り返し-1 μ m (5 に至る-5 μ m) による軸延長。いくつかのエリアのパターンは生成されません、それらの場所で不足しているプローブのため見ることができます。ドットの 2 つだけの行が生成されるエリアでこの結果を示しますだけ預金機能フルz配列を拡張するとき、完全に機能プローブと同じ高さではありませんが、プローブが存在-軸距離。この画像のコントラストを意図的に部分的な印刷領域の観測を有効にするのに変更されています。<a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56967/56967fig8large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56967/56967fig9.jpg"> 図 9。落射蛍光顕微鏡画像の hMSCs PPL によってテンプレートのフィブロネクチン アレイ上で培養した。(A) と (B) は高倍率画像表示個々 のセル。(C) 細胞および (D) は (印刷されたパターンの模式図は、インレーにも表示されます) のグリッド配置で培養された細胞の広視野画像付着せずフィブロネクチン配列のパターン例を示しています。細胞はフィブロネクチン (赤), F-アクチン (緑) を表示し、セルの核 (ブルー) ステンド グラスします。<a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56967/56967fig9large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

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Large-area Scanning Probe Nanolithography Facilitated by Automated Alignment and Its Application to Substrate Fabrication for Cell Culture Studies

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