Name: utilizing high resolution ultrasound to monitor tumor onset and growth in genetically engineered pancreatic cancer models
Uploaded: 2018-04-07T13:00:00
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Esta investigación fue apoyada por la Deutsche Krebshilfe (Max Eder grupo AN: 110972), una beca de tesis doctoral de la DGVS (a SMB) y una beca de Else-Kröner-Fresenius-Fundación (a RGG) en la Universidad médica centro de Go! ttingen. Agradecemos a Jutta Blumberg y Ulrike Wegner para la asistencia técnica de expertos. También agradecemos a los técnicos animales en el Animalario de la Universidad médica centro de Go! ttingen para ratón manteniendo. Todos los experimentos fueron realizados según las normas de bienestar animal alemán.

Este protocolo está de acuerdo con las pautas de cuidado de los animales en la Universidad médica centro de Go! ttingen, Alemania (33,9-42502-04-15/2056). Dependiendo de los requerimientos específicos de cada animal revisar tableros, algunos de los pasos del protocolo podrían ser modificados en consecuencia.
1. abdominal palpación de KPC ratones
<ol><li>Para evitar ecografías innecesarias, palpe el abdomen de ratón para identificar ratones que posiblemente podrían tener una lesión i...

<ol>
	<li>Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+oncology+research+and+cancer+medicine.">Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine.</a> EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).</li><li>Olive, K. P., Politi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Translational therapeutics in genetically engineered mouse models of cancer. (2), 131-143 (2014).</li><li>Westphalen, C. B., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+of+pancreatic+cancer.">Genetically engineered mouse models of pancreatic cancer.</a> The Cancer Journal. 18 (6), 502-510 (2012).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li><li>Frese, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=nab-Paclitaxel+potentiates+gemcitabine+activity+by+reducing+cytidine+deaminase+levels+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">nab-Paclitaxel potentiates gemcitabine activity by reducing cytidine deaminase levels in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Cancer Discovery. 2 (3), 260-269 (2012).</li><li>Paredes, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-invasive+method+of+quantifying+pancreatic+volume+in+mice+using+micro-MRI.">A non-invasive method of quantifying pancreatic volume in mice using micro-MRI.</a> PLoS One. 9 (3), e92263 (2014).</li><li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer.">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li><li>Aung, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotargeting+of+Integrin+alpha6beta4+for+Single-Photon+Emission+Computed+Tomography+and+Near-Infrared+Fluorescence+Imaging+in+a+Pancreatic+Cancer+Model.">Immunotargeting of Integrin alpha6beta4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model.</a> Molecular Imaging. 15, (2016).</li><li>Akladios, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+microCT+structural+imaging+to+preclinical+evaluation+of+hepatocellular+carcinoma+chemotherapeutics+on+orthotopic+graft+in+ACI+rats.">Contribution of microCT structural imaging to preclinical evaluation of hepatocellular carcinoma chemotherapeutics on orthotopic graft in ACI rats.</a> Bulletin du Cancer. 98 (2), 120-132 (2011).</li><li>Neesse, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CTGF+antagonism+with+mAb+FG-3019+enhances+chemotherapy+response+without+increasing+drug+delivery+in+murine+ductal+pancreas+cancer.">CTGF antagonism with mAb FG-3019 enhances chemotherapy response without increasing drug delivery in murine ductal pancreas cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 110 (30), 12325-12330 (2013).</li><li>Sastra, S. A., Olive, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+murine+pancreatic+tumors+by+high-resolution+ultrasound.">Quantification of murine pancreatic tumors by high-resolution ultrasound.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 249-266 (2013).</li></ol>

Con este protocolo, se proporciona una descripción detallada para la cuantificación de los tumores pancreáticos usando proyección de imagen ecografía abdominal de alta resolución en modelos de ratón modificados genéticamente. Sastra et al publicado recientemente, una descripción detallada cómo cuantificar los tumores pancreáticos en modelos de ratón, pero no visualizadas instrucciones sobre la preparación y manipulación como requisito previo para todos los otros pasos se muestra11...

Modelos de ratón modificados genéticamente han adquirido una importancia creciente en la investigación del cáncer debido a su capacidad para recapitular muy de cerca la compleja naturaleza de la carcinogénesis humana1,2,3. Uno de los más frecuentemente utiliza modelos para estudiar el desarrollo de cáncer de páncreas, la progresión y la respuesta terapéutica se caracteriza por una mutación activadora en el oncogén Kras combinado con una inactivación del tumor supresor p534. Este LSL-KrasG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre modelo de ratón (KPC) imita la progresión paso a paso de lesiones pre-invasivas neoplasia intraepitelial pancreática (PanIN) a carcinoma invasor. Fenotípicamente, casi todos los ratones desarrollan PDAC dentro de los seis primeros meses después del nacimiento. Sin embargo, en comparación con modelos trasplantados, el modelo KPC revela un inicio tumor altamente variable de 8 semanas a varios meses4. Una vez que los tumores pancreáticos alcanzan un cierto tamaño (5-9 mm de diámetro), crecimiento tumoral acelera rápidamente y ratones tendrán que estar inscritos en ensayos preclínicos5. Por lo tanto, la detección exacta de la aparición del tumor y tamaño del tumor es una condición esencial para la logística de estudio preclínico y seguimiento farmacoterapéutico. En general, varios enfoques como la proyección de imagen de resonancia magnética (MRI)6,7,8,9 o ultrasonido de alta resolución de la exploración de la tomografía computada puede ser empleada para llevar a cabo la proyección del tumor y tratamiento10. Cada técnica tiene sus ventajas y desventajas. Aunque MRI- o la tomografía computada (CT)-proyección de imagen permite la adquisición de datos de alta resolución así como cálculo de volumen exacto, tiempo prolongado examen bajo sedación general y equipos muy costosos, se requiere y no permiten frecuentes exploración durante un largo período de tiempo. En contraste, pequeños animal ultrasonografía es un método establecido que se puede emplear para detectar patología abdominal en ratones11. Ventajas de este método de proyección de imagen son breves análisis de tiempos, alta resolución, y la posibilidad de utilizar el ultrasonido doppler o contraste realzado ultrasonido (CEUS) para visualizar la perfusión de órganos en paralelo. Sin embargo, conocimiento anatómico, 3D imaginación y formación práctica completa se requieren para la interpretación de la imagen correcta.
En el artículo siguiente, se proporciona un protocolo detallado para la utilización de ultrasonido de alta resolución en el modelo KPC. Además, imágenes de ultrasonido estándar son representados y etiquetados con estructuras del órgano para facilitar la orientación para el investigador.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Visual Sonics Vevo2100 High Resolution Ultrasound System, including imaging stage and anesthesia line</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>VS-11945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 2100 MicroScan Transducer MS-550-D (22-55MHz)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>VS-11874</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Anesthesia System (anesthesia induction chamber with fresh and waste gas inlet)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>SA-12055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station (working stage with nose cone for anesthesia supply)</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada</td>
			<td>SA-11982</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;electronic pet clippers</td>
			<td>Panasonic Marketing Europe, Germany</td>
			<td>5025232484324</td>
			<td>Panasonic ER-PA10-s</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labotect Hot plate</td>
			<td>Labor tech G&#246;ttingen, Germany</td>
			<td>13854</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye cream (ophthalmic ointment)</td>
			<td>Sch&#252;lke&#38;Mayr, Germany</td>
			<td>9080249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>veterinary isoflurane</td>
			<td>Abbvie, Germany</td>
			<td>4831867</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>depilatory cream</td>
			<td>RB healthcare UK, United Kingdom</td>
			<td>8218535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol (v/v) in distilled water</td>
			<td>TH. Geyer, Germany</td>
			<td>22941000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrasound gel</td>
			<td>Asmuth, Germany</td>
			<td>13477</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tissue wipes</td>
			<td>Kimberly-Clark Germany, Germany</td>
			<td>7558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cotton tips</td>
			<td>Meditrade, Germany</td>
			<td>75481116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glass bowl for ultrasound gel</td>
			<td>ARC France, France</td>
			<td>H1149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water bowl</td>
			<td>W &#38; P Trading Co., USA</td>
			<td>B00K2P6PLQ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze sponges</td>
			<td>Fuhrmann, Germany</td>
			<td>960504</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilizing high resolution ultrasound to monitor tumor onset and growth in genetically engineered pancreatic cancer models

La LSL-KrasG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre modelo de ratón (KPC) representa un modelo transgénico establecido y utilizado para evaluar nuevas terapias en cáncer de páncreas. Tumor es variable en el modelo KPC entre 8 semanas y varios meses. Por lo tanto, herramientas de proyección de imagen no invasivas están obligados a pantalla de inicio de tumor y monitorear respuesta al tratamiento. Para solucionar este problema, diferentes enfoques han surgido en los últimos años. Ultrasonido de alta resolución tiene grandes ventajas como la no invasividad, tiempos de sesión rápido y una resolución de imagen de alta sin exposición a la radiación. Sin embargo, en los ratones no es trivial y suficiente conocimiento anatómico y habilidades prácticas se requieren para realizar con éxito la ecografía de alta resolución en modelos preclínicos de cáncer de páncreas. Con el siguiente artículo se presenta una guía práctica detallada para ultrasonido abdominal en modelos murinos con un enfoque particular en modelos de cáncer de páncreas endógeno. Además, se proporciona un resumen de errores comunes y cómo evitarlos.

Imágenes por ultrasonido son una técnica versátil y no invasivo que se utiliza para tratar varios temas en modelos murinos de enfermedades humanas. En comparación con todas otras imágenes enfoques principales ventajas son eficacia de alto rendimiento, costo, tiempo de adquisición breve y la proyección de imagen en tiempo real. Sin embargo, esta herramienta necesita conocimientos para generar imágenes precisas y de alta calidad. Particularmente en el caso de los artefactos no desea...

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Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

Este artículo describe la utilización de la ecografía de alta resolución en ratones modificados genéticamente el cáncer de páncreas. El objetivo principal es proporcionar una instrucción detallada para la detección y evaluación de los tumores pancreáticos endógenos.

Utilizando ultrasonido de alta resolución Monitor Tumor Inicio y crecimiento en modelos de cáncer pancreático genéticamente

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

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