Name: in vivo gene transfer to the rabbit common carotid artery endothelium
Uploaded: 2018-05-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium at JoVE.com

Ringraziamo AdVec, Inc., per il permesso di utilizzare reagenti HDAd, Julia Feyk per l'assistenza amministrativa e i servizi veterinari del dipartimento di medicina comparativa per consulenza chirurgica e supporto. Questo lavoro è stato supportato da HL114541 e il John L. Locke, Jr. Charitable Trust.

Tutti i metodi descritti qui sono stati approvati dall'Università di Washington Office of Animal Welfare e associato istituzionale Animal Care ed uso Committee (IACUC) e sono stati completati in conformità e rispetto di tutte le pertinenti normative e istituzionali linee guida.
Nota: Il trasferimento del Gene ad arterie carotiche comuni coniglio viene eseguita sui conigli da un chirurgo con l'ausilio di un anestesista o un assistente.
1. trasferimento del Gene per le arterie carotiche comuni di coniglio: pr...

Alcuni aspetti della tecnica chirurgica meritano un'attenzione particolare. Esposizione completa e mobilizzazione dell'arteria carotica comune tramite la dissezione attenta volontà facilitare gene transfer e arteriotomia riparazione. Tuttavia, durante la dissezione, manipolazione diretta dell'arteria carotica dovrebbe essere minimizzato per impedire il vasospasmo. Inoltre, qualsiasi sanguinamento adiacente all'arteria deve essere interrotto applicando una leggera pressione con una garza e sangue travasato deve essere ri...

L'obiettivo di questo metodo è quello di introdurre un transgene nell'endotelio delle arterie carotiche comuni di coniglio. Introduzione del transgene permette di valutare il ruolo biologico del prodotto transgene sia in arterie normali modelli di coniglio della malattia arteriosa umana. La sovraespressione del transgene in modelli di malattia può rivelare se il transgene (e il suo prodotto proteico) mostrano la promessa come agenti terapeutici1,2,3,4. Inclusione di elementi regolatori cis-acting in cassetta di espressione del transgene consente la valutazione dell'attività di questi elementi nell'endotelio arterioso in vivo5,6. Conoscenza dell'attività di specifici elementi regolatori cis-agenti può essere utilizzato per progettare cassette di espressione più attivi e per sondare i meccanismi di regolazione genica in grande arteria endotelio in vivo7.
I conigli sono un modello valido per vari aspetti della fisiologia vascolare umana e malattia. Conigli condividono molte caratteristiche vascolari con gli esseri umani. Ad esempio, valori ematologici basali, regolamento emostatico e vascolare tensione longitudinale sono simili tra conigli e gli esseri umani8. Modelli di coniglio di malattie vascolari replicano le caratteristiche principali di molte malattie umane, inclusi: aneurismi (simili caratteristiche di flusso e geometrici)9, vasospasmo (simile risposta a trattamento endovascolare)10,11, e aterosclerosi (placche intimal con caratteristiche simili, tra cui un nucleo ricco di lipidi, macrofagi e cellule muscolari lisce in un cappuccio fibroso)12,13. Di conseguenza, sono stati sviluppati modelli di coniglio per molte malattie vascolari come trombosi, vasospasmo, aneurisma, diabete, stenosi vascolare dell'innesto e aterosclerosi8,13,14, 15,16.
Per i ricercatori scegliendo tra modelli animali di fisiologia vascolare e nella malattia, il coniglio ha diversi vantaggi. Rispetto ai roditori, i battelli più grandi dei conigli permettono più facile manipolazione chirurgica, uso di dispositivi endovascolari e una maggiore quantità di tessuto per le misure quantitative. I conigli sono molto più vicini filogeneticamente ai primati che sono roditori17, e la maggiore diversità genetica dei conigli nazionali meglio approssima la variabilità genetica degli esseri umani. Diversità genetica è particolarmente importante per gli studi preclinici, che-per loro natura-obiettivo di sviluppare terapie che possono essere applicate alla popolazione umana geneticamente diversa. Come con molti se non tutti gli altri specie modello, geni di coniglio sono facilmente clonati o sintetizzati perché è stato sequenziato il genoma di coniglio con alta copertura (7,48 x) [http://rohsdb.cmb.usc.edu/GBshape/cgi-bin/hgGateway?db=oryCun2]. Rispetto ad altri modelli animali grandi (ad esempio, cani, maiali o pecore), i conigli sono relativamente poco costosi da acquistare e casa e sono più facili da allevare e gestire. Modelli specifici di malattia vascolare in conigli ogni hanno i loro vantaggi e difetti come modelli di malattia umana che esulano dall'ambito di questo manoscritto8,12,18. Un investigatore dovrebbe rivedere questi vantaggi e difetti per determinare se il coniglio è il modello migliore per rispondere ad una domanda specifica sperimentale.
Introduzione di sequenze regolatrici di acido desossiribonucleico (DNA) in cellule endoteliali in vivo consente di indagine dell'attività di queste sequenze in un ambiente fisiologico complesso. Studi in vitro in cellule trasfettate endoteliale possono essere utile per la valutazione iniziale delle sequenze regolatrici del DNA; Tuttavia, i livelli di espressione in modelli di coltura del tessuto a volte non vengono riprodotti quando gli studi sono ripetute in vivo5,19,20. Sistemi in vitro possono anche essere utili per esplorare la base delle vie di segnalazione proteica e la fisiologia endoteliale, nonché comunicazione tra cellule vascolari coltivate; Tuttavia, le vie più complesse o reti di regolazione che sono influenzati da complesse popolazioni di cellule vascolari vicine o il sistema immunitario migliore sono studiate in un in vivo sistema6,20. Il metodo descritto nel presente documento fornisce una piattaforma per esplorare la regolazione dell'espressione del transgene nell'endotelio nel contesto di una nave intatta, con o senza malattia. Il sistema in vivo permette anche indagine di crosstalk cellular fisiologiche e patologiche e l'identificazione dei contributi del sistema immunitario alla regolazione del gene espressione6.
Germe-linea transgenesi (soprattutto nei topi) sono un approccio alternativo per dirigere l'espressione del transgene alle cellule endoteliali. Questo approccio può fornire l'espressione del transgene tutta la vita, con il targeting endoteliale mediata da specifici promotore o regioni regolative21,22. Tuttavia, la generazione di topi transgenici è lungo e costoso, diverse linee transgeniche devono essere spesso testati per garantire il targeting del transgene per il tipo di cella desiderata e il raggiungimento dei livelli di espressione del transgene adeguata e sperimentale Risultati in sistemi murini possono essere ceppo-dipendente. Modelli murini transgenici con transgeni endoteliale-mirati hanno molti vantaggi: non c'è alcuna necessità di eseguire un intervento chirurgico su ogni animale sperimentale al fine di raggiungere la transgenesi, topi sperimentali possono essere allevati con numerosi altri topi transgenici disponibili in ordinare per testare interazioni genetiche e fenotipiche, e c'è una vasta selezione di anticorpi che reagiscono con le proteine murine, facilitando la caratterizzazione dei fenotipi. Tuttavia, targeting di transgeni all'endotelio tramite la linea germinale in genere comporta l'espressione del transgene in tutto il sistema vascolare,22 rende difficile determinare il sito in cui agisce il prodotto del transgene. Questo è particolarmente vero quando il prodotto del transgene è secreto, perché un transgene prodotto secernuto dalle cellule endoteliali in tutto il sistema vascolare potrebbe avere attività biologica in un numero qualsiasi di siti all'interno di un animale. Anche se il metodo descritto in questo manoscritto richiede competenze tecniche e strutture specializzate, può essere molto meno tempo e meno costoso di sviluppare una linea di topi transgenici endoteliali specifici. Esso consente la valutazione della funzione di una proteina selettivamente nelle cellule endoteliali di un segmento di grande arteria, e permette l'uso della carotide comune controlaterale come controllo appaiato (eliminando i fattori sistemici che possono variare tra sperimentale animali-ad esempio, la pressione sanguigna o livelli di colesterolo-come variabili incontrollate).
La terapia genica è un approccio promettente per il trattamento delle malattie vascolari, malattie croniche in particolare, perché una singola applicazione in grado di fornire sostenuta o forse tutta la vita l'espressione di un gene terapeutico23. La promessa terapeutica della terapia genica è stata esplorata in modelli animali di trasferimento genico somatico, spesso il fegato24,25, che è un obiettivo relativamente facile perché molti vettori virali ematica sono hepatotropic di targeting. Tuttavia, per avere un effetto sulla malattia vascolare, terapia genica mirata al fegato dovrà raggiungere sistemica iperespressione delle proteine. Ciò richiede in genere grandi dosi di vettore, che può essere tossico o addirittura mortali26. Inoltre, ha aumentato i livelli sistemici di un aumento di proteine, il rischio di effetti collaterali fuori bersaglio, che potrebbe complicare o oscurare anche interpretazione dei risultati sperimentali. Terapia genica locale targeting endotelio vascolare come descritto in questo manoscritto potrebbe evitare effetti collaterali sistemici perché il vettore infuso non è ampiamente diffusi oltre il segmento arterioso trasdotte, e gli effetti vascolari locali possono essere realizzati senza cambiamenti nei livelli di plasma sistemica della proteina. 27 inoltre, è necessaria una quantità nettamente inferiore di vettore di trasdurre un segmento arterioso in quanto è necessario per raggiungere robusto trasduzione epatica. L'espressione del transgene dal fegato è stata segnalata a diminuire nel tempo, probabilmente a causa del turnover cellulare, che richiedono dosi ripetute se l'espressione del transgene ad alto livello deve essere mantenuta. 28 al contrario, il tasso di turnover basso dell'endotelio fornisce espressione stabile per almeno 48 settimane in conigli alimentati chow e per almeno 24 settimane in lesioni aterosclerotiche dei conigli di colesterolo-federazione. 1 , 27
Per determinare se questo metodo di trasferimento del gene ad endotelio carotica comune coniglio è appropriato, i vantaggi e gli svantaggi (tabella 1) dovrebbero essere considerati nel contesto degli obiettivi specifici di ricerca. I vantaggi di questo metodo includono: conigli nazionali sono maggiormente rappresentativo della diversità genetica umana che sono topi inbred (importanti per lavoro preclinico); conigli forniscono più grandi vasi per manipolazione più facile e più tessuto per l'analisi; l'espressione del transgene mirati dell'endotelio può raggiungere il metodo molto più rapidamente di quanto non germe-linea endoteliale di targeting in topi transgenici; dose di vettore può essere facilmente regolata a livelli variabili di modello di espressione del transgene; è possibile analizzare i processi specifici di grande arteria endotelio; e transgenesi vascolare locale permette la carotide opposta nello stesso animale per essere utilizzato come controllo, eliminando i fattori sistemici come variabili incontrollate. Gli svantaggi includono: speciali strutture e competenze sono necessarie; Sfondi meno geneticamente modificati su cui sperimentare sono disponibili in conigli che nei topi; e c'è una selezione meno estesa di anticorpi di coniglio contro proteine del topo (per immunodetection di transgene proteina ed altri antigeni che possono essere importanti nell'interpretazione dei risultati sperimentali).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:888px;" width="887">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Disposables</td>
			<td style="width:181px;"></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">3mL syringe with 24G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309571</td>
			<td style="width:199px;">2x for gene transfer surgery; 3x for harvest surgery</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">1mL syringe with 27G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309623</td>
			<td style="width:199px;">6x for gene transfer surgery; 1x for harvest surgery</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">20mL syringe, luer lock</td>
			<td>Nipro Medical Corp</td>
			<td>JD+20L</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Catheters, 24G x 3/4&#34;</td>
			<td>Terumo Medical Products</td>
			<td>SROX2419V</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">19G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305187</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">21G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305165</td>
			<td style="width:199px;">For 20 mL syringe of saline</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Gauze 4&#34; x 4&#34;</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td style="width:149px;">3242</td>
			<td style="width:199px;">~10-15 per surgery</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">3-0 silk suture</td>
			<td>Covidien Ltd.</td>
			<td>S-244</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">5-0 silk suture</td>
			<td>Covidien Ltd.</td>
			<td>S-182</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">7-0 polypropylene suture</td>
			<td>CP Medical</td>
			<td>8648P</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">5-0 polyglycolic acid suture</td>
			<td>CP Medical</td>
			<td>421A</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">3-0 polyglycolic acid suture</td>
			<td>CP Medical</td>
			<td>398A</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Alcohol swabs</td>
			<td>Covidien Ltd.</td>
			<td>6818</td>
			<td style="width:199px;">For placement of I.V. line</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Catheter plug</td>
			<td>Vetoquinol</td>
			<td>411498</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Ketamine HCl, 100 mg/mL</td>
			<td>Vedco Inc.</td>
			<td>05098916106</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Xylazine, 100 mg/mL</td>
			<td>Akorn Inc.</td>
			<td>4821</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Lidocaine HCl, 2%</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>00409427702</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Bupivacaine HCl, 0.5%</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>00409161050</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Beuthanasia D-Special</td>
			<td>Intervet Inc.</td>
			<td>NDC 00061047305</td>
			<td style="width:199px;">Harvest surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Buprenorphine HCl, 0.3 mg/mL&#160;</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>12496075705</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:359px;">Saline IV bag, 0.9% sodium chloride</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>2B1309</td>
			<td style="width:199px;">2x for gene transfer surgery; can use vial of sterile saline in place of one</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Heparin&#160; (5000 U/mL)</td>
			<td>APP Pharmaceuticals</td>
			<td>NDC 63323-047-10</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Fentanyl patch, 25 mcg/hr&#160;</td>
			<td>Apotex Corp.</td>
			<td>NDC 60505-7006-2</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Isoflurane</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td style="width:149px;">Catalog number not available</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:359px;">Gene transfer vector</td>
			<td></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;">Dilute 350 &#181;L per artery; 2 x 1011 vp/mL for adenovirus; gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Surgical Instruments</td>
			<td></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Metzenbaum needle holder 7&#34; straight</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7900</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Operating scissors 6.5&#34; straight blunt/blunt</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-6828</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Needle holder /w suture scissors</td>
			<td>Miltex</td>
			<td style="width:149px;">8-14-IMC</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Castroviejo scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5658</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Castroviejo needle holder, 5.75&#34; straight with lock</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-6412</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Stevens scissors 4.25&#34; curved blunt/blunt</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-5943</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Alm retractor 4&#34; 4X4 5mm blunt prongs</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-6514</td>
			<td style="width:199px;">2x</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Backhaus towel clamp 3.5&#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;">4x</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Micro clip setting forceps 4.75&#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-6496</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Micro vascular clips, 11 mm</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;">2x for gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Surg-I-Loop</td>
			<td>Scanlan International</td>
			<td style="width:149px;">1001-81M</td>
			<td style="width:199px;">5 cm length</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Bonaccolto forceps, 4&#8221; (10 cm) long longitudinal serrations, cross serrated tip, 1.2mm tip width</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-5210</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Dumont #3 forceps Inox tip size .17 X .10mm</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-5042</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Graefe forceps, 4&#8221; (10 cm) long serrated straight, 0.8mm tip</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-5280</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Halstead mosquito forceps,&#160; 5&#34; straight, 1.3mm tips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7110</td>
			<td style="width:199px;">2x</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Halstead mosquito forceps,&#160; 5&#34; curved, 1.3mm tips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7111</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Jacobson mosquito forceps 5&#34; curved extra delicate, 0.9 mm tips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7117</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Kantrowitz forceps, 7.25&#34; 90 degree delicate, 1.7 mm tips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7305</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Tissue forceps 5&#34;, 1X2 teeth, 2 mm tip width</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-8162</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Allis-Baby forceps, 12 cm, 4x5 teeth, 3 mm tip width</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:149px;">11092-12</td>
			<td style="width:199px;">2x</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Adson forceps, 12 cm, serrated, straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:149px;">11006-12</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Veterinary electrosurgery handpiece and electrode</td>
			<td>MACAN Manufacturing</td>
			<td style="width:149px;">HPAC-1; R-F11</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Surgical Suite Equipment</td>
			<td></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Circulating warm water blanket and pump</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td style="width:149px;">Catalog number not available</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Forced air warming unit</td>
			<td>3M</td>
			<td style="width:149px;">Bair Hugger Model 505</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">IV infusion pump</td>
			<td>Heska</td>
			<td style="width:149px;">Vet IV 2.2</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Isoflurane vaporizer and scavenger</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td style="width:149px;">Catalog number not available</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Veterinary multi-parameter monitor</td>
			<td>Surgivet</td>
			<td style="width:149px;">Surgivet Advisor</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Veterinary electrosurgery unit</td>
			<td>MACAN Manufacturing</td>
			<td style="width:149px;">MV-9</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Surgical microscope</td>
			<td style="width:181px;">D.F. Vasconcellos</td>
			<td style="width:149px;">M900</td>
			<td style="width:199px;">Needs ~16x magnification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo gene transfer to the rabbit common carotid artery endothelium

L'obiettivo di questo metodo è quello di introdurre un transgene nell'endotelio dei segmenti isolati di entrambe le arterie carotiche comuni di coniglio. Il metodo raggiunge focale transgenesi endoteliale selettivo, consentendo in tal modo un investigatore per determinare i ruoli biologici di transgeni endoteliale-espresso e quantificare l'attività trascrizionale in vivo delle sequenze di DNA in grande arteria cellule endoteliali. Il metodo utilizza isolamento chirurgico delle arterie carotiche comuni di coniglio e un'arteriotomia per consegnare un vettore virale che esprimono transgene interno del lume arterioso. Un periodo di incubazione breve del vettore nel lume, con successiva aspirazione del contenuto lumen, è sufficiente per realizzare efficiente e durevole espressione del transgene nell'endotelio, con nessun rilevabile trasduzione o espressione di fuori della segmento arterioso isolato. Il metodo consente la valutazione delle attività biologiche del transgene prodotti sia in arterie normali modelli di malattia vascolare umano, evitando effetti sistemici che potrebbero essere causati da targeting genico ad altri siti (ad es. il fegato) o per l'approccio alternativo di erogare costrutti genetici all'endotelio di transgenesi linea germinale. Applicazione del metodo è limitata dalla necessità di un chirurgo esperto e anestesista, una ben attrezzata sala operatoria, i costi di acquisto e alloggiamento conigli e la necessità di esperienza nella costruzione di vettore di trasferimento genico e uso. Risultati ottenuti con questo metodo includono: alterazioni relative transgene in struttura arteriosa, cellularità, matrice extracellulare o funzione vasomotore; aumenti o riduzioni di infiammazione arteriosa; alterazioni nell'apoptosi delle cellule vascolari; e progressione, ritardo o regressione di malattie come l'iperplasia intimale o aterosclerosi. Il metodo consente inoltre di misurare la capacità di nativi e sintetici sequenze regolatrici del DNA per alterare l'espressione del transgene in cellule endoteliali, fornendo risultati che includono: livelli di transgene mRNA, i livelli di proteina transgene e livelli di transgene attività enzimatica.

Per implementare questo metodo con fiducia, esperimenti preliminari sono necessari per stabilire che l'operatore realizza trasferimento genico efficiente e riproducibili, con l'espressione del transgene principalmente in cellule endoteliali luminal. Nella nostra esperienza, questo è più facilmente valutato usando un vettore che esprime la β-galattosidasi. 5-bromo-4-Chloro-3-indolyl-β-D-Galactopyranoside (X-gal) la macchiatura dei segmenti carotiche comune rimosso 3 giorni dopo infusio...

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In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

Questo metodo è quello di introdurre un transgene nell'endotelio delle arterie carotiche coniglio. Introduzione del transgene permette di valutare il ruolo biologico del prodotto transgene in arterie normali o modelli di malattia. Il metodo è anche utile per misurare l'attività di sequenze regolatrici del DNA.

In Vivo Trasferimento del gene per l'endotelio dell'arteria carotica comune di coniglio

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

Un modello di Disturbed flusso indotta aterosclerosi carotidea in Arteria mouse da legatura parziale e un semplice metodo di isolamento dell&#39;RNA da Endotelio carotidea

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified ...

Ricerca

Medicina

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

Una strategia per identificare le mutazioni de novo nei disturbi comuni come autismo e schizofrenia

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Training a Sophisticated Microsurgical Technique: Interposition of External Jugular Vein Graft in the Common Carotid Artery in Rats

La formazione di una sofisticata tecnica microchirurgica: Interposizione della vena giugulare esterna innesto nella carotide comune in Rats

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

Bilaterale occlusione comune Arteria carotide come uno stimolo precondizionamento in grado di indurre tolleranza ischemica precoce di focale Ischemia Cerebrale

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Un modello murino di impianto di stent a livello dell&#39;arteria carotidea per lo Studio della restenosi

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

Topo adulto venosa Ipertensione Modello: carotide comune di External Vena giugulare anastomosi.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

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A Novel<em&gt; In vivo</em&gt; Tecnica Gene Transfer e<em&gt; In vitro</em&gt; test cellulari per lo studio della perdita ossea nei disturbi muscoloscheletrici

Differentiation and activation of osteoclasts play a key role in the development of musculoskeletal diseases as these cells are primarily involved in bone ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Infusi carotide di farmacocinetica e di farmacodinamica Analisi dei taxani nei topi

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Vascular Balloon Injury and Intraluminal Administration in Rat Carotid Artery

Vascolare Balloon Lesioni e intraluminale Amministrazione in Rat carotide

The carotid artery balloon injury model in rats has been well established for over two decades. It remains an important method to study the molecular and ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Esecuzione permanente distale Medio cerebrale con arteria carotide comune di occlusione in ratti anziani per studiare corticale Ischemia con disabilità sostenuta

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...