Name: in vivo gene transfer to the rabbit common carotid artery endothelium
Uploaded: 2018-05-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium at JoVE.com

Agradecemos a instantáneo, Inc. permiso utilizar reactivos HDAd, Julia Feyk para asistencia administrativa y los servicios veterinarios del Departamento de medicina comparada quirúrgica asesoramiento y apoyo. Este trabajo fue apoyado por HL114541 y la confianza caritativa de John L. Locke, Jr..

Todos los métodos aquí descritos fueron aprobados por la Universidad de Washington, oficina de bienestar de animales asociado institucional Animal atención y Comité uso (IACUC) y se completaron en conformidad y cumplimiento de todos los pertinentes reglamentario e institucional directrices.
Nota: Transferencia de genes a arterias carótidas comunes del conejo se realiza en conejos por un cirujano con la ayuda de un anestesiólogo o un asistente.
1. transferencia de gen arterias carótidas común conejo: a...

Ciertos aspectos de la técnica quirúrgica merecen especial atención. Exposición completa y movilización de la arteria carótida común mediante disección cuidadosa voluntad de facilitar la transferencia y arteriotomía reparación de gen. Sin embargo, durante la disección, debe reducirse la manipulación directa de la arteria carótida para prevenir el vasoespasmo. Además, cualquier hemorragia adyacente a la arteria debe ser detenido mediante la aplicación de ligera presión con una gasa y sangre extravasada deb...

El objetivo de este método es introducir un transgen en el endotelio de las arterias carótidas común conejo. Introducción del transgén permite la evaluación de la función biológica del producto transgénico tanto en modelos de conejo de la humana enfermedad arterial en las arterias normales. La sobreexpresión del transgen en modelos de la enfermedad puede revelar si el transgén (y su producto de la proteína) prometen como agentes terapéuticos1,2,3,4. Inserción de elementos reguladores cis-acting en el casete de expresión del transgén permite la evaluación de la actividad de estos elementos en el endotelio arterial en vivo5,6. Conocimiento de la actividad de determinados elementos reguladores cis-acting puede utilizarse para diseñar casetes de expresión más activa y sondear los mecanismos de regulación génica en el endotelio de la arteria grande en vivo7.
Los conejos son un modelo valioso para diversos aspectos de la fisiología vascular humana y enfermedad. Los conejos comparten muchas características vasculares con los seres humanos. Por ejemplo, valores hematológicos basales, la regulación hemostática y tensión longitudinal vascular son similares entre los conejos y los seres humanos8. Modelos de conejo de enfermedades vasculares replican las características clave de muchas enfermedades humanas incluyendo: aneurismas (similares geométricas y características del flujo)9, vasoespasmo (similar respuesta a tratamiento endovascular)10,11, y aterosclerosis (placas íntima con similares características, incluyendo un núcleo rico en lípidos, macrófagos y músculo liso células en una cubierta fibrosa)12,13. En consecuencia, han desarrollado modelos de conejo para muchas enfermedades vasculares como trombosis, vasoespasmo, aneurisma, diabetes, estenosis de injerto vascular y ateroesclerosis8,13,14, 15,16.
Para elegir entre los modelos animales de la fisiología vascular y enfermedad de los investigadores, el conejo tiene varias ventajas. En comparación con los roedores, los vasos más grandes de los conejos permiten más fácil manipulación quirúrgica, uso de dispositivos endovasculares y una mayor cantidad de tejido para mediciones cuantitativas. Los conejos son mucho más cercanos filogenéticamente a los primates que son roedores17, y la mayor diversidad genética de conejos exogámica aproxima mejor la variabilidad genética de los seres humanos. La diversidad genética es particularmente importante para los estudios preclínicos, que-por naturaleza-pretenden desarrollar terapias que pueden aplicarse a la población humana genéticamente diversa. Como con muchas si no todas las demás especies modelo, genes de conejo son fácilmente clonados o sintetizados ya se ha secuenciado el genoma de conejo con alta cobertura (7.48 x) [http://rohsdb.cmb.usc.edu/GBshape/cgi-bin/hgGateway?db=oryCun2]. En comparación con otros modelos animales grandes (como perros, cerdos u ovejas), los conejos son relativamente baratos de comprar y casa y son fáciles de criar y manejar. Modelos específicos de enfermedad vascular en conejos cada uno tienen sus ventajas y deficiencias como modelos de enfermedades humanas que están más allá del alcance de este manuscrito8,12,18. Un investigador debe revisar estas ventajas y deficiencias para determinar si el conejo es el mejor modelo para contestar una pregunta experimental específica.
Introducción de secuencias reguladoras del ácido desoxirribonucleico (ADN) en células endoteliales en vivo permite la investigación de la actividad de estas secuencias en un complejo entorno fisiológico. Estudios in vitro en las células transfected endoteliales pueden ser útiles para la evaluación inicial de secuencias reguladoras del ADN; sin embargo, los niveles de expresión en modelos de cultivo de tejidos a veces se reproducen no cuando los estudios son repetidos en vivo5,19,20. Sistemas in vitro también pueden ser útiles para explorar vías básicas de proteína de señalización y fisiología endotelial, así como comunicación entre las células vasculares cultivadas; sin embargo, más complejas vías o redes de regulación que están influenciadas por las poblaciones complejas de células vasculares vecinas o el sistema inmune se estudian mejor en un en vivo sistema6,20. El método descrito en este documento ofrece una plataforma para explorar la regulación de la expresión de transgenes en el endotelio en el contexto de un recipiente intacto, con o sin enfermedad. En vivo el sistema también permite la investigación de interferencia celular fisiológica y patológica y la identificación de las contribuciones del sistema inmune a la regulación de la expresión de gen6.
Transgénesis germinal (especialmente en los ratones) es un enfoque alternativo para dirigir la expresión del transgen a las células endoteliales. Este enfoque puede proporcionar expresión del transgen durante toda la vida, con objetivos endotelial mediada por promotor específica o regiones reguladoras21,22. Sin embargo, la generación de ratones transgénicos es costoso y desperdiciador de tiempo, varias líneas transgénicas deben probarse frecuentemente para garantizar la focalización del transgén en el tipo celular deseado y el logro de niveles de expresión del transgen adecuada y experimental resultados en sistemas murinos pueden ser dependiente de la cepa. Modelos murinos transgénicos con transgenes endotelial dirigidos tienen muchas ventajas: no es necesario realizar la cirugía en todos los animales experimentales con el fin de lograr la transgénesis, ratones experimentales pueden ser criados con numerosos otros ratones transgénicos disponibles en para probar las interacciones genéticas y fenotípicas, y hay una gran variedad de anticuerpos que reaccionan con proteínas murinas, facilitando la caracterización de fenotipos. Sin embargo, targeting de transgenes al endotelio a través de la línea germinal típicamente resulta en la expresión de transgenes a través de la vasculatura,22 lo que es difícil determinar el sitio en que está actuando el producto del transgen. Esto es especialmente cierto cuando el producto del transgen es secretado, porque un producto transgénico secretado por las células endoteliales a través de la vasculatura podría tener actividad biológica en cualquier número de sitios dentro de un animal. Aunque el método descrito en este manuscrito requiere conocimientos técnicos y servicios especializados, puede ser mucho menos tiempo y menos costosa que el desarrollo de una línea de ratón transgénico endoteliales específicos. Permite la evaluación de la función de una proteína selectivamente en las células endoteliales de un segmento de arteria grande, y permite el uso de la carótida común contralateral como control emparejado (eliminando factores sistémicos que pueden variar entre experimental animales-por ejemplo, la presión arterial o los niveles de colesterol-como variables incontroladas).
La terapia génica es un enfoque prometedor para el tratamiento de enfermedades vasculares, enfermedades crónicas especialmente, porque una sola aplicación puede ser sostenida o posiblemente toda la vida la expresión de un gene terapéutico23. Se ha explorado la promesa terapéutica de la terapia génica en modelos animales de transferencia génica somática, a menudo el hígado24,25, que es un objetivo relativamente fácil porque muchos vectores virales transmitidas por la sangre son hepatotrópicos. Sin embargo, para tener un efecto sobre la enfermedad vascular, la terapia génica dirigida al hígado debe alcanzar sistémica sobreexpresión de las proteínas. En general, esto requiere grandes dosis de vectores, que pueden ser tóxicas o incluso mortales26. Por otra parte, aumento de los niveles sistémicos de un aumento de la proteína el riesgo de efectos secundarios fuera del objetivo, que podría complicar o incluso oscurecer la interpretación de resultados experimentales. Terapia del gene locales dirigidos a endotelio vascular como se describe en este manuscrito podría evitar efectos secundarios sistémicos porque el vector infundido no se difundió más allá del segmento arterial transduced y efectos vasculares locales pueden lograrse sin cambios en niveles plasmáticos sistémicos de la proteína. 27 además, se necesita una cantidad mucho menor de vector a transducir un segmento arterial que es necesario para lograr la transducción hepática sólida. Expresión transgénica del hígado se ha divulgado a declinar con el tiempo, probablemente debido al recambio celular, que requiere dosis repetidas si la expresión transgénica de alto nivel debe ser mantenido. 28 en cambio, la tasa de rotación baja del endotelio proporciona expresión estable durante al menos 48 semanas en conejos alimentados con chow y durante al menos 24 semanas en las lesiones ateroscleróticas de conejos alimentados con colesterol. 1 , 27
Para determinar si este método de transferencia de genes al endotelio carótida común conejo es apropiado, las ventajas y desventajas (tabla 1) deben considerarse en el contexto de los objetivos específicos de investigación. Las ventajas de este método incluyen: exogámica los conejos son el mejor representante de la diversidad genética humana que son ratones endogámicos (importantes para el trabajo preclínico); conejos proporcionan recipientes más grandes para un manejo más fácil y más tejido para el análisis; el método puede lograr expresión transgen orientada a endotelio mucho más rápidamente de lo que hace la línea germinal endotelial en ratones transgénicos; dosis del vector se pueden ajustar fácilmente a niveles variables de modelo de expresión del transgen; procesos específicos de endotelio de arterias grandes pueden ser investigados; y transgénesis vascular local permiten la carótida opuesta en el mismo animal para ser utilizado como un control, eliminar los factores sistémicos como variables incontroladas. Desventajas incluyen: instalaciones especiales y conocimientos son necesarios; menos fondos modificados genéticamente en el que experimentar están disponibles en los conejos que en los ratones; y hay una selección menos extensa de anticuerpos de conejo frente a proteínas de ratón (para la inmunodetección de proteínas transgénicas y otros antígenos que pueden ser importantes en la interpretación de resultados experimentales).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:888px;" width="887">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Disposables</td>
			<td style="width:181px;"></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">3mL syringe with 24G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309571</td>
			<td style="width:199px;">2x for gene transfer surgery; 3x for harvest surgery</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">1mL syringe with 27G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309623</td>
			<td style="width:199px;">6x for gene transfer surgery; 1x for harvest surgery</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">20mL syringe, luer lock</td>
			<td>Nipro Medical Corp</td>
			<td>JD+20L</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Catheters, 24G x 3/4&#34;</td>
			<td>Terumo Medical Products</td>
			<td>SROX2419V</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">19G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305187</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">21G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305165</td>
			<td style="width:199px;">For 20 mL syringe of saline</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Gauze 4&#34; x 4&#34;</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td style="width:149px;">3242</td>
			<td style="width:199px;">~10-15 per surgery</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">3-0 silk suture</td>
			<td>Covidien Ltd.</td>
			<td>S-244</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">5-0 silk suture</td>
			<td>Covidien Ltd.</td>
			<td>S-182</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">7-0 polypropylene suture</td>
			<td>CP Medical</td>
			<td>8648P</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">5-0 polyglycolic acid suture</td>
			<td>CP Medical</td>
			<td>421A</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">3-0 polyglycolic acid suture</td>
			<td>CP Medical</td>
			<td>398A</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Alcohol swabs</td>
			<td>Covidien Ltd.</td>
			<td>6818</td>
			<td style="width:199px;">For placement of I.V. line</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Catheter plug</td>
			<td>Vetoquinol</td>
			<td>411498</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Ketamine HCl, 100 mg/mL</td>
			<td>Vedco Inc.</td>
			<td>05098916106</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Xylazine, 100 mg/mL</td>
			<td>Akorn Inc.</td>
			<td>4821</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Lidocaine HCl, 2%</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>00409427702</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Bupivacaine HCl, 0.5%</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>00409161050</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Beuthanasia D-Special</td>
			<td>Intervet Inc.</td>
			<td>NDC 00061047305</td>
			<td style="width:199px;">Harvest surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Buprenorphine HCl, 0.3 mg/mL&#160;</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>12496075705</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:359px;">Saline IV bag, 0.9% sodium chloride</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>2B1309</td>
			<td style="width:199px;">2x for gene transfer surgery; can use vial of sterile saline in place of one</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Heparin&#160; (5000 U/mL)</td>
			<td>APP Pharmaceuticals</td>
			<td>NDC 63323-047-10</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Fentanyl patch, 25 mcg/hr&#160;</td>
			<td>Apotex Corp.</td>
			<td>NDC 60505-7006-2</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Isoflurane</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td style="width:149px;">Catalog number not available</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:359px;">Gene transfer vector</td>
			<td></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;">Dilute 350 &#181;L per artery; 2 x 1011 vp/mL for adenovirus; gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Surgical Instruments</td>
			<td></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Metzenbaum needle holder 7&#34; straight</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7900</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Operating scissors 6.5&#34; straight blunt/blunt</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-6828</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Needle holder /w suture scissors</td>
			<td>Miltex</td>
			<td style="width:149px;">8-14-IMC</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Castroviejo scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5658</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Castroviejo needle holder, 5.75&#34; straight with lock</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-6412</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Stevens scissors 4.25&#34; curved blunt/blunt</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-5943</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Alm retractor 4&#34; 4X4 5mm blunt prongs</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-6514</td>
			<td style="width:199px;">2x</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Backhaus towel clamp 3.5&#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;">4x</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Micro clip setting forceps 4.75&#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-6496</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Micro vascular clips, 11 mm</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;">2x for gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Surg-I-Loop</td>
			<td>Scanlan International</td>
			<td style="width:149px;">1001-81M</td>
			<td style="width:199px;">5 cm length</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Bonaccolto forceps, 4&#8221; (10 cm) long longitudinal serrations, cross serrated tip, 1.2mm tip width</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-5210</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Dumont #3 forceps Inox tip size .17 X .10mm</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-5042</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Graefe forceps, 4&#8221; (10 cm) long serrated straight, 0.8mm tip</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-5280</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Halstead mosquito forceps,&#160; 5&#34; straight, 1.3mm tips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7110</td>
			<td style="width:199px;">2x</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Halstead mosquito forceps,&#160; 5&#34; curved, 1.3mm tips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7111</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Jacobson mosquito forceps 5&#34; curved extra delicate, 0.9 mm tips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7117</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Kantrowitz forceps, 7.25&#34; 90 degree delicate, 1.7 mm tips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7305</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Tissue forceps 5&#34;, 1X2 teeth, 2 mm tip width</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-8162</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Allis-Baby forceps, 12 cm, 4x5 teeth, 3 mm tip width</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:149px;">11092-12</td>
			<td style="width:199px;">2x</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Adson forceps, 12 cm, serrated, straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:149px;">11006-12</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Veterinary electrosurgery handpiece and electrode</td>
			<td>MACAN Manufacturing</td>
			<td style="width:149px;">HPAC-1; R-F11</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Surgical Suite Equipment</td>
			<td></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Circulating warm water blanket and pump</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td style="width:149px;">Catalog number not available</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Forced air warming unit</td>
			<td>3M</td>
			<td style="width:149px;">Bair Hugger Model 505</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">IV infusion pump</td>
			<td>Heska</td>
			<td style="width:149px;">Vet IV 2.2</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Isoflurane vaporizer and scavenger</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td style="width:149px;">Catalog number not available</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Veterinary multi-parameter monitor</td>
			<td>Surgivet</td>
			<td style="width:149px;">Surgivet Advisor</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Veterinary electrosurgery unit</td>
			<td>MACAN Manufacturing</td>
			<td style="width:149px;">MV-9</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Surgical microscope</td>
			<td style="width:181px;">D.F. Vasconcellos</td>
			<td style="width:149px;">M900</td>
			<td style="width:199px;">Needs ~16x magnification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo gene transfer to the rabbit common carotid artery endothelium

El objetivo de este método es introducir un transgen en el endotelio de segmentos aislados de ambas arterias carótidas comunes del conejo. El método logra focal transgénesis endotelial selectiva, lo que permite a un investigador determinar los roles biológicos de endoteliales expresan transgenes y cuantificar la actividad transcripcional in vivo de secuencias de ADN en arterias grandes células endoteliales. El método utiliza aislamiento quirúrgico de arterias carótidas comunes de conejo y una arteriotomía para entregar un vector viral expresar transgenes en la luz arterial. Un período de incubación corto del vector en el lumen, con posterior aspiración de los contenidos de la luz, es suficiente para alcanzar eficiente y duradera expresión del transgén en el endotelio, sin transducción detectable o expresión fuera de la segmento arterial aislada. El método permite la evaluación de las actividades biológicas de los productos transgénicos en arterias normales y en modelos de enfermedad vascular humana, evitando efectos sistémicos que podrían ser causados ya sea apuntando a la entrega de genes a otros sitios (por ej. el hígado) o por la alternativa de entregar construcciones genéticas al endotelio por transgénesis de línea del germen. Aplicación del método está limitada por la necesidad de un experto cirujano y anestesista, una bien equipada sala de operaciones, los costos de compra y vivienda conejos y la necesidad de experiencia en la construcción de vectores de transferencia génica y uso. Resultados obtenidos con este método incluyen: alteraciones relacionadas con el transgén en la estructura arterial, celularidad, matriz extracelular o función vasomotora; aumentos o reducciones en la inflamación arterial; alteraciones en la apoptosis de las células vasculares; y progresión, retraso o regresión de enfermedades como la hiperplasia intimal o ateroesclerosis. El método también permite la medición de la capacidad de secuencias reguladoras de ADN natural y sintético para alterar la expresión del transgén en las células endoteliales, proporcionando resultados que incluyen: niveles de transgen mRNA, los niveles de la proteína transgénica y niveles del transgén actividad enzimática.

Para implementar este método con confianza, experimentos preliminares son necesarios para establecer que el operador logra a transferencia de genes eficientes y reproducibles, con expresión del transgen principalmente en las células endoteliales luminales. En nuestra experiencia, esto se calcula más fácilmente usando un vector que expresa la β-galactosidasa. 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside (X-gal) tinción de segmentos de la carótida común quita 3 días después ...

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In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

Este método consiste en introducir un transgen en el endotelio de las arterias carótidas de conejo. Introducción del transgén permite la evaluación de la función biológica del producto transgen en arterias normales o modelos de la enfermedad. El método también es útil para medir actividad de secuencias reguladoras del ADN.

En Vivo Transferencia génica en el endotelio de la arteria carótida común conejo

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

Un modelo de Disturbed inducida por el flujo de Aterosclerosis en la arteria carótida del ratón por la ligadura parcial y un método sencillo para el aislamiento de ARN del endotelio carótida

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified ...

Investigación

Medicina

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

Una estrategia para identificar mutaciones de novo en los trastornos comunes, tales como el autismo y la esquizofrenia

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Training a Sophisticated Microsurgical Technique: Interposition of External Jugular Vein Graft in the Common Carotid Artery in Rats

La formación de una sofisticada técnica de microcirugía: La interposición de injerto de la vena yugular externa en la arteria carótida común en ratas

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

Bilateral Común oclusión de la arteria carótida como un estímulo de preacondicionamiento adecuado para inducir la tolerancia isquémica precoz de isquemia cerebral focal

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Un modelo murino de la implantación de un stent en la arteria carótida para el Estudio de la reestenosis

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

Adultos Mouse hipertensión venosa: Modelo: arteria carótida común a la vena yugular externa anastomosis.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

A Novel<em&gt; In vivo</em&gt; Técnica de transferencia de genes y<em&gt; In vitro</em&gt; ensayos basados ​​en células para el estudio de la pérdida ósea en los trastornos musculoesqueléticos

Differentiation and activation of osteoclasts play a key role in the development of musculoskeletal diseases as these cells are primarily involved in bone ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Infusiones de la arteria carótida para farmacocinéticas y farmacodinámicas Análisis de taxanos en ratones

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Vascular Balloon Injury and Intraluminal Administration in Rat Carotid Artery

Lesión Vascular Globo y Administración intraluminal en rata arteria carótida

The carotid artery balloon injury model in rats has been well established for over two decades. It remains an important method to study the molecular and ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Realización Permanente distal cerebral media carótida común con oclusión de la arteria en ratas de edad avanzada para el Estudio de la isquemia cortical con sostenida de la discapacidad

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...