Name: in vivo gene transfer to the rabbit common carotid artery endothelium
Uploaded: 2018-05-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium at JoVE.com

Ve destek AdVec, Inc. ve karşılaştırmalı tıp bölümü Veterinerlik Hizmetleri için cerrahi tavsiye HDAd reaktifler, Julia Feyk yönetim yardım için kullanmak için izin için teşekkür ederiz. Bu eser HL114541 ve John L. Locke, Jr. hayırsever güven tarafından desteklenmiştir.

Tüm yöntem tanımlamak burada Washington Office hayvan refahı ve ilişkili kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Üniversitesi tarafından onaylanmıştır ve uygun olarak ve tüm ile uyum içinde tamamlanmıştır ilgili yasal ve kurumsal yönergeleri.
Not: Gen transferi için tavşan ortak Karotid arter tavşan bir anestezi uzmanı veya Yardımcısı Yardımı ile bir cerrah tarafından gerçekleştirilir.
1. gen transferi için tavşan ortak Karotid arter: işlem öncesi
<ol><li>Tavş...

Cerrahi tekniğin bazı yönlerini özellikle dikkat hak. Tam pozlama ve gen transferi ve arteriotomy onarım kolaylaştırmak seferberlik ortak Karotid arter yolu ile dikkatli diseksiyon. Ancak, vasospasm önlemek için doğrudan manipülasyon Karotid arter diseksiyonu sırasında indirilmelidir. Buna ek olarak, herhangi bir arter ile bitişik kanama gazlı bezle hafif basınç uygulayarak durdurulması gerektiğini ve extravasated kan hemen normal salin alanıyla durulama ile temizlenmelidir. Ortak Karotid arter ile pa...

Bu yöntem bir transgene tavşan ortak Karotid arter endotel tanıtmak için hedeftir. Transgene getirilmesi transgene ürün biyolojik rolü değerlendirilmesi normal arter hem de insan arter hastalığı tavşan modelleri sağlar. Hastalık modelleri transgene overexpression transgene (ve protein ürün) terapötik ajanlar1,2,3,4olarak umut verici olup olmadığını ortaya çıkarabilir. CIS etkili düzenleyici elemanlarının transgene ifade kaset içinde eklenmesi damar endotel vivo içinde5,6bu öğeleri etkinliğinin değerlendirmesi sağlar. Belirli CIS etkili düzenleyici elemanlarının faaliyet bilgi daha aktif ifade kaset tasarlamak için ve büyük damar endotel vivo içinde7gen düzenlemesi mekanizmaları incelemek için kullanılabilir.
Adatavşanı are çeşitli yönlerini insan vasküler Fizyoloji ve hastalık için değerli bir model. Tavşan insanlarla birçok damar özellikleri şunlardır. Örneğin, temel hematolojik değerler, Kan durdurucu sargı yönetmelik ve vasküler boyuna gerginlik tavşan ve insanlar8arasında benzer. Tavşan modelleri vasküler hastalıklar çoğaltmak temel özellikleri de dahil olmak üzere birçok insan hastalıkları: anevrizma (benzer geometrik ve akış özellikleri)9, vasospasm (benzer tepki Endovasküler tedavi)10,11, ve ateroskleroz (intimal plaklar ile benzer özellikler bir çekirdek lipid, makrofajlar ve düz kas hücrelerinde zengin lifli bir kap içinde dahil)12,13. Buna göre tavşan modelleri tromboz, vasospasm, anevrizma, şeker hastalığı, damar grefti stenoz ve ateroskleroz8,13,14, gibi birçok vasküler hastalık gelişmiş için 15,16.
Vasküler Fizyoloji ve hastalık hayvan modelleri arasında seçme araştırmacılar için tavşan birçok avantajı vardır. Kemirgenler karşılaştırıldığında, tavşan daha büyük gemilerin kolay cerrahi işleme, Endovasküler cihazların kullanımı ve doku nicel ölçümler için daha büyük bir miktarda sağlar. Tavşan kemirgenler17daha filogenetik primatlar için çok daha yakın ve daha fazla genetik çeşitlilik outbred tavşan, daha iyi insanlar genetik değişkenliği yaklasik. Genetik çeşitlilik preklinik çalışmaları için özellikle önemli olan-genetik olarak farklı insan nüfus için uygulanan tedaviler geliştirmek için onların doğa amacı tarafından. Eğer tüm diğer birçok model türü ile tavşan genler kolayca klonlanmış veya tavşan genom ile yüksek kapsama sıralı çünkü sentez (7,48 x) [http://rohsdb.cmb.usc.edu/GBshape/cgi-bin/hgGateway?db=oryCun2]. Diğer büyük hayvan modeller (örneğin, köpek, domuz ya da koyun) karşılaştırıldığında, tavşan satın almak nispeten ucuzdur ve ev ve onlar doğurmak ve işlemek daha kolaydır. Tavşanların her belirli vasküler hastalık modelleri bu el yazması8,12,18kapsamı dışındadır insan hastalık modelleri olarak kendi avantajları ve eksiklikleri vardır. Bir araştırmacı bu avantajları ve tavşan deneysel sorularınıza cevap için en iyi modeli olup olmadığını belirlemek için eksiklikleri gözden geçirmelidir.
Giriş endotel hücreleri vivo içinde içine deoksiribonükleik asit (DNA) düzenleyici sıralarının soruşturma bu dizilere karmaşık bir fizyolojik ortamda faaliyet sağlar. Vitro çalışmalar transfected endotel hücrelerindeki DNA düzenleyici dizileri ilk değerlendirme için yararlı olabilir; çalışmalar tekrarlanan vivo içinde5,19,20olduğunda ancak, doku kültürü modelleri seviyelerinde ifade bazen çoğaltılabilir değil. Vitro sistemleri de kültürlü vasküler hücreler arasında protein sinyal ve endotel fizyolojisi hem de iletişim temel yolları keşfetmek için yararlı olabilir; Ancak, daha karmaşık yollar veya karmaşık nüfus komşu vasküler hücre veya bağışıklık sistemi tarafından etkilenmiştir düzenleyici ağları en iyi bir vivo içinde sistem6,20dakikaya okudu. Burada açıklanan yöntemi, düzenleme çerçevesinde endotel transgene ifadesinde veya hastalık olmadan sağlam bir geminin, keşfetmek için bir platform sağlar. Vivo sistem aynı zamanda fizyolojik ve patolojik hücresel crosstalk incelenmesi ve katkıları için düzenleme gen ifade6, bağışıklık sisteminin tanımlaması izin verir.
Mikrop-line transgenesis (özellikle farelerde) transgene ifade endotel hücrelere yönetmenlik için alternatif bir yaklaşımdır. Bu yaklaşım ömür boyu transgene ifade, endotel aracılı belirli organizatörü veya düzenleyici bölgeleri21,22tarafından hedeflemede sağlayabilir. Ancak, transgenik fareler zaman alıcı ve pahalı olduğunu, birkaç transgenik hattı kez istenilen hücre tipi ve başarı yeterli transgene ifade düzeylerinin ve deneysel transgene hedefleme emin olmak için test gerekir fare sistemleri sonuçlarında zorlanma bağımlı olabilir. Endotel hedefli transgenes ile fare transgenik modelleri pek çok avantajı var: cerrahi transgenesis elde etmek için her deneysel hayvan üzerinde gerçekleştirmek için gerek yoktur, deneysel fareler çok sayıda diğer kullanılabilir transgenik farelerde ile yetiştirilmiş genetik ve fenotipik etkileşimleri test etmek için sipariş ve fenotipleri karakterizasyonu kolaylaştırmak fare proteinler ile tepki antikorların geniş bir seçim. Ancak, genellikle transgenes germ hattı üzerinden endotel için hedefleme transgene ifade damarlara, hangi transgene ürün etkili olan siteyi belirlemek üzere22 boyunca sonuç. Transgene ürün salgılanan, damarlara boyunca endotel hücreleri tarafından salgılanan bir transgene ürün içerisindeki bir hayvan sitelerin her noktada biyolojik aktivitesi olabilir çünkü bu özellikle doğrudur. Bu el yazması anlatılan yöntem teknik uzmanlık ve özel İmkanlar gerektirir, ancak daha az zaman alıcı ve bir özel endotel transgenik fare çizgi geliştirme daha ucuz olabilir. Bu işlev, bir kesim büyük arterin endotel hücreleri seçerek bir proteinin değerlendirilmesi için sağlar ve kontralateral ortak karotis kullanımına (deneysel arasında değişebilir sistemik faktörleri ortadan eşleştirilmiş denetimi olarak izin verir hayvanlar-Örneğin, kan basıncı veya kolesterol düzeyleri-kontrolsüz değişkenler olarak).
Gen tedavisi damar hastalıklarının tedavisi için umut verici bir yaklaşımdır özellikle kronik hastalıklar, çünkü tek bir uygulama sürekli ya da büyük olasılıkla ömür boyu ifade bir tedavi gen23sağlayabilir. Gen tedavisi tedavi vaadi somatik gen transferi, sık sık kan yoluyla birçok viral vektörler hepatotropic çünkü nispeten kolay bir hedef olan karaciğer24,25, hedefleme hayvan modellerinde keşfedilmeyi. Ancak, damar hastalıkları üzerinde etkisi olduğu için karaciğere hedef gen tedavisi sistemik overexpression proteinlerin elde etmek gerekir. Bu genellikle büyük dozlarda toksik veya hatta ölümcül26olabilir vektör gerektirir. Ayrıca, sistemik protein zam hedef kapalı yan etkileri, karmaşık veya hatta deneysel sonuçlar yorumlanması karanlık riskini düzeyde arttı. Çünkü infüzyon vektör yaygın olarak transduced Arteryel segment Dissemine değil ve yerel vasküler etkileri olmadan elde edilebilir bu el yazması açıklandığı gibi vasküler endotel hedefleme yerel gen tedavisi sistemik yan etkileri önlemek olabilir Sistemik plazma düzeyleri protein değişimler. 27 vektör çok daha düşük bir miktarda Ayrıca, sağlam hepatik iletim ulaşmak için gerekenden bir Arteryel kesimini transduce gerekiyordu. Karaciğer ifadeden transgene üst düzey transgene ifade saklanması için ise tekrarlanan dozaj gerektiren büyük olasılıkla hücre ciro nedeniyle, zaman içinde azalmaya bildirilmiştir. 28 buna ek olarak, istikrarlı ifade en az 48 hafta chow beslenen tavşanların ve en az 24 hafta kolesterol beslenen tavşanların aterosklerotik lezyonları içinde endotel düşük devir hızı sağlar. 1 , 27
Bu yöntemi, gen transferi tavşan ortak Karotid endotel için uygun olup olmadığını belirlemek için özel araştırma hedefleri bağlamında avantajları ve dezavantajları (Tablo 1) dikkate alınmalıdır. Bu yöntemin avantajları şunlardır: outbred adatavşanı are insan genetik çeşitliliğin daha iyi temsilcisi daha doğuştan fareler (preklinik iş için önemli); Tavşan daha kolay manipülasyon için daha büyük gemiler ve daha fazla doku analizi için sağlar; yöntem endotel hedefli transgene ifade mikrop-line transgenik farelerde hedefleme endotel göründüğünden çok daha hızlı bir şekilde elde edebilirsiniz; vektör doz kolaylıkla modeli çeşitli düzeyleri transgene ifade için ayarlanabilir; büyük damar endotel için belirli işlemleri soruşturma olması; ve yerel vasküler transgenesis ters karotis aynı hayvan kontrolsüz değişkenler olarak sistemik faktörleri ortadan bir denetim olarak kullanılmak üzere izin verir. Dezavantajları şunlardır: Özel İmkanlar ve uzmanlık gereklidir; daha az genetiği değiştirilmiş arka plan hangi deneme tavşan farelerde kullanılabilir; ve tavşan fare proteinler (için immunodetection transgene protein ve deneysel sonuçlar yorumlama önemli olabilir diğer antijenleri) karşı antikorlar daha az kapsamlı bir seçki.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:888px;" width="887">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:359px;">Disposables</td>
			<td style="width:181px;"></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">3mL syringe with 24G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309571</td>
			<td style="width:199px;">2x for gene transfer surgery; 3x for harvest surgery</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">1mL syringe with 27G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309623</td>
			<td style="width:199px;">6x for gene transfer surgery; 1x for harvest surgery</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">20mL syringe, luer lock</td>
			<td>Nipro Medical Corp</td>
			<td>JD+20L</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Catheters, 24G x 3/4&#34;</td>
			<td>Terumo Medical Products</td>
			<td>SROX2419V</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">19G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305187</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">21G needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305165</td>
			<td style="width:199px;">For 20 mL syringe of saline</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Gauze 4&#34; x 4&#34;</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td style="width:149px;">3242</td>
			<td style="width:199px;">~10-15 per surgery</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">3-0 silk suture</td>
			<td>Covidien Ltd.</td>
			<td>S-244</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">5-0 silk suture</td>
			<td>Covidien Ltd.</td>
			<td>S-182</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">7-0 polypropylene suture</td>
			<td>CP Medical</td>
			<td>8648P</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">5-0 polyglycolic acid suture</td>
			<td>CP Medical</td>
			<td>421A</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">3-0 polyglycolic acid suture</td>
			<td>CP Medical</td>
			<td>398A</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Alcohol swabs</td>
			<td>Covidien Ltd.</td>
			<td>6818</td>
			<td style="width:199px;">For placement of I.V. line</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Catheter plug</td>
			<td>Vetoquinol</td>
			<td>411498</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Ketamine HCl, 100 mg/mL</td>
			<td>Vedco Inc.</td>
			<td>05098916106</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Xylazine, 100 mg/mL</td>
			<td>Akorn Inc.</td>
			<td>4821</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Lidocaine HCl, 2%</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>00409427702</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Bupivacaine HCl, 0.5%</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>00409161050</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Beuthanasia D-Special</td>
			<td>Intervet Inc.</td>
			<td>NDC 00061047305</td>
			<td style="width:199px;">Harvest surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Buprenorphine HCl, 0.3 mg/mL&#160;</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>12496075705</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:359px;">Saline IV bag, 0.9% sodium chloride</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>2B1309</td>
			<td style="width:199px;">2x for gene transfer surgery; can use vial of sterile saline in place of one</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Heparin&#160; (5000 U/mL)</td>
			<td>APP Pharmaceuticals</td>
			<td>NDC 63323-047-10</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Fentanyl patch, 25 mcg/hr&#160;</td>
			<td>Apotex Corp.</td>
			<td>NDC 60505-7006-2</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Isoflurane</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td style="width:149px;">Catalog number not available</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:359px;">Gene transfer vector</td>
			<td></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;">Dilute 350 &#181;L per artery; 2 x 1011 vp/mL for adenovirus; gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Surgical Instruments</td>
			<td></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Metzenbaum needle holder 7&#34; straight</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7900</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Operating scissors 6.5&#34; straight blunt/blunt</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-6828</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Needle holder /w suture scissors</td>
			<td>Miltex</td>
			<td style="width:149px;">8-14-IMC</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Castroviejo scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5658</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Castroviejo needle holder, 5.75&#34; straight with lock</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-6412</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Stevens scissors 4.25&#34; curved blunt/blunt</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-5943</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Alm retractor 4&#34; 4X4 5mm blunt prongs</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-6514</td>
			<td style="width:199px;">2x</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Backhaus towel clamp 3.5&#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;">4x</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Micro clip setting forceps 4.75&#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-6496</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Micro vascular clips, 11 mm</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;">2x for gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Surg-I-Loop</td>
			<td>Scanlan International</td>
			<td style="width:149px;">1001-81M</td>
			<td style="width:199px;">5 cm length</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Bonaccolto forceps, 4&#8221; (10 cm) long longitudinal serrations, cross serrated tip, 1.2mm tip width</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-5210</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Dumont #3 forceps Inox tip size .17 X .10mm</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-5042</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Graefe forceps, 4&#8221; (10 cm) long serrated straight, 0.8mm tip</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-5280</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Halstead mosquito forceps,&#160; 5&#34; straight, 1.3mm tips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7110</td>
			<td style="width:199px;">2x</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Halstead mosquito forceps,&#160; 5&#34; curved, 1.3mm tips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7111</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Jacobson mosquito forceps 5&#34; curved extra delicate, 0.9 mm tips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7117</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Kantrowitz forceps, 7.25&#34; 90 degree delicate, 1.7 mm tips</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-7305</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Tissue forceps 5&#34;, 1X2 teeth, 2 mm tip width</td>
			<td>Roboz</td>
			<td style="width:149px;">RS-8162</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Allis-Baby forceps, 12 cm, 4x5 teeth, 3 mm tip width</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:149px;">11092-12</td>
			<td style="width:199px;">2x</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Adson forceps, 12 cm, serrated, straight</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td style="width:149px;">11006-12</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Veterinary electrosurgery handpiece and electrode</td>
			<td>MACAN Manufacturing</td>
			<td style="width:149px;">HPAC-1; R-F11</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Surgical Suite Equipment</td>
			<td></td>
			<td style="width:149px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Circulating warm water blanket and pump</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td style="width:149px;">Catalog number not available</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Forced air warming unit</td>
			<td>3M</td>
			<td style="width:149px;">Bair Hugger Model 505</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">IV infusion pump</td>
			<td>Heska</td>
			<td style="width:149px;">Vet IV 2.2</td>
			<td style="width:199px;">Gene transfer surgery only</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:359px;">Isoflurane vaporizer and scavenger</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td style="width:149px;">Catalog number not available</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Veterinary multi-parameter monitor</td>
			<td>Surgivet</td>
			<td style="width:149px;">Surgivet Advisor</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Veterinary electrosurgery unit</td>
			<td>MACAN Manufacturing</td>
			<td style="width:149px;">MV-9</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:359px;">Surgical microscope</td>
			<td style="width:181px;">D.F. Vasconcellos</td>
			<td style="width:149px;">M900</td>
			<td style="width:199px;">Needs ~16x magnification</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo gene transfer to the rabbit common carotid artery endothelium

Bu yöntem bir transgene izole segmentlerinin her iki tavşan ortak Karotid arter endotel tanıtmak için hedeftir. Böylece bir dedektif endotel ifade transgenes biyolojik rolleri belirlemek ve DNA dizilerinin büyük arter içinde vivo transkripsiyon etkinliği ölçmek için izin veren odak seçici endotel transgenesis yöntemi elde endotel hücreleri. Bir transgene ifade viral vektör Arteryel lumen teslim için tavşan ortak Karotid arter ve bir arteriotomy cerrahi yalıtım yöntemini kullanır. Lümen vektörde kısa kuluçka süresi Lümen içindekiler sonraki aspirasyon ile tespit iletim veya ifade dışında endotel transgene verimli ve dayanıklı ifade ulaşmak için yeterli izole arter kesimi. Yöntemi biyolojik etkinlikler transgene ürünlerin değerlendirilmesi normal arterler ve modelleri insan damar hastalığının gen teslim (örn. diğer sitelere hedefleme tarafından kaynaklanmış olabilir sistemik etkileri kaçınırken sağlar karaciğer) veya genetik yapıları için endotel germ hattı transgenesis tarafından teslim alternatif bir yaklaşım. Uygulama yönteminin yetenekli bir cerrah ve anestezi, iyi donanımlı ameliyathane, satın alma ve konut tavşan maliyetlerinin ihtiyacını ve uzmanlık gen transferi vektör yapım ve kullanım için ihtiyaç ile sınırlıdır. Bu yöntem ile elde edilen sonuçlar içerir: transgene ile ilgili değişiklikler arter yapısı, cellularity, hücre dışı matriks veya vasomotor işlevi; artar veya damar iltihabı indirimleri; vasküler hücre apoptosis içinde değişiklikler; ve ilerleme, geriliği veya regresyon intimal Hiperplazi veya ateroskleroz gibi hastalıkların. Yöntemi aynı zamanda doğal ve sentetik DNA düzenleyici diziler transgene ifade içeren sonuçları sağlayan endotel hücrelerinde değiştirme olanağı ölçümü sağlar: transgene düzeyde mRNA, transgene protein düzeyleri ve düzeyleri transgene enzimatik aktivite.

Güven ile bu yöntemi uygulamak için ön deneyler işleci luminal endotel hücreleri ifadede öncelikle transgene ile verimli ve tekrarlanabilir gen transferi elde kurmak gereklidir. Deneyim, bu en kolay β-galaktozidaz ifade eder bir vektör kullanarak değerlendirilir. 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside (X-gal) ortak Karotid segmentlerinin boyama 3 gün sonra vektör infüzyon, hem de nicel ters transkripsiyon Polimeraz zincir ile β-galaktozidaz mRNA (mesajcı RNA) öl...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium at JoVE.com

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

Bu yöntem bir transgene tavşan Karotid arter endotel tanıtmak için hazırlanmıştır. Transgene getirilmesi transgene ürün normal damar veya hastalık modelleri biyolojik rolü değerlendirmesini sağlar. Yöntem düzenleyici DNA dizilerinin etkinliği ölçmek için yararlıdır.

Vivo Gen transferi için tavşan ortak Karotid arter endotel

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

Kısmi ligasyon Fare Karotis Arter Disturbed Akış Kaynaklı Ateroskleroz ve Karotis Endotel RNA İzolasyonu Basit Bir Yöntem Bir Model

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified ...

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

Ortak Bozuklukları de Novo Mutasyonlar, otizm ve şizofreni gibi tanımlayın Bir Strateji

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Training a Sophisticated Microsurgical Technique: Interposition of External Jugular Vein Graft in the Common Carotid Artery in Rats

Sıçanlarda Common Karotid Arter interpozisyon Harici Juguler Ven Greft: Gelişmiş Mikrocerrahi Tekniği Eğitimi

Neointimal hyperplasia is one the primary causes of stenosis in arterialized veins that are of great importance in arterial coronary bypass surgery, in ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

Odak Serebral İskemi Erken İskemik Tolerans tetikleyebilecek bir Yeterli Önkoşullama Uyarıcı olarak bilateral Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Restenoz Çalışmaları Karotis Arter Stent İmplantasyonu bir murin Modeli

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

Yetişkin Fare Venöz Hipertansiyon Modeli: Dış Boyun Ven Anastomoza Ortak Karotis Arter.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

Bir Roman<em&gt; In vivo</em&gt; Gen Transferi Tekniği ve<em&gt; In vitro</emİskelet Hastalıkları Kemik Kaybı Çalışmaları&gt; Hücre Tabanlı Tahliller

Differentiation and activation of osteoclasts play a key role in the development of musculoskeletal diseases as these cells are primarily involved in bone ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Farelerde Taksanlar Farmakokinetik ve Farmakodinamik Analiz Karotis Arter İnfüzyonlar

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Vascular Balloon Injury and Intraluminal Administration in Rat Carotid Artery

Sıçan Karotis Arter Vasküler Balon Yaralanma ve intraluminal İdaresi

The carotid artery balloon injury model in rats has been well established for over two decades. It remains an important method to study the molecular and ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Yaşlı Sıçanlarda Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı ile Kalıcı Distal Orta Serebral Sahne Kortikal İskemi Sürekli Engelli Eğitim için

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...