Name: mouse models of helicobacter infection and gastric pathologies
Uploaded: 2018-10-18T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies at JoVE.com

الكتاب يود أن يشكر السيدة أ دي Paoli والسيدة جورجي رأي-ماكان للمساعدة التقنية. الكتاب تقر استخدام التسهيلات والمساعدة التقنية من منصة موناش علم الأنسجة وقسم علم التشريح وعلم الأحياء التنموي، جامعة موناش. المختبر هو مدعومة بتمويل من "الوطنية للصحة" ومجلس البحوث الطبية (NHMRC) إلى RLF (APP1079930، APP1107930). ويدعم RLF "زمالة للبحث أقدم" من NHMRC (APP1079904). دينار كويتي ومولودية تدعمها سواء في "موناش الدراسات العليا المنح الدراسية". دينار كويتي أيضا معتمد من قبل المركز للحصانة الفطرية والأمراض المعدية، ومعهد هدسون للأبحاث الطبية، في حين MC "المنح الدراسية الدولية بعد التخرج" من كلية الطب والتمريض والعلوم الصحية، جامعة موناش. أبحاث في "معهد هدسون للأبحاث الطبية" معتمد من قبل "التنفيذية برنامج الحكومة الفيكتوري دعم البنية التحتية".

1-النمو وإعداد لقاح البكتيريا
<ol><li>ذوبان الجليد الأرصدة والغليسيرول H. pylori أو H. حطي15 -80 درجة مئوية وثقافة فرعية على الحصان أجار الدم (HBA) لوحات تضم: "أجار الدم قاعدة رقم 2" (انظر الجدول للمواد)؛ تعديل "الملحق سكيرو انتقائية المضادات الحيوية" (تتألف من فانكومايسي?...

<ol>
	<li>Goh, K. L., Chan, W. K., Shiota, S., Yamaoka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+Helicobacter+pylori+infection+and+public+health+implications.">Epidemiology of Helicobacter pylori infection and public health implications.</a> Helicobacter. 16, 1-9 (2011).</li><li>Montecucco, C., Rappuoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+dangerously:+how+Helicobacter+pylori+survives+in+the+human+stomach.">Living dangerously: how Helicobacter pylori survives in the human stomach.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2 (6), 457-466 (2001).</li><li>Akopyants, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyses+of+the+cag+pathogenicity+island+of+Helicobacter+pylori.">Analyses of the cag pathogenicity island of Helicobacter pylori.</a> Molecular Microbiology. 28 (1), 37-53 (1998).</li><li>Censini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cag,+a+pathogenicity+island+of+Helicobacter+pylori,+encodes+type+I-specific+and+disease-associated+virulence+factors.">cag, a pathogenicity island of Helicobacter pylori, encodes type I-specific and disease-associated virulence factors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (25), 14648-14653 (1996).</li><li>Peek, R. M., Fiske, C., Wilson, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+innate+immunity+in+Helicobacter+pylori-induced+gastric+malignancy.">Role of innate immunity in Helicobacter pylori-induced gastric malignancy.</a> Physiological Reviews. 90 (3), 831-858 (2010).</li><li>O'Rourke, J. L., Lee, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+Helicobacter+pylori+infection+and+disease.">Animal models of Helicobacter pylori infection and disease.</a> Microbes and Infection. 5 (8), 741-748 (2003).</li><li>Sakagami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atrophic+gastric+changes+in+both+Helicobacter+felis+and+Helicobacter+pylori+infected+mice+are+host+dependent+and+separate+from+antral+gastritis.">Atrophic gastric changes in both Helicobacter felis and Helicobacter pylori infected mice are host dependent and separate from antral gastritis.</a> Gut. 39 (5), 639-648 (1996).</li><li>Correa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+pylori+and+gastric+carcinogenesis.">Helicobacter pylori and gastric carcinogenesis.</a> The American Journal of Surgical Pathology. 19, S37-S43 (1995).</li><li>Enno, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MALToma-like+lesions+in+the+murine+gastric+mucosa+after+long-term+infection+with+Helicobacter+felis.+A+mouse+model+of+Helicobacter+pylori-induced+gastric+lymphoma.">MALToma-like lesions in the murine gastric mucosa after long-term infection with Helicobacter felis. A mouse model of Helicobacter pylori-induced gastric lymphoma.</a> The American Journal of Pathology. 147 (1), 217-222 (1995).</li><li>Lee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+standardized+mouse+model+of+Helicobacter+pylori+infection:+introducing+the+Sydney+strain.">A standardized mouse model of Helicobacter pylori infection: introducing the Sydney strain.</a> Gastroenterology. 112 (4), 1386-1397 (1997).</li><li>Crabtree, J. E., Ferrero, R. L., Kusters, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+colonizing+Helicobacter+pylori+strain+SS1+may+lack+a+functional+cag+pathogenicity+island.">The mouse colonizing Helicobacter pylori strain SS1 may lack a functional cag pathogenicity island.</a> Helicobacter. 7 (2), 139-140 (2002).</li><li>Israel, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+pylori+strain-specific+differences+in+genetic+content,+identified+by+microarray,+influence+host+inflammatory+responses.">Helicobacter pylori strain-specific differences in genetic content, identified by microarray, influence host inflammatory responses.</a> Journal of Clinical Investigation. 107 (5), 611-620 (2001).</li><li>Fox, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+pylori-induced+gastritis+in+the+domestic+cat.">Helicobacter pylori-induced gastritis in the domestic cat.</a> Infection and Immunity. 63 (7), 2674-2681 (1995).</li><li>Lee, A., Hazell, S. L., O'Rourke, J., Kouprach, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+spiral-shaped+bacterium+from+the+cat+stomach.">Isolation of a spiral-shaped bacterium from the cat stomach.</a> Infection and Immunity. 56 (11), 2843-2850 (1988).</li><li>Ferrero, R. L., Wilson, J. E., Sutton, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+Helicobacter-induced+gastric+cancer:+use+of+cocarcinogens.">Mouse models of Helicobacter-induced gastric cancer: use of cocarcinogens.</a> Methods in Molecular Biology. 921, 157-173 (2012).</li><li>Ferrero, R. L., Thiberge, J. M., Huerre, M., Labigne, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+responses+of+specific-pathogen-free+mice+to+chronic+Helicobacter+pylori+(strain+SS1)+infection.">Immune responses of specific-pathogen-free mice to chronic Helicobacter pylori (strain SS1) infection.</a> Infection and Immunity. 66 (4), 1349-1355 (1998).</li><li>Blanchard, T. G., Nedrud, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+maintenance+of+Helicobacter+species.">Laboratory maintenance of Helicobacter species.</a> Current Protocols in Microbiology. , (2012).</li><li>Kim, J. S., Chang, J. H., Chung, S. I., Yum, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+the+host+genetic+background+on+immune+responses+to+Helicobacter+pylori+infection+and+therapeutic+vaccine+efficacy.">Importance of the host genetic background on immune responses to Helicobacter pylori infection and therapeutic vaccine efficacy.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 31 (1), 41-46 (2001).</li><li>Nedrud, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+genetic+influence+on+the+innate+inflammatory+response+to+helicobacter+infection+of+the+gastric+mucosa.">Lack of genetic influence on the innate inflammatory response to helicobacter infection of the gastric mucosa.</a> Frontiers in Immunology. 3, 181 (2012).</li><li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+felis+eradication+restores+normal+architecture+and+inhibits+gastric+cancer+progression+in+C57BL/6+mice.">Helicobacter felis eradication restores normal architecture and inhibits gastric cancer progression in C57BL/6 mice.</a> Gastroenterology. 128 (7), 1937-1952 (2005).</li><li>Ferrero, R. L., Labigne, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning,+expression+and+sequencing+of+Helicobacter+felis+urease+genes.">Cloning, expression and sequencing of Helicobacter felis urease genes.</a> Molecular Microbiology. 9 (2), 323-333 (1993).</li><li>Stevenson, T. H., Castillo, A., Lucia, L. M., Acuff, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+Helicobacter+pylori+in+various+liquid+and+plating+media.">Growth of Helicobacter pylori in various liquid and plating media.</a> Letters in Applied Microbiology. 30 (3), 192-196 (2000).</li><li>Uotani, T., Graham, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+Helicobacter+pylori+using+the+rapid+urease+test.">Diagnosis of Helicobacter pylori using the rapid urease test.</a> Annals of Translational Medicine. 3 (1), 9 (2015).</li><li>Riley, L. K., Franklin, C. L., Hook, R. R., Besch-Williford, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+murine+helicobacters+by+PCR+and+restriction+enzyme+analyses.">Identification of murine helicobacters by PCR and restriction enzyme analyses.</a> Journal of Clinical Microbiology. 34 (4), 942-946 (1996).</li><li>Chaouche-Drider, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+commensal+Helicobacter+sp.+of+the+rodent+intestinal+flora+activates+TLR2+and+NOD1+responses+in+epithelial+cells.">A commensal Helicobacter sp. of the rodent intestinal flora activates TLR2 and NOD1 responses in epithelial cells.</a> PLoS One. 4 (4), e5396 (2009).</li><li>Fox, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+bilis:+bacterial+provocateur+orchestrates+host+immune+responses+to+commensal+flora+in+a+model+of+inflammatory+bowel+disease.">Helicobacter bilis: bacterial provocateur orchestrates host immune responses to commensal flora in a model of inflammatory bowel disease.</a> Gut. 56 (7), 898-900 (2007).</li><li>McGee, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholesterol+enhances+Helicobacter+pylori+resistance+to+antibiotics+and+LL-37.">Cholesterol enhances Helicobacter pylori resistance to antibiotics and LL-37.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (6), 2897-2904 (2011).</li><li>Viala, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nod1+responds+to+peptidoglycan+delivered+by+the+Helicobacter+pylori+cag+pathogenicity+island.">Nod1 responds to peptidoglycan delivered by the Helicobacter pylori cag pathogenicity island.</a> Nature Immunology. 5 (11), 1166-1174 (2004).</li><li>Kong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+and+specific+PCR+method+to+detect+Helicobacter+felis+in+a+conventional+mouse+model.">A sensitive and specific PCR method to detect Helicobacter felis in a conventional mouse model.</a> Clinical and Vaccine Immunology. 3 (1), 73-78 (1996).</li><li>Ng, G., Every, A., McGuckin, M., Sutton, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Helicobacter+felis+colonization+in+male+129/Sv+mice+fails+to+suppress+gastritis.">Increased Helicobacter felis colonization in male 129/Sv mice fails to suppress gastritis.</a> Gut Microbes. 2 (6), 358-360 (2011).</li><li>Ferrero, R. L., Ave, P., Radcliff, F. J., Labigne, A., Huerre, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outbred+mice+with+long-term+Helicobacter+felis+infection+develop+both+gastric+lymphoid+tissue+and+glandular+hyperplastic+lesions.">Outbred mice with long-term Helicobacter felis infection develop both gastric lymphoid tissue and glandular hyperplastic lesions.</a> The Journal of Pathology. 191 (3), 333-340 (2000).</li></ol>

ويصف هذا البروتوكول استخدام طراز الماوس في فيفو لعدوى الملوية . الخطوات الحاسمة من الإجراءات: 1) إعداد لقاح الملوية التي تحتوي على البكتيريا قادرة على البقاء ومتحركة؛ 2) تسليم الأرقام المناسبة للبكتيريا للماوس عبر إجراء تزقيمية مدتها؛ 3) الكشف عن العدوى البكتيرية بالعد مستعم...

الملوية البوابية ممرض المعدة على شكل دوامة، سلبية الغرام، والبشرية موجودة في جميع السكان عبر العالم، مع معدلات الإصابة في البلدان النامية وتقدر بحدود 80%1. على الرغم من أن معظم H. pylori-الأفراد المصابين بأعراض، ووضع بعض أشد الأمراض، بدءاً من تقرح الهضمية بسرطان المعدة2. H. pylori-تتميز السرطانات المرتبطة بها على نطاق واسع بتغييرات خبيثة في الخلايا الظهارية (جيكس) أو بتشكيل العقدي خارج الأنسجة اللمفاوية في المعدة، ونتج عنه غدية المعدة أو المرتبطة بالغشاء المخاطي الليمفاوي سرطان الغدد الليمفاوية الأنسجة (الشعير)، على التوالي. H. pylori هو تكييف عالية البقاء على قيد الحياة في مكانة الإيكولوجية القاسية في المعدة بسبب وجود عدة عوامل الفوعة واليات تيسير الانضمام، والنمو والايض في مكانة هذا. على وجه الخصوص، تمتلك خبثاً سلالات H. pylori كيلو بايت 40 كاج الجزيرة الإمراضية (cagPAI) الذي يشفر حوالي 30 الجينات المطلوبة للإنتاج من نوع 4 إفراز نظام (T4SS)3،4 . المساعدة النقدية PAI-إيجابية سلالات H. pylori المرتبطة بتنظيم دورات تعريفية لمستويات أعلى من التهاب مزمن في البلد المضيف، والذي كان متورطا باعتبارها مؤشرا أساسيا للمعدة غدية5.
وكانت في فيفو نماذج حيوانية، لا سيما من الفئران، الزاخر بالسماح للباحثين بالتحقيق في المساهمة النسبية للمضيف، والعوامل الجرثومية والبيئية على H. pylori العدوى والمرض نتيجة6. سبق وقد أثبتت الدراسات أن تطول H. pylori عدوى فئران على نتائج الخلفية الوراثية C57BL/6 في تطوير التهاب المعدة المزمن وغده ضمور، كلا من السمات المميزة ل عدوى H. pylori 7. وعلاوة على ذلك، قد تبين الإصابة بالأنواع البكتيرية القطط/الكلاب ذات الصلة، حطي حاء، للحث على تشكيل الشعير في الفئران مع أمراض مماثلة وتطور المرض كما رأينا في لمفوما مالت البشرية8،9. H. pylori الأكثر استخداماً هو عزل في دراسات الاستعمار الماوس "سيدني سلالة 1" (SS1) سلالة10الذي كاجالباي+ ولكن من T4SS غير وظيفية (T4SS−)11. السلالات الأخرى المستخدمة على نطاق واسع تشمل H. pylori B128 7.13 (كاجالباي+/T4SS+)12 و X47-2AL (cagPAI–/T4SS−)13. للالتهابات حطي حاء ، سلالة CS1 ("القط دوامة 1"، كاجالباي–/T4SS−) هو عموما يستخدم14.
وهنا، نحن نقدم بروتوكول وصف إعداد لقاح الملوية للعدوى في الجسم الحي ، والإجراءات المتعلقة بإجراء تزقيمية الفئران، فضلا عن أساليب لمعالجة الأنسجة لدراسة التغيرات التشريحية المرضية في المعدة. على وجه الخصوص، هذه المادة سوف تركز على غذائها الأساليب المستخدمة لتصور الاستعمار الجرثومي وتقييم التغيرات التشريحية المرضية، بما في ذلك تشكيل الشعير، وفي الغشاء المخاطي المعدة من الفئران المصابة. قد تكون بعض الأساليب الموصوفة هنا تتكيف مع دراسة أخرى مسببات أمراض الأمعاء مثل س. تيفيموريوم أو C. رودينتيوم.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bacteriological reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxoid Blood Agar Base No.2</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>CM0271B</td>
			<td>Dissolve in deinonized water prior to sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Premium Defibrinated Horse blood</td>
			<td>Australian Ethical Biologicals</td>
			<td>PDHB100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Brain Heart Infusion Broth</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>237500</td>
			<td>Dissolve in deinonized water prior to sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CampyGen gas packs</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>CN0035A/CN0025A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histological reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute alcohol, 100% Denatured</td>
			<td>ChemSupply</td>
			<td>AL048-20L-P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol (2-propanol)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>100995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene (sulphur free)</td>
			<td>ChemSupply</td>
			<td>XT003-20L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Haematoxylin</td>
			<td>Amber Scientific</td>
			<td>&#160;MH-1L</td>
			<td>Filter before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin, Aqueous Stain</td>
			<td>Amber Scientific</td>
			<td>EOCA-1L</td>
			<td>Filter before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wright-Giemsa Stain, modified</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>WG80-2.5L</td>
			<td>Dilute before use (20% Giemsa, 80% deionized water)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histolene</td>
			<td>Grale Scientific</td>
			<td>11031/5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mounting medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>1.00579.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular biology reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qubit dsDNA BR Assay Kit</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>Q32850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligonucleotides</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>The annealing temperature of ureB primers used in this study is 61&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GoTaq Flexi DNA Polymerase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>&#160;M8291</td>
			<td>Kit includes 10X PCR buffer and Magnesium Chloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTPs</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-39028</td>
			<td>Dilute to 10mM in sterile nuclease free water before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Grade Agarose</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-41025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydrogen Carbonate</td>
			<td>Univar (Ajax Fine Chemicals)</td>
			<td>A475-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulphate Heptahydrate</td>
			<td>Chem-Supply</td>
			<td>MA048-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotics</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vancomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>V2002-1G</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polymyxin B</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P4932-5MU</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimethoprim (&#8805;98% HPLC)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T7883</td>
			<td>Dissolve in 100% (absolute) Ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin</td>
			<td>Amresco (Astral Scientific)</td>
			<td>E437-100MG</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacitracin from Bacillus licheniformis</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B0125</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naladixic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>N8878</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methoxyflurane (Pentrhox)</td>
			<td>Medical Developments International</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Wax</td>
			<td>Paraplast Plus, Leica Biosystems</td>
			<td>39601006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment and plasticware</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxoid Anaerobic Jars</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>HP0011/HP0031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>COPAN Pasteur Pipettes</td>
			<td>Interpath Services</td>
			<td>200CS01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf 5810R centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Collect bacterial pellets by centrifugation at 2,200 rpm for 10 mins at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23g precision glide needle</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>301805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Bemis, VWR</td>
			<td>PM996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portex fine bore polythene tubing</td>
			<td>Smiths Medical</td>
			<td>800/100/200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic feeding catheters</td>
			<td>Instech&#160; Laboratories</td>
			<td>FTP20-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml tuberculin luer slip disposable syringes</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>302100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf micropestle for 1.2 - 2 mL tubes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z317314</td>
			<td>Autoclavable polypropylene pestles used for stomach homogenization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACs Dissociator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td>Use a pre-set gentleMACS Programs for mouse stomach tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M Tubes (orange cap)</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>30-093-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Qubit Fluorometer</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>Q33216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile plastic loop</td>
			<td>LabServ</td>
			<td>LBSLP7202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold Plate, Leica EG1160 Embedding System</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Base Mould System, Base Mold 38 x 25 x 6</td>
			<td>Sakura, Alphen aan den Rijn</td>
			<td>4124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek III Uni-Casette System</td>
			<td>Sakura, Alphen aan den Rijn</td>
			<td>4170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome, Leica RM2235</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged SuperFrost Plus glass slides</td>
			<td>Menzel Glaser, Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>4951PLUS4</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse models of helicobacter infection and gastric pathologies

الملوية البوابية هو ممرض المعدة في نصف سكان العالم وهو سببا هاما للمراضة والوفيات لدى البشر. تم تطوير عدة نماذج الماوس المعدة الملوية العدوى دراسة الآليات الجزيئية والخلوية حيث H. pylori البكتيريا استعمار معدّة المضيفين الإنسان وتسبب المرض. هنا، يمكننا وصف البروتوكولات إلى: 1) تعد المعلقات البكتيرية للعدوى في فيفو من الفئران عن طريق إجراء تزقيمية مدتها؛ 2) تحديد مستويات الاستعمار الجرثومي في أنسجة المعدة الماوس، بتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) والعد قابلة للتطبيق؛ و 3) تقييم التغيرات المرضية، بعلم الأنسجة. لإنشاء هيليكوباكتer العدوى في الفئران، أولاً هي تلقيح الحيوانات (منتدى جنوب المحيط الهادئ) خالية من مسببات الأمراض خاصة مع تعليق (التي تحتوي على إيه وان زيرو5 الوحدات المكونة للمستعمرة، كفوس) من سلالات استعمار الماوس أما الملوية البوابية أو أخرى spp. الملوية المعدة من الحيوانات، مثل حطي الملوية. في العدوى بعد النقاط الزمنية المناسبة، اقتطعت بطون وتشريح ساجيتالي إلى أجزاء متساوية الأنسجة اثنين، كل منها يتألف من مناطق الجسم والتجويف. واحدة من هذه الشظايا ثم يستخدم للعد قابلة للتطبيق أو استخراج الحمض النووي، بينما الآخر يخضع لتجهيز غذائها. يمكن تقييم الاستعمار الجرثومي وتغييرات نسيجية في المعدة بشكل روتيني في أقسام الأنسجة المعدة ملطخة ببقع (H & E) النجوم Warthin، جيمسى أو هايماتوكسيلين وويوزين، حسب الاقتضاء. التحاليل المناعية إضافية قد تضطلع أيضا إيمونوهيستوتشيميستري أو الفلورة على أبواب أنسجة المعدة الماوس. البروتوكولات المبينة أدناه مصممة خصيصا لتمكين تقييم أمراض المعدة تشبه تلك التي تتعلق بالإنسان H. pylori في الفئران الأمراض، بما في ذلك التهاب وضمور الغدة وتشكيل جريب اللمفاوية. إعداد العدوى والبروتوكولات تزقيمية إجراء يمكن تكييفها لدراسة أمراض أخرى تصيب الإنسان المعوية أن استعمار الفئران، مثل Typhimurium السالمونيلا أو رودينتيوم المضاداتأيضا.

ويصف هذا البروتوكول أسلوب تزقيمية شفوي لتحقيق إجراء عدوى H. pylori أو H. حطي في نماذج الماوس مورين (الشكل 1). في أعقاب القتل الرحيم، يتم إزالة بطون، ووزنه ومقسمة إلى نصفين تساوي 2 تتألف من التجويف والجسم ومناطق غير غدي من أنسجة المعدة (الشكل 2). تتم إزالة ا...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies at JoVE.com

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

نماذج الماوس الملوية العدوى وأمراض المعدة

الفئران تمثل نموذجا لا تقدر بثمن في فيفو لدراسة العدوى والأمراض التي تسببها الكائنات الدقيقة المعدية المعوية. هنا، يمكننا وصف الطرق المستخدمة لدراسة الاستعمار الجرثومي وتغييرات نسيجية في نماذج الماوس الملوية البوابية-المتعلقة بالمرض.

Helicobacter pylori is a gastric pathogen that is present in half of the global population and is a significant cause of morbidity and mortality in ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أمراض الجهاز الهضمي حول تأثير أعضاء الميكروبات ، وتحديدًا تلك التي من جنس Helicobacter ، على الالتهاب والسرطان. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بدراسة عدوى Helicobacter وتأثيرها على المعدة في ظل الظروف الفسيولوجية. تمتد آثار هذه التقنية نحو تطوير العلاجات للوقاية من أو القضاء على عدوى Helicobacter أو عواقبها ، بما في ذلك المضادات الحيوية أو الأدوية أو اللقاحات.توفر هذه الطرق رؤية خاصة بـ pathogenesis من عدوى Helicobacter. ومع ذلك، قد يتم تكييف العديد من التقنيات لدراسة مسببات الأمراض المعدية المعوية الأخرى. عموما، سوف الأفراد الجدد لهذه الطريقة النضال مع إعداد inoculum البكتيرية قادرة على إنشاء عدوى في الفئران.ومن الضروري أن عزل Helicobacter معروفة سلالات الفأر الاستعمار التي لم تشهد ثقافة فرعية واسعة في المختبر. وبالإضافة إلى ذلك، ينبغي تسجيل عدد الثقافات الفرعية في المختبر لهذه السلالات. إضافة التعليقات البكتيرية إلى أنابيب البوليسترين 15 ملليلتر، واستخدام حلقة بلاستيكية لنقل واحد 10-20 ميكرولتر قطرات من كل ثقافة على شرائح المجهر الزجاج الفردية.ثم، تقييم صلاحية وحركية البكتيريا تحت المجهر على النقيض من المرحلة في التكبير 100 مرة. فقط استخدام inocula H.pylori إذا كانت غالبية البكتيريا لها شكل bacillary. H.felis inocula ينبغي أن تحتوي في المقام الأول على البكتيريا على شكل helical.و تحميل الحقنة في حقن فردية يمكن التخلص منها و مليلتر واحد تجهيز كل حقنة مع إبرة قياس 23، واستخدام فيلم البارافين البلاستيك لإرفاق قسطرة البولي إيثيلين المتاح لكل إبرة. بعد ذلك ، قم يدويًا بتقييد فأر محدد من العمر من ستة إلى ثمانية أسابيع خالي من مسببات الأمراض والخالية من Helicobacter من قِبل scruff من الرقبة والذيل ، وأدخل قسطرة واحدة في مركز الفك المفتوح.توجيه القسطرة في المريء نحو المريء، وتمديد عنق الماوس للسماح بسهولة الوصول إلى المعدة من خلال المريء وبعيدا عن القصبة الهوائية حتى معظم أو كل من القسطرة لم يعد مرئيا وشعروا المقاومة. ثم، تسليم ما لا يقل عن واحد مرات 10 إلى البكتيريا الخامسة لضمان الاستعمار الأمثل وأمراض الأمراض. في نهاية التجربة ، استخدم مقصًا ناعمًا ومنحنيًا لفتح تجويف البطن لختان المعدة.قطع المعدة على طول انحناء أكبر، وغسل بلطف الجهاز مرتين في أنبوب واحد 50 ملليلتر من برنامج تلفزيوني الطازجة في غسل لإزالة أي طعام المتبقية. بعد الغسيل الثاني، ضع الأنسجة في طبق بيتري من البلاستيك، طوله ستة سنتيمترات، لتسجيل الوزن الرطب. بعد تسطيح المعدة، قسم العينة القوس إلى اثنين من شظايا الأنسجة متساوية تتألف من المناطق antrum، والجسم، وغير غدي forestomach.إزالة المنطقة غير غدية، وتزن نصف كل معدة قبل تخزين قطعة من الأنسجة في الحل المناسب للتحليل المصب المخطط لها. إضافة النصف الآخر من أنسجة المعدة إلى أنبوب مخروطي 15 ملليلتر يحتوي على 10٪ formalin، تسطيح الأنسجة ضد الجانبين العلويين من الأنابيب بعد 10 ثوان. عندما أصبحت الأنسجة الملصقة على جدران أنبوب، إعادة غمر العينات في formalin لمدة 24 ساعة على الأقل.لحساب عدد من H.pylori قابلة للحياة في المعدة بعد العدوى، التجانس عينات المعدة المخزنة في BHI، وتنفيذ عمليات تخفيف المسلسل مكررة من تجانس المعدة الناتجة في مرق الطازجة، العقيمة. تقسيم قبل المجففة حصان الدم أجار، أو HBA، لوحات تستكمل مع المضادات الحيوية إضافية إلى ثلاثة أو أربعة أجزاء، وباستخدام التكيف من تقنية مايلز ومصرا، إضافة 10 إلى 100 ميكرولترات من كل تخفيف التجانس المعدة على جزء من كل لوحة أجار. انتشار تجانس مع الحلقات العقيمة والبلاستيك، والسماح للألواح لتجف.ثم، ضع اللوحات في وضع مقلوب في جرار غاز anaerobe تحتوي على طبق بيتري من الماء وحزمة غاز. ثم، احتضان الجرار في 37 درجة مئوية لمدة أربعة إلى سبعة أيام. عندما يمكن ملاحظة المستعمرات، عدّد الأجزاء التي تحتوي على ما بين 10 و 100 مستعمرة معزولة.بعد القتل الرحيم ، يتم حصاد المعدة من الحيوانات ووزنها. تتم إزالة المنطقة غير غدية، وينقسم المعدة إلى نصفين متساويين تتألف من antrum والجسم. وعادة ما يتم تأكيد الاستعمار الناجح من خلال إجراء العد القابل للتطبيق والتعداد اللاحق للمستعمرات الفردية من تجانس المعدة المتجانسة على لوحات HBA.لاحظ أن وجود البكتيريا الملوثة من ميكروبيوتا المعدة الماوس أو أعداد كبيرة من مستعمرات H.pylori يمكن أن تعقد تعداد CFUs H.pylori. وبدلاً من ذلك، يمكن استخدام البوليميراز المتعدد الكلور للتحقق من العدوى باستخدام اُبُر محددة مُثبتة صحة موجهة إلى منطقة زوج من 325 قاعدة من جينات H.felis وH.pylori ureB. في هذه التجربة التمثيلية، أظهرت الفئران من النوع البري C57 Black-6 علامات معتدلة للالتهاب، بما في ذلك تضخم التنسج وضمور الغدة في ستة أشهر بعد العدوى مع H.felis، بالإضافة إلى التسلل الخلوي للخلود الفرعي.ويلاحظ التهاب أكثر حدة في الفئران خروج المغلوب في نفس الوقت نقطة, مع وجود إضافية من بصيلات اللمفاوية لوحظت على مقربة من تسلل الخلوية. يمكن أيضًا تصور بكتيريا H.felis في أقسام ملطّخة بـ Giemsa من أنسجة معدة الماوس المصابة. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل PCR الكمي، الكيمياء المناعية، أو المناعة للإجابة على أسئلة إضافية حول أنواع الاستجابات المضيفة الناجمة أثناء عدوى Helicobacter.بعد تطورها، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال علم الأحياء الدقيقة والجهاز الهضمي لاستكشاف الدور المسبب لهيليكوباكتر بيلوري في أمراض المعدة في البشر. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إصابة الفئران بشكل متكاثر مع أنواع Helicobacter ودراسة الأمراض المرتبطة بالعدوى. لا ننسى أن سلالات Helicobacter المستخدمة في هذا البروتوكول المعدية، وبالتالي ينبغي اتباع إجراءات السلامة الحيوية القياسية دائما أثناء العمل مع هذه البكتيريا.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

عبر الاحليل تحريض العدوى ماوس المسالك البولية

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

تشخيص وEndoparasites Ecto في الجرذان والفئران المعملية

Internal and external parasites remain a significant concern in laboratory rodent facilities, and many research facilities harbor some parasitized ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

إدارة الأنف المؤتلف لقاحات الأنفلونزا في همي ماوس نماذج لدراسة الأغشية المخاطية الحصانة

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...

Organoids as Model for Infectious Diseases: Culture of Human and Murine Stomach Organoids and Microinjection of Helicobacter Pylori

Organoids كنموذج للأمراض المعدية: ثقافة الإنسان وOrganoids المعدة الفئران وهيليكوباكتر بيلوري Microinjection من

Recently infection biologists have employed stem cell derived cultures to answer the need for new and better models to study host-pathogen interactions. ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

الإدارة داخل القصبة الهوائية لل<em&gt; المستدمية النزلية</em&gt; في نماذج الماوس لدراسة التهاب الشعب الهوائية

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

واحد خطوة السلبية الكروماتوغرافي تنقية<em&gt; هيليكوباكتر بيلوري</em&gt; بروتين العدلات، تفعيل Overexpressed في<em&gt; كولاي</em&gt; في دفعة واسطة

Helicobacter pylori neutrophil-activating protein (HP-NAP) is a major virulence factor of Helicobacter pylori (H. pylori). It plays a critical role in H. ...

Mouse- and Human-derived Primary Gastric Epithelial Monolayer Culture for the Study of Regeneration

الفأر والإنسان-المستمدة من الثقافة أساسي أحادي الطبقة الظهارية المعدة لدراسة تجديد

In vitro studies of gastric wound repair typically involves the use of gastric cancer cell lines in a scratch-wound assay of cellular proliferation and ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

داخل الجمجمة سوباراتشنويدال الطريق للعدوى "أدوار التحقيق" للأغشية الحيوية العقدية الخنزيرية في التهاب السحايا في "نموذج العدوى الماوس"

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

CRISPR-Cas9-based Genome Engineering to Generate Jurkat Reporter Models for HIV-1 Infection with Selected Proviral Integration Sites

هندسة الجينوم كريسبر-Cas9-تعتمد لتوليد نماذج مراسل جوركات للإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية-1 مع مواقع مختارة من التكامل بروفيرال

Human immunodeficiency virus (HIV) integrates its proviral DNA non-randomly into the host cell genome at recurrent sites and genomic hotspots. Here we ...

Chronic, Acute, and Reactivated HIV Infection in Humanized Immunodeficient Mouse Models

عدوي فيروس نقص المناعة المزمنة والحاده والمعاد تنشيطها في نماذج الماوس المناعية الانسانيه

Humanized NOD/SCID/IL-2 receptor &#947;-chainnull mice recapitulate some features of human immunity, which can be exploited in basic and pre-clinical ...