Name: mouse models of helicobacter infection and gastric pathologies
Uploaded: 2018-10-18T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить г-жа A. де Паоли и г-жа Джорджи Рей-McCann для оказания технической помощи. Авторы признают, что использование средств и технической помощи Монаш гистология платформы, кафедра анатомии и биологии развития, Университет Монаш. Лаборатория поддерживает финансирование от национального здравоохранения и медицинских исследований Совета (NHMRC) RLF (APP1079930, APP1107930). RLF поддерживается старший стипендия исследований NHMRC (APP1079904). KD и MC поддерживаются в Монаш выпускник стипендии. KD также поддерживается центром врожденного иммунитета и инфекционные заболевания, Гудзоновский институт медицинских исследований, в то время как MC имеет международной аспирантов стипендии от факультета медицины, медсестер и медицинских наук, Университет Монаш. Исследования в Институте медицинских исследований Хадсон поддерживается викторианской правительство оперативной инфраструктуры поддержки программы.

1. рост и подготовка бактериальный инокуляты
<ol><li>Оттепель запасы глицерина15 Helicobacter pylori или H. felisот-80 ° C и субкультуры на лошади пластины крови агар (HBA) состоит из: кровь агар основания №2 (см. Таблицу материалы); изменение «Скирроу антибиотик селективного...

<ol>
	<li>Goh, K. L., Chan, W. K., Shiota, S., Yamaoka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+Helicobacter+pylori+infection+and+public+health+implications.">Epidemiology of Helicobacter pylori infection and public health implications.</a> Helicobacter. 16, 1-9 (2011).</li><li>Montecucco, C., Rappuoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+dangerously:+how+Helicobacter+pylori+survives+in+the+human+stomach.">Living dangerously: how Helicobacter pylori survives in the human stomach.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2 (6), 457-466 (2001).</li><li>Akopyants, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyses+of+the+cag+pathogenicity+island+of+Helicobacter+pylori.">Analyses of the cag pathogenicity island of Helicobacter pylori.</a> Molecular Microbiology. 28 (1), 37-53 (1998).</li><li>Censini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cag,+a+pathogenicity+island+of+Helicobacter+pylori,+encodes+type+I-specific+and+disease-associated+virulence+factors.">cag, a pathogenicity island of Helicobacter pylori, encodes type I-specific and disease-associated virulence factors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (25), 14648-14653 (1996).</li><li>Peek, R. M., Fiske, C., Wilson, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+innate+immunity+in+Helicobacter+pylori-induced+gastric+malignancy.">Role of innate immunity in Helicobacter pylori-induced gastric malignancy.</a> Physiological Reviews. 90 (3), 831-858 (2010).</li><li>O'Rourke, J. L., Lee, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+Helicobacter+pylori+infection+and+disease.">Animal models of Helicobacter pylori infection and disease.</a> Microbes and Infection. 5 (8), 741-748 (2003).</li><li>Sakagami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atrophic+gastric+changes+in+both+Helicobacter+felis+and+Helicobacter+pylori+infected+mice+are+host+dependent+and+separate+from+antral+gastritis.">Atrophic gastric changes in both Helicobacter felis and Helicobacter pylori infected mice are host dependent and separate from antral gastritis.</a> Gut. 39 (5), 639-648 (1996).</li><li>Correa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+pylori+and+gastric+carcinogenesis.">Helicobacter pylori and gastric carcinogenesis.</a> The American Journal of Surgical Pathology. 19, S37-S43 (1995).</li><li>Enno, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MALToma-like+lesions+in+the+murine+gastric+mucosa+after+long-term+infection+with+Helicobacter+felis.+A+mouse+model+of+Helicobacter+pylori-induced+gastric+lymphoma.">MALToma-like lesions in the murine gastric mucosa after long-term infection with Helicobacter felis. A mouse model of Helicobacter pylori-induced gastric lymphoma.</a> The American Journal of Pathology. 147 (1), 217-222 (1995).</li><li>Lee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+standardized+mouse+model+of+Helicobacter+pylori+infection:+introducing+the+Sydney+strain.">A standardized mouse model of Helicobacter pylori infection: introducing the Sydney strain.</a> Gastroenterology. 112 (4), 1386-1397 (1997).</li><li>Crabtree, J. E., Ferrero, R. L., Kusters, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+colonizing+Helicobacter+pylori+strain+SS1+may+lack+a+functional+cag+pathogenicity+island.">The mouse colonizing Helicobacter pylori strain SS1 may lack a functional cag pathogenicity island.</a> Helicobacter. 7 (2), 139-140 (2002).</li><li>Israel, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+pylori+strain-specific+differences+in+genetic+content,+identified+by+microarray,+influence+host+inflammatory+responses.">Helicobacter pylori strain-specific differences in genetic content, identified by microarray, influence host inflammatory responses.</a> Journal of Clinical Investigation. 107 (5), 611-620 (2001).</li><li>Fox, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+pylori-induced+gastritis+in+the+domestic+cat.">Helicobacter pylori-induced gastritis in the domestic cat.</a> Infection and Immunity. 63 (7), 2674-2681 (1995).</li><li>Lee, A., Hazell, S. L., O'Rourke, J., Kouprach, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+spiral-shaped+bacterium+from+the+cat+stomach.">Isolation of a spiral-shaped bacterium from the cat stomach.</a> Infection and Immunity. 56 (11), 2843-2850 (1988).</li><li>Ferrero, R. L., Wilson, J. E., Sutton, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+Helicobacter-induced+gastric+cancer:+use+of+cocarcinogens.">Mouse models of Helicobacter-induced gastric cancer: use of cocarcinogens.</a> Methods in Molecular Biology. 921, 157-173 (2012).</li><li>Ferrero, R. L., Thiberge, J. M., Huerre, M., Labigne, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+responses+of+specific-pathogen-free+mice+to+chronic+Helicobacter+pylori+(strain+SS1)+infection.">Immune responses of specific-pathogen-free mice to chronic Helicobacter pylori (strain SS1) infection.</a> Infection and Immunity. 66 (4), 1349-1355 (1998).</li><li>Blanchard, T. G., Nedrud, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+maintenance+of+Helicobacter+species.">Laboratory maintenance of Helicobacter species.</a> Current Protocols in Microbiology. , (2012).</li><li>Kim, J. S., Chang, J. H., Chung, S. I., Yum, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+the+host+genetic+background+on+immune+responses+to+Helicobacter+pylori+infection+and+therapeutic+vaccine+efficacy.">Importance of the host genetic background on immune responses to Helicobacter pylori infection and therapeutic vaccine efficacy.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 31 (1), 41-46 (2001).</li><li>Nedrud, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+genetic+influence+on+the+innate+inflammatory+response+to+helicobacter+infection+of+the+gastric+mucosa.">Lack of genetic influence on the innate inflammatory response to helicobacter infection of the gastric mucosa.</a> Frontiers in Immunology. 3, 181 (2012).</li><li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+felis+eradication+restores+normal+architecture+and+inhibits+gastric+cancer+progression+in+C57BL/6+mice.">Helicobacter felis eradication restores normal architecture and inhibits gastric cancer progression in C57BL/6 mice.</a> Gastroenterology. 128 (7), 1937-1952 (2005).</li><li>Ferrero, R. L., Labigne, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning,+expression+and+sequencing+of+Helicobacter+felis+urease+genes.">Cloning, expression and sequencing of Helicobacter felis urease genes.</a> Molecular Microbiology. 9 (2), 323-333 (1993).</li><li>Stevenson, T. H., Castillo, A., Lucia, L. M., Acuff, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+Helicobacter+pylori+in+various+liquid+and+plating+media.">Growth of Helicobacter pylori in various liquid and plating media.</a> Letters in Applied Microbiology. 30 (3), 192-196 (2000).</li><li>Uotani, T., Graham, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+Helicobacter+pylori+using+the+rapid+urease+test.">Diagnosis of Helicobacter pylori using the rapid urease test.</a> Annals of Translational Medicine. 3 (1), 9 (2015).</li><li>Riley, L. K., Franklin, C. L., Hook, R. R., Besch-Williford, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+murine+helicobacters+by+PCR+and+restriction+enzyme+analyses.">Identification of murine helicobacters by PCR and restriction enzyme analyses.</a> Journal of Clinical Microbiology. 34 (4), 942-946 (1996).</li><li>Chaouche-Drider, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+commensal+Helicobacter+sp.+of+the+rodent+intestinal+flora+activates+TLR2+and+NOD1+responses+in+epithelial+cells.">A commensal Helicobacter sp. of the rodent intestinal flora activates TLR2 and NOD1 responses in epithelial cells.</a> PLoS One. 4 (4), e5396 (2009).</li><li>Fox, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+bilis:+bacterial+provocateur+orchestrates+host+immune+responses+to+commensal+flora+in+a+model+of+inflammatory+bowel+disease.">Helicobacter bilis: bacterial provocateur orchestrates host immune responses to commensal flora in a model of inflammatory bowel disease.</a> Gut. 56 (7), 898-900 (2007).</li><li>McGee, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholesterol+enhances+Helicobacter+pylori+resistance+to+antibiotics+and+LL-37.">Cholesterol enhances Helicobacter pylori resistance to antibiotics and LL-37.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (6), 2897-2904 (2011).</li><li>Viala, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nod1+responds+to+peptidoglycan+delivered+by+the+Helicobacter+pylori+cag+pathogenicity+island.">Nod1 responds to peptidoglycan delivered by the Helicobacter pylori cag pathogenicity island.</a> Nature Immunology. 5 (11), 1166-1174 (2004).</li><li>Kong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+and+specific+PCR+method+to+detect+Helicobacter+felis+in+a+conventional+mouse+model.">A sensitive and specific PCR method to detect Helicobacter felis in a conventional mouse model.</a> Clinical and Vaccine Immunology. 3 (1), 73-78 (1996).</li><li>Ng, G., Every, A., McGuckin, M., Sutton, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Helicobacter+felis+colonization+in+male+129/Sv+mice+fails+to+suppress+gastritis.">Increased Helicobacter felis colonization in male 129/Sv mice fails to suppress gastritis.</a> Gut Microbes. 2 (6), 358-360 (2011).</li><li>Ferrero, R. L., Ave, P., Radcliff, F. J., Labigne, A., Huerre, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outbred+mice+with+long-term+Helicobacter+felis+infection+develop+both+gastric+lymphoid+tissue+and+glandular+hyperplastic+lesions.">Outbred mice with long-term Helicobacter felis infection develop both gastric lymphoid tissue and glandular hyperplastic lesions.</a> The Journal of Pathology. 191 (3), 333-340 (2000).</li></ol>

Этот протокол описывает использование модели мыши в естественных условиях для инфекции Helicobacter . Важнейшие шаги процедуры являются: 1) подготовка Helicobacter инокуляты, содержащие жизнеспособные и подвижные бактерий; 2) доставки соответствующего числа бактерий к мыши через вн?...

Helicobacter pylori это спираль образная, грамотрицательных, человеческого желудка патогена присутствуют в всех групп населения во всем мире, с заболеваемости в развивающихся странах, по оценкам, составляют порядка 80%1. Хотя большинство Helicobacter pylori-инфицированных протекает бессимптомно, некоторые развивать более тяжелых заболеваний, начиная от пептических язв желудка рак2. H. pylori-связанных рака характеризуются широко злокачественные изменения эпителиальных клеток (GECs) или формирования экстра узловой лимфоидной ткани в желудке, приводит к аденокарцинома желудка или слизистой оболочки, связанных лимфоидных ткани (MALT) лимфомы, соответственно. H. пилори высоко адаптирована к выжить в суровых экологическую нишу желудка из-за наличия различных факторов вирулентности и механизмов содействия его соблюдению, роста и метаболизма в этой нише. В частности вирулентным штаммов H. пилори обладают 40 КБ cag остров патогенности (cagPAI), который кодирует приблизительно 30 генов, необходимых для производства типа 4 секреторной системы (T4SS)3,4 . ЦАГ ПАЙ инфицированных штаммами Helicobacter pylori связаны с индукции более высокий уровень хронического воспаления в узле, который был вовлечен как основных прекурсоров аденокарцинома желудка5.
В естественных условиях Животные модели, особенно мышей, были весьма информативным, позволяя исследователей для изучения относительного вклада принимающих, бактериальных и экологических факторов на H. pylori инфекции и болезни результат6. Ранее исследования показали, что длительное пилорусов заражение мышей C57BL/6 генетический фон результатов в развитии хронического гастрита и железы атрофия, оба клейма Helicobacter pylori инфекции7. Кроме того было показано инфекции с смежных бактериальных видов кошачьих/собак, H. felis, вызывать образование солода в мышах с аналогичными патологии и прогрессирования заболевания как видно человека MALT лимфома8,9. Наиболее часто используемые пилорусов изолировать в мыши колонизации исследования является «Сидней штамм 1» (SS1) напряжение10, который cagПАЙ+ но нефункциональные T4SS (T4SS−)11. Других широко используемых штаммов включают пилорусов B128 7.13 (cagПАЙ+/T4SS+)12 и X47 2AL (cagПАЙ–/T4SS−)13. H. felis инфекций, штамм CS1 («Cat спираль 1», ЦАГПАЙ–/T4SS−) — обычно используется14.
Здесь мы предоставляем протокол, описывающий подготовку Helicobacter инокуляты в vivo инфекции, процедура внутрижелудочного затравки мышей, а также методы для обработки тканей для изучения гистопатологические изменения в желудке. В частности эта статья будет сосредоточена на гистологических методов, используемых для визуализации бактериальной колонизации и оценить гистопатологические изменения, включая формирование солода, в слизистой оболочке желудка зараженных мышей. Некоторые из методов, описанных здесь могут быть адаптированы к изучению других кишки патогены, например S. Typhimurium или C. rodentium.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bacteriological reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxoid Blood Agar Base No.2</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>CM0271B</td>
			<td>Dissolve in deinonized water prior to sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Premium Defibrinated Horse blood</td>
			<td>Australian Ethical Biologicals</td>
			<td>PDHB100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Brain Heart Infusion Broth</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>237500</td>
			<td>Dissolve in deinonized water prior to sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CampyGen gas packs</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>CN0035A/CN0025A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histological reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute alcohol, 100% Denatured</td>
			<td>ChemSupply</td>
			<td>AL048-20L-P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol (2-propanol)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>100995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene (sulphur free)</td>
			<td>ChemSupply</td>
			<td>XT003-20L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Haematoxylin</td>
			<td>Amber Scientific</td>
			<td>&#160;MH-1L</td>
			<td>Filter before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin, Aqueous Stain</td>
			<td>Amber Scientific</td>
			<td>EOCA-1L</td>
			<td>Filter before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wright-Giemsa Stain, modified</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>WG80-2.5L</td>
			<td>Dilute before use (20% Giemsa, 80% deionized water)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histolene</td>
			<td>Grale Scientific</td>
			<td>11031/5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mounting medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>1.00579.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular biology reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qubit dsDNA BR Assay Kit</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>Q32850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligonucleotides</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>The annealing temperature of ureB primers used in this study is 61&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GoTaq Flexi DNA Polymerase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>&#160;M8291</td>
			<td>Kit includes 10X PCR buffer and Magnesium Chloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTPs</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-39028</td>
			<td>Dilute to 10mM in sterile nuclease free water before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Grade Agarose</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-41025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydrogen Carbonate</td>
			<td>Univar (Ajax Fine Chemicals)</td>
			<td>A475-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulphate Heptahydrate</td>
			<td>Chem-Supply</td>
			<td>MA048-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotics</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vancomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>V2002-1G</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polymyxin B</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P4932-5MU</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimethoprim (&#8805;98% HPLC)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T7883</td>
			<td>Dissolve in 100% (absolute) Ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin</td>
			<td>Amresco (Astral Scientific)</td>
			<td>E437-100MG</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacitracin from Bacillus licheniformis</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B0125</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naladixic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>N8878</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methoxyflurane (Pentrhox)</td>
			<td>Medical Developments International</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Wax</td>
			<td>Paraplast Plus, Leica Biosystems</td>
			<td>39601006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment and plasticware</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxoid Anaerobic Jars</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>HP0011/HP0031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>COPAN Pasteur Pipettes</td>
			<td>Interpath Services</td>
			<td>200CS01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf 5810R centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Collect bacterial pellets by centrifugation at 2,200 rpm for 10 mins at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23g precision glide needle</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>301805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Bemis, VWR</td>
			<td>PM996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portex fine bore polythene tubing</td>
			<td>Smiths Medical</td>
			<td>800/100/200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic feeding catheters</td>
			<td>Instech&#160; Laboratories</td>
			<td>FTP20-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml tuberculin luer slip disposable syringes</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>302100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf micropestle for 1.2 - 2 mL tubes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z317314</td>
			<td>Autoclavable polypropylene pestles used for stomach homogenization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACs Dissociator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td>Use a pre-set gentleMACS Programs for mouse stomach tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M Tubes (orange cap)</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>30-093-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Qubit Fluorometer</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>Q33216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile plastic loop</td>
			<td>LabServ</td>
			<td>LBSLP7202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold Plate, Leica EG1160 Embedding System</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Base Mould System, Base Mold 38 x 25 x 6</td>
			<td>Sakura, Alphen aan den Rijn</td>
			<td>4124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek III Uni-Casette System</td>
			<td>Sakura, Alphen aan den Rijn</td>
			<td>4170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome, Leica RM2235</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged SuperFrost Plus glass slides</td>
			<td>Menzel Glaser, Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>4951PLUS4</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse models of helicobacter infection and gastric pathologies

Helicobacter pylori это желудка возбудителя, который присутствует в половину мирового населения и является существенной причиной заболеваемости и смертности в организме человека. Несколько моделей мыши желудочной инфекции Helicobacter были разработаны для изучения молекулярных и клеточных механизмов, whereby H. пилори бактерий колонизировать желудок человека хостов и вызывают болезни. Здесь, мы описываем протоколы: 1) подготовить бактериальных суспензий для инфекции в vivo мышей через внутрижелудочного кормления; 2) определяет уровень бактериальной колонизации в мыши желудка тканях, полимеразной цепной реакции (ПЦР) и жизнеспособной подсчета; и 3) оценки патологических изменений, по гистологии. Установить HelicobactЭр инфекции в мышей, конкретного возбудителя бесплатно (SPF) животных сначала прививанным с суспензий (содержащие ≥105 колонии формирование подразделения, CFUs) мыши колонизировать штаммов либо Helicobacter pylori или другие желудка Helicobacter spp. от животных, таких как Helicobacter felis. В соответствующие моменты времени после инфекции желудков подакцизным и расчлененный sagittally на два равных ткани фрагменты, каждое в составе области гайморовых и тела. Затем один из этих фрагментов используется для жизнеспособных подсчета или экстракции ДНК, в то время как другой подвергается гистологической обработки. Бактериальной колонизации и гистопатологические изменения в желудке может оцениваться регулярно в разделах ткани желудка, окрашенных с Warthin-звездное, Гимзы или гематоксилин и эозином (H & E) пятна, в случае необходимости. Дополнительные иммунологические анализы могут также осуществляться иммуногистохимия или иммунофлюоресценции на разделах желудка ткани мыши. Протоколы, описанные ниже предназначены специально для проведения оценки в мышах патологии желудка, напоминающие те в связанных с человека Helicobacter pylori заболеваний, включая воспаление, атрофия железы и формирования лимфоидных фолликулов. Подготовка посевным материалом и внутрижелудочного затравки протоколы могут быть адаптированы для изучения патогенеза других кишечных патогенов человека, которые колонизировали мышей, например Salmonella Typhimurium или Citrobacter rodentium.

Этот протокол описывает метод пероральная затравка для достижения внутрижелудочного инфекция с Helicobacter pylori или H. felis в мышиных мыши модели (рис. 1). После эвтаназии желудки удалены, взвешиваются и разделен на 2 равные половины, включающий антрального, тело и не же...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies at JoVE.com

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

Модели мыши инфекции Helicobacter и патологий желудка

Мышей представляют собой бесценный в vivo модель для изучения инфекции и заболеваний, вызванных желудочно-кишечные микроорганизмы. Здесь мы описываем методы, используемые для изучения бактериальной колонизации и гистопатологические изменения в моделях мыши Helicobacter pylori-связанных заболеваний.

Helicobacter pylori is a gastric pathogen that is present in half of the global population and is a significant cause of morbidity and mortality in ...

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области гастроэнтерологии о влиянии членов микробиоты, в частности, рода Helicobacter, на воспаление и рак. Основным преимуществом этой методики является то, что она позволяет изучать инфекцию геликобактеров и ее воздействие на желудок в физиологических условиях. Последствия этого метода распространяются на разработку методов лечения для профилактики или ликвидации инфекции Helicobacter или ее последствий, включая антибиотики, лекарства или вакцины.Эти методы дают представление о патогенеза инфекции Helicobacter. Тем не менее, некоторые из методов могут быть адаптированы к изучению других желудочно-кишечных патогенов. Как правило, лица, новые для этого метода будет бороться с подготовкой бактериального инокулума, способного установить инфекцию у мышей.Крайне важно, чтобы изоляты Helicobacter были известными штаммами колонизации мышей, которые не претерпели обширной субкультуры in vitro. Кроме того, следует фиксировали количество субкультур in vitro для этих штаммов. Добавьте бактериальные суспензии в 15-миллилитровые полистироловые трубки и используйте пластиковую петлю для переноса одной 10-20-микролитровой капли из каждой культуры на отдельные слайды стеклянного микроскопа.Затем оцените жизнеспособность и подвижность бактерий в рамках фазово-контрастной микроскопии при 100-м увеличении. Используйте иокулу H.pylori только в том случае, если большинство бактерий имеют бациллярную форму. H.felis inocula должна в первую очередь содержать бактерии в форме helical.И загрузите иокулу в отдельные одноразовые, одноми миллилитровые шприцы. Оборудуй каждый шприц иглой 23-го калибра и используйте пластиковую парафиновую пленку, чтобы прикрепить к каждой игле одноразовый полиэтиленовый катетер. Затем вручную сдерживайте шести-восьминедельную мышь без специфических патогенов и мышь без хеликобактеров за потертости шеи и хвоста и вставьте один катетер в центр открытой челюсти.Руководство катетер в caudal к пищевода, расширение шеи мыши, чтобы облегчить доступ к желудку через пищевод и от трахеи, пока большинство или все катетер больше не видно и сопротивление ощущается. Затем доставить по крайней мере один раз от 10 до пятой бактерии для обеспечения оптимальной колонизации и патологии заболеваний. В конце эксперимента используйте тонкие изогнутые ножницы, чтобы открыть брюшную полость для иссечения желудка.Вырезать желудок вдоль большей кривизны, и осторожно мыть орган два раза в одной 50-миллилитровой трубки свежего PBS за стирку, чтобы удалить остатки пищи. После второй стирки поместите ткань в смоляную шестисемейную пластиковую чашку Петри, чтобы зафиксировать мокрый вес. После уплощения желудка, разрезать образец sagittally на два равных фрагментов ткани, состоящей из antrum, тела и не-железистой области forestomach.Удалите не железистой области, и весят половину каждого желудка перед хранением кусок ткани в соответствующем растворе для запланированного анализа вниз по течению. Добавьте другую половину ткани желудка в 15-миллилитровую коническую трубку, содержащую 10%формалин, уплощая ткани против верхних сторон труб через 10 секунд. Когда ткани прикрепится к стенкам трубки, повторно погрузите образцы в формалин, по крайней мере 24 часов.Чтобы подсчитать количество жизнеспособных H.pylori в желудке после инфекции, гомогенизировать образцы желудка, хранящиеся в BHI, и выполнять дубликаты серийных разбавления в результате желудочных гомогенатов в свежем, стерильном бульоне. Разделите предварительно высушенный конский агар крови, или HBA, пластины, дополненные дополнительными антибиотиками, на три или четыре сегмента, и, используя адаптацию техники Майлза и Мисры, добавьте от 10 до 100 микролитров каждого желудка гомогенатного разбавления на сегмент каждой агарной пластины. Распространение гомогенатов с стерильными, пластиковые петли, и дайте пластины высохнуть.Затем поместите пластины в перевернутое положение в анаэробные газовые банки, содержащие чашку воды Петри и газовую упаковку. Затем инкубировать банки при 37 градусах по Цельсию в течение четырех-семи дней. Когда колонии можно наблюдать, перечислите сегменты, содержащие от 10 до 100 изолированных колоний.После эвтаназии желудок собирают у животных и взвешивают. Нехландулярная область удаляется, и желудок делится на две равные половинки, состоящие из антрума и тела. Успешная колонизация, как правило, подтверждается путем выполнения жизнеспособного подсчета и последующего перечисления отдельных колоний из желудочных гомогенатов, пронизанные на пластины HBA.Обратите внимание, что наличие загрязняющих бактерий из мыши желудочной микробиоты или большое количество колоний H.pylori может осложнить перечисление H.pylori CFUs. Кроме того, ПЦР может быть использован для проверки инфекции с использованием конкретных проверенных грунтовок, направленных на 325-базовую парную область генов H.felis и H.pylori ureB. В этом репрезентативном эксперименте, дикий тип C57 Черный-6 мышей отображается умеренные признаки воспаления, в том числе гиперплазии и атрофии железы в шесть месяцев после заражения H.felis, а также клеточной инфильтрации субмукосы.Более тяжелое воспаление наблюдается у нокаут мышей в то же время, с дополнительным присутствием лимфоидных фолликулов наблюдается в непосредственной близости от клеточных инфильтраций. Бактерии H.felis также могут быть визуализированы в окрашенных гимса участках инфицированной ткани желудка мыши. После этой процедуры, другие методы, такие как количественные ПЦР, иммуногистохимия, или иммунофторесценция могут быть выполнены, чтобы ответить на дополнительные вопросы о типах принимающих ответов, вызванных во время инфекции Helicobacter.После своего развития, этот метод проложил путь для исследователей в области микробиологии и гастроэнтерологии, чтобы исследовать причинно-следственную роль Helicobacter pylori в болезни желудка у людей. После просмотра этого видео, вы должны иметь хорошее понимание того, как воспроизвести заразить мышей с видами Helicobacter и изучить патологию, связанную с инфекцией. Не забывайте, что штаммы Helicobacter, используемые в этом протоколе, являются инфекционными, и поэтому стандартные процедуры биобезопасности всегда должны соблюдаться во время работы с этими бактериями.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

Трансуретральная Индукция Мышь инфекции мочевыводящих путей

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

Диагностика экто-и эндопаразиты в лабораторных крыс и мышей

Internal and external parasites remain a significant concern in laboratory rodent facilities, and many research facilities harbor some parasitized ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

Интраназального введения рекомбинантного гриппа вакцин в химерных мышей Модели для изучения слизистых оболочек

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...

Organoids as Model for Infectious Diseases: Culture of Human and Murine Stomach Organoids and Microinjection of Helicobacter Pylori

Органоиды как модель для инфекционных болезней: Культура человека и мыши желудка органоидов и Микроинъекция Helicobacter Pylori

Recently infection biologists have employed stem cell derived cultures to answer the need for new and better models to study host-pathogen interactions. ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-трахеи Администрация<em&gt; Гемофильной</em&gt; В мышиные модели для изучения Воспаление дыхательных путей

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

Один шаг Отрицательный хроматографической очистки<em&gt; Хеликобактерной</em&gt; Активирующий нейтрофилы белок избыточно экспрессируется в<em&gt; Кишечная палочка</em&gt; В пакетном режиме

Helicobacter pylori neutrophil-activating protein (HP-NAP) is a major virulence factor of Helicobacter pylori (H. pylori). It plays a critical role in H. ...

Mouse- and Human-derived Primary Gastric Epithelial Monolayer Culture for the Study of Regeneration

Мыши и человека, полученных первичных желудка эпителиальных монослойном культивировании для изучения регенерации

In vitro studies of gastric wound repair typically involves the use of gastric cancer cell lines in a scratch-wound assay of cellular proliferation and ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Внутричерепная Subarachnoidal маршрут инфекции для расследования роли Streptococcus suis биоплёнки в менингита в мышиной модели инфекции

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

CRISPR-Cas9-based Genome Engineering to Generate Jurkat Reporter Models for HIV-1 Infection with Selected Proviral Integration Sites

Основанный ТРИФОСФАТЫ Cas9 генома инженерии для создания модели Jurkat репортер для инфекции ВИЧ-1 с выбранной Proviral интеграции сайтов

Human immunodeficiency virus (HIV) integrates its proviral DNA non-randomly into the host cell genome at recurrent sites and genomic hotspots. Here we ...

Chronic, Acute, and Reactivated HIV Infection in Humanized Immunodeficient Mouse Models

Хроническая, острая и активированная ВИЧ-инфекция в гуманизированных иммунодефицитных моделях мыши

Humanized NOD/SCID/IL-2 receptor &#947;-chainnull mice recapitulate some features of human immunity, which can be exploited in basic and pre-clinical ...