Name: mouse models of helicobacter infection and gastric pathologies
Uploaded: 2018-10-18T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies at JoVE.com

Yazarlar Bayan A. De Paoli ve Bayan Georgie Wray-McCann teknik yardım için teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar tesislerinin kullanımı ve Monash Histoloji Platform, anatomi bölümü ve gelişim biyolojisi, Monash Üniversitesi Teknik yardım kabul edersiniz. Laboratuvar Ulusal Sağlık ve tıbbi araştırma Konseyi (NHMRC) RLF (APP1079930, APP1107930) için fon tarafından desteklenir. RLF NHMRC (APP1079904) bir üst düzey araştırma bursu tarafından desteklenmektedir. KD ve MC her ikisi de Monash Lisansüstü Bursları tarafından desteklenir. MC bir uluslararası yüksek lisans burs Tıp Fakültesi, Hemşirelik ve Sağlık Bilimleri, Monash Üniversitesi varken KD doğuştan gelen bağışıklık ve enfeksiyöz hastalıklar, Hudson Enstitüsü tıbbi araştırma, aynı zamanda merkezi tarafından desteklenir. Araştırma, Hudson Enstitüsü tıbbi araştırma Victoria Hükümeti'nın operasyonel altyapı desteği programı tarafından desteklenir.

1. büyüme ve bakteriyel Inocula hazırlanması
<ol><li>H. pylori veya H. felis15 -80 ° C ve alt kültür at kan agar (HBA) plakaları oluşan gliserol stokları çözülme: kan Agar Bankası No.2 (bkz. Tablo reçetesi); değiştirilmiş bir "Skirrow'ın antibiyotik seçmeli ek" (vankomisin, 10 μg/mL; oluşan polimiksin B, 25 ng/mL; trimetoprim, 5 µg/mL; Amfoterisin B, 2.5 μg/mL); ve 5-%10 (v/v) at kan15,<sup class="xref"...

<ol>
	<li>Goh, K. L., Chan, W. K., Shiota, S., Yamaoka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+Helicobacter+pylori+infection+and+public+health+implications.">Epidemiology of Helicobacter pylori infection and public health implications.</a> Helicobacter. 16, 1-9 (2011).</li><li>Montecucco, C., Rappuoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+dangerously:+how+Helicobacter+pylori+survives+in+the+human+stomach.">Living dangerously: how Helicobacter pylori survives in the human stomach.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2 (6), 457-466 (2001).</li><li>Akopyants, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyses+of+the+cag+pathogenicity+island+of+Helicobacter+pylori.">Analyses of the cag pathogenicity island of Helicobacter pylori.</a> Molecular Microbiology. 28 (1), 37-53 (1998).</li><li>Censini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cag,+a+pathogenicity+island+of+Helicobacter+pylori,+encodes+type+I-specific+and+disease-associated+virulence+factors.">cag, a pathogenicity island of Helicobacter pylori, encodes type I-specific and disease-associated virulence factors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (25), 14648-14653 (1996).</li><li>Peek, R. M., Fiske, C., Wilson, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+innate+immunity+in+Helicobacter+pylori-induced+gastric+malignancy.">Role of innate immunity in Helicobacter pylori-induced gastric malignancy.</a> Physiological Reviews. 90 (3), 831-858 (2010).</li><li>O'Rourke, J. L., Lee, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+Helicobacter+pylori+infection+and+disease.">Animal models of Helicobacter pylori infection and disease.</a> Microbes and Infection. 5 (8), 741-748 (2003).</li><li>Sakagami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atrophic+gastric+changes+in+both+Helicobacter+felis+and+Helicobacter+pylori+infected+mice+are+host+dependent+and+separate+from+antral+gastritis.">Atrophic gastric changes in both Helicobacter felis and Helicobacter pylori infected mice are host dependent and separate from antral gastritis.</a> Gut. 39 (5), 639-648 (1996).</li><li>Correa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+pylori+and+gastric+carcinogenesis.">Helicobacter pylori and gastric carcinogenesis.</a> The American Journal of Surgical Pathology. 19, S37-S43 (1995).</li><li>Enno, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MALToma-like+lesions+in+the+murine+gastric+mucosa+after+long-term+infection+with+Helicobacter+felis.+A+mouse+model+of+Helicobacter+pylori-induced+gastric+lymphoma.">MALToma-like lesions in the murine gastric mucosa after long-term infection with Helicobacter felis. A mouse model of Helicobacter pylori-induced gastric lymphoma.</a> The American Journal of Pathology. 147 (1), 217-222 (1995).</li><li>Lee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+standardized+mouse+model+of+Helicobacter+pylori+infection:+introducing+the+Sydney+strain.">A standardized mouse model of Helicobacter pylori infection: introducing the Sydney strain.</a> Gastroenterology. 112 (4), 1386-1397 (1997).</li><li>Crabtree, J. E., Ferrero, R. L., Kusters, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+colonizing+Helicobacter+pylori+strain+SS1+may+lack+a+functional+cag+pathogenicity+island.">The mouse colonizing Helicobacter pylori strain SS1 may lack a functional cag pathogenicity island.</a> Helicobacter. 7 (2), 139-140 (2002).</li><li>Israel, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+pylori+strain-specific+differences+in+genetic+content,+identified+by+microarray,+influence+host+inflammatory+responses.">Helicobacter pylori strain-specific differences in genetic content, identified by microarray, influence host inflammatory responses.</a> Journal of Clinical Investigation. 107 (5), 611-620 (2001).</li><li>Fox, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+pylori-induced+gastritis+in+the+domestic+cat.">Helicobacter pylori-induced gastritis in the domestic cat.</a> Infection and Immunity. 63 (7), 2674-2681 (1995).</li><li>Lee, A., Hazell, S. L., O'Rourke, J., Kouprach, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+spiral-shaped+bacterium+from+the+cat+stomach.">Isolation of a spiral-shaped bacterium from the cat stomach.</a> Infection and Immunity. 56 (11), 2843-2850 (1988).</li><li>Ferrero, R. L., Wilson, J. E., Sutton, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+Helicobacter-induced+gastric+cancer:+use+of+cocarcinogens.">Mouse models of Helicobacter-induced gastric cancer: use of cocarcinogens.</a> Methods in Molecular Biology. 921, 157-173 (2012).</li><li>Ferrero, R. L., Thiberge, J. M., Huerre, M., Labigne, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+responses+of+specific-pathogen-free+mice+to+chronic+Helicobacter+pylori+(strain+SS1)+infection.">Immune responses of specific-pathogen-free mice to chronic Helicobacter pylori (strain SS1) infection.</a> Infection and Immunity. 66 (4), 1349-1355 (1998).</li><li>Blanchard, T. G., Nedrud, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+maintenance+of+Helicobacter+species.">Laboratory maintenance of Helicobacter species.</a> Current Protocols in Microbiology. , (2012).</li><li>Kim, J. S., Chang, J. H., Chung, S. I., Yum, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+the+host+genetic+background+on+immune+responses+to+Helicobacter+pylori+infection+and+therapeutic+vaccine+efficacy.">Importance of the host genetic background on immune responses to Helicobacter pylori infection and therapeutic vaccine efficacy.</a> FEMS Immunology and Medical Microbiology. 31 (1), 41-46 (2001).</li><li>Nedrud, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+genetic+influence+on+the+innate+inflammatory+response+to+helicobacter+infection+of+the+gastric+mucosa.">Lack of genetic influence on the innate inflammatory response to helicobacter infection of the gastric mucosa.</a> Frontiers in Immunology. 3, 181 (2012).</li><li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+felis+eradication+restores+normal+architecture+and+inhibits+gastric+cancer+progression+in+C57BL/6+mice.">Helicobacter felis eradication restores normal architecture and inhibits gastric cancer progression in C57BL/6 mice.</a> Gastroenterology. 128 (7), 1937-1952 (2005).</li><li>Ferrero, R. L., Labigne, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning,+expression+and+sequencing+of+Helicobacter+felis+urease+genes.">Cloning, expression and sequencing of Helicobacter felis urease genes.</a> Molecular Microbiology. 9 (2), 323-333 (1993).</li><li>Stevenson, T. H., Castillo, A., Lucia, L. M., Acuff, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+Helicobacter+pylori+in+various+liquid+and+plating+media.">Growth of Helicobacter pylori in various liquid and plating media.</a> Letters in Applied Microbiology. 30 (3), 192-196 (2000).</li><li>Uotani, T., Graham, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+Helicobacter+pylori+using+the+rapid+urease+test.">Diagnosis of Helicobacter pylori using the rapid urease test.</a> Annals of Translational Medicine. 3 (1), 9 (2015).</li><li>Riley, L. K., Franklin, C. L., Hook, R. R., Besch-Williford, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+murine+helicobacters+by+PCR+and+restriction+enzyme+analyses.">Identification of murine helicobacters by PCR and restriction enzyme analyses.</a> Journal of Clinical Microbiology. 34 (4), 942-946 (1996).</li><li>Chaouche-Drider, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+commensal+Helicobacter+sp.+of+the+rodent+intestinal+flora+activates+TLR2+and+NOD1+responses+in+epithelial+cells.">A commensal Helicobacter sp. of the rodent intestinal flora activates TLR2 and NOD1 responses in epithelial cells.</a> PLoS One. 4 (4), e5396 (2009).</li><li>Fox, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicobacter+bilis:+bacterial+provocateur+orchestrates+host+immune+responses+to+commensal+flora+in+a+model+of+inflammatory+bowel+disease.">Helicobacter bilis: bacterial provocateur orchestrates host immune responses to commensal flora in a model of inflammatory bowel disease.</a> Gut. 56 (7), 898-900 (2007).</li><li>McGee, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholesterol+enhances+Helicobacter+pylori+resistance+to+antibiotics+and+LL-37.">Cholesterol enhances Helicobacter pylori resistance to antibiotics and LL-37.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 55 (6), 2897-2904 (2011).</li><li>Viala, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nod1+responds+to+peptidoglycan+delivered+by+the+Helicobacter+pylori+cag+pathogenicity+island.">Nod1 responds to peptidoglycan delivered by the Helicobacter pylori cag pathogenicity island.</a> Nature Immunology. 5 (11), 1166-1174 (2004).</li><li>Kong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+and+specific+PCR+method+to+detect+Helicobacter+felis+in+a+conventional+mouse+model.">A sensitive and specific PCR method to detect Helicobacter felis in a conventional mouse model.</a> Clinical and Vaccine Immunology. 3 (1), 73-78 (1996).</li><li>Ng, G., Every, A., McGuckin, M., Sutton, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Helicobacter+felis+colonization+in+male+129/Sv+mice+fails+to+suppress+gastritis.">Increased Helicobacter felis colonization in male 129/Sv mice fails to suppress gastritis.</a> Gut Microbes. 2 (6), 358-360 (2011).</li><li>Ferrero, R. L., Ave, P., Radcliff, F. J., Labigne, A., Huerre, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outbred+mice+with+long-term+Helicobacter+felis+infection+develop+both+gastric+lymphoid+tissue+and+glandular+hyperplastic+lesions.">Outbred mice with long-term Helicobacter felis infection develop both gastric lymphoid tissue and glandular hyperplastic lesions.</a> The Journal of Pathology. 191 (3), 333-340 (2000).</li></ol>

Bu iletişim kuralı bir vivo içinde fare modeli Helicobacter enfeksiyon için açıklar. Yordam kritik adımlar şunlardır: 1) canlı ve hareketli bakteri; içeren Helicobacter inocula hazırlanması 2) için fareyi intragastric sonda ile besleme yoluyla bakteri uygun sayıda teslim; 3) koloni sayımı ve/veya PCR bakteriyel enfeksiyon tespiti; ve 4) işleme histopatoloji içinde değerlendirilmesi etkinleştirmek için mide dokuların enfekte mideleri. Değişiklikler, sorun giderme ve tekn...

Helicobacter pylori enfeksiyonu oranları gelişmekte olan ülkelerde % 801sırasına göre olduğu tahmin ile dünya çapında spiral şeklinde, gram-negatif, insan mide patojen mevcut tüm nüfus var. Her ne kadar çoğu H. pylori-enfekte bireylerin asemptomatik, biraz daha ağır hastalıkları, peptik ülser mide kanseri2' ye kadar geliştirmek. H. pylori-ilişkili kanserler geniş oluşumu ekstra nodal lenfoid doku mide, mide adenokarsinom sonuçlanan veya mukoza ilişkili lenfoid veya malign degisimler epitel hücreleri (GECs) tarafından karakterize doku (MALT) Lenfoma, anılan sıraya göre. H. pylori mide çeşitli virülans faktörleri ve mekanizmaları, bağlılık, büyüme ve metabolizma bu niş içinde kolaylaştırmak varlığı nedeniyle sert ekolojik niş içinde hayatta kalmak için son derece uyarlanmıştır. Özellikle, öldürücü soy-in H. pylori 40 kb cag patojenitesi Adası (cagPAI) yaklaşık 30 genler bir tip 4 salgı sistemi (T4SS)3,4 üretimi için gerekli kodlar sahip . cag PAI-pozitif H. pylori suşları karıştığı gastrik adenokarsinom5temel bir habercisi konak, kronik inflamasyon yüksek düzeyde indüksiyon ile ilişkilidir.
İn vivo hayvan modelleri, özellikle fareler, araştırmacılar host, H. pylori enfeksiyonu ve hastalık sonucu6bakteriyel ve çevresel faktörlere göreli katkılarıyla araştırmak için izin vererek son derece bilgilendirici olmuştur. Çalışmalar daha önce gösterdi bu uzun H. pylori enfeksiyonu C57BL/6 genetik arka plan sonuçlarını geliştirme kronik gastrit ve bezi farelerin atrofi, H. pylori enfeksiyonu7her iki işaretlerinden. Ayrıca, enfeksiyon ile ilgili kedi/köpek bakteriyel türler, H. felis, MALT oluşumu benzer patoloji ve insan MALT lenfoma8,9' da görüldüğü gibi hastalık ilerlemesi ile farelerde ikna etmek için gösterilmiştir. En sık kullanılan H. pylori izole fare kolonizasyon çalışmaları olduğunu "Sydney zorlanma 1" hangi cagPAI+ ama işlevsel olmayan bir T4SS vardır (SS1) zorlanma10, (T4SS−)11. H. pylori yaygın olarak kullanılan diğer suşları dahil B128 7,13 (cagPAI+/T4SS+) (cagPAI-/T4SS−)1312 ve X47-2AL. H. felis enfeksiyonları, zorlanma CS1 için ("kedi sarmal 1", cagPAI-/T4SS−) olduğunu genellikle kullanılan14.
Burada, Helicobacter inocula vivo içinde enfeksiyon için yordamı farelerin intragastric sonda ile besleme için hem de histopatolojik değişikliklerin incelenmesi için dokuların işleme yöntemleri hazırlanması açıklayan bir protokol sağlar mide. Özellikle, bu makalede bakteriyel kolonizasyon görselleştirmek ve MALT oluşumu, virüslü fareleri gastrik mukoza dahil histopatolojik değişiklikleri değerlendirmek için kullanılan histolojik yöntemleri ele alınacak. Burada açıklanan yöntemlerden bazıları diğer gut patojenleri S. gibi çalışmanın adapte olabilir Typhimurium veya C. rodentium.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bacteriological reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxoid Blood Agar Base No.2</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>CM0271B</td>
			<td>Dissolve in deinonized water prior to sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Premium Defibrinated Horse blood</td>
			<td>Australian Ethical Biologicals</td>
			<td>PDHB100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Brain Heart Infusion Broth</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>237500</td>
			<td>Dissolve in deinonized water prior to sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CampyGen gas packs</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>CN0035A/CN0025A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histological reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute alcohol, 100% Denatured</td>
			<td>ChemSupply</td>
			<td>AL048-20L-P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol (2-propanol)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>100995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene (sulphur free)</td>
			<td>ChemSupply</td>
			<td>XT003-20L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Haematoxylin</td>
			<td>Amber Scientific</td>
			<td>&#160;MH-1L</td>
			<td>Filter before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin, Aqueous Stain</td>
			<td>Amber Scientific</td>
			<td>EOCA-1L</td>
			<td>Filter before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wright-Giemsa Stain, modified</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>WG80-2.5L</td>
			<td>Dilute before use (20% Giemsa, 80% deionized water)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histolene</td>
			<td>Grale Scientific</td>
			<td>11031/5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX mounting medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>1.00579.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular biology reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qubit dsDNA BR Assay Kit</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>Q32850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oligonucleotides</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>The annealing temperature of ureB primers used in this study is 61&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GoTaq Flexi DNA Polymerase</td>
			<td>Promega</td>
			<td>&#160;M8291</td>
			<td>Kit includes 10X PCR buffer and Magnesium Chloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTPs</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-39028</td>
			<td>Dilute to 10mM in sterile nuclease free water before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Grade Agarose</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-41025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydrogen Carbonate</td>
			<td>Univar (Ajax Fine Chemicals)</td>
			<td>A475-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulphate Heptahydrate</td>
			<td>Chem-Supply</td>
			<td>MA048-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotics</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vancomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>V2002-1G</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polymyxin B</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P4932-5MU</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimethoprim (&#8805;98% HPLC)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T7883</td>
			<td>Dissolve in 100% (absolute) Ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin</td>
			<td>Amresco (Astral Scientific)</td>
			<td>E437-100MG</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacitracin from Bacillus licheniformis</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B0125</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naladixic acid</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>N8878</td>
			<td>Dissolve in deionized water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methoxyflurane (Pentrhox)</td>
			<td>Medical Developments International</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Wax</td>
			<td>Paraplast Plus, Leica Biosystems</td>
			<td>39601006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment and plasticware</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxoid Anaerobic Jars</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>HP0011/HP0031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>COPAN Pasteur Pipettes</td>
			<td>Interpath Services</td>
			<td>200CS01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf 5810R centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Collect bacterial pellets by centrifugation at 2,200 rpm for 10 mins at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23g precision glide needle</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>301805</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M</td>
			<td>Bemis, VWR</td>
			<td>PM996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portex fine bore polythene tubing</td>
			<td>Smiths Medical</td>
			<td>800/100/200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic feeding catheters</td>
			<td>Instech&#160; Laboratories</td>
			<td>FTP20-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml tuberculin luer slip disposable syringes</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>302100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf micropestle for 1.2 - 2 mL tubes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z317314</td>
			<td>Autoclavable polypropylene pestles used for stomach homogenization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACs Dissociator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td>Use a pre-set gentleMACS Programs for mouse stomach tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M Tubes (orange cap)</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>30-093-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Qubit Fluorometer</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>Q33216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile plastic loop</td>
			<td>LabServ</td>
			<td>LBSLP7202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold Plate, Leica EG1160 Embedding System</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Not applicable</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Base Mould System, Base Mold 38 x 25 x 6</td>
			<td>Sakura, Alphen aan den Rijn</td>
			<td>4124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek III Uni-Casette System</td>
			<td>Sakura, Alphen aan den Rijn</td>
			<td>4170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome, Leica RM2235</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged SuperFrost Plus glass slides</td>
			<td>Menzel Glaser, Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>4951PLUS4</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse models of helicobacter infection and gastric pathologies

Helicobacter pylori dünya nüfusunun yarısı var ve önemli bir morbidite ve mortalite insanlarda nedenidir bir mide patojeni var. Birkaç fare modelleri gastrik Helicobacter enfeksiyonunun sayede H. pylori bakteri mide insan ana kolonize ve hastalığa neden moleküler ve hücresel mekanizmaları incelemek için geliştirilmiştir. Burada, biz protokollere tarif: 1) intragastric sonda ile besleme; yoluyla farelerin vivo içinde enfeksiyon Bakteriyel süspansiyonlar hazırlamak 2) polimeraz zincir tepkimesi (PCR) ve uygun hesap tarafından fare gastrik dokularda bakteriyel kolonizasyon düzeylerini belirlemek; ve 3) patolojik değişiklikler, Histoloji tarafından değerlendirmek. Kurmak Helicobacter farelerde enfeksiyon için belirli patojen-Alerjik (SPF) hayvanlar ilk fare kolonileşmesi suşları ya Helicobacter pylori , süspansiyonlar (≥105 koloni oluşturan birimler, CFUs içeren) ile aşılanmış veya hayvanlardan, diğer mide Helicobacter spp. gibi Helicobacter felis. Uygun zaman-puan sonrası enfeksiyon mideleri varlığına ve sagittally iki eşit doku parçaları, her test ve vücut bölgelerinde oluşan disseke. Diğer histolojik işleme tabi tutulur iken bu parçaları birini daha sonra uygun sayma ya da DNA ekstraksiyon, için kullanılır. Bakteriyel kolonizasyon ve midede histopatolojik değişiklikleri düzenli olarak Warthin yıldızlı, Giemsa veya Haematoxylin ve eozin (H & E) lekeleri, uygun ile lekeli gastrik doku bölümlerde değerlendirildi. Ek immünolojik değerlendirmeler de immünhistokimya veya fare gastrik doku bölümlerinde ayirt tarafından üstlenilen. Aşağıda açıklanan protokoller gastrik patolojiler bu insan ile ilgili H. pylori benzeyen farelerde değerlendirilmesi etkinleştirmek için özel olarak tasarlanmış hastalıklar, iltihap, bezi atrofi ve lenfoid folikül oluşumu gibi. İnoculum hazırlanması ve intragastric sonda ile besleme iletişim kuralları da fare, Salmonella Typhimurium veya Sitrobacter rodentiumgibi kolonize diğer enterik insan patojenleri patogenezinde çalışmaya adapte olabilir.

Bu iletişim kuralı ile H. pylori ya da H. felis intragastric enfeksiyon fare fare modelleri (Şekil 1) elde etmek için bir oral gavaj tekniği açıklar. Ötenazi, mideleri kaldırılır, tartılır ve test, vücut ve glandüler gastrik dokuları (Şekil 2) bölgelerinde oluşan 2 eşit yarıya bölünmüş. Glandüler olmayan bölge herhangi bir analizleri gerçekleştirmeden önce kaldırılır.
Hayvanların ba?...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies at JoVE.com

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

Fare modelleri Helicobacter enfeksiyonu ve gastrik patolojiler

Fareler enfeksiyon ve gastrointestinal mikroorganizmalar tarafından neden olduğu hastalıklar çalışmaya bir çok değerli vivo içinde modeli temsil. Burada, bakteriyel kolonizasyon ve Helicobacter pylorifare modelleri histopatolojik değişiklikleri incelemek için kullanılan yöntemleri tarif-hastalığı ile ilgili.

Helicobacter pylori is a gastric pathogen that is present in half of the global population and is a significant cause of morbidity and mortality in ...

Bu yöntem mikrobiyota üyelerinin etkisi hakkında gastroenteroloji alanında anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir, özellikle cins Helicobacter olanlar, inflamasyon ve kanser. Bu tekniğin en büyük avantajı, helicobacter enfeksiyonunun incelenmesine ve fizyolojik koşullar altında mide üzerindeki etkisine olanak sağlamasıdır. Bu tekniğin sonuçları, Helicobacter enfeksiyonunun önlenmesi veya ortadan kaldırılması veya antibiyotikler, ilaçlar veya aşılar da dahil olmak üzere sonuçları için tedavilerin geliştirilmesine yönelikdir.Bu yöntemler Helicobacter enfeksiyonunun patogenezine özgü bir içgörü sağlar. Ancak, tekniklerin birkaç diğer gastrointestinal patojenlerin çalışmaya adapte edilebilir. Genel olarak, bu yönteme yeni bireyler farelerde enfeksiyon kurma yeteneğine sahip bir bakteriyel inoculum hazırlanması ile mücadele edecek.Helicobacter izole lerinin, yoğun bir alt kültürden in vitro geçirmiş olmayan fare kolonileştirme suşları olarak bilinmesi zorunludur. Buna ek olarak, bu suşlar için in vitro alt kültürlerin sayısı kaydedilmelidir. 15 mililitrelik polistiren tüplere bakteriyel süspansiyonlar ekleyin ve her kültürden 10 ila 20 mikrolitrelik damlacıkları tek tek cam mikroskop slaytlarına aktarmak için plastik bir döngü kullanın.Daha sonra, faz kontrastlı mikroskopi altında bakterilerin canlılığını ve hareketliliğini 100 kat daha fazla büyütmede değerlendirin. Bakterilerin çoğunluğu basilşeklinde ise sadece H.pylori inocula kullanın. H.felis inocula öncelikle sarmal şekilli bakteriler içermelidir.Ve inocula'yı tek kullanımlık, tek kullanımlık, mililitreşileşlere yükleyin. Her şırıngayı 23 kalibrelik bir iğneyle donatın ve her iğneye tek kullanımlık polietilen kateter takmak için plastik parafin film kullanın. Daha sonra, altı ila sekiz haftalık spesifik patojensiz ve Helicobacter içermeyen fareyi boyun ve kuyruğun ensesine elle dizginler ve açık çenenin ortasına bir kateter yerleştirin.Kateteri yemek borusuna doğru bir kateterde yönlendirin, farenin boynunu uzatarak yemek borusundan mideye ve trakeadan uzaklaşın, kateterin çoğu veya tamamı artık görünmez olana ve bir direnç hissedilene kadar. Sonra, en iyi kolonizasyon ve hastalık patolojisi sağlamak için beşinci bakterilere en az bir kez 10 teslim. Deneyin sonunda, mide eksizyonu için karın boşluğu açmak için ince, kavisli makas kullanın.Büyük eğrilik boyunca mide kesin ve yavaşça herhangi bir artık gıda kaldırmak için yıkama başına taze PBS bir 50 mililitrelik tüp iki kez organ yıkayın. İkinci yıkamadan sonra, ıslak ağırlığı kaydetmek için bir katranlı, altı santimetre, plastik Petri çanak içine doku yerleştirin. Midedüzleştirme sonra, antrum oluşan iki eşit doku parçaları halinde sagittally örnek ikiye bölün, vücut, ve non-glandüler forestomach bölgeleri.Non-glandüler bölge çıkarın ve planlanan downstream analizi için uygun çözüm doku parçası depolamadan önce her midenin yarısı tartMak. Mide dokusunun diğer yarısını %10 formalin içeren 15 mililitrelik konik bir tüpe ekleyin ve 10 saniye sonra tüplerin üst taraflarına dokuları düzleştirmek. Dokular tüp duvarlarına yapıştırılmış hale geldiğinde, en az 24 saat boyunca formalin örnekleri yeniden batırın.Midede enfeksiyon sonrası canlı H.pylori sayısını saymak için, BHI'de depolanan mide örneklerini homojenize eder ve ortaya çıkan gastrik homojenlerin taze, steril et suyunda seri seyreltmeler gerçekleştirir. Önceden kurutulmuş at kanı agar, veya HBA, plakalar üç veya dört segmente ek antibiyotikler ile takviye bölmek ve Miles ve Misra tekniğinin bir adaptasyon kullanarak, her agar plaka bir segment üzerine her mide homojen seyreltme 10 ila 100 mikrolitre ekleyin. Steril, plastik döngüler ile homojenleri yayın ve plakaların kurumasını bekleyin.Daha sonra, su petri çanak ve bir gaz paketi içeren anaerobe gaz kavanoz ters bir pozisyonda plakaları yerleştirin. Sonra, kavanozları 37 derecede 4-7 gün kuluçkaya yatırın. Koloniler gözlemlenebildiği zaman, 10 ila 100 izole koloni içeren segmentleri sayısal.Ötenaziden sonra mide hayvanlardan hasat edilir ve tartılır. Non-glandüler bölge kaldırılır, ve mide antrum ve vücut oluşan iki eşit yarıya ayrılır. Başarılı kolonizasyon genellikle hba plakaları üzerine çizgili gastrik homojenatlardan bireysel kolonilerin canlı sayma ve sonraki numaralandırma gerçekleştirerek doğrulanır.Fare mide mikrobiyotası veya çok sayıda H.pylori kolonisinden gelen kirletici bakterilerin varlığının H.pylori CPU'ların numaralandırılmasını zorlaştırabileceğini unutmayın. Alternatif olarak, PCR H.felis ve H.pylori ureB genlerinin 325-baz çifti bölgeye yönelik özel doğrulanmış astarlar kullanarak enfeksiyonu doğrulamak için kullanılabilir. Bu temsili deneyde, yabani tip C57 Black-6 fareler, H.felis enfeksiyonu sonrası altı ay hiperplazi ve bez atrofisi de dahil olmak üzere orta derecede inflamasyon belirtileri ve submukozanın hücresel infiltrasyonu gösterdi.Daha şiddetli inflamasyon nakavt farelerde aynı anda gözlenir, lenfoid foliküllerin ek varlığı hücresel infiltratlar yakın gözlenen ile. H.felis bakterileri de enfekte fare mide dokusunun Giemsa lekeli bölümlerinde görselleştirilmiş olabilir. Bu prosedürü takiben, Helicobacter enfeksiyonu sırasında indüklenen konak yanıtlarının türleri hakkında ek soruları yanıtlamak için kantitatif PCR, immünohistokimya veya immünoresans gibi diğer yöntemler de uygulanabilmektedir.Bu teknik, gelişiminden sonra mikrobiyoloji ve gastroenteroloji alanında araştırmacıların Helicobacter pylori'nin mide hastalığındaki nedensel rolünü keşfetmelerinin önünü açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, helicobacter türleri ile farelere nasıl tekrar bulaştıracağınız ve enfeksiyonla ilişkili patolojiyi nasıl inceleyeceğiniz konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bu protokolde kullanılan Helicobacter suşlarının bulaşıcı olduğunu unutmayın ve bu nedenle bu bakterilerle çalışırken her zaman standart biyogüvenlik prosedürleri izlenmelidir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Mouse Models Of Helicobacter Infection And Gastric Pathologies

Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection

Transüretral İndüksiyon Fare İdrar Yolu Enfeksiyonu

Uropathogenic bacterial strains of interest are grown on agar. Generally, uropathogenic E. coli (UPEC) and other strains can be grown overnight on ...

Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

Tanı Laboratuvarı Sıçanlar ve Fareler Ecto-Endoparasites

Internal and external parasites remain a significant concern in laboratory rodent facilities, and many research facilities harbor some parasitized ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

Kimerik fare modellerinde Rekombinant Grip aşıların burun içinde yoluyla mukozal bağışıklık Okumak

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...

Organoids as Model for Infectious Diseases: Culture of Human and Murine Stomach Organoids and Microinjection of Helicobacter Pylori

Enfeksiyon Hastalıkları Modeli Olarak Organoids: Helicobacter Pylori ve İnsan Kültür ve kemirgen Mide Organoids ve Mikroenjeksiyon

Recently infection biologists have employed stem cell derived cultures to answer the need for new and better models to study host-pathogen interactions. ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

intra-trakeal İdaresi<em&gt; Haemophilus influenza</em&gt; Fare Modelleri Havayolu inflamasyonu Eğitim için

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

Tek adımlı olumsuz Kromatografik arıtma<em&gt; Helicobacter pylori</em&gt; Nötrofil-aktive protein aşın<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Toplu Modunda

Helicobacter pylori neutrophil-activating protein (HP-NAP) is a major virulence factor of Helicobacter pylori (H. pylori). It plays a critical role in H. ...

Mouse- and Human-derived Primary Gastric Epithelial Monolayer Culture for the Study of Regeneration

Fare ve insan elde edilen birincil Gastrik epitel Monolayer kültür yenilenme çalışmaları için

In vitro studies of gastric wound repair typically involves the use of gastric cancer cell lines in a scratch-wound assay of cellular proliferation and ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Kafa içi Subarachnoidal rota için soruşturma rolleri streptokok suis biyofilmler menenjit bir fare enfeksiyon modeli içinde enfeksiyon

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

CRISPR-Cas9-based Genome Engineering to Generate Jurkat Reporter Models for HIV-1 Infection with Selected Proviral Integration Sites

HIV-1 enfeksiyonu seçili Proviral tümleştirme siteleri ile Jurkat muhabir modelleri oluşturmak için CRISPR-Cas9-esaslı genom mühendislik

Human immunodeficiency virus (HIV) integrates its proviral DNA non-randomly into the host cell genome at recurrent sites and genomic hotspots. Here we ...

Chronic, Acute, and Reactivated HIV Infection in Humanized Immunodeficient Mouse Models

Humanized Immunoficient Mouse Modellerinde Kronik, Akut ve Yeniden Aktive HIV Enfeksiyonu

Humanized NOD/SCID/IL-2 receptor &#947;-chainnull mice recapitulate some features of human immunity, which can be exploited in basic and pre-clinical ...