Name: ex vivo infection of human lymphoid tissue and female genital mucosa with human immunodeficiency virus 1 and histoculture
Uploaded: 2018-10-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Infection of Human Lymphoid Tissue and Female Genital Mucosa with Human Immunodeficiency Virus 1 and Histoculture at JoVE.com

이 작품은 재단 Blanceflor 본 콤 파 니 비시 옛 Bildt (http://blanceflor.se/), 에이즈 (http://www.aidsfond.se/, 참고 FOa2014-0006)와 피코 안드레아 전자 리비 Lorini (http에 대하여 재단 스웨덴 의사에서 교부 금에 의해 지원 되었다 : / / fondazionelorini.it/) 안드레아 Introini에.

인간의 조직의 컬렉션에 대 한 프로토콜 로컬 관할 당국에 의해 윤리적인 승인을 요구할 수 있습니다. 편도 선 수술, 자 군 절제 등 지정 된 수술의 경우는 표본은 연구 목적을 위해 특별히 수집 하 고 연구에 여겨진다 인간 대상 연구 (건강의 국가 학회. 인간 주제에 연구입니다. https://humansubjects.nih.gov/walkthrough-investigator#tabpanel11)입니다. 그러나, 조직 기증자 개인 및 의료 데이터를 가져오기 (예<...

<ol>
	<li>Grivel, J. C., Margolis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+human+tissue+explants+to+study+human+infectious+agents.">Use of human tissue explants to study human infectious agents.</a> Nature protoc. 4 (2), 256-269 (2009).</li><li>Glushakova, S., Grivel, J. C., Fitzgerald, W., Sylwester, A., Zimmerberg, J., Margolis, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+the+HIV-1+phenotype+switch+as+a+causal+factor+in+acquired+immunodeficiency.">Evidence for the HIV-1 phenotype switch as a causal factor in acquired immunodeficiency.</a> Nat Med. 4 (2), 346-349 (1998).</li><li>Dezzutti, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+and+human+mucosal+tissue+models+to+study+HIV+biomedical+interventions:+can+we+predict+success.">Animal and human mucosal tissue models to study HIV biomedical interventions: can we predict success.</a> J Int AIDS Soc. 18 (1), 20301 (2015).</li><li>Lederman, M. M., Margolis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lymph+node+in+HIV+pathogenesis.">The lymph node in HIV pathogenesis.</a> Semin Immunol. 20 (3), 187-195 (2008).</li><li>Chun, T. W., Moir, S., Fauci, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+reservoirs+as+obstacles+and+opportunities+for+an+HIV+cure.">HIV reservoirs as obstacles and opportunities for an HIV cure.</a> Nat Immunol. 16 (6), 584-589 (2015).</li><li>Biancotto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+induced+activation+of+CD4++T+cells+creates+new+targets+for+HIV-1+infection+in+human+lymphoid+tissue+ex+vivo.">HIV-1 induced activation of CD4+ T cells creates new targets for HIV-1 infection in human lymphoid tissue ex vivo.</a> Blood. 111 (2), 699-704 (2008).</li><li>Van Laar, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+secretion+of+immunoglobulin+by+long-lived+human+tonsil+plasma+cells.">Sustained secretion of immunoglobulin by long-lived human tonsil plasma cells.</a> Am J Pathol. 171 (3), 917-927 (2007).</li><li>Introini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seminal+plasma+induces+inflammation+and+enhances+HIV-1+replication+in+human+cervical+tissue+explants.">Seminal plasma induces inflammation and enhances HIV-1 replication in human cervical tissue explants.</a> PLoS Pathog. 13 (5), 1006402 (2017).</li><li>Grivel, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+CCR5-+but+not+CXCR4-tropic+HIV-1+in+lymphoid+tissue+by+human+herpesvirus+6.">Suppression of CCR5- but not CXCR4-tropic HIV-1 in lymphoid tissue by human herpesvirus 6.</a> Nat Med. 7 (11), 1232-1235 (2001).</li><li>Rollenhagen, C., Lathrop, M. J., Macura, S. L., Doncel, G. F., Asin, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+virus+type-2+stimulates+HIV-1+replication+in+cervical+tissues:+implications+for+HIV-1+transmission+and+efficacy+of+anti-HIV-1+microbicides.">Herpes simplex virus type-2 stimulates HIV-1 replication in cervical tissues: implications for HIV-1 transmission and efficacy of anti-HIV-1 microbicides.</a> Mucosal Immunol. 7 (5), 1165-1174 (2014).</li><li>Lisco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acyclovir+is+activated+into+a+HIV-1+reverse+transcriptase+inhibitor+in+herpesvirus-infected+human+tissues.">Acyclovir is activated into a HIV-1 reverse transcriptase inhibitor in herpesvirus-infected human tissues.</a> Cell Host Microbe. 4 (3), 260-270 (2008).</li><li>Vanpouille, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+common+anti-cytomegalovirus+drug,+ganciclovir,+inhibits+HIV-1+replication+in+human+tissues+ex+vivo.">A common anti-cytomegalovirus drug, ganciclovir, inhibits HIV-1 replication in human tissues ex vivo.</a> AIDS. 31 (11), 1519-1528 (2017).</li><li>Andrei, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+tenofovir,+a+microbicide+effective+against+HIV,+inhibits+herpes+simplex+virus-2+replication.">Topical tenofovir, a microbicide effective against HIV, inhibits herpes simplex virus-2 replication.</a> Cell Host Microbe. 10 (4), 379-389 (2011).</li><li>Greenhead, P., Hayes, P., Watts, P. S., Laing, K. G., Griffin, G. E., Shattock, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parameters+of+human+immunodeficiency+virus+infection+of+human+cervical+tissue+and+inhibition+by+vaginal+virucides.">Parameters of human immunodeficiency virus infection of human cervical tissue and inhibition by vaginal virucides.</a> J Virol. 74 (12), 5577-5586 (2012).</li><li>Saba, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+sexual+transmission:+early+events+of+HIV-1+infection+of+human+cervico-vaginal+tissue+in+an+optimized+ex+vivo+model.">HIV-1 sexual transmission: early events of HIV-1 infection of human cervico-vaginal tissue in an optimized ex vivo model.</a> Mucosal Immunol. 3 (3), 280-290 (2010).</li><li>Introini, A., Vanpouille, C., Lisco, A., Grivel, J. C., Margolis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-7+facilitates+HIV-1+transmission+to+cervico-vaginal+tissue+ex+vivo.">Interleukin-7 facilitates HIV-1 transmission to cervico-vaginal tissue ex vivo.</a> PLoS Pathog. 9 (2), 1003148 (2013).</li><li>Biancotto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+highly+sensitive+and+dynamic+immunofluorescent+cytometric+bead+assay+for+the+detection+of+HIV-1+p24.">A highly sensitive and dynamic immunofluorescent cytometric bead assay for the detection of HIV-1 p24.</a> J Virol Methods. 157 (1), 98-101 (2009).</li><li>Lisco, A., Vanpouille, C., Margolis, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=War+and+peace+between+microbes:+HIV-1+interactions+with+coinfecting+viruses.">War and peace between microbes: HIV-1 interactions with coinfecting viruses.</a> Cell Host Microbe. 6 (5), 403-408 (2009).</li><li>Keele, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+transmitted+and+early+founder+virus+envelopes+in+primary+HIV-1+infection.">Identification and characterization of transmitted and early founder virus envelopes in primary HIV-1 infection.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (21), 7552-7557 (2008).</li><li>Pudney, J., Quayle, A. J., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+microenvironments+in+the+human+vagina+and+cervix:+mediators+of+cellular+immunity+are+concentrated+in+the+cervical+transformation+zone.">Immunological microenvironments in the human vagina and cervix: mediators of cellular immunity are concentrated in the cervical transformation zone.</a> Biol Reprod. 73 (6), 1253-1263 (2005).</li><li>Ganor, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Within+1h,+HIV-1+uses+viral+synapses+to+enter+efficiently+the+inner,+but+not+outer,+foreskin+mucosa+and+engages+Langerhans-T+cell+conjugates.">Within 1h, HIV-1 uses viral synapses to enter efficiently the inner, but not outer, foreskin mucosa and engages Langerhans-T cell conjugates.</a> Mucosal Immunol. 3 (5), 506-522 (2010).</li><li>Cavarelli, M., Foglieni, C., Rescigno, M., Scarlatti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R5+HIV-1+envelope+attracts+dendritic+cells+to+cross+the+human+intestinal+epithelium+and+sample+luminal+virions+via+engagement+of+the+CCR5.">R5 HIV-1 envelope attracts dendritic cells to cross the human intestinal epithelium and sample luminal virions via engagement of the CCR5.</a> EMBO Mol Med. 5 (5), 776-794 (2013).</li><li>Cummins, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+testing+of+candidate+topical+microbicides+for+anti-human+immunodeficiency+virus+type+1+activity+and+tissue+toxicity+in+a+human+cervical+explant+culture.">Preclinical testing of candidate topical microbicides for anti-human immunodeficiency virus type 1 activity and tissue toxicity in a human cervical explant culture.</a> Antimicrob Agents Chemother. 51 (5), 1770-1779 (2007).</li><li>Abner, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+colorectal+explant+culture+to+evaluate+topical+microbicides+for+the+prevention+of+HIV+infection.">A human colorectal explant culture to evaluate topical microbicides for the prevention of HIV infection.</a> J Infect Dis. 192 (9), 1545-1556 (2005).</li><li>Saba, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Productive+HIV-1+infection+of+human+cervical+tissue+ex+vivo+is+associated+with+the+secretory+phase+of+the+menstrual+cycle.">Productive HIV-1 infection of human cervical tissue ex vivo is associated with the secretory phase of the menstrual cycle.</a> Mucosal Immunol. 6 (6), 1081-1090 (2013).</li></ol>

인간의 조직 사용 explants 에이즈-1 감염의 연구는 전통적인 bi 차원 및 monotypic 실험 시스템 1 차 셀 또는 셀 라인, 세포 상호 작용 재현 하 그들의 뛰어난 능력 때문에 이점을 제공 하 고 휴대 기능 vivo에서그들은 (예를 들어, cytokine 생산). 그럼에도 불구 하 고, 편도 선 및 자 궁 경부 조직 수, 및 HIV 대상 셀1,16의 phenotypic와 기능적 특성 등 여러 ...

여기 언급으로 종래의 monotypic bi 차원 세포 배양 조직을 구성 하는 세포 유형의 큰 다양성 및 기관 간의 공간 및 기능 통신에 대 한 계정을 하지 않습니다. 이 점은 질병의 실험 모델에 대 한 파라마운트 중요성의 방해가 homeostatic 세포 상호 작용은 모든 병 리의 운전 요인. 조직 explants 그들은 vivo에서, 비록 제한 된 양의 시간1대는 cytoarchitecture와 기관의 많은 중요 한 기능적 측면을 유지 하기 때문에 건강 및 인 간에 있는 질병을 모델링 하기 위한 주요 이점을 제공 합니다. 예를 들어 디프테리아 사망 toxoid 등 파상풍 사망 toxoid, 회 항으로 비보 전 도전 시 편도 선 조직 항 원 특정 항 체2의 활발 한 생산 응답합니다. 어떤 다른 비보 전 모델 처럼, histoculture는 그것의 자신의 제한이: 간 기증자, 조직 분극, 제한 된 조직 생존, 변화와 confocal 현미경 검사 법1의 깊이 넘어 셀 모니터링에 어려움. 그럼에도 불구 하 고, 인간의 조직 explants 호스트 병원 체 상호 작용 및 잠재적인 치료 내정간섭3를 포함 하 여 인간에서 항상성 및 병원 성 면역 과정을 공부 하는 선택의 모델을 남아 있다.
에이즈-1 병의 중요 한 이벤트는 조직에서 자리를 차지할. 생식 기 점 막의 감염 모든 hiv-1 전송 이벤트 전세계4의 대부분을 차지 한다. 림프 조직 급성 감염 시 바이러스 복제의 주요 사이트 latently 감염 세포5의 뜻깊은 수영장을 비호 하 고 그들의 지 속성 치료6을 달성 하기 위해 주요 장애물을 나타냅니다. 인간 림프 및 점 막 조직의 문화 및 비보 전 도전 에이즈-1의 연구에 대 한 격리 된 세포에 따라 기존의 시스템에 비해 몇 가지 장점을 제공 합니다. 예를 들어, 조직 상주 세포 주변 혈액 단 셀1반대로 exogenous 활성화의 부재에 에이즈-1 감염을 지원할 수 있습니다. 림프 조직 explants의 사용 기본 CD4 T 세포 소모즉, 방관자 효과7, 급성 감염의 특징은 몇 가지 주요 메커니즘의 더 나은 이해를 허용 했다. 림프 조직8 여 포 B 셀 등 여성 생식 기 점 막 explants9 상피 구조의 보전이이 사이트에서 에이즈-1 감염의 공간 및 기능 기능을 통합 독특한 기회를 제공 합니다. Antiretrovirals 및 multitarget microbicides12, 의 전 임상 시험에 대 한 뿐만 아니라 모델을 연구 및 herpesvirus 공동 감염10,11, histocultures 성공적으로 사용 되었다 마지막으로, 13 , 14 , 15.
여기, 편도 선 및 낮은 여성의 성 기 요로 (자 궁 경부)에서 점 막 조직에서 얻은 인간 조직 explants의 문화에 대 한 자세한 프로토콜 덮고 비 편광 방식으로 에이즈-1 도전 explant를 조직 해 부 설명 합니다. 문화 지원, 젤라틴 스폰지를 사용 하 여 액체 공기 인터페이스에서 조직 explants의 모세 혈관, 따라서 그들의 자연적인 감퇴를 지연 스폰지를 통해 문화 매체 영양소에 대 한 액세스를 제공 하면서 산소를 공기에 노출을 극대화 합니다. Hiv-1 복제를 평가 하는 우리의 시스템에 가장 즉각적인 방법은 immunoassay 또는 정량 시간이 지남에 explant 문화 매체에 발표 하는 바이러스의 양을 측정 하는 것입니다. 에이즈-1 감염 및 병 인 (예., CD4 T 세포 소모) cytometry 여 조직 explants 대량 RNA/DNA 추출 및 정량, 제자리에서 얼룩, 또는 조직 소화 시 단일 세포 분석 평가할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:941px;" width="940">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:280px;">Gelfoam 12-7 mm Absorbable gelatin sponge&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Pfizer</td>
			<td style="width:141px;">NDC:&#160; 0009-0315-08</td>
			<td>Gelfoam and Spongostan perform equally well in histocuture for both tonsillar and cervical tissue.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:280px;">SPONGOSTAN Standard 70 &#215; 50 &#215; 10 mm Absorbable haemostatic gelatin sponge</td>
			<td>Ferrosan Medical Devices</td>
			<td>MS0002</td>
			<td>Gelfoam and Spongostan perform equally well in histocuture for both tonsillar and cervical tissue.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:280px;">RPMI 1640 with phenol red and glutamine</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>21875034</td>
			<td>To RPMI1640 add MEM non-essential aminoacids, sodium pyruvate, gentamicin, amphotericin B and FBS 15% (v/v) to make culture medium (CM).</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:280px;">Modified Eagle&#39;s medium (MEM) non-essential aminoacids (100x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11140035</td>
			<td>To RPMI1640 add MEM non-essential aminoacids, sodium pyruvate, gentamicin, amphotericin B and FBS 15% (v/v) to make culture medium (CM).</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Sodium pyruvate, 100 mM (100x)&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11360070</td>
			<td>To RPMI1640 add MEM non-essential aminoacids, sodium pyruvate, gentamicin, amphotericin B and FBS 15% (v/v) to make culture medium (CM).</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Gentamicin 50 mg/mL (1000x)&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15750037</td>
			<td>To RPMI1640 add MEM non-essential aminoacids, sodium pyruvate, gentamicin, amphotericin B and FBS 15% (v/v) to make culture medium (CM).</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Amphotericin B 250 &#956;g/mL (100x)&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15290018</td>
			<td>To RPMI1640 add MEM non-essential aminoacids, sodium pyruvate, gentamicin, amphotericin B and FBS 15% (v/v) to make culture medium (CM).</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Fetal bovine serum (FBS)&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>To RPMI1640 add MEM non-essential aminoacids, sodium pyruvate, gentamicin, amphotericin B and FBS 15% (v/v) to make culture medium (CM).</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:49px;width:280px;">Ticarcillin disodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T5639-1G</td>
			<td>Resuspend in sterile cell culture grade water tircacillin disodium (3g) and potassium clavulanate (100mg) and mix to obtain 100 mL of antibiotic solution (100x). Aliquote and store at -20 &#176;C. Avoid repeated freezing and thawing. Supplement CM with antibiotic solution to make CMT.</td>
		</tr>
		<tr height="82">
			<td height="82" style="height:82px;width:280px;">Potassium clavulanate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>33454-100MG</td>
			<td>Resuspend in sterile cell culture grade water tircacillin disodium (3g) and potassium clavulanate (100mg) and mix to obtain 100 mL of antibiotic solution (100x). Aliquote and store at -20 &#176;C. Avoid repeated freezing and thawing. Supplement CM with antibiotic solution to make CMT.</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:280px;">Sterile phosphate buffer saline (PBS) pH 7.4 w/o calcium, magnesium and phenol red</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;">To use for storage and transportation of surgical specimens. PBS can be replaced with another isotonic solution with physiologic pH. Culture medium is best for overnight storage.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Sterile cell culture grade water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Sterile transportation container</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">70% ethanol solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:280px;">Disinfectant solution for biological waste disposal</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Sterile metal forceps or tweezers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Sterile metal scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Sterile flat weighing metal spatula</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Sterile scalpels and blades</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">6-well cell culture plates</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">12-well cell culture plates</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Sterile Petri dish, 100 mm &#215; 20 mm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:280px;">Cell-free HIV-1 viral preparation HIV-1BaL</td>
			<td>NIH AIDS Reagent Program</td>
			<td>510</td>
			<td>The virus should be propagated to generate a stock large enough to perform several experiments. Aliquote virus suspension and store at -80 &#176;C. Avoid repeated freezing and thawing.</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:280px;">Cell-free HIV-1 viral preparation HIV-1LAI.04</td>
			<td>NIH AIDS Reagent Program</td>
			<td>2522</td>
			<td>The virus should be propagated to generate a stock large enough to perform several experiments. Aliquote virus suspension and store at -80 &#176;C. Avoid repeated freezing and thawing.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:280px;">Lamivudine (3TC)</td>
			<td>NIH AIDS Reagent Program</td>
			<td>8146</td>
			<td style="width:345px;">Resuspend in DMSO at 10 mg/ml, aliquote and store at -20 &#176;C. Avoid repeated freezing and thawing.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Biological safety cabinet</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="50">
			<td height="50" style="height:50px;width:280px;">Water-jacketed CO2 incubator, set at 37 &#176;C, 5% CO2, &#8805; 90% humidity</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Water bath set at 37 &#176;C</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:280px;">Sterile 1.5- and 2-mL screw cap tubes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:280px;">Dry bath shaker with heating block for 1.5-mL tubes, set at 37 &#176;C, 300 rpm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:345px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo infection of human lymphoid tissue and female genital mucosa with human immunodeficiency virus 1 and histoculture

Histocultures 허용 인간의 조직 내에서 세포 상호 작용을 공부 하 고 그들은 통제 된 실험실 조건에서 모델 호스트 병원 체 상호 작용을 채택 될 수 있다. 인간의 조직 중 다른 바이러스, 인간 면역 결핍 바이러스 (HIV)의 감염 ex vivo 효능 및 항 바이러스 약물의 독성을 테스트 플랫폼으로 초기 질병 병 인, 조사를 성공적으로 사용 되었습니다. 현재 프로토콜에서 우리가 처리와 에이즈-1 조직 explants 인간의 편도 및 자 궁 경부 거칠어, 감염 약 2 주 동안 액체 공기 인터페이스에 젤라틴 스폰지 위에 문화에서 그들을 유지 하는 방법을 설명 합니다. 이 아닌-편광 culture 설정 조직의 무결성과 기능적 아키텍처의 진보적인 손실의 주요 제한 남아 있지만 문화 매체에 산소, 영양소에 대 한 액세스를 극대화 합니다. 이 메서드는 hiv-1 복제 및 병 인 immunoassays, cytometry, 정량, 등 여러 가지 기술을 사용 하 여 모니터링을 수 있습니다. 중요성, 생리 변화 같은 표본의 다른 지역에서 explants 사이 에서도 조직 기증자, 사이의 실험 결과 영향을 크게 수 있습니다. 결과 재현성을 보장 하기 위해, 그것은 중요 explants, 기술 복제, 조건과 일치 하는 기증자 컨트롤의 적절 한 번호를 사용 하 여 여러 실험에서 데이터를 컴파일할 때 실험적 치료의 결과 정규화 (즉, ., 다른 기증자에서 직물을 사용 하 여 실시) 통계 분석을 위해.

조직 explants에서 hiv-1 복제를 평가 하기 위해 몇 가지 기법을 사용할 수 있습니다. 우리의 표준 읽어 에이즈-1 p24개 그 immunoassay18시간이 지남에 cm에서 발표의 양을 측정 하는 것입니다.
같은 HIV-1 재고의 동일한 inoculum 감염 다른 기증자 로부터 조직 explants는 다른 양의 바이러스 (표 1)를 얻?...

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Ex Vivo Infection of Human Lymphoid Tissue and Female Genital Mucosa with Human Immunodeficiency Virus 1 and Histoculture

인간의 조직 비보 전 인간 면역 결핍 바이러스 (HIV)의 감염 바이러스 병의 귀중 한 3D 모델을 제공합니다. 여기, 우리는 프로토콜 처리 및 조직 표본에서 인간의 편도 에이즈-1 여성 생식 기 거칠어 감염과 액체 공기 인터페이스에 문화에서 그들을 유지 하는 것을 설명 합니다.

전 비보 인간 면역 결핍 바이러스 1와 Histoculture 인간 림프 조직 및 여성 생식 기 점 막의 감염

Histocultures allow studying intercellular interactions within human tissues, and they can be employed to model host-pathogen interactions under ...

이 방법은 HIV 분야에서 가장 영향을 받는 기관 중 2개 내에서 바이러스 전달 및 병인의 결정요인 식별과 같은 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있다. 사실, 주요 고급 운전 질병 진행은 조직에서 일어난다. 감염의 특징 그리고 복잡성은 순환에 있는 세포에 의해 제대로 반영되거나 격리되고 시험관에서 감염됩니다.HIV 병인을 연구하는 전 생체 조직 배양의 주요 장점은 2 ~ 3 주 동안 세포 사이의 원래 의 간격 및 기능적 관계를 유지한다는 것입니다. 우선, CMT의 20~30밀리리터로 100밀리미터 페트리 접시를 채우고, 젤라틴 스폰지를 멸균 포셉을 사용하여 페트리 접시에 옮긴다.양쪽에 스폰지를 적시고 스폰지가 1 분 동안 매체를 흡수 할 수 있습니다. 멸균 주걱을 사용하여 약 2 분 동안 페트리 접시의 바닥에 스폰지를 누릅니다. 멸균 가위를 사용하여 수화 된 젤라틴 스폰지를 약 1 평방 센티미터의 동일한 크기로 자른다.그런 다음 집게를 사용하여 하나의 스폰지 조각을 배양 판의 각 우물에 옮겨 넣습니다. 편도선에 대한 6 웰 플레이트의 각 웰에 CMT의 3 ~ 4 밀리리터를 추가하고 자궁 경부를위한 12 웰 접시에 잘 당 1 밀리리터를 추가합니다. 플레이트를 인큐베이터에 놓고, 37°C, 5%CO2로 설정되며, 조직 이축이 스폰지에 적재될 때까지 습도가 90%보다 크거나 같습니다.수송 용기에서 편도선을 멸균 포셉을 사용하여 CMT 10~20밀리리터를 함유한 100mm 페트리 접시로 옮킨다. 페트리 접시의 뚜껑을 절단 표면으로 사용하여 조직을 해부합니다. 집게로 조직을 부드럽게 잡고, 멸균 메스와 블레이드를 사용하여 각 편도선을 다른 큰 조각으로 자릅니다.집게와 메스를 사용하여 소작, 피 묻은 및 자궁 근종 조직뿐만 아니라 편도선 또는 녹색 갈색 을 포함하는 부품을 제거하십시오. 각 티슈 조각을 두께가 약 2밀리미터 의 조각으로 자른다. 이전 단계에서와 같이 원치 않는 부품을 제거합니다.그런 다음 티슈 슬라이스를 2mm 두께의 스트립으로 자른다. 마지막으로, 2 밀리미터 두께의 블록으로 조직 스트립을 잘라. 해부를 진행하는 동안 조직 건조를 피하기 위해 CMT의 10 ~ 20 밀리리터를 포함하는 새로운 100 밀리미터 페트리 접시로 이양을 옮김.해부의 끝에서, 박을 배스하여 배분 분포를 임의로 한다. 집게를 사용하여 6웰 플레이트에 각 젤라틴 스폰지 위에 9개의 티슈 를 놓고 그 사이의 공간을 허용합니다. 플레이트를 인큐베이터에 반환합니다.일반적으로, 박은 하룻밤 배양된다. HIV접종은 다음날 수행됩니다. 이것은 배양에서 세균 또는 곰팡이 오염이 개발되지 않도록하기 위한 것입니다.또한 세포는 해부 직후 조직 이출을 회귀하는 경향이 있습니다. 파이펫으로 6웰 플레이트에 배지를 흡인하고 소독제 용액이 있는 용기에 버려십시오. 접시를 기울이고 젤라틴 스폰지를 웰의 상부에 부드럽게 밀어 매체가 바닥에 모일 수 있도록 합니다.매체를 흡인하고 폐기합니다. 그런 다음 각 웰에 CMT의 3 ~4 밀리리터를 추가합니다. 이제 37섭씨에서 수조에서 HIV-1 바이러스 제제를 해동하십시오.젤라틴 스폰지에 9 개의 각 의 상단에 바이러스 접종을 피펫. 접시를 인큐베이터에 반환합니다. 페트리 접시의 뚜껑을 절단 표면으로 사용하여 조직을 해부합니다.집게로 조직을 부드럽게 잡고, 자궁 근막의 점막 및/또는 자궁 근막및 자궁 내막과 메스와 칼날로 자궁 근막및 자궁내막을 분리하여 점막의 스트립을 얻습니다. 점막을 2mm 너비의 스트립으로 자른다. 제거 하 고 가능한 한 많은 submucosa를 폐기, 조직의 단지 2 밀리 미터 두께층을 떠나.그런 다음 스트립을 2밀리미터 두께의 블록으로 자른다. 조직을 100mm 페트리 접시에 담기하여 CMT의 10~20밀리리터를 함유하여 해부를 진행하는 동안 조직 건조를 피합니다. 해부의 끝에서, 박을 배스하여 배분 분포를 임의로 한다.멸균 집게로, 멸균 1.5 밀리리터 원추형 튜브로 이불을 옮기. 파이펫을 사용하여 튜브의 모든 매체를 제거합니다. 최적의 결과를 위해, 자궁 경부의 자궁 경부의 내병은 수술 후 가능한 한 빨리 처리되고 감염되어야 합니다, 이상적으로 수술의 날.또는, 조직은 하룻밤 사이에 CMT에 침수저장되고 해부 직후에 감염될 수 있다. 섭씨 37도에서 수조에서 HIV-1 준비를 해동하십시오. 일단 해동되면, 이물질을 포함하는 관으로 바이러스를 전송합니다.튜브를 열셰이커로 옮기고 300rpm에서 흔들리는 섭씨 37도에서 2시간 동안 배양합니다. 30~60분마다 튜브를 몇 번 부드럽게 반전시다. 한편, 멸균 인산염 완충식식염의 우물 당 3 ~ 4 밀리리터와 6 웰 플레이트를 채웁니다.HIV-1을 사용한 배양의 끝에서 파이펫을 사용하여 소독제 용액이 있는 용기에 각기를 포함하는 튜브의 모든 바이러스 준비를 폐기합니다. 그런 다음 집게와 파이펫을 사용하여 PBS를 포함하는 6웰 플레이트로 이물질을 옮기습니다. 실온에서 1분 동안 PBS에서 휴식을 취하도록 허용한 후 PBS를 2~3회 위아래로 부드럽게 배관하여 씻어냅니다.그런 다음 파이펫을 사용하여 소독제 용액을 사용하여 PBS를 용기에 버리십시오. 각 웰에 새로운 PBS의 3 ~4 밀리리터를 추가합니다. 총 세개의 세차재에 대해 두 번 더 반복합니다.조직 탈수를 피하기 위해 스폰지에 각기를 전송하기 직전에 PBS를 폐기하십시오. 이제 집게를 사용하여 각 젤라틴 스폰지 위에 5~8개의 각기를 12웰 플레이트로 옮겨 넣습니다. 접시를 인큐베이터에 반환합니다.파이펫으로 배양 배지 샘플을 수집하고, 영하 80도에서 보관할 수 있도록 멸균 1.5 또는 2 밀리리터 나사 캡 튜브로 전송합니다. 멸균 집게로 조직을 수확하고, 멸균 1.5 또는 2 밀리리터 나사 캡 튜브로 이불을 전달합니다. 실험에서 요구하는 대로 조직 샘플을 처리하거나 저장합니다.파이펫으로 잔류 배양 배지를 잘 흡입하고 소독용 용기에 버려십시오. 접시를 기울이고 젤라틴 스폰지를 웰의 상부에 부드럽게 밀어 매체가 바닥에 모일 수 있도록 한 다음 흡인하고 버릴 수 있습니다. 이제 각 우물에 3~4밀리리터의 배양 배지를 추가합니다.멸균 집게를 사용하여, 인큐베이터에 접시를 반환하기 전에 젤라틴 스폰지에 매체로 떨어졌다 모든 조직 이출을 반환합니다. 문화의 끝에서, 유해 생물학적 처리에 대한 연구소의 규정과 특정 위험 평가에 따라 apposite 용기에 모든 생물학적 폐기물을 폐기하십시오. 기증자 간 가변성은 동일한 바이러스 접종에 감염된 3개의 다른 기증자로부터 자궁 경부 조직을 위해 입증된 바와 같이 조직 박멸 배양 상류제에서 HIV 코어 단백질 p24 개그의 농도에 의해 측정된 HIV-1 복제에 영향을 미칠 수 있다.첫 번째 기증자의 경우, HIV-1 BaL에만 감염된 축종의 배양 배지에서 p24 개그를 축적하는 것은 제품 감염을 명확하게 나타낸다. HIV 복제를 완전히 무효화하는 항레트로바이러스 약물 3TC는 부정적인 대조군으로 사용되었습니다. 3TC 처리된 이종의 배양 배지에서 측정된 p24 개그의 양은 배양 중에 조직 이월에 의해 특별히 흡수되고 방출되는 바이러스 접종의 일부를 나타낸다.두 번째 기증자로부터 의 조직 에서 이식에서, HIV-1 창자 감염은 시간이 지남에 따라 p24 개그의 농도에 꾸준한 감소귀착, 감염의 중단을 나타내는 또는 p24 개그 정량화에 의해 검출 할 수 없습니다. 이것은 유사한 HIV 복제 역학을 보여주는 3TC 처리한 통제 각질에 의해 확인됩니다. 조직의 감염은 세 번째 기증자에서 이식 바이러스의 작은 금액을 산출.이 경우, 3TC 치료를 음의 대조군으로 포함하면 드 노보 바이러스 생산에 감염의 존재를 확인할 필요가 있다. 이 절차에 따라, 유동 세포측정또는 면역스테인링과 같은 분석 방법은 관심 있는 세포 집단의 표현형, 비율 또는 조직 위치에 대한 질문에 답하기 위해 다른 시점에서 수행될 수 있다. 실험을 설계할 때, 기증자 간 가변성이 선택한 실험 적 판독에 미치는 영향을 추정하는 것이 중요합니다.기증자 간 가변성은 엄격한 임상 및 실험 적 포함 및 배제 기준을 설정하여 부분적으로 제어 될 수 있습니다. Ex vivo 인간 조직 배양은 백신 바이러스 또는 헤르페스 바이러스와 같은 HIV 이외의 미생물의 발병을 연구하는 데 사용될 수 있다. 그(것)들은 또한 항균 독성 및 윤리 연구 결과를 위한 전임상 플랫폼으로 이용되었습니다.건강한 개인조차도 모든 인간 표본이 전염성 요원을 수용 할 수 있다는 점에 유의하십시오. 귀하와 동료의 안전을 보장하기 위해 인간 조직을 처리하기 위해 적절한 교육, 교육 및 보호가 필요합니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Ex Vivo Infection of Human Lymphoid Tissue and Female Genital Mucosa with Human Immunodeficiency Virus 1 and Histoculture

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

효율에 대한 HLA - IG 기반 인공 항원 제시 세포 예 생체내</em인간 CTL의> 확장

CTL with optimal effector function play critical roles in mediating protection against various intracellular infections and cancer. However, individuals ...

연구

면역학 및 감염병학

Isolation of Lymphocytes from Mouse Genital Tract Mucosa

마우스 성기 요로 점막에서 림프구의 분리

Mucosal surfaces, including in the gastrointestinal, urogenital, and respiratory tracts, provide portals of entry for pathogens, such as viruses and ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

HIV-1 감염 CD4의 타고난 감지 평가<sup&gt; +</sup&gt;를 사용하여 형질 수지상 세포에 의한 T 세포<em&gt; 예 생체 내</em&gt; 공동 문화 시스템.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

표현형 분석 및 대한 인간의 피부에서 림프구 분리<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 세포 배양

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

Pairwise Growth Competition Assay for Determining the Replication Fitness of Human Immunodeficiency Viruses

인간 면역 결핍 바이러스의 복제 피트니스를 결정하기위한 인접 쌍 성장 경쟁 분석

In vitro fitness assays are essential tools for determining viral replication fitness for viruses such as HIV-1. Various measurements have been used to ...

Ex Vivo Infection of Murine Epidermis with Herpes Simplex Virus Type 1

Ex Vivo Infection of Murine Epidermis with Herpes Simplex Virus Type 1

단순 포진 바이러스 1 형과 쥐 표피의 생체 감염

To enter its human host, herpes simplex virus type 1 (HSV-1) must overcome the barrier of mucosal surfaces, skin, or cornea. HSV-1 targets keratinocytes ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

를 사용하여 림프구 혈관 외로 유출 분석<em&gt; 체외</em&gt; 인간의 혈액 - 뇌 장벽의 모델

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

Optical Screening of Novel Bacteria-specific Probes on Ex Vivo Human Lung Tissue by Confocal Laser Endomicroscopy

Optical Screening of Novel Bacteria-specific Probes on Ex Vivo Human Lung Tissue by Confocal Laser Endomicroscopy

새로운 박테리아 특정의 광학 검사 Confocal 레이저 Endomicroscopy에 의해 전 비보 인간의 폐 조직에 프로브

Improving the speed and accuracy of bacterial detection is important for patient stratification and to ensure the appropriate use of antimicrobials. To ...