Name: mouse adipose tissue collection and processing for rna analysis
Uploaded: 2018-01-31T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Adipose Tissue Collection and Processing for RNA Analysis at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por Canadá de Diabetes.

Cuidado de los ratones utilizados en los procedimientos de cumplimiento de normas para el cuidado y uso de animales de experimentación establecida por el Consejo Canadiense para la protección de los animales. Todos los procedimientos fueron aprobados por la Universidad de cuidado Animal y uso en el centro de investigación CHUM.
1. autopsia y colección de tejido adiposo de los ratones macho
<ol><li>Hacer grupos experimentales según objetivos del estudio. En este estudio, se recolectaron ...

<ol>
	<li>Guh, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incidence+of+co-morbidities+related+to+obesity+and+overweight:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">The incidence of co-morbidities related to obesity and overweight: a systematic review and meta-analysis.</a> BMC. 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J., Walsh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipokines:+a+link+between+obesity+and+cardiovascular+disease.">Adipokines: a link between obesity and cardiovascular disease.</a> J Cardiol. 63 (4), 250-259 (2014).</li><li>Taylor, S. C., Mrkusich, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+state+of+RT-quantitative+PCR:+firsthand+observations+of+implementation+of+minimum+information+for+the+publication+of+quantitative+real-time+PCR+experiments+(MIQE).">The state of RT-quantitative PCR: firsthand observations of implementation of minimum information for the publication of quantitative real-time PCR experiments (MIQE).</a> J Mol Microbiol Biotechnol. 24 (1), 46-52 (2014).</li><li>Hummon, A. B., Lim, S. R., Difilippantonio, M. J., Ried, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+solubilization+of+proteins+after+TRIzol+extraction+of+RNA+and+DNA+from+patient+material+following+prolonged+storage.">Isolation and solubilization of proteins after TRIzol extraction of RNA and DNA from patient material following prolonged storage.</a> Biotechniques. 42 (4), 467-470 (2007).</li></ol>

Siguiente HF-dieta alimentación, encontraron a ratones obesos tengan más cuerpo y peso del tejido adiposo blanco en comparación con ratones alimentados con una dieta de N. RNA extraído con fenol solución rindió muestras de buena pureza. La leptina es un adipoquinas producidas principalmente por el tejido adiposo y se sabe que correlacionan positivamente con la masa grasa16. Como se esperaba, la expresión de mRNA de leptina aumentó en ratones obesos en concomitancia con su masa grasa.
<...

La obesidad es una epidemia en todo el mundo que puede conducir a complicaciones tales como tipo 2 diabetes1. Modelos animales obesos y modificados genéticamente inducida por la dieta se utilizan con frecuencia para la investigación en la obesidad y sus complicaciones asociadas. Tradicionalmente, el tejido adiposo blanco es conocido como un compartimiento de almacenamiento para el exceso de energía y sobre todo se compone de lípidos y tejido adiposo marrón convierte la energía en calor2,3. Tejido adiposo es dinámico y ampliará y encogen dependiendo de muchos factores como el consumo de alimentos y actividad física. Por lo tanto, para determinar los factores que contribuyen a estos cambios, manejo y colección adecuada de tejido adiposo son necesarios4.
Entre los blancos de los tejidos adiposos, está generalmente aceptado que los depósitos de grasa subcutáneos y viscerales tienen diferentes propiedades tales como la localización anatómica y función2,5. En consecuencia, para evitar resultados contradictorios o gran variabilidad, atención debe ser tomado para evitar la contaminación cruzada entre los diferentes depósitos de grasa al recoger cojines gordos.
Por otra parte, hay tres grandes retos cuando aislar RNA o proteína del tejido adiposo de ratones blancos. En primer lugar, recogiendo los cojines gordos en ratones obesos no es tarea fácil como la frontera que separa los diferentes depósitos de grasa blanco no siempre es clara, a diferencia de otros órganos como los riñones y el corazón6. En segundo lugar, debido al contenido alto de lípidos del tejido adiposo, durante el aislamiento de ARN o proteína, una capa de lípidos flota en la parte superior y evita el acceso directo a la muestra. En tercer lugar, a diferencia del tejido adiposo marrón u otros tejidos, tejido adiposo blanco tiene mucho menor contenido de RNA y proteínas y esto es de gran preocupación al usar ratones jóvenes, ratones alimentaron con una dieta normal (N) y ratones que tienen masas de grasa bajo (es decir, KO modelos, tratamiento con fármacos, ejercen entrenamiento, etcetera.) 7 , 8.
Por lo tanto, es fundamental elegir el método adecuado para aislar el ARN del tejido adiposo. Métodos alternativos a la extracción de fenol/cloroformo son kits comerciales. Se basan típicamente en un paso de extracción de fenol inicial, seguido de purificación de RNA en una columna9. Sin embargo, los kits son típicamente más caros y dan muestras de menor rendimiento, mientras que la calidad del RNA puede ser variable pero mucho menos tiempo. Sin embargo, una de las mayores ventajas para la extracción del fenol/cloroformo solución descrita aquí es la posibilidad de aislar RNA, DNA y proteína de una sola muestra de10. Desde cojines gordos ratones son generalmente pequeñas y dan pequeñas cantidades de RNA y proteínas (especialmente en modelos de ratón magro), estos protocolos maximizan los datos que uno puede salir de una pequeña muestra.
El objetivo de este trabajo es describir detalladamente un método para garantizar la obtención adecuada de depósitos de tejido adiposo blanco tres ratones, así como cantidad y calidad de aislamiento de RNA. RNA obtenido siguiendo este protocolo se puede utilizar para realizar análisis PCR en tiempo real. Este protocolo no está diseñado para el aislamiento de RNA de adipocitos cultivados de primarias.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1003px;" width="1002">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">1 mL seringes</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">1X TE solution (10 mM Tris-HCl and 1 mM EDTA&#8226;Na2. pH 8.0)</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">22 G needles</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">26 G needles</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">75% Ethanol</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Block heater (dry bath)</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Chloroform</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C2432-500mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">dATP&#160;&#160;&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:189px;">R0141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">dCTP&#160;&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:189px;">R0151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">dGTP&#160;&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:189px;">R0161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">DNase I (1 U/&#181;l)&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:189px;">EN0521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">dTTP&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:189px;">R0171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Faststart Universal SYBR green Master (Rox)</td>
			<td style="width:189px;">Roche</td>
			<td style="width:189px;">4913922001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Faststart universal SYBR green master (Rox) fluorescent dye&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Roche</td>
			<td style="width:189px;">4913914001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Filtered tips</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Forceps&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Instrumentarium</td>
			<td>HB275</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Gauze</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Hammer</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">High fat rodent diet</td>
			<td>Bio-Serv, Frenchtown, NJ</td>
			<td style="width:189px;">F3282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Isopropanol&#160;</td>
			<td>Laboratoire MAT</td>
			<td>IH-0101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:457px;">Leptin forward PCR primer (5&#8217;-GGGCTTCACCCCATTCTGA-3&#8217;) 10 uM</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:457px;">Leptin reverse PCR primer (5&#8217;-GGCTATCTGCAGCACATTTTG-3&#8217;) 10 uM</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Liquid nitrogen</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Maxima Reverse Transcriptase (enzyme and 5x buffer)</td>
			<td style="width:189px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:189px;">EP0742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Nanopure water (referred as ultrapure water)</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Nitrile examination gloves</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Nitrile gloves</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:457px;">Normal rodent diet</td>
			<td style="width:189px;">Harlan Laboratories, Madison, WI</td>
			<td style="width:189px;">Harlan 2018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">P1000 pipetman</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">P2 pipetman</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">P20 pipetman</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">P200 pipetman</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Phenol solution (TRIzol)&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Ambion Life Technologies</td>
			<td style="width:189px;">15598018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Pre-identified aluminium foil</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Quartz spectrophotometer cuvette</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rack for PCR tube strips</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Racks for RT-PCR tube strips</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Random hexamers&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:189px;">58875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:457px;">Real-time PCR Rotor Gene system&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Corbett research</td>
			<td style="width:189px;">RG-3000 Rotor-Gene thermal cycler</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Refrigerated bench-top centrifuge</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">RiboLock RNase Inhibitor&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:189px;">EO0381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">RNase-free 1.5 mL eppendorf tubes</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">RNase-free 1.5 mL screw cap tubes</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RNase-free PCR tube strips (0.2 mL) and caps</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">RNase-free water&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Hyclone</td>
			<td style="width:189px;">SH30538.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">RT-PCR machine</td>
			<td style="width:189px;">Qiagen</td>
			<td style="width:189px;">Rotor-Gene Corbett 3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">RT-PCR tube strips (0.1 mL) and caps</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:457px;">S16 forward PCR primer (5&#8217;-ATCTCAAAGGCCCTGGTAGC-3&#8217;) 10 uM</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:457px;">S16 reverse PCR primer (5&#8217; ACAAAGGTAAACCCCGATCG-3&#8217;) 10 uM</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Spectrophotometer</td>
			<td style="width:189px;">Biochrom</td>
			<td style="width:189px;">Ultrospec 3100 pro</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Stainless steel mortar and pestle</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="77">
			<td height="77" style="height:77px;width:457px;">Surgical pads</td>
			<td style="width:189px;">Home made a foam board wrapped in a disposable absorbent underpad</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Surgical scissors&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Intrumentarium</td>
			<td style="width:189px;">130.450.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Thermal cycler</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Thermal cycler&#160;</td>
			<td style="width:189px;">Biometra</td>
			<td style="width:189px;">Thermocycler</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Vortex mixer</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:457px;">Weighing spatula</td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td style="width:189px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse adipose tissue collection and processing for rna analysis

En comparación con otros tejidos, tejido adiposo blanco tiene un contenido considerablemente menos RNA y proteína para aplicaciones posteriores como PCR en tiempo real y Western Blot, ya que en su mayoría contiene lípidos. Aislamiento de RNA de las muestras de tejido adiposo también es un reto como pasos adicionales son necesarios para evitar estos lípidos. Aquí, presentamos un procedimiento para recoger tres anatómicamente diferentes blancos los tejidos adiposos de los ratones, para procesar las muestras y realizar aislamiento de RNA. Además describimos la síntesis del cDNA y del gene experimentos de expresión usando PCR en tiempo real. El protocolo aquí descrito permite la reducción de la contaminación de pelo y sangre en almohadillas de grasa, así como la contaminación cruzada entre diferentes cojines gordos durante la recogida de tejido del animal. También se ha optimizado para garantizar la adecuada cantidad y calidad del ARN extraído. Este protocolo puede ser ampliamente aplicada a cualquier modelo de ratón donde las muestras de tejido adiposo son requeridas para experimentos de la rutina como PCR en tiempo real pero no está diseñado para el aislamiento de cultivos celulares de adipocitos primarios.

Siguiendo el procedimiento de necropsia, tres tejidos adiposo blanco fueron recogidos y ponderados de los dos grupos de ratones (N y HF alimentados con dieta). Como era de esperar, ratones en la dieta HF habían aumentado peso final y ganancia de peso en comparación con hermanos de camada en dieta de N (tabla 1). Estas observaciones fueron acompañadas por más de un aumento de 2 dobleces en el peso de la PGF, el PRF y el SCS en ratones obesos en comparación con aquello...

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Mouse Adipose Tissue Collection and Processing for RNA Analysis

Colección de tejido adiposo ratón y procesamiento para el análisis de ARN

El objetivo de este trabajo es presentar un procedimiento paso a paso para recoger diferentes tejidos adiposos blancos de ratones, procesar las muestras de grasa y extracto de RNA.

Compared to other tissues, white adipose tissue has a considerably less RNA and protein content for downstream applications such as real-time PCR and ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Experimental Design for Laser Microdissection RNA-Seq: Lessons from an Analysis of Maize Leaf Development

Diseño experimental para microdisección láser RNA-Seq: Lecciones de un análisis del desarrollo de la hoja de maíz

Genes with important roles in development frequently have spatially and/or temporally restricted expression patterns. Often these gene transcripts are not ...

Investigación

Bioquímica

An Efficient Method for the Isolation of Highly Purified RNA from Seeds for Use in Quantitative Transcriptome Analysis

Un método eficiente para el aislamiento de ARN altamente purificada a partir de semillas para uso en el Análisis Cuantitativo de transcriptoma

Plant seeds accumulate large amounts of storage reserves comprising biodegradable organic matter. Humans rely on seed storage reserves for food and as ...

Toeprinting Analysis of Translation Initiation Complex Formation on Mammalian mRNAs

Toeprinting análisis de formación de complejos de iniciación traducción de mRNAs mamíferos

Translation initiation is the rate-limiting step of protein synthesis and represents a key point at which cells regulate their protein output. Regulation ...

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) Strategy

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture CARIC Strategy

Captura e identificación de proteínas de unión a RNA usando Click química asistida por ARN-interactoma capturan (CARIC) estrategia

A comprehensive identification of RNA-binding proteins (RBPs) is key to understanding the posttranscriptional regulatory network in cells. A widely used ...

Rapid Collection of Floral Fragrance Volatiles using a Headspace Volatile Collection Technique for GC-MS Thermal Desorption Sampling

Colección Rápida de Volátiles de Fragancia Floral usando una Técnica de Colección Volátil del Espacio de Cabeza para muestreo de desorción térmica GC-MS

Fragrances of many flower families have been sampled and the volatiles analyzed. Knowing the compounds that make up the fragrances can be an important ...

Studying RNA Interactors of Protein Kinase RNA-Activated during the Mammalian Cell Cycle

Estudio de interactianos de ARN de la proteína quinasa activada por ARN durante el ciclo de la célula mamífera

Protein kinase RNA-activated (PKR) is a member of the innate immune response proteins and recognizes the double-stranded secondary structure of viral ...

Rapid and Cost-Effective RNA Extraction of Rat Pancreatic Tissue

Extracción rápida y rentable de ARN de tejido pancreático de rata

Regardless of the extraction method, optimized RNA extraction of tissues and cell lines are carried out in four stages: 1) homogenization, 2) effective ...

RNA Blot Analysis for the Detection and Quantification of Plant MicroRNAs

Análisis de manchas de ARN para la detección y cuantificación de microARN de plantas

MicroRNAs (miRNAs) are a class of endogenously expressed non-coding, ~21 nt small RNAs involved in the regulation of gene expression in both plants and ...