Name: murine drinking models in the development of pharmacotherapies for alcoholism: drinking in the dark and two-bottle choice
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet, en del af forskning tilskud SC CTSI NIH/NCRR/NCATS - UL1TR000130 (D.L.D.), AA022448 (D.L.D.) og USC School af apoteket.

Alle procedurer beskrevet her er blevet godkendt af institutionelle Animal Care og brug udvalg af University of Southern California Health Sciences Campus.
1. eksperimentel opsætning og montage
<ol><li>Erhverve alle de følgende leverancer og kemikalier før starten af undersøgelsen: mus, bure/metal bur toppe, sengetøj, mad, vand, ethanol, pipets, sipper toppe, shrink wrap, hobbykniv, zip bånd, tape, bunsenbrænder, skala, forlygte.</li>
	<li>Hente C57BL/6J mus, enten fra en kommerciel k...

<ol>
	<li>Litten, R. Z., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery,+Development,+and+Adoption+of+Medications+to+Treat+Alcohol+Use+Disorder:+Goals+for+the+Phases+of+Medications+Development.">Discovery, Development, and Adoption of Medications to Treat Alcohol Use Disorder: Goals for the Phases of Medications Development.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 40 (7), 1368-1379 (2016).</li><li>Grant, B. F., Dawson, D. A., Stinson, F. S., Chou, S. P., Dufour, M. C., Pickering, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+12-month+prevalence+and+trends+in+DSM-IV+alcohol+abuse+and+dependence:+United+States,+1991-1992+and+2001-2002.">The 12-month prevalence and trends in DSM-IV alcohol abuse and dependence: United States, 1991-1992 and 2001-2002.</a> Drug and Alcohol Dependence. 74 (3), 223-234 (2004).</li><li>Sacks, J. J., Gonzales, K. R., Bouchery, E. E., Tomedi, L. E., Brewer, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+and+State+Costs+of+Excessive+Alcohol+Consumption.">National and State Costs of Excessive Alcohol Consumption.</a> American Journal of Preventive Medicine. 49 (5), 73-79 (2015).</li><li>Litten, R. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medications+development+to+treat+alcohol+dependence:+a+vision+for+the+next+decade.">Medications development to treat alcohol dependence: a vision for the next decade.</a> Addiction Biology. 17 (3), 513-527 (2012).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Johnson+Medication+Treatment+of+Different+Types+of+Alcoholism.">Johnson Medication Treatment of Different Types of Alcoholism.</a> American Journal of Psychiatry. 167 (6), 630-639 (2010).</li><li>Litten, R. Z., Wilford, B. B., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+medications+for+the+treatment+of+alcohol+use+disorder:+An+evaluation+of+clinical+efficacy+and+safety.">Potential medications for the treatment of alcohol use disorder: An evaluation of clinical efficacy and safety.</a> Substance Abuse. 37 (2), 286-298 (2016).</li><li>Litten, R. Z., Ryan, M. L., Falk, D. E., Reilly, M., Fertig, J. B., Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+Alcohol+Use+Disorder:+Understanding+Mechanisms+to+Advance+Personalized+Treatment.+Alcoholism:+Clinical+and+Experimental.">Heterogeneity of Alcohol Use Disorder: Understanding Mechanisms to Advance Personalized Treatment. Alcoholism: Clinical and Experimental.</a> Research. 39 (4), 579-584 (2015).</li><li>Schuckit, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Genome-Wide+Search+for+Genes+That+Relate+to+a+Low+Level+of+Response+to+Alcohol.">A Genome-Wide Search for Genes That Relate to a Low Level of Response to Alcohol.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 25 (3), 323-329 (2001).</li><li>Batki, S. L., Pennington, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+Personalized+Medicine+in+the+Pharmacotherapy+of+Alcohol+Use+Disorder:+Targeting+Patient+Genes+and+Patient+Goals.">Toward Personalized Medicine in the Pharmacotherapy of Alcohol Use Disorder: Targeting Patient Genes and Patient Goals.</a> American Journal of Psychiatry. 171 (4), 391-394 (2014).</li><li>Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+frameworks+and+mechanistic+aspects+of+alcohol+addiction:+alcohol+addiction+as+a+reward+deficit+disorder.">Theoretical frameworks and mechanistic aspects of alcohol addiction: alcohol addiction as a reward deficit disorder.</a> Current topics in behavioral neurosciences. 13, 3-30 (2013).</li><li>Yoneyama, N., Crabbe, J. C., Ford, M. M., Murillo, A., Finn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voluntary+ethanol+consumption+in+22+inbred+mouse+strains.">Voluntary ethanol consumption in 22 inbred mouse strains.</a> Alcohol. 42 (3), 149-160 (2008).</li><li>Rhodes, J. S., Best, K., Belknap, J. K., Finn, D. A., Crabbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+simple+model+of+ethanol+drinking+to+intoxication+in+C57BL/6J+mice.">Evaluation of a simple model of ethanol drinking to intoxication in C57BL/6J mice.</a> Physiology &amp; Behavior. 84 (1), 53-63 (2005).</li><li>Thiele, T. E., Navarro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Drinking+in+the+dark"+(DID)+procedures:+A+model+of+binge-like+ethanol+drinking+in+non-dependent+mice.">"Drinking in the dark" (DID) procedures: A model of binge-like ethanol drinking in non-dependent mice.</a> Alcohol. 48 (3), 235-241 (2014).</li><li>Crabbe, J. C., Spence, S. E., Brown, L. L., Metten, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol+preference+drinking+in+a+mouse+line+selectively+bred+for+high+drinking+in+the+dark.">Alcohol preference drinking in a mouse line selectively bred for high drinking in the dark.</a> Alcohol. 45 (5), 427-440 (2011).</li><li>Sprow, G. M., Thiele, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neurobiology+of+binge-like+ethanol+drinking:+Evidence+from+rodent+models.">The neurobiology of binge-like ethanol drinking: Evidence from rodent models.</a> Physiology &amp; Behavior. 106 (3), 325-331 (2012).</li><li>Neasta, J., Hamida, B., Yowell, Q., Carnicella, S., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+mammalian+target+of+rapamycin+complex+1+signaling+in+neuroadaptations+underlying+alcohol-related+disorders.">Role for mammalian target of rapamycin complex 1 signaling in neuroadaptations underlying alcohol-related disorders.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (46), 20093-20098 (2010).</li><li>Huynh, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+development+of+moxidectin+as+a+novel+therapeutic+for+alcohol+use+disorder.">Preclinical development of moxidectin as a novel therapeutic for alcohol use disorder.</a> Neuropharmacology. 113, 60-70 (2017).</li><li>Egli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+experimental+paradigms+and+animal+models+be+used+to+discover+clinically+effective+medications+for+alcoholism.">Can experimental paradigms and animal models be used to discover clinically effective medications for alcoholism.</a> Addiction Biology. 10 (4), 309-319 (2005).</li><li>Huynh, N., Arabian, N., Lieu, D., Asatryan, L., Davies, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+an+Orally+Dissolving+Strip+for+Pharmacological+and+Toxicological+Studies:+A+Simple+and+Humane+Alternative+to+Oral+Gavage+for+Animals.">Utilizing an Orally Dissolving Strip for Pharmacological and Toxicological Studies: A Simple and Humane Alternative to Oral Gavage for Animals.</a> Journal of Visualized Experiments. (109), (2016).</li><li>Yardley, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ivermectin+reduces+alcohol+intake+and+preference+in+mice.">Ivermectin reduces alcohol intake and preference in mice.</a> Neuropharmacology. 63 (2), 190-201 (2012).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li></ol>

Verdensomspændende estimater indikerer, at så mange som 76 millioner mennesker opfylder kriterierne for at berettige en diagnose for alkohol brug lidelse (AUD). Desværre, i øjeblikket farmaceutiske behandlinger er stort set ineffektive og videre udvikling er nødvendigt for at udligne denne kliniske befolkning20behov. Herpå følgende protokol har til formål at lette denne bestræbelse af et eksempel på to af de mest grundlæggende gnaver drikke paradigmer: to-flaske-valg (skal Bekræftes) o...

I sidste 25 plus år, betydelig indsats er blevet sat til at udvikle medicin til behandling af alkohol brug lidelse (AUD)1. Selv om mange fremskridt har gjort, AUD er stadig et stort folkesundhedsproblem, der berører mere end 18 millioner amerikanere, og koster over $220 milliarder årligt2,3. I øjeblikket er der kun tre FDA-godkendt medicin, disulfiram, Naltrexon og acamprosate, som alle har givet inkonsistente resultater i kliniske forsøg og begrænset succes selv når kombineret med psykosociale intervention i klinikken-indstillinger 4 , 5 , 6 , 7.
Den primære årsag til svigt af nuværende AUD terapi er knyttet til den heterogene karakter af AUD8. Mens både miljømæssige og genetiske faktorer bidrager til udviklingen af AUD, arveligheden tegner sig for en anslået 50-60% af risikoen for debut9. Svarende til behandling af depression, det er almindeligt accepteret at patienter lider af AUD vil har brug for en bred vifte af medicin, der er skræddersyet til at opfylde behovene hos hver enkelt patient10.
Klart, der er et presserende behov for mere effektive behandlinger, der ville blive fremmet, hvis den allerede vanskelige og tidskrævende proces for drug discovery blev strømlinet3. Med henblik herpå viser følgende protokol prækliniske anvendeligheden af to gnavere drikke modeller almindeligt anvendt til at undersøge det neurobiologiske grundlaget for AUD11. Mere specifikt metoden indført heri kan vurdere effekten af kandidat forbindelser ved at reducere alkohol forbrug i både "moderat" og "binge drinking" scenarier udnytter to-flaske valg (skal Bekræftes) og drikke i de mørke (DID) paradigmer, henholdsvis. Begge paradigmer undersøge ikke-operant ethanol selvforvaltning, hvorved mus indtage ethanol mundtligt og efter behag, og derfor illustrere høj ansigt og konstruere gyldighed som en model af menneskelige alkoholisme11.
I TBC drikke, også kendt som frit valg drikke, præference drikke, eller sociale drikke, er to flasker af løsning kontinuerligt tilgængelige i burene. En flaske indeholder vand, og det andet indeholder en fortyndet opløsning af ethanol, hvorved koncentrationen af ethanol kan varieres (fx., 5-30% v/v)11,12. Musene har konstant adgang til begge flasker, og derfor kan vælge hvor meget at drikke fra hver flaske.
Denne model vurderer ethanol forbruget af hver mus (g/kg), samt ethanol præference ratio (volumen af ethanol, der forbruges ÷ samlede volumen væske indtaget). Det bruges rutinemæssigt til at sammenligne drikke niveauer på tværs af forskellige stammer af mus, eller efter en bestemt genetisk manipulation (fx., gen knockout eller knockdown) og resultater i blod ethanol koncentrationer (BECs) svarer til hvad der er fundet i mennesker når drikke i moderation13,14.
I DID procedure, 3 timer efter starten på den mørke cyklus, udveksles hjem bur flaske vand med en flaske med 20% (v/v) ethanol opløsning for en begrænset adgang drikke session. De drikker sessioner forekomme som en fortløbende 4-dages cyklus, varig 2 h på dage 1-3 og 4 h på dag 4. Dage 1-3 tjene som en alkohol-tilvænning periode før testning på dag 4. Derfor mus pålideligt vil forbruge nok ethanol for at opnå BECs > 100 mg/dL og som følge heraf udviser adfærdsmæssige virkninger af forgiftning fundet i mennesker, der er lejlighedsdrikkeri13,14,15. Vand adgang er tilgængelig på alle tidspunkter end at drikke session.
Der er flere varianter af begrænset adgang til drikkevand. For eksempel i modellen intermitterende adgang modtage mus to flasker (én indeholdende vand og andre indeholdende 20% (v/v) ethanol) kun på mandag, onsdag og fredag 24 h og 48 h tilbageholdelsesperiode på hverdage og weekender, henholdsvis16. Efter flere ugers intermitterende adgang, musene vil gradvist og eskalere frivilligt drikke niveauer, i sidste ende at nå BECS lig hvad er observeret i DID model. DID, men synes at være den mest almindeligt anvendte model til at vurdere binge-lignende drikke adfærd. Findes andre modeller af intermitterende drikke, men de stole på begrænsning af adgang til mad eller dampe kammer induceret stigninger i frivillig selvforvaltning, hvilket gør dem mindre repræsentant for frivillig menneskelige alkohol forbrug16.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1617px;" width="1616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:483px;">1 L&#160; graduated cylinder</td>
			<td style="width:315px;">VWR</td>
			<td style="width:232px;">https://us.vwr.com/store/product/20935285/marisco-single-scale-cylinder-graduates-john-m-maris-co</td>
			<td style="width:588px;">To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">1 L glass bottle</td>
			<td>Pyrex (Fisher Scientific)</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/pyrex-reusable-media-storage-bottles-12/p-42752</td>
			<td>To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">100 mL graduated cylinder</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimble-chase-kimax-class-a-to-contain-graduated-cylinders-8/p-4369311</td>
			<td>To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Analox</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>One potential method of analyzing DID blood samples is by using the analox machine</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">ball-bearing sipper tubes</td>
			<td>Ancare Corp.</td>
			<td>http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point</td>
			<td>Length: 2.5 inches, Diameter: 5/16 inches, Model: TD100</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">C57BL/6J Mice</td>
			<td>Jackson lab</td>
			<td>https://www.jax.org/strain/000664</td>
			<td>May also come from internal breeding colony</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">disposable serological pipets</td>
			<td>VWR International (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4760455/vwr-disposable-serological-pipets-polystyrene-sterile-plugged</td>
			<td>10 mL, 18 mL, or 25 mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">ethanol, pure, 190 proof (95%), USP, KOPTEC</td>
			<td>Decon Labs (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4542412/ethanol-pure-190-proof-95-usp-koptec</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">heat gun&#160;</td>
			<td>Master Appliances Corp.</td>
			<td colspan="2">http://www.masterappliance.com/master-heat-guns-kits/</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">heat shrink tubing</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Diameter: 3/8 inches</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">industrial knife/blade</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">metal cage plate</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Should be available through the university/institutional vivarium</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">mouse RO water</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Should be available through the university/institutional vivarium</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">portable electronic scale</td>
			<td>Ohaus (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4789377/portable-electronic-cs-series-scales-ohaus</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">red light headlamp</td>
			<td>nyteBright (Amazon)</td>
			<td>https://www.amazon.com/LED-Headlamp-Flashlight-Red-Light/dp/B00R0LMMF8/ref=sr_1_1?ie=UTF8&#38;qid=1499591137&#38;sr=8-1-spons&#38;keywords=red+lamp+headlamp&#38;psc=1</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">silicone stoppers</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">thermometer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-scientific-hygro-thermometer-clock-large-display-2/p-4077232</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">weigh boat</td>
			<td>VWR International (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/16773534/vwr-pour-boat-weighing-dishes</td>
			<td>The lid from a pipete tip box is an appropriate alternative</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine drinking models in the development of pharmacotherapies for alcoholism: drinking in the dark and two-bottle choice

Alkohol brug lidelse (AUD) er et stort problem med mere end en anslået 76 millioner mennesker på verdensplan opfylder de diagnostiske kriterier. Nuværende behandlinger er begrænset til tre FDA-godkendt medicin, der er stort set ineffektive, selv når de kombineres med psykosociale intervention, som det fremgår af høje tilbagefald sats. Som sådan, repræsenterer at søge efter mere roman behandlinger et vigtigt folkesundhedsmæssige mål. Herpå følgende protokol udnytter to simple gnaver drikke modeller for at vurdere de prækliniske effekten af anti-alkohol blyforbindelser: to-flaske valg (skal Bekræftes) og drikke i mørke (DID). Den tidligere tillader mus til frivillig drink i moderation mens sidstnævnte inducerer mus til frivillig forbruge en stor mængde alkohol i en kort periode, der efterligner lejlighedsdrikkeri. Den enkle og høj overførselshastighed karakter af begge disse paradigmer giver mulighed for hurtig screening af farmakologiske stoffer eller til at identificere stammer af mus, der udviser visse frivillige drikkevaner.

I de følgende repræsentative undersøgelser, var sociale drikke modelleret ved hjælp af to-flaske valg (skal Bekræftes) paradigme. Kort havde mus adgang til to flasker af løsning, hvoraf den ene indeholdt vand, og den anden en 10% (v/v) ethanol opløsning. Emner blev senere opdelt og jævnt tildelt drug behandlingsgrupper, moxidectin (MOX) vs saltvand kontrol, således at hver gruppe ville har i gennemsnit ethanol indtagelse niveauer med et minimum af variation.
<p class="jove_co...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice at JoVE.com

Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice

Murine drikke modeller i udviklingen af Pharmacotherapies for alkoholisme: drikker i den mørke og to-flaske valg

Alkohol brug lidelse (AUD) er et stort nationalt sundhedsproblem og udviklingen af mere effektive behandlinger er påkrævet for at udligne behovene hos denne patientgruppe. Herpå udnytter følgende protokol to simple gnaver drikke modeller for at vurdere de prækliniske effekten af anti-alkohol blyforbindelser.

Alcohol Use Disorder (AUD) is a major problem with more than an estimated 76 million people worldwide meeting the diagnostic criteria. Current treatments ...

Det overordnede mål med dette paradigme er at vurdere effektiviteten af en potentiel anti-alkohol stof ved hjælp af gnaver modeller af alkoholbrug lidelse. Alkoholbrug lidelse udgør en stor folkesundhedskrise. Nuværende behandlinger er ineffektive og igangværende præklinisk forskning er nødvendig.Vores protokol giver os mulighed for at vurdere sikkerheden og nytten af en potentiel behandling samt at tage et kig på den underliggende neurobiologi af lidelsen selv. Begynd proceduren ved at opvarme en brugskniv på Bunsen-brænderen. Ved hjælp af denne kniv, skåret omkring en tomme fra toppen og nederste ender af en plastik 18 milliliter serologisk pipette.Næste varm pipetten under en varmepistol. Sæt kuglelejessipperrøret ind i den nederste ende af pipetten. Derefter ved hjælp af en kommercielt tilgængelig krympe wrap pistol, forsegle sipper rør på plads med krympe wrap.Cap off den anden åbning med en silikone prop. Til dyrs tilvænning, ved ankomsten, enkelt hus hver mus i standard polycarbonat polysulfon bur med strøelse, mad og vand og en metal gitter bur top. Begynder på dag fire i en uge enkelt boliger akklimatisering, måle og registrere musens daglige krop og mad vægte.Mål vandindtaget ved hjælp af raderinge sammen med den omvendte flaske for at registrere det højeste punkt i menisken. Når vandindtaget er stabiliseret til plus eller minus 10% variation fra middelværdi af de sidste tre dage, begynde ethanol adgang med enten TBC eller DID. For at udføre TBS, forberede 10% ethanol opløsning i 1, 000 milliliter ved at tilføje 105,3 milliliter af 190 bevis korn ethanol til 894,7 milliliter vand, derefter ryst det grundigt.I betragtning af at ethanol fordamper hurtigt, erstatte opløsningen to gange om ugen. På den første dag i TBC, i hvert bur, tømme en af de to vandflasker og fylde den til randen med frisklavet ethanol opløsning. Da ethanol og vand er vanskeligt at skelne visuelt, mærkes flaskerne tydeligt med deres tilsvarende indhold.Tilføj mere opløsning til vandflasken efter behov. Placer derefter flasken tilbage i buret, og sørg for, at hætten er lukket sikkert og blottet for luftbobler eller lækager fra tuden. Fjern eventuelle luftbobler ved blot at trykke på flasken, så luften kan undslippe flasken.Suppleant placeringen af flasken hver anden dag for at korrigere for konditioneret sted præference relaterede påvirkninger i drikkeaktivitet. Optag ethanol indtag niveau og analysere 10% ethanol indtag og præference ratio. Så snart ethanolindtaget er blevet stabilt, skal du administrere en enkelt kontrolinperitoneal injektion til hver mus under den daglige målingsrutine for at vænne musen til injektion.Når en ethanol baseline med lav variabilitet er genoprettet, opdele musene i kontrol og eksperimentelle grupper ved hjælp af ethanol indtag værdier, således at alle grupper har nogenlunde samme gennemsnitlige ethanol indtag værdier. Begynd daglige stof dosing, enten for en akut eller multi dag varighed. At gennemføre DID, på hver dag af planlagt ethanol adgang, registrere målinger for vandvolumen, fødeindtagelse og kropsvægt og udføre narkotika dosering.Udfør dette i løbet af en forudvalgt tid i løbet af lys cyklus, der er valgt i overensstemmelse med farmakokinetik af lægemidlet, således at forbindelsen nærmer sig den maksimale hjernekoncentration i drikkeperioden. Dernæst forberede 20% ethanol opløsning i 1, 000 milliliter ved at tilføje 210,5 milliliter 190 bevis korn ethanol til 789,5 milliliter vand. Ryst den derefter grundigt.Fyld ethanolflasken før drikkesessionens start, så vandflasken, så snart DID begynder, simpelthen kan udskiftes med alkoholflasken. Under hele DID session, skal du bruge en rødt lys forlygte for ikke at forstyrre dyret. I starten af DID drikke session, som er planlagt til at begynde tre timer i den mørke cyklus før lyset cyklus, registrere mængden af vand for hver mus.Derefter erstatte hver vandflaske med en flaske 20% ethanol opløsning og registrere start ethanol volumen. Læs og optag det endelige ethanolvolumen to timer senere i slutningen af drikkesessionen på dag et til tre og fire timer senere på dag fire. Derefter analysere 20% ethanol indtag.Udskift derefter ethanolflasken med vandflaske og optag vandmængden. Dette tal viser vurderingen af virkningerne af en akut dosis moxidectin på 5 mg/kg på ethanolindtag og præference. En enkelt dosis af moxidectin reducerede alkoholindtagelse betydeligt over 45 % sammenlignet med præ-moxidectin-injektioner og præference på over 30%10%ethanolindtag og præference begge forbliver betydeligt lavere end saltvand dagen umiddelbart efter MOX-behandling.Her, kraftigt lejlighedsdrikkeri blev modelleret ved hjælp af DID procedure. Mus blev administreret saltvandet på dag et til fire med baseline 20% ethanol etableret på dag fire. På dag et til tre af den anden ugentlige cyklus fik alle mus endnu en daglig saltvandsindsprøjtning.Ethanolindtagsværdierne fra dag tre blev derefter brugt til at opdele musene i to grupper, som efterfølgende fik enten en injektion af moxidectin på fem milligram pr. kg eller saltvand på dag fire. Den følgende uge fik alle mus daglige saltvandsinjektninger på dag et til fire, og ethanolindtag blev målt endnu en gang på dag fire. Akut administration af MOX blev analyseret og fundet at reducere alkoholindtag på over 54% sammenlignet med præ-drug injektioner.Husk, at fremtidige eksperimenter ved hjælp af denne protokol skal gøres for at evaluere mekanismen, dosing og toksicitet af et potentielt lægemiddel samt at vurdere dets effektivitet i forhold til de nuværende behandlingsmuligheder.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Segmentering og måling af tykke bind i murine Fedme-modeller vha. X-ray Computed Tomography

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Udvikling af obliterativ bronchiolitis i en musemodel for Orthotopisk lungetransplantation

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

En musemodel af Stent Implantation i halspulsåren for Studiet af Restenosis

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

Development of an Audio-based Virtual Gaming Environment to Assist with Navigation Skills in the Blind

Udvikling af en Audio-based Virtual Gaming Miljø til at hjælpe med Navigation Skills i Blind

Audio-based Environment Simulator (AbES) is virtual environment software designed to improve real world navigation skills in the blind. Using only audio ...

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Tekniske aspekter af Mouse Aortocaval Fistula

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

Indsamling og brydning af spyt DNA til Next Generation Sequencing

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Mus nyretransplantation: modeller af allotransplantatafstødning

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

Udvikling af en Direct Pulp-capping Model for Vurdering af pulpa Sårheling og Reparative Dentin Formation i mus

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is ...