Name: murine drinking models in the development of pharmacotherapies for alcoholism: drinking in the dark and two-bottle choice
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
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Diese Arbeit wurde unterstützt, unter anderem durch Forschung gewährt SC CTSI NIH/NCRR/NCATS--UL1TR000130 (D.L.D.), AA022448 (D.L.D.) und die USC School of Pharmacy.

Alle hier beschriebene Verfahren wurden von den institutionellen Animal Care und Nutzung Ausschüsse des Campus der University of Southern California Health Sciences genehmigt.
1. Versuchsaufbau und Montage
<ol><li>Erwerben alle der folgenden Lieferungen und Chemikalien vor Beginn der Studie: Mäuse, Käfige/Metal Käfig Tops, Einstreu, Nahrung, Wasser, Ethanol, Mehrkanalpipette Sipper Tops, schrumpfen, Wrap, Cuttermesser, Kabelbinder, Klebeband, Bunsenbrenner, Skala, Scheinwerfer.</li>
	<li...

<ol>
	<li>Litten, R. Z., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery,+Development,+and+Adoption+of+Medications+to+Treat+Alcohol+Use+Disorder:+Goals+for+the+Phases+of+Medications+Development.">Discovery, Development, and Adoption of Medications to Treat Alcohol Use Disorder: Goals for the Phases of Medications Development.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 40 (7), 1368-1379 (2016).</li><li>Grant, B. F., Dawson, D. A., Stinson, F. S., Chou, S. P., Dufour, M. C., Pickering, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+12-month+prevalence+and+trends+in+DSM-IV+alcohol+abuse+and+dependence:+United+States,+1991-1992+and+2001-2002.">The 12-month prevalence and trends in DSM-IV alcohol abuse and dependence: United States, 1991-1992 and 2001-2002.</a> Drug and Alcohol Dependence. 74 (3), 223-234 (2004).</li><li>Sacks, J. J., Gonzales, K. R., Bouchery, E. E., Tomedi, L. E., Brewer, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+and+State+Costs+of+Excessive+Alcohol+Consumption.">National and State Costs of Excessive Alcohol Consumption.</a> American Journal of Preventive Medicine. 49 (5), 73-79 (2015).</li><li>Litten, R. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medications+development+to+treat+alcohol+dependence:+a+vision+for+the+next+decade.">Medications development to treat alcohol dependence: a vision for the next decade.</a> Addiction Biology. 17 (3), 513-527 (2012).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Johnson+Medication+Treatment+of+Different+Types+of+Alcoholism.">Johnson Medication Treatment of Different Types of Alcoholism.</a> American Journal of Psychiatry. 167 (6), 630-639 (2010).</li><li>Litten, R. Z., Wilford, B. B., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+medications+for+the+treatment+of+alcohol+use+disorder:+An+evaluation+of+clinical+efficacy+and+safety.">Potential medications for the treatment of alcohol use disorder: An evaluation of clinical efficacy and safety.</a> Substance Abuse. 37 (2), 286-298 (2016).</li><li>Litten, R. Z., Ryan, M. L., Falk, D. E., Reilly, M., Fertig, J. B., Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+Alcohol+Use+Disorder:+Understanding+Mechanisms+to+Advance+Personalized+Treatment.+Alcoholism:+Clinical+and+Experimental.">Heterogeneity of Alcohol Use Disorder: Understanding Mechanisms to Advance Personalized Treatment. Alcoholism: Clinical and Experimental.</a> Research. 39 (4), 579-584 (2015).</li><li>Schuckit, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Genome-Wide+Search+for+Genes+That+Relate+to+a+Low+Level+of+Response+to+Alcohol.">A Genome-Wide Search for Genes That Relate to a Low Level of Response to Alcohol.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 25 (3), 323-329 (2001).</li><li>Batki, S. L., Pennington, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+Personalized+Medicine+in+the+Pharmacotherapy+of+Alcohol+Use+Disorder:+Targeting+Patient+Genes+and+Patient+Goals.">Toward Personalized Medicine in the Pharmacotherapy of Alcohol Use Disorder: Targeting Patient Genes and Patient Goals.</a> American Journal of Psychiatry. 171 (4), 391-394 (2014).</li><li>Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+frameworks+and+mechanistic+aspects+of+alcohol+addiction:+alcohol+addiction+as+a+reward+deficit+disorder.">Theoretical frameworks and mechanistic aspects of alcohol addiction: alcohol addiction as a reward deficit disorder.</a> Current topics in behavioral neurosciences. 13, 3-30 (2013).</li><li>Yoneyama, N., Crabbe, J. C., Ford, M. M., Murillo, A., Finn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voluntary+ethanol+consumption+in+22+inbred+mouse+strains.">Voluntary ethanol consumption in 22 inbred mouse strains.</a> Alcohol. 42 (3), 149-160 (2008).</li><li>Rhodes, J. S., Best, K., Belknap, J. K., Finn, D. A., Crabbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+simple+model+of+ethanol+drinking+to+intoxication+in+C57BL/6J+mice.">Evaluation of a simple model of ethanol drinking to intoxication in C57BL/6J mice.</a> Physiology &amp; Behavior. 84 (1), 53-63 (2005).</li><li>Thiele, T. E., Navarro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Drinking+in+the+dark"+(DID)+procedures:+A+model+of+binge-like+ethanol+drinking+in+non-dependent+mice.">"Drinking in the dark" (DID) procedures: A model of binge-like ethanol drinking in non-dependent mice.</a> Alcohol. 48 (3), 235-241 (2014).</li><li>Crabbe, J. C., Spence, S. E., Brown, L. L., Metten, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol+preference+drinking+in+a+mouse+line+selectively+bred+for+high+drinking+in+the+dark.">Alcohol preference drinking in a mouse line selectively bred for high drinking in the dark.</a> Alcohol. 45 (5), 427-440 (2011).</li><li>Sprow, G. M., Thiele, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neurobiology+of+binge-like+ethanol+drinking:+Evidence+from+rodent+models.">The neurobiology of binge-like ethanol drinking: Evidence from rodent models.</a> Physiology &amp; Behavior. 106 (3), 325-331 (2012).</li><li>Neasta, J., Hamida, B., Yowell, Q., Carnicella, S., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+mammalian+target+of+rapamycin+complex+1+signaling+in+neuroadaptations+underlying+alcohol-related+disorders.">Role for mammalian target of rapamycin complex 1 signaling in neuroadaptations underlying alcohol-related disorders.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (46), 20093-20098 (2010).</li><li>Huynh, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+development+of+moxidectin+as+a+novel+therapeutic+for+alcohol+use+disorder.">Preclinical development of moxidectin as a novel therapeutic for alcohol use disorder.</a> Neuropharmacology. 113, 60-70 (2017).</li><li>Egli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+experimental+paradigms+and+animal+models+be+used+to+discover+clinically+effective+medications+for+alcoholism.">Can experimental paradigms and animal models be used to discover clinically effective medications for alcoholism.</a> Addiction Biology. 10 (4), 309-319 (2005).</li><li>Huynh, N., Arabian, N., Lieu, D., Asatryan, L., Davies, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+an+Orally+Dissolving+Strip+for+Pharmacological+and+Toxicological+Studies:+A+Simple+and+Humane+Alternative+to+Oral+Gavage+for+Animals.">Utilizing an Orally Dissolving Strip for Pharmacological and Toxicological Studies: A Simple and Humane Alternative to Oral Gavage for Animals.</a> Journal of Visualized Experiments. (109), (2016).</li><li>Yardley, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ivermectin+reduces+alcohol+intake+and+preference+in+mice.">Ivermectin reduces alcohol intake and preference in mice.</a> Neuropharmacology. 63 (2), 190-201 (2012).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li></ol>

Weltweite Schätzungen zufolge mehr als 76 Millionen Menschen die Kriterien um eine Diagnose für Alkohol Verwendung Störung (AUD) rechtfertigen. Leider derzeit verfügbaren pharmazeutische Behandlungen sind weitgehend wirkungslos und Weiterentwicklung ist notwendig, um die Bedürfnisse dieser klinischen Bevölkerung20auszugleichen. Zu diesem Zweck das folgende Protokoll zielt darauf ab, dieses Unterfangen zu erleichtern, indem exemplarisch zwei der grundlegendsten Nager trinken Paradigmen: zwei-...

Für die letzten 25 plus Jahre, hat erhebliche Anstrengungen zur Entwicklung von Medikamenten für die Behandlung von Alkohol-Gebrauch-Störung (AUD)1gesetzt worden. Obwohl viele Fortschritte erzielt wurden, AUD immer noch eine große Gesundheitsproblem Auswirkungen auf mehr als 18 Millionen Amerikaner, und kostet mehr als $ 220 Milliarden jährlich2,3. Derzeit gibt es nur drei FDA-zugelassene Medikamente, Disulfiram, Naltrexon und Acamprosat, die inkonsistente Ergebnisse in klinischen Studien und auch in Kombination mit psychosozialer Intervention in den Klinik-Einstellungen nur begrenzten Erfolg geführt haben 4 , 5 , 6 , 7.
Einer der Hauptgründe für Ausfälle der aktuellen AUD Therapie ist mit der heterogenen Natur der AUD8verbunden. Während sowohl Umwelt-als auch genetische Faktoren Entwicklung von AUD zur, entfallen Erblichkeit schätzungsweise 50-60 % des Risikos von Beginn9. Ähnlich wie bei der Behandlung von Depressionen, ist es weithin anerkannt, dass Patienten mit AUD benötigen eine Vielzahl von Medikamenten, die zugeschnitten sind auf die Bedürfnisse des einzelnen Patienten10.
Natürlich gibt es eine dringende Notwendigkeit wirksamer Behandlungen, die erleichtert werden würde, wären schon mühsame und zeitraubende Prozess der Wirkstoffforschung optimierte3. Zu diesem Zweck zeigt das folgende Protokoll der präklinische Anwendbarkeit der zwei Nager trinken-Modelle am meisten benutzt, die neurobiologische Basis von AUD11zu prüfen. Genauer gesagt, hierin eingeführte Methode beurteilen kann die Wirksamkeit der Kandidat Verbindungen bei Alkohol reduzieren Verbrauch in "mäßig" und "Alkoholexzesse" Szenarien unter Verwendung der zwei-Flaschen-Wahl (TBC) und trinken in den dunklen (DID) Paradigmen bzw.. Beide Paradigmen untersuchen nicht operanten Ethanol Selbstverwaltung, wobei Mäuse ingest Ethanol mündlich und am Willen, und daher hohe Gesicht zu veranschaulichen und Gültigkeit als Modell der menschlichen Alkoholismus11zu konstruieren.
In TBC trinken, auch bekannt als freien Wahl trinken, trinken, Präferenz oder sozialen trinken gibt es zwei Flaschen Lösung ständig im Hause Käfig. Eine Flasche enthält Wasser und andererseits einer verdünnten Lösung von Ethanol, wobei die Konzentration von Ethanol variiert werden kann (zB., 5-30 % V/V)11,12. Die Mäuse haben jederzeit Zugriff auf beide Flaschen, und daher können wie viel von jeder Flasche zu trinken.
Dieses Modell bewertet die Ethanol-Verbrauch von jeder Maus (g/kg), sowie das Ethanol Präferenz Verhältnis (Volumen Ethanol verbraucht ÷ Gesamtvolumen Flüssigkeit verbraucht). Es wird routinemäßig zur trinkende Ebenen über verschiedene Stämme von Mäusen oder nach einer bestimmten genetischen Manipulation zu vergleichen (zB., gen Knockout oder Zuschlag) und Ergebnisse in Ethanol Blutkonzentrationen (BECs) ähnlich wie beim Menschen ist bei der Trinken in Maßen13,14.
In der DID-Verfahren, 3 h nach dem Start des dunklen Zyklus wird die Heimat Käfig Flasche Wasser mit einer Flasche von 20 % (V/V) Ethanol-Lösung für einen eingeschränkten Zugang Trinkgelage ausgetauscht. Die trinken Sitzungen auftreten als in Folge 4-Tage-Zyklus, dauerhaften 2 h am Tage 1-3 und 4 h am Tag 4. Tage 1-3 dienen als einen Alkohol-Gewöhnung-Zeitraum vor der Prüfung am 4. Tag. Infolgedessen Mäuse verbrauchen zuverlässig genug Ethanol um BECs erreichen > 100 mg/dL und folglich zeigen die Auswirkungen auf das Verhalten des Rausches findet man bei Menschen, die Alkoholexzesse13,14,15. Wasser kostenfrei bei allen Zeiten als die Trinkgelage.
Es gibt mehrere Varianten von begrenzten Zugang zu Trinkwasser. Zum Beispiel erhalten die intermittierende Zugriffsmodell Mäuse zwei Flaschen (eine mit Wasser und das andere mit 20 % (V/V) Ethanol) nur am Montag, Mittwoch und Freitag mit einer 24 h und 48 h Wartezeit an Wochentagen und Wochenenden, bzw.16. Nach mehreren Wochen der intermittierenden Zugang die Mäuse werden allmählich und freiwillig eskalieren trinken Ebenen, schließlich erreichen BECS ähnlich, was in der DID-Modell beobachtet wird. Die DID, scheint jedoch das am häufigsten verwendete Modell Binge-Trinken Verhalten zu beurteilen. Gibt es andere Modelle der intermittierenden trinken, aber sie verlassen sich auf die Beschränkung des Zugangs zu Nahrung oder Dampf Kammer induzierten Anstieg der freiwilligen Selbstverwaltung, wodurch sie weniger Vertreter der menschlichen Freiwilligen Alkohol Konsum16.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1617px;" width="1616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:483px;">1 L&#160; graduated cylinder</td>
			<td style="width:315px;">VWR</td>
			<td style="width:232px;">https://us.vwr.com/store/product/20935285/marisco-single-scale-cylinder-graduates-john-m-maris-co</td>
			<td style="width:588px;">To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">1 L glass bottle</td>
			<td>Pyrex (Fisher Scientific)</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/pyrex-reusable-media-storage-bottles-12/p-42752</td>
			<td>To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">100 mL graduated cylinder</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimble-chase-kimax-class-a-to-contain-graduated-cylinders-8/p-4369311</td>
			<td>To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Analox</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>One potential method of analyzing DID blood samples is by using the analox machine</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">ball-bearing sipper tubes</td>
			<td>Ancare Corp.</td>
			<td>http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point</td>
			<td>Length: 2.5 inches, Diameter: 5/16 inches, Model: TD100</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">C57BL/6J Mice</td>
			<td>Jackson lab</td>
			<td>https://www.jax.org/strain/000664</td>
			<td>May also come from internal breeding colony</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">disposable serological pipets</td>
			<td>VWR International (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4760455/vwr-disposable-serological-pipets-polystyrene-sterile-plugged</td>
			<td>10 mL, 18 mL, or 25 mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">ethanol, pure, 190 proof (95%), USP, KOPTEC</td>
			<td>Decon Labs (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4542412/ethanol-pure-190-proof-95-usp-koptec</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">heat gun&#160;</td>
			<td>Master Appliances Corp.</td>
			<td colspan="2">http://www.masterappliance.com/master-heat-guns-kits/</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">heat shrink tubing</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Diameter: 3/8 inches</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">industrial knife/blade</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">metal cage plate</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Should be available through the university/institutional vivarium</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">mouse RO water</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Should be available through the university/institutional vivarium</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">portable electronic scale</td>
			<td>Ohaus (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4789377/portable-electronic-cs-series-scales-ohaus</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">red light headlamp</td>
			<td>nyteBright (Amazon)</td>
			<td>https://www.amazon.com/LED-Headlamp-Flashlight-Red-Light/dp/B00R0LMMF8/ref=sr_1_1?ie=UTF8&#38;qid=1499591137&#38;sr=8-1-spons&#38;keywords=red+lamp+headlamp&#38;psc=1</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">silicone stoppers</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">thermometer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-scientific-hygro-thermometer-clock-large-display-2/p-4077232</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">weigh boat</td>
			<td>VWR International (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/16773534/vwr-pour-boat-weighing-dishes</td>
			<td>The lid from a pipete tip box is an appropriate alternative</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine drinking models in the development of pharmacotherapies for alcoholism: drinking in the dark and two-bottle choice

Alkohol-Gebrauch-Störung (AUD) ist ein großes Problem mit mehr als einem geschätzten 76 Millionen Menschen weltweit die diagnostischen Kriterien erfüllen. Aktuelle Behandlungsmethoden beschränken sich auf drei FDA-zugelassene Medikamente, die weitgehend wirkungslos sind, auch in Kombination mit psychosozialer Intervention, wie deutlich die hohe Rückfall Rate. Als solche stellt die Suche nach mehr neuartige Therapien eine wichtige öffentliche Gesundheitsziel. Zu diesem Zweck das folgende Protokoll nutzt zwei einfache Nager trinken-Modelle um die präklinische Wirksamkeit der Anti-Alkohol Bleiverbindungen beurteilen: zwei-Flasche Wahl (TBC) und in der Dunkelheit (DID) trinken. Ersteres ermöglicht, dass Mäuse freiwillig trinken in Maßen, während letztere Mäuse, um freiwillige induziert eine große Menge an Alkohol in einem kurzen Zeitraum verbrauchen, die "Binge drinking" imitiert. Die einfache und hohen Durchsatz Natur beider dieser Paradigmen erlaubt für schnelle Screening pharmakologischer Substanzen oder zur Identifizierung von Stämme von Mäusen, die bestimmte freiwillige Trinkverhalten aufweisen.

In den folgenden repräsentative Untersuchungen wurde trinken modelliert mit dem zwei-Flasche Wahl (TBC)-Paradigma. Kurz, Mäuse hatten Zugang zu zwei Flaschen Lösung, von denen Wasser, und die anderen 10 % (V/V) Ethanol Lösung enthielt. Themen waren anschließend aufgeteilt und gleichmäßig, Medikament Behandlungsgruppen, Moxidectin (MOX) vs. Kochsalzlösung Kontrolle zugewiesen, so dass jede Gruppe Ethanol Aufnahmemengen mit der geringsten Abweichung im Durchschnitt würde.
<p cl...

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Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice

Murine Modelle bei der Entwicklung von Pharmakotherapien für Alkoholismus zu trinken: Trinken in der dunklen und zwei Flasche Wahl

Alkohol-Gebrauch-Störung (AUD) ist ein wichtiges nationales Gesundheitsproblem und die Entwicklung wirksamer Therapien ist erforderlich, um den Bedürfnissen dieser Patientengruppe zu kompensieren. Zu diesem Zweck nutzt das folgende Protokoll zwei einfache Nager trinken-Modelle um die präklinische Wirksamkeit der Anti-Alkohol Bleiverbindungen zu beurteilen.

Alcohol Use Disorder (AUD) is a major problem with more than an estimated 76 million people worldwide meeting the diagnostic criteria. Current treatments ...

Das übergeordnete Ziel dieses Paradigmas ist es, die Wirksamkeit einer potenziellen Anti-Alkohol-Droge mit Nagetier-Modelle der Alkoholkonsumstörung zu bewerten. Alkoholkonsumstörungen stellen eine große Krise im Bereich der öffentlichen Gesundheit dar. Aktuelle Behandlungen sind ineffektiv und eine kontinuierliche präklinische Forschung ist erforderlich.Unser Protokoll ermöglicht es uns, die Sicherheit und den Nutzen einer möglichen Behandlung zu bewerten sowie einen Blick auf die zugrunde liegende Neurobiologie der Erkrankung selbst zu werfen. Beginnen Sie den Vorgang, indem Sie ein Gebrauchsmesser auf dem Bunsenbrenner erhitzen. Schneiden Sie mit diesem Messer etwa einen Zoll von den oberen und unteren Enden einer 18 Milliliter serologischen Pipette aus Kunststoff ab.Als nächstes wärmen Sie die Pipette unter einer Wärmepistole. Setzen Sie das Kugellager-Sipperrohr in das untere Ende der Pipette ein. Dann mit einer handelsüblichen Schrumpfpistole, versiegeln Sie das Sipperrohr an Ort und Stelle mit Schrumpffolie.Kappen Sie die andere Öffnung mit einem Silikonstopfen. Für die Tieransiedlung, bei der Ankunft, Einzelne Haus jede Maus in der Standard-Polycarbonat Polysulfon Käfig mit Bettwäsche, Nahrung und Wasser und einem Metallgitter Käfig oben. Beginnend am vierten Tag der einwöchigen Einzelwohnung Akklimatisierung, messen und erfassen Sie die täglichen Körper- und Nahrungsgewichte der Maus.Messen Sie die Wasseraufnahme mit den Radierungen neben der invertierten Flasche, um den höchsten Punkt des Meniskus zu erfassen. Sobald sich die Wasseraufnahme auf plus oder minus 10% Variabilität gegenüber dem Mittelwert der letzten drei Tage stabilisiert hat, beginnen Sie den Ethanol-Zugang entweder mit TBC oder DID. Um TBS zu leiten, bereiten Sie 10% Ethanol-Lösung in 1.000 Milliliter, indem Sie 105,3 Milliliter 190-prozentiges Getreide-Ethanol zu 894,7 Milliliter Wasser hinzufügen, dann schütteln Sie es gründlich.Da Ethanol schnell verdunstet, ersetzen Sie die Lösung zweimal pro Woche. Am ersten Tag von TBC, in jedem Käfig, eine der beiden Wasserflaschen leeren und bis zum Rand mit der frisch zubereiteten Ethanollösung füllen. Da Ethanol und Wasser optisch schwer zu unterscheiden sind, kennzeichnen Sie die Flaschen eindeutig mit ihrem entsprechenden Inhalt.Fügen Sie der Wasserflasche je nach Bedarf weitere Lösungen hinzu. Legen Sie dann die Flasche wieder in den Käfig, um sicherzustellen, dass die Kappe sicher geschlossen ist und frei von Luftblasen oder Lecks aus dem Auslauf. Entfernen Sie alle Luftblasen, indem Sie einfach auf die Flasche tippen, damit die Luft der Flasche entweichen kann.Wechseln Sie die Position der Flasche jeden zweiten Tag, um für konditionierte Platz Präferenz bezogene Einflüsse in der Trinkaktivität zu korrigieren. Erfassen Sie den Ethanol-Aufnahmegrad und analysieren Sie das Ethanol-Aufnahme- und Präferenzverhältnis von 10 %. Sobald die Ethanolzufuhr stabil geworden ist, verabreichen Sie jeder Maus während der täglichen Messroutine eine einzige intraperitoneale Injektion, um die Maus an die Injektion zu gewöhnen.Sobald sich eine Ethanol-Basislinie mit geringer Variabilität wiederhergestellt hat, teilen Sie die Mäuse in Kontroll- und Versuchsgruppen auf, die die Ethanolaufnahmewerte verwenden, so dass alle Gruppen ungefähr ähnliche durchschnittliche Ethanolaufnahmewerte haben. Beginnen Sie tägliche Drogendosis, entweder für eine akute oder mehrtägige Dauer. Um DID durchzuführen, zeichnen Sie an jedem Tag des geplanten Ethanolzugriffs die Messungen für Wasservolumen, Nahrungsaufnahme und Körpergewicht auf und führen Sie eine Medikamenten-Dosierung durch.Führen Sie dies während einer vorgewählten Zeit während des Lichtzyklus, der in Übereinstimmung mit der Pharmakokinetik des Medikaments gewählt wird, so dass die Verbindung nähert sich der maximalen Gehirnkonzentration während der Trinkzeit. Als nächstes bereiten Sie 20% Ethanol-Lösung in 1.000 Milliliter, indem Sie 210,5 Milliliter von 190 proof Getreide Ethanol zu 789,5 Milliliter Wasser. Dann schütteln Sie es gründlich.Füllen Sie die Ethanolflasche vor Beginn der Trinksitzung, damit die Wasserflasche, sobald DID beginnt, einfach durch die Alkoholflasche ersetzt werden kann. Verwenden Sie während der gesamten DID-Sitzung einen Rotlichtscheinwerfer, um das Tier nicht zu stören. Zu Beginn der DID-Trinksitzung, die drei Stunden vor dem Lichtzyklus in den dunklen Zyklus einfließen soll, wird die Wassermenge für jede Maus aufzeichnen.Dann ersetzen Sie jede Wasserflasche durch eine Flasche 20% Ethanol-Lösung und erfassen Sie das Start-Ethanol-Volumen. Lesen und aufzeichnen Sie das endgültige Ethanolvolumen zwei Stunden später am Ende der Trinksitzung an den Tagen eins bis drei und vier Stunden später am vierten Tag. Analysieren Sie dann die 20%Ethanol-Aufnahme.Anschließend die Ethanolflasche durch eine Wasserflasche ersetzen und das Wasservolumen aufzeichnen. Diese Abbildung zeigt die Bewertung der Auswirkungen einer akuten Dosis von Moxidectin auf fünf Milligramm pro Kilogramm auf die Ethanolaufnahme und -präferenz. Eine Einzeldosis Moxidectin reduzierte den Alkoholkonsum signifikant von mehr als 45 % im Vergleich zu Pre-Moxidectin-Injektionen und bevorzugt über 30%10% Ethanol-Aufnahme und Präferenz bleiben beide deutlich niedriger als die Saline am Tag unmittelbar nach der MOX-Behandlung.Hier wurde Binge-Trinken nach dem DID-Verfahren modelliert. Mäusen wurde die Saline an den Tagen eins bis vier verabreicht, wobei am vierten Tag 20% Ethanol basisig festgestellt wurden. An den Tagen eins bis drei des zweiten Wochenzyklus erhielten alle Mäuse eine weitere tägliche Saline-Injektion.Die Ethanol-Aufnahmewerte vom dritten Tag wurden dann verwendet, um die Mäuse in zwei Gruppen aufzuteilen, die anschließend entweder eine Injektion von Moxidectin mit fünf Milligramm pro Kilogramm oder eine Saline am vierten Tag erhielten. In der darauffolgenden Woche erhielten alle Mäuse täglich Saline-Injektionen an den Tagen eins bis vier und die Ethanolaufnahme wurde am vierten Tag erneut gemessen. Akute Verabreichung von MOX wurde analysiert und festgestellt, dass deutlich reduziert Alkoholaufnahme von mehr als 54%im Vergleich zu Pre-Drogen-Injektionen.Denken Sie daran, dass zukünftige Experimente mit diesem Protokoll durchgeführt werden müssen, um den Mechanismus, die Wahl und die Toxizität eines potenziellen Arzneimittels zu bewerten und seine Wirksamkeit in Bezug auf die aktuellen Behandlungsmöglichkeiten zu bewerten.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Eine Methode zur Murine Islet Isolation und subkapsulären Nierentransplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Forschung

Medizin

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

Eine Strategie, um de novo Mutationen in Common Störungen wie Autismus und Schizophrenie Identifizieren

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Segmentierung und Messung von FAT-Volumes in Murine Obesity Modellen mithilfe von Röntgen-Computertomographie

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Entwicklung einer Bronchiolitis obliterans in einem Mausmodell der orthotopen Lungentransplantation

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Ein Mausmodell der Stentimplantation in der Arteria carotis für das Studium der Restenose

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

Development of an Audio-based Virtual Gaming Environment to Assist with Navigation Skills in the Blind

Entwicklung eines Audio-based Virtual Gaming Umwelt mit Navigation Skills in the Blind Assist

Audio-based Environment Simulator (AbES) is virtual environment software designed to improve real world navigation skills in the blind. Using only audio ...

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Technische Aspekte der Maus aortokavaler Fistel

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

Sammlung und Extraktion von DNA-Speichel für Next Generation Sequencing

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Maus Nierentransplantation: Modelle der Transplantatabstoßung

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

Entwicklung eines Direkt Pulp-Kappungsmodell für die Beurteilung von Pulpal Wundheilung und Reparative Dentinbildung bei Mäusen

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is ...