Name: murine drinking models in the development of pharmacotherapies for alcoholism: drinking in the dark and two-bottle choice
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice at JoVE.com

עבודה זו נתמכה, בין השאר, על ידי מחקר מעניקה SC CTSI NIH/NCRR/NCATS - UL1TR000130 (D.L.D.), AA022448 (D.L.D.) והספר לרוקחות באוניברסיטת קליפורניה.

כל ההליכים המתוארים כאן אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ו שימוש ועדות של הקמפוס למדעי הבריאות באוניברסיטת דרום קליפורניה.
1. ניסיוני התקנה והרכבה
<ol><li>לרכוש את כל הכימיקלים לפני תחילת המחקר והציוד הבאים: עכברים, צמרות כלוב כלובים/מתכת, כלי מיטה, מזון, מים, אתנול, pipets, sipper...

<ol>
	<li>Litten, R. Z., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery,+Development,+and+Adoption+of+Medications+to+Treat+Alcohol+Use+Disorder:+Goals+for+the+Phases+of+Medications+Development.">Discovery, Development, and Adoption of Medications to Treat Alcohol Use Disorder: Goals for the Phases of Medications Development.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 40 (7), 1368-1379 (2016).</li><li>Grant, B. F., Dawson, D. A., Stinson, F. S., Chou, S. P., Dufour, M. C., Pickering, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+12-month+prevalence+and+trends+in+DSM-IV+alcohol+abuse+and+dependence:+United+States,+1991-1992+and+2001-2002.">The 12-month prevalence and trends in DSM-IV alcohol abuse and dependence: United States, 1991-1992 and 2001-2002.</a> Drug and Alcohol Dependence. 74 (3), 223-234 (2004).</li><li>Sacks, J. J., Gonzales, K. R., Bouchery, E. E., Tomedi, L. E., Brewer, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+and+State+Costs+of+Excessive+Alcohol+Consumption.">National and State Costs of Excessive Alcohol Consumption.</a> American Journal of Preventive Medicine. 49 (5), 73-79 (2015).</li><li>Litten, R. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medications+development+to+treat+alcohol+dependence:+a+vision+for+the+next+decade.">Medications development to treat alcohol dependence: a vision for the next decade.</a> Addiction Biology. 17 (3), 513-527 (2012).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Johnson+Medication+Treatment+of+Different+Types+of+Alcoholism.">Johnson Medication Treatment of Different Types of Alcoholism.</a> American Journal of Psychiatry. 167 (6), 630-639 (2010).</li><li>Litten, R. Z., Wilford, B. B., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+medications+for+the+treatment+of+alcohol+use+disorder:+An+evaluation+of+clinical+efficacy+and+safety.">Potential medications for the treatment of alcohol use disorder: An evaluation of clinical efficacy and safety.</a> Substance Abuse. 37 (2), 286-298 (2016).</li><li>Litten, R. Z., Ryan, M. L., Falk, D. E., Reilly, M., Fertig, J. B., Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+Alcohol+Use+Disorder:+Understanding+Mechanisms+to+Advance+Personalized+Treatment.+Alcoholism:+Clinical+and+Experimental.">Heterogeneity of Alcohol Use Disorder: Understanding Mechanisms to Advance Personalized Treatment. Alcoholism: Clinical and Experimental.</a> Research. 39 (4), 579-584 (2015).</li><li>Schuckit, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Genome-Wide+Search+for+Genes+That+Relate+to+a+Low+Level+of+Response+to+Alcohol.">A Genome-Wide Search for Genes That Relate to a Low Level of Response to Alcohol.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 25 (3), 323-329 (2001).</li><li>Batki, S. L., Pennington, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+Personalized+Medicine+in+the+Pharmacotherapy+of+Alcohol+Use+Disorder:+Targeting+Patient+Genes+and+Patient+Goals.">Toward Personalized Medicine in the Pharmacotherapy of Alcohol Use Disorder: Targeting Patient Genes and Patient Goals.</a> American Journal of Psychiatry. 171 (4), 391-394 (2014).</li><li>Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+frameworks+and+mechanistic+aspects+of+alcohol+addiction:+alcohol+addiction+as+a+reward+deficit+disorder.">Theoretical frameworks and mechanistic aspects of alcohol addiction: alcohol addiction as a reward deficit disorder.</a> Current topics in behavioral neurosciences. 13, 3-30 (2013).</li><li>Yoneyama, N., Crabbe, J. C., Ford, M. M., Murillo, A., Finn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voluntary+ethanol+consumption+in+22+inbred+mouse+strains.">Voluntary ethanol consumption in 22 inbred mouse strains.</a> Alcohol. 42 (3), 149-160 (2008).</li><li>Rhodes, J. S., Best, K., Belknap, J. K., Finn, D. A., Crabbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+simple+model+of+ethanol+drinking+to+intoxication+in+C57BL/6J+mice.">Evaluation of a simple model of ethanol drinking to intoxication in C57BL/6J mice.</a> Physiology &amp; Behavior. 84 (1), 53-63 (2005).</li><li>Thiele, T. E., Navarro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Drinking+in+the+dark"+(DID)+procedures:+A+model+of+binge-like+ethanol+drinking+in+non-dependent+mice.">"Drinking in the dark" (DID) procedures: A model of binge-like ethanol drinking in non-dependent mice.</a> Alcohol. 48 (3), 235-241 (2014).</li><li>Crabbe, J. C., Spence, S. E., Brown, L. L., Metten, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol+preference+drinking+in+a+mouse+line+selectively+bred+for+high+drinking+in+the+dark.">Alcohol preference drinking in a mouse line selectively bred for high drinking in the dark.</a> Alcohol. 45 (5), 427-440 (2011).</li><li>Sprow, G. M., Thiele, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neurobiology+of+binge-like+ethanol+drinking:+Evidence+from+rodent+models.">The neurobiology of binge-like ethanol drinking: Evidence from rodent models.</a> Physiology &amp; Behavior. 106 (3), 325-331 (2012).</li><li>Neasta, J., Hamida, B., Yowell, Q., Carnicella, S., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+mammalian+target+of+rapamycin+complex+1+signaling+in+neuroadaptations+underlying+alcohol-related+disorders.">Role for mammalian target of rapamycin complex 1 signaling in neuroadaptations underlying alcohol-related disorders.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (46), 20093-20098 (2010).</li><li>Huynh, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+development+of+moxidectin+as+a+novel+therapeutic+for+alcohol+use+disorder.">Preclinical development of moxidectin as a novel therapeutic for alcohol use disorder.</a> Neuropharmacology. 113, 60-70 (2017).</li><li>Egli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+experimental+paradigms+and+animal+models+be+used+to+discover+clinically+effective+medications+for+alcoholism.">Can experimental paradigms and animal models be used to discover clinically effective medications for alcoholism.</a> Addiction Biology. 10 (4), 309-319 (2005).</li><li>Huynh, N., Arabian, N., Lieu, D., Asatryan, L., Davies, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+an+Orally+Dissolving+Strip+for+Pharmacological+and+Toxicological+Studies:+A+Simple+and+Humane+Alternative+to+Oral+Gavage+for+Animals.">Utilizing an Orally Dissolving Strip for Pharmacological and Toxicological Studies: A Simple and Humane Alternative to Oral Gavage for Animals.</a> Journal of Visualized Experiments. (109), (2016).</li><li>Yardley, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ivermectin+reduces+alcohol+intake+and+preference+in+mice.">Ivermectin reduces alcohol intake and preference in mice.</a> Neuropharmacology. 63 (2), 190-201 (2012).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li></ol>

הערכות ברחבי העולם מציינים כי כ- 76 מיליון אנשים לענות על הקריטריונים כדי להצדיק אבחנה של הפרעה לשימוש אלכוהול (AUD). למרבה הצער, זמין כרגע תרופות טיפולים יעילים בעיקר, פיתוח נוסף הוא הכרחי לקזז את צרכי האוכלוסייה קליניים20. למטרה זו, להלן פרוטוקול שמטרתה להקל על המאמץ הזה על ידי ה?...

האחרונות 25 פלוס שנים, כבר הכניסו מאמץ משמעותי בפיתוח תרופות לטיפול של הפרעה לשימוש באלכוהול (AUD)1. למרות ההתקדמות הרבה נעשו, AUD עדיין נשאר בעיה מרכזית בבריאות הציבור, משפיע על יותר מ-18 מיליון אמריקאים, עולה מעל 220 מיליארד דולר מדי שנה2,3. כיום ישנם רק שלושה תרופות שאושרו על-ידי ה-FDA disulfiram, נלוקסן, acamprosate, אשר הניבו תוצאות לא עקביות ניסויים קליניים, הצלחה מוגבלת גם כאשר בשילוב עם התערבות פסיכו-סוציאלי בהגדרות של המרפאה 4 , 5 , 6 , 7.
הסיבות העיקריות על הכישלונות של הטיפול AUD הנוכחי הוא מקושר אל הטבע heterogenous של AUD8. בעוד גורמים סביבתיים והן גנטיים תורמים להתפתחות של AUD, תורשתיות חשבונות עבור % 50-60 המשוערת של הסיכון של תחילת9. בדומה לטיפול בדיכאון, מקובל כי חולים הסובלים AUD צריך מגוון רחב של תרופות המותאמים לצרכים של כל מטופל10.
ברור, יש צורך דחוף טיפולים יעילים יותר פוריה אם התהליך כבר זמן רב מפרכות של גילוי תרופות היו יעילים3. למטרה זו, הפרוטוקול הבא מדגים את הישימות פרה של שני דגמים שתייה מכרסמים בשימוש נרחב לבחינת בסיס הנוירוביולוגי של AUD11. ליתר דיוק, השיטה הציג בזאת יכול להעריך את היעילות של המועמד תרכובות אלכוהול להפחתת צריכת "מתון" והן "אוכלת שותה" תרחישים ניצול הבחירה בקבוק שני (TBC) ושותים בתוך הפארדיגמות (DID) כהה, בהתאמה. שתי פרדיגמות לבחון ניהול עצמי שאינו operant אתנול, לפיה עכברים להבלע אתנול והן בעל-פה, בשעה, לכן להמחיש את הפנים גבוה ולבנות תוקפו כמודל של אלכוהוליזם האנושי11.
TBC לשתות, הידוע גם בשם הבחירה החופשית לשתות, העדפה לשתייה, או שתיה, שני בקבוקים של פתרון זמינים ללא הרף בכלוב בבית. בקבוק אחד מכילה מים, השני מכיל בתמיסה מדוללת של אתנול, לפיה יכולים להיות מגוונים את הריכוז של אתנול (למשל., 5-30% v/v)11,12. העכברים יש גישה מתמדת כדי שני הבקבוקים, לכן, באפשרותך לבחור כמה שותים מבקבוק בכל.
מודל זה מעריך בצריכת האתנול בכל עכבר (g/kg), כמו גם יחס העדפה של אתנול (נפח של האתנול צורכים ÷ הנפח הכולל הנוזלים הנצרכת). הוא משמש באופן שגרתי כדי להשוות בין רמות שתייה על פני זנים שונים של עכברים, או לאחר מניפולציה גנטית ספציפית (למשל., נוקאאוט גנטי או נוקאאוט) ותוצאות בריכוזים בדם אתנול (בקס) הדומה מה נמצא אצל בני אדם כאשר לשתות במתינות13,14.
בהליך DID, 3 שעות לאחר תחילת מחזור כהה, הביתה כלוב בקבוק מים מוחלף עם בקבוק של 20% (v/v) אתנול פתרון עבור גישה מוגבלת שותה הפעלה. ההפעלות שתייה להתרחש מחזור 4 ימים רצופים, שנמשך 2 h ב- 1-3 ימים, 4 שעות ביום 4. ימים 1-3 משמשים תקופה אלכוהול-habituation לפני הבדיקה ביום 4. כתוצאה מכך, עכברים יצרוך באופן אמין אתנול מספיק כדי להשיג בקס > 100 מ"ג/ד"ל, כתוצאה מכך, שהפגינו את השפעות התנהגותיות שיכרון נמצאו שבני אדם הם מוגזמת שתייה13,14,15. גישה מים זמינה בכל עת מלבד המפגש שתייה.
ישנם מספר וריאציות של גישה מוגבלת שתייה. לדוגמה, במודל הגישה לסירוגין, עכברים מקבלים שני בקבוקים (מים המכילים אחד, המכיל האתנול 20% (v/v) אחרים) רק בשני, רביעי, שישי עם תקופה של 24 שעות ביממה ו- 48 h נסיגה בימי חול, בסופי שבוע, בהתאמה16. לאחר מספר שבועות של access לסירוגין, העכברים בהדרגה, בהתנדבות להסלים שותה רמות, בסופו של דבר להגיע בקס הדומה תצפית במודל DID. DID, עם זאת, נראה כי המודל הנפוץ ביותר להערכת התנהגות שתייה מוגזמת.. קיימים דגמים אחרים של שתייה לסירוגין, אבל הם מסתמכים על הגבלת גישה למזון או אדים קאמרית המושרה העלאות ניהול עצמי מרצון, מה שהופך אותם פחות נציג של צריכת אלכוהול האנושי מרצון16.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1617px;" width="1616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:483px;">1 L&#160; graduated cylinder</td>
			<td style="width:315px;">VWR</td>
			<td style="width:232px;">https://us.vwr.com/store/product/20935285/marisco-single-scale-cylinder-graduates-john-m-maris-co</td>
			<td style="width:588px;">To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">1 L glass bottle</td>
			<td>Pyrex (Fisher Scientific)</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/pyrex-reusable-media-storage-bottles-12/p-42752</td>
			<td>To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">100 mL graduated cylinder</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimble-chase-kimax-class-a-to-contain-graduated-cylinders-8/p-4369311</td>
			<td>To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Analox</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>One potential method of analyzing DID blood samples is by using the analox machine</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">ball-bearing sipper tubes</td>
			<td>Ancare Corp.</td>
			<td>http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point</td>
			<td>Length: 2.5 inches, Diameter: 5/16 inches, Model: TD100</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">C57BL/6J Mice</td>
			<td>Jackson lab</td>
			<td>https://www.jax.org/strain/000664</td>
			<td>May also come from internal breeding colony</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">disposable serological pipets</td>
			<td>VWR International (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4760455/vwr-disposable-serological-pipets-polystyrene-sterile-plugged</td>
			<td>10 mL, 18 mL, or 25 mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">ethanol, pure, 190 proof (95%), USP, KOPTEC</td>
			<td>Decon Labs (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4542412/ethanol-pure-190-proof-95-usp-koptec</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">heat gun&#160;</td>
			<td>Master Appliances Corp.</td>
			<td colspan="2">http://www.masterappliance.com/master-heat-guns-kits/</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">heat shrink tubing</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Diameter: 3/8 inches</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">industrial knife/blade</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">metal cage plate</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Should be available through the university/institutional vivarium</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">mouse RO water</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Should be available through the university/institutional vivarium</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">portable electronic scale</td>
			<td>Ohaus (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4789377/portable-electronic-cs-series-scales-ohaus</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">red light headlamp</td>
			<td>nyteBright (Amazon)</td>
			<td>https://www.amazon.com/LED-Headlamp-Flashlight-Red-Light/dp/B00R0LMMF8/ref=sr_1_1?ie=UTF8&#38;qid=1499591137&#38;sr=8-1-spons&#38;keywords=red+lamp+headlamp&#38;psc=1</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">silicone stoppers</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">thermometer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-scientific-hygro-thermometer-clock-large-display-2/p-4077232</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">weigh boat</td>
			<td>VWR International (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/16773534/vwr-pour-boat-weighing-dishes</td>
			<td>The lid from a pipete tip box is an appropriate alternative</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine drinking models in the development of pharmacotherapies for alcoholism: drinking in the dark and two-bottle choice

הפרעה לשימוש באלכוהול (AUD) היא בעיה רצינית עם יותר מאשר מיליון 76 המשוערת אנשים ברחבי העולם להכיר את הקריטריונים לאבחון. טיפולים שוטפים מוגבלות שלוש תרופות שאושרו על-ידי ה-FDA כי הם במידה רבה יעיל גם כאשר בשילוב עם פסיכו-סוציאלי התערבות, כפי שניתן לראות בתרשים על-ידי הגבוה נסיגה קצב. ככזה, החיפוש אחר טיפולים חדשניים יותר מייצג יעד חשוב לבריאות הציבור. לשם כך, הפרוטוקול הבא מנצל שני דגמים שתייה פשוטה מכרסמים כדי להעריך את היעילות פרה של עופרת נגד אלכוהול תרכובות: בקבוק שני הבחירה (TBC) ושותים בחושך (DID). לשעבר מאפשר עכברים מרצון לשתות במתינות בזמן האחרון גורם עכברים מרצון לצרוך כמות גדולה של אלכוהול תוך תקופה קצרה המחקה שתייה מופרזת. מהות תפוקה גבוהה ופשוט שתי פרדיגמות אלה מאפשרות להקרנה מהירה של סוכנים תרופתי או לזיהוי זני עכברים שהפגינו התנהגות מסוימים שתייה מרצון.

בחקירות הנציגה הבאה, שתיה היה המודל באמצעות את פרדיגמת הבחירה בקבוק שני (TBC). בקצרה, עכברים הייתה גישה שני בקבוקים של פתרון, אחד מהם הכיל מים, ואילו האחר פתרון אתנול 10% (v/v). הנבדקים היו לאחר מכן לפצל ומוקצה באופן שווה לקבוצות טיפול סמים, moxidectin (MOX) לעומת שליטה מלוחים, כך כל קבוצ...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice at JoVE.com

Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice

מאתר שותה מודלים בהתפתחות Pharmacotherapies לאלכוהול: הבחירה אפל, שני-בקבוק שתייה

הפרעה לשימוש באלכוהול (AUD) היא בעיה בריאותית לאומית גדולה ונדרש ההתפתחות של טיפולים יעילים יותר כדי לקזז את הצרכים של האוכלוסייה המטופלת הזו. לשם כך, הפרוטוקול הבא מנצל שני דגמים שתייה פשוטה מכרסמים כדי להעריך את היעילות פרה של תרכובות נגד אלכוהול עופרת.

Alcohol Use Disorder (AUD) is a major problem with more than an estimated 76 million people worldwide meeting the diagnostic criteria. Current treatments ...

המטרה הכוללת של פרדיגמה זו היא להעריך את האפקטיביות של תרופה פוטנציאלית נגד אלכוהול באמצעות מודלים מכרסמים של הפרעת שימוש באלכוהול. הפרעת שימוש באלכוהול מייצגת משבר גדול בבריאות הציבור. הטיפולים הנוכחיים אינם יעילים ונחוץ מחקר פרה-קליני מתמשך.הפרוטוקול שלנו מאפשר לנו להעריך את הבטיחות והתועלת של טיפול פוטנציאלי, כמו גם להעיף מבט על הנוירוביולוגיה הבסיסית של ההפרעה עצמה. התחל את ההליך על ידי חימום סכין שירות על מבער Bunsen. באמצעות סכין זו, לחתוך בערך סנטימטר מהקצה העליון והתחתון של פלסטיק 18 מיליליטר פיפטה סרולוגית.לאחר מכן לחמם את פיפטה תחת אקדח חום. הכנס את צינור מסבי הכדור לתוך הקצה התחתון של פיפטה. ואז באמצעות אקדח עטיפת כיווץ זמין מסחרית, לאטום את צינור לגימות במקום עם לעטוף כיווץ.קאפ את הפתח השני עם פקק סיליקון. למגורי בעלי חיים, עם ההגעה, בית יחיד כל עכבר בכלוב פוליקרבונט פוליסולפון סטנדרטי עם מצעים, מזון ומים וטופ כלוב רשת מתכת. החל מהיום הרביעי של שבוע אחד התאקלמות דיור יחיד, למדוד ולתרשם את הגוף היומי של העכבר משקולות מזון.למדוד את צריכת המים באמצעות תחריטים לצד הבקבוק ההפוך, כדי לתעד את הנקודה הגבוהה ביותר של המניסקוס. לאחר צריכת המים התייצב פלוס או מינוס 10% שונות מן הממוצע של שלושת הימים האחרונים, להתחיל גישה אתנול עם TBC או עשה. כדי לנהל TBS, להכין 10%פתרון אתנול ב 1, 000 מיליליטר על ידי הוספת 105.3 מיליליטר של 190 אתנול תבואה הוכחה 894.7 מיליליטר של מים, ולאחר מכן לנער אותו ביסודיות.בהתחשב בכך שאתנול מתאדה במהירות, החלף את הפתרון פעמיים בשבוע. ביום הראשון של TBC, בכל כלוב, רוקנו את אחד משני בקבוקי המים ומלאו אותו עד אפס מקום בתסכול האתנול הטרי שהוכן. בהתחשב בכך אתנול ומים קשה להבדיל חזותית, בבירור לתייג את הבקבוקים עם התוכן המתאים שלהם.הוסיפו עוד פתרון לבקבוק המים לפי הצורך. ואז למקם את הבקבוק בחזרה בכלוב, לוודא כי הכובע סגור בבטחה נטול כל בועות אוויר או דליפות מן זרבובית. הסר את כל בועות האוויר פשוט על ידי הקשה על הבקבוק, כך האוויר יכול לברוח הבקבוק.לסירוגין את המיקום של הבקבוק כל יומיים כדי לתקן עבור העדפת מקום מותנה השפעות הקשורות בפעילות שתייה. רשום את רמת צריכת אתנול ולנתח את צריכת אתנול 10% יחס העדפה. ברגע צריכת אתנול הפך יציב, לנהל זריקה תוך-ניתוחית שליטה אחת לכל עכבר במהלך שגרת המדידה היומית, להרגיל את העכבר להזרקה.לאחר שקו בסיס אתנול עם שונות נמוכה התבהר מחדש, חלק את העכברים לקבוצות בקרה וניסויים באמצעות ערכי צריכת האתנול כך שלכול הקבוצות יש ערכי צריכת אתנול ממוצעים דומים בערך. התחל מנון סמים יומי, או למשך זמן חריף או רב יומי. כדי לנהל DID, בכל יום של גישה אתנול מתוזמן, להקליט את המדידות עבור נפח המים, צריכת המזון ומשקל הגוף ולבצע מינה סמים.בצע זאת במהלך זמן שנבחר מראש במהלך מחזור האור שנבחר בהתאם לפרמקוקינטיקה של התרופה, כך שהתרכובת מתקרבת לריכוז המוח המרבי במהלך תקופת השתייה. לאחר מכן, הכן תסכול אתנול של 20% ב- 1,000 מיליליטר על-ידי הוספת 210.5 מיליליטר של 190 אתנול תבואה הוכחה ל-789.5 מיליליטר מים. אז לנער אותו ביסודיות.מלאו את בקבוק האתנול לפני תחילת מפגש השתייה, כך שברגע ש-DID מתחיל, ניתן פשוט להחליף את בקבוק המים בבקבוק האלכוהול. במהלך כל הפגישה עשה, להשתמש פנס אור אדום כדי לא להפריע את החיה. בתחילת הפגישה שתייה DID, אשר מתוכנן להתחיל שלוש שעות לתוך המחזור החשוך לפני מחזור האור, להקליט את נפח המים עבור כל עכבר.לאחר מכן החלף כל בקבוק מים בבקבוק של 20% פתרון אתנול והקליט את נפח האתנול ההתחלתי. קרא והקליט את כרך האתנול הסופי שעתיים לאחר מכן בתום מפגש השתייה בימים 1 עד 3 ו-4 שעות מאוחר יותר ביום הרביעי. לאחר מכן לנתח את צריכת 20%אתנול.לאחר מכן, להחליף את בקבוק אתנול עם בקבוק מים ולתקליט נפח המים. נתון זה מראה את הערכת ההשפעות של מנה חריפה של moxidectin בחמישה מיליגרם לקילוגרם על צריכת אתנול והעדפה. מנה אחת של moxidectin הפחיתה באופן משמעותי את צריכת האלכוהול מעל 45%בהשוואה לזריקות טרום תחמוצת והעדפה העולה על 30%10%צריכת אתנול והעדפה שניהם נשארים נמוכים משמעותית מלוחים ביום מיד לאחר טיפול MOX.כאן, שתייה מוגזמת הייתה מודל באמצעות הליך DID. עכברים ניתנו מלוחים בימים אחד עד ארבעה עם בסיסי 20% אתנול הוקמה ביום הרביעי. בימים 1 עד 3 של המחזור השבועי השני, כל העכברים קיבלו עוד הזרקת מלוחים יומית.ערכי צריכת האתנול מהיום השלישי שימשו לאחר מכן לפצל את העכברים לשתי קבוצות שקיבלו לאחר מכן או זריקה אחת של moxidectin בחמישה מיליגרם לקילוגרם או מלוחים ביום הרביעי. בשבוע שלאחר מכן, כל העכברים קיבלו זריקות מלוחים יומיות בימים 1 עד 4 וצריכת אתנול נמדדה שוב ביום הרביעי. ניהול חריף של MOX נותח ומצא להפחית באופן משמעותי את צריכת האלכוהול מעל 54% בהשוואה לזריקות לפני סמים.זכור כי ניסויים עתידיים באמצעות פרוטוקול זה חייב להיעשות כדי להעריך את המנגנון, מנון ורעילות של תרופה פוטנציאלית, כמו גם כדי להעריך את האפקטיביות שלה ביחס לאפשרויות הטיפול הנוכחיות.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

שיטה בידוד איילט Murine והשתלות כליה Subcapsular

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

אסטרטגיה לזהות מוטציות דה נובו בהפרעות נפוצות כגון אוטיזם וסכיזופרניה

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

פילוח ומדידה של כמויות השומן מודלים השמנת יתר Murine באמצעות קרני רנטגן טומוגרפיה ממוחשבת

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

פיתוח Bronchiolitis סותם במודל Murine של השתלת ריאות Orthotopic

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

דגם Murine של השתלת תומכן בעורק הראשי לחקר restenosis

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

Development of an Audio-based Virtual Gaming Environment to Assist with Navigation Skills in the Blind

פיתוח של סביבת משחקים וירטואלית אודיו מבוססות המסייע במיומנויות ניווט בליינד

Audio-based Environment Simulator (AbES) is virtual environment software designed to improve real world navigation skills in the blind. Using only audio ...

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

היבטים טכניים של מורסת Aortocaval מאוס

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

איסוף והפקת DNA רוק לסידור הדור הבא

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

השתלת כליה עכבר: מודלים של דחיית השתל

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

פיתוח מודל ישיר מכסת-זול עבור הערכת pulpal ריפוי פצע גיבוש מתקנת הדנטין של עכברים

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is ...