Name: murine drinking models in the development of pharmacotherapies for alcoholism: drinking in the dark and two-bottle choice
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice at JoVE.com

一部、研究によって付与 SC CTSI/NIH/NCRR にこの作業はサポートされている/NCATS - UL1TR000130 (D.L.D.)、AA022448 (D.L.D.)、南カリフォルニア大学薬学部。

ここで説明したすべての手順は、機関動物ケアと南カリフォルニア大学の健康科学のキャンパスの使用委員会によって承認されています。
1 実験装置およびアセンブリ
<ol><li>すべての次の消耗品および研究の開始前に化学物質を取得: マウス、ケージ/金属ケージ トップ、寝具、食品、水、エタノール、pipets、シッパー トップ、シュリンク ラップ、ユーティリティ ナイ...

<ol>
	<li>Litten, R. Z., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery,+Development,+and+Adoption+of+Medications+to+Treat+Alcohol+Use+Disorder:+Goals+for+the+Phases+of+Medications+Development.">Discovery, Development, and Adoption of Medications to Treat Alcohol Use Disorder: Goals for the Phases of Medications Development.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 40 (7), 1368-1379 (2016).</li><li>Grant, B. F., Dawson, D. A., Stinson, F. S., Chou, S. P., Dufour, M. C., Pickering, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+12-month+prevalence+and+trends+in+DSM-IV+alcohol+abuse+and+dependence:+United+States,+1991-1992+and+2001-2002.">The 12-month prevalence and trends in DSM-IV alcohol abuse and dependence: United States, 1991-1992 and 2001-2002.</a> Drug and Alcohol Dependence. 74 (3), 223-234 (2004).</li><li>Sacks, J. J., Gonzales, K. R., Bouchery, E. E., Tomedi, L. E., Brewer, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+and+State+Costs+of+Excessive+Alcohol+Consumption.">National and State Costs of Excessive Alcohol Consumption.</a> American Journal of Preventive Medicine. 49 (5), 73-79 (2015).</li><li>Litten, R. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medications+development+to+treat+alcohol+dependence:+a+vision+for+the+next+decade.">Medications development to treat alcohol dependence: a vision for the next decade.</a> Addiction Biology. 17 (3), 513-527 (2012).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Johnson+Medication+Treatment+of+Different+Types+of+Alcoholism.">Johnson Medication Treatment of Different Types of Alcoholism.</a> American Journal of Psychiatry. 167 (6), 630-639 (2010).</li><li>Litten, R. Z., Wilford, B. B., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+medications+for+the+treatment+of+alcohol+use+disorder:+An+evaluation+of+clinical+efficacy+and+safety.">Potential medications for the treatment of alcohol use disorder: An evaluation of clinical efficacy and safety.</a> Substance Abuse. 37 (2), 286-298 (2016).</li><li>Litten, R. Z., Ryan, M. L., Falk, D. E., Reilly, M., Fertig, J. B., Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+Alcohol+Use+Disorder:+Understanding+Mechanisms+to+Advance+Personalized+Treatment.+Alcoholism:+Clinical+and+Experimental.">Heterogeneity of Alcohol Use Disorder: Understanding Mechanisms to Advance Personalized Treatment. Alcoholism: Clinical and Experimental.</a> Research. 39 (4), 579-584 (2015).</li><li>Schuckit, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Genome-Wide+Search+for+Genes+That+Relate+to+a+Low+Level+of+Response+to+Alcohol.">A Genome-Wide Search for Genes That Relate to a Low Level of Response to Alcohol.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 25 (3), 323-329 (2001).</li><li>Batki, S. L., Pennington, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+Personalized+Medicine+in+the+Pharmacotherapy+of+Alcohol+Use+Disorder:+Targeting+Patient+Genes+and+Patient+Goals.">Toward Personalized Medicine in the Pharmacotherapy of Alcohol Use Disorder: Targeting Patient Genes and Patient Goals.</a> American Journal of Psychiatry. 171 (4), 391-394 (2014).</li><li>Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+frameworks+and+mechanistic+aspects+of+alcohol+addiction:+alcohol+addiction+as+a+reward+deficit+disorder.">Theoretical frameworks and mechanistic aspects of alcohol addiction: alcohol addiction as a reward deficit disorder.</a> Current topics in behavioral neurosciences. 13, 3-30 (2013).</li><li>Yoneyama, N., Crabbe, J. C., Ford, M. M., Murillo, A., Finn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voluntary+ethanol+consumption+in+22+inbred+mouse+strains.">Voluntary ethanol consumption in 22 inbred mouse strains.</a> Alcohol. 42 (3), 149-160 (2008).</li><li>Rhodes, J. S., Best, K., Belknap, J. K., Finn, D. A., Crabbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+simple+model+of+ethanol+drinking+to+intoxication+in+C57BL/6J+mice.">Evaluation of a simple model of ethanol drinking to intoxication in C57BL/6J mice.</a> Physiology &amp; Behavior. 84 (1), 53-63 (2005).</li><li>Thiele, T. E., Navarro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Drinking+in+the+dark"+(DID)+procedures:+A+model+of+binge-like+ethanol+drinking+in+non-dependent+mice.">"Drinking in the dark" (DID) procedures: A model of binge-like ethanol drinking in non-dependent mice.</a> Alcohol. 48 (3), 235-241 (2014).</li><li>Crabbe, J. C., Spence, S. E., Brown, L. L., Metten, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol+preference+drinking+in+a+mouse+line+selectively+bred+for+high+drinking+in+the+dark.">Alcohol preference drinking in a mouse line selectively bred for high drinking in the dark.</a> Alcohol. 45 (5), 427-440 (2011).</li><li>Sprow, G. M., Thiele, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neurobiology+of+binge-like+ethanol+drinking:+Evidence+from+rodent+models.">The neurobiology of binge-like ethanol drinking: Evidence from rodent models.</a> Physiology &amp; Behavior. 106 (3), 325-331 (2012).</li><li>Neasta, J., Hamida, B., Yowell, Q., Carnicella, S., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+mammalian+target+of+rapamycin+complex+1+signaling+in+neuroadaptations+underlying+alcohol-related+disorders.">Role for mammalian target of rapamycin complex 1 signaling in neuroadaptations underlying alcohol-related disorders.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (46), 20093-20098 (2010).</li><li>Huynh, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+development+of+moxidectin+as+a+novel+therapeutic+for+alcohol+use+disorder.">Preclinical development of moxidectin as a novel therapeutic for alcohol use disorder.</a> Neuropharmacology. 113, 60-70 (2017).</li><li>Egli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+experimental+paradigms+and+animal+models+be+used+to+discover+clinically+effective+medications+for+alcoholism.">Can experimental paradigms and animal models be used to discover clinically effective medications for alcoholism.</a> Addiction Biology. 10 (4), 309-319 (2005).</li><li>Huynh, N., Arabian, N., Lieu, D., Asatryan, L., Davies, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+an+Orally+Dissolving+Strip+for+Pharmacological+and+Toxicological+Studies:+A+Simple+and+Humane+Alternative+to+Oral+Gavage+for+Animals.">Utilizing an Orally Dissolving Strip for Pharmacological and Toxicological Studies: A Simple and Humane Alternative to Oral Gavage for Animals.</a> Journal of Visualized Experiments. (109), (2016).</li><li>Yardley, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ivermectin+reduces+alcohol+intake+and+preference+in+mice.">Ivermectin reduces alcohol intake and preference in mice.</a> Neuropharmacology. 63 (2), 190-201 (2012).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li></ol>

世界中の概算では、7600 万人がアルコール使用障害 (AUD) の診断を正当化する条件を満たしています。残念ながら、現在利用可能な医薬の治療法はほとんど効果がないとさらなる発展この臨床人口20のニーズを相殺する必要があります。この目的のために次のプロトコル 2 つのパラダイムを飲む最も基本的な齧歯動物のチームパワーがこの努力を促進することを目的: 2 つのボ?...

過去の 25 年、プラス、アルコール使用障害 (AUD)1の治療のため薬の開発に向けて多大な労力を置かれています。AUD はまだ以上 1800 万のアメリカ人に影響を与えると、$ 2200 億をかけて主要な公衆衛生問題を残っている多くの進歩がなされたが毎年2,3。現在、唯一の 3 つの FDA 承認薬、ジスルフィラム、ナルトレキソン、アカンプロセート、臨床試験および限られた成功クリニック設定における心理社会的介入と組み合わせるとも矛盾する結果が得られているすべて4,5,6,7。
現在の豪ドルの治療の失敗の主な理由は、AUD8の異種の性質にリンクされます。環境および遺伝的要因は、豪ドルの開発に貢献する一方遺伝は発症9のリスクの推定の 50-60% を占めています。うつ病の治療と同様に、それは広く受け入れられている AUD から患者がさまざまな10の各患者のニーズに合った医薬品を必要があります。
明らかに、創の既に困難で時間のかかるプロセスが合理化された3場合、促進されるだろうより効果的な治療のための緊急の必要性があります。この目的のためには、次のプロトコルは、前臨床モデルへの適用 2 齧歯類飲酒広く AUD11の神経生物学の基礎を確認するために使用を示します。具体的には、本書で紹介するメソッドは、アルコールを減らすことで候補化合物の有効性を評価することが「中程度」、「飲み騒ぎ」シナリオ 2 本選択 (TBC) を利用した、暗い (DID) パラダイムの中で飲む消費それぞれ。両方のパラダイムを調べる非オペラント エタノール自己管理、というマウス経口と意志で、エタノールを摂取したがって例示高顔し人間のアルコール依存症11のモデルとしての妥当性を構築します。
TBC 飲んで、またとして知られている飲料、嗜好飲料、自由に選択または社会の飲酒で、ソリューションの 2 つのボトルが家のケージで継続的に利用できます。1 ボトルは、水を含むし、薄めたエタノール、エタノールの濃度を変えることができるというを格納 (e.g。、5-30% v/v)11,12。マウスは両方のボトルに常時アクセスを持って、したがって、どのくらい各ボトルから飲むことを選択できます。
このモデルは、エタノール好み比 (エタノール消費 ÷ 総容積液消費量) だけでなく、各マウス (g/kg) のエタノールを評価します。それはマウス、または特定の遺伝子操作後の異なる系統間で飲酒レベルを比較する使用 (e.g、遺伝子ノックアウトまたはノックダウン) と血中エタノール濃度 (Bec) 人間で見られるものと同様の結果と。モデレート13,14で飲みます。
DID の手順、暗いサイクルの開始後 3 時間でホーム ケージのボトル入り飲料水は飲んでセッション アクセスが制限の 20% (v/v) エタノールのボトルと交換されます。飲み会は、4 日目に連続した 4 日間のサイクル、1 ~ 3 日の永続的な 2 h と 4 h として発生します。1-3 日は、4 日目にテストする前にアルコール habituation 期間として機能します。その結果、マウスは確実に Bec を達成するために十分なエタノールを消費する > 100 mg/dL とその結果、どんちゃん騒ぎ飲むことは13、14,15は、人間の中毒の行動への影響を展示します。水、飲み会以外のすべての回で利用できます。
制限付きアクセスを飲んでのいくつかのバリエーションがあります。たとえば、断続的にアクセス モデルで平日と週末には、それぞれ1624 時間および 48 時間の休薬期間でマウスは月曜日、水曜日、および金曜日にのみ (1 つの含んでいる水と他の含まれている 20% (v/v) エタノール) 2 つのボトルを受け取る。断続的にアクセスの数週間後、マウスは徐々 し、最終的に BEC DID モデルで観察されるものと同様の達成レベルを飲んで自らエスカレートします。DID、ただし、どんちゃん騒ぎのような飲酒行動を評価するために最も一般的に使用されるモデルであることが表示されます。断続的な飲酒の他のモデルが存在するが、彼らは食糧へのアクセス制限に依存や自主的な人間のアルコール消費量16以下の代表になる自主的な自己管理の商工会議所による増加を水蒸気します。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1617px;" width="1616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:483px;">1 L&#160; graduated cylinder</td>
			<td style="width:315px;">VWR</td>
			<td style="width:232px;">https://us.vwr.com/store/product/20935285/marisco-single-scale-cylinder-graduates-john-m-maris-co</td>
			<td style="width:588px;">To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">1 L glass bottle</td>
			<td>Pyrex (Fisher Scientific)</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/pyrex-reusable-media-storage-bottles-12/p-42752</td>
			<td>To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">100 mL graduated cylinder</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimble-chase-kimax-class-a-to-contain-graduated-cylinders-8/p-4369311</td>
			<td>To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Analox</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>One potential method of analyzing DID blood samples is by using the analox machine</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">ball-bearing sipper tubes</td>
			<td>Ancare Corp.</td>
			<td>http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point</td>
			<td>Length: 2.5 inches, Diameter: 5/16 inches, Model: TD100</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">C57BL/6J Mice</td>
			<td>Jackson lab</td>
			<td>https://www.jax.org/strain/000664</td>
			<td>May also come from internal breeding colony</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">disposable serological pipets</td>
			<td>VWR International (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4760455/vwr-disposable-serological-pipets-polystyrene-sterile-plugged</td>
			<td>10 mL, 18 mL, or 25 mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">ethanol, pure, 190 proof (95%), USP, KOPTEC</td>
			<td>Decon Labs (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4542412/ethanol-pure-190-proof-95-usp-koptec</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">heat gun&#160;</td>
			<td>Master Appliances Corp.</td>
			<td colspan="2">http://www.masterappliance.com/master-heat-guns-kits/</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">heat shrink tubing</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Diameter: 3/8 inches</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">industrial knife/blade</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">metal cage plate</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Should be available through the university/institutional vivarium</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">mouse RO water</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Should be available through the university/institutional vivarium</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">portable electronic scale</td>
			<td>Ohaus (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4789377/portable-electronic-cs-series-scales-ohaus</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">red light headlamp</td>
			<td>nyteBright (Amazon)</td>
			<td>https://www.amazon.com/LED-Headlamp-Flashlight-Red-Light/dp/B00R0LMMF8/ref=sr_1_1?ie=UTF8&#38;qid=1499591137&#38;sr=8-1-spons&#38;keywords=red+lamp+headlamp&#38;psc=1</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">silicone stoppers</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">thermometer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-scientific-hygro-thermometer-clock-large-display-2/p-4077232</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">weigh boat</td>
			<td>VWR International (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/16773534/vwr-pour-boat-weighing-dishes</td>
			<td>The lid from a pipete tip box is an appropriate alternative</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine drinking models in the development of pharmacotherapies for alcoholism: drinking in the dark and two-bottle choice

アルコール使用障害 (AUD) は大きな問題よりも、推定 7600 万の世界的な診断基準を満たす人します。現在の治療法は、介入と高によって明らかにされる再発率で心理と組み合わせる場合でもほとんど効果がない 3 つの FDA 承認薬に限定されます。そのためより新しい治療法の検索は重要な公衆衛生の目標を表します。このためには、次のプロトコルを利用鉛抗アルコール化合物の臨床効果を評価するために 2 つの単純な齧歯動物飲酒モデル: 2 本選択 (TBC) と闇 (DID) で飲みます。前者は自発的にマウスを誘導する後者間適度に自主的な飲み物をマウス酒盛りを模した短い期間でアルコールの大量に消費することができます。これらのパラダイムの両方のシンプルかつ高いスループット自然許可薬理学的エージェントの急速なスクリーニングのためまたはある特定の自主的な飲酒行動を示すマウスの系統を識別するため。

次の代表的な調査で 2 ボトル選択 (TBC) パラダイムを使用してモデル社会を飲みます。簡単に言えば、マウス水、その他 10% (v/v) エタノール溶液に含まれている 1 つのソリューションの 2 つのボトルにアクセスしていた。被験者はその後分割され、各グループだろう変化の最小量のエタノール摂取量の平均は、薬物治療群、モキシデクチン (MOX) 生理食塩水制御対に均等...

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Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice

アルコール中毒のための Pharmacotherapies の開発のモデルを飲むマウス: 暗く、2 ボトルの選択で飲む

アルコール使用障害 (AUD) は主要な国民の健康上の問題、この患者集団のニーズを相殺するためにより効果的な治療法の開発が必要です。この目的のためには、次のプロトコルは、鉛抗アルコール化合物の臨床効果を評価するために 2 つの単純な齧歯動物飲酒モデルを利用しています。

Alcohol Use Disorder (AUD) is a major problem with more than an estimated 76 million people worldwide meeting the diagnostic criteria. Current treatments ...

このパラダイムの全体的な目標は、アルコール使用障害のげっ歯類モデルを使用して潜在的な抗アルコール薬の有効性を評価することです.アルコール使用障害は、主要な公衆衛生上の危機を表しています。現在の治療は効果がなく、進行中の前臨床研究が必要です。私たちのプロトコルは、潜在的な治療の安全性と有用性を評価するだけでなく、障害自体の基礎となる神経生物学を見ることを可能にします。ブンゼンバーナーにユーティリティナイフを加熱して手順を開始します。このナイフを使用して、プラスチック18ミリリットルの血清ピペットの上端と下端から約1インチを切ります。次に、ヒートガンの下でピペットを暖めます。ボールベアリングシッパーチューブをピペットの下端に挿入します。次に市販のシュリンクラップガンを使用し、シッパーチューブをシュリンクラップで所定の位置に密封します。シリコーンストッパーで他の開口部をキャップオフします。動物の習慣のために、到着時に、寝具、食べ物と水と金属グリッドケージトップと標準的なポリカーボネートポリスルホンケージ内の各マウスをシングルハウス。1週間の単一住宅の順応の4日目から、マウスの毎日の体と食べ物の重みを測定し、記録します。転立ボトルと一緒にエッチングを使用して水分摂取量を測定し、半月板の最高点を記録します。水の摂取量が過去3日間の平均からプラスマイナス10%の変動に安定したら、TBCまたはDIDのいずれかでエタノールアクセスを開始します。TBSを実施するには、105.3ミリリットルの190の証拠穀物エタノールを894.7ミリリットルの水に加えて105.3ミリリットルで10%エタノール溶液を調製し、十分に振ります。エタノールが速やかに蒸発することを考えると、溶液を週に2回交換してください。TBCの初日、各ケージに2つの水筒のうちの1つを空にし、準備したてのエタノール溶液で満たします。エタノールと水を目視で区別することが困難であることを考えると、ボトルに対応する内容物を明確にラベル付けします。必要に応じて、水筒にさらにソリューションを追加します。その後、ボトルをケージに戻し、キャップがしっかりと閉じられ、気泡や噴出口からの漏れが欠けていることを確認します。空気がボトルから逃げることができるように、ボトルをタップするだけで気泡を取り除きます。飲み物活動における条件付き場所の好みに関連する影響を修正するために、ボトルの位置を1日おきに交互に行う。エタノール摂取量を記録し、10%エタノール摂取量と選好率を分析した。エタノール摂取量が安定になるとすぐに、毎日の測定ルーチン中に各マウスに腹腔内注射を1回制御し、マウスを注射に慣す。変動性の低いエタノールベースラインが再確立したら、マウスをエタノール摂取量値を用いて対照群と実験群に分け、全群がほぼ同じ平均エタノール摂取量値を有するようにする。急性または複数日の期間のいずれかの毎日の薬物の服用を開始します。DIDを実施するには、スケジュールされたエタノールアクセスの各日に、水量、食物摂取量および体重の測定値を記録し、薬物投与を行う。薬物の薬物動態に従って選択された光サイクル中に事前に選択された時間の間にこれを実行し、化合物が飲酒期間中に最大脳濃度に近づくようにする。次に、1,000ミリリットルに20%エタノール溶液を調製し、190の証拠穀物エタノールを210.5ミリリットルの水に加えます。その後、徹底的にそれを振ります。飲み会の開始前にエタノールボトルを充填し、DIDが始まるとすぐに、水筒をアルコールボトルに置き換えることができます。DIDセッション全体で、動物を邪魔しないように赤いライトのヘッドランプを使用してください。光サイクルの前に暗いサイクルに3時間開始する予定のDID飲酒セッションの開始時に、各マウスの水の量を記録します。次に、各水ボトルを20%エタノール溶液のボトルに交換し、エタノールの開始量を記録します。飲み会の終わりに2時間後に最終エタノール量を読んで記録し、4日目の1〜3時間と4時間後に記録します。その後、20%エタノール摂取量を分析する。その後、エタノールボトルを水筒に交換し、水量を記録します。この図は、エタノールの摂取量と好みに対する1キログラム当たり5ミリグラムの急性用量のモオセクチンの影響の評価を示す。1回の用量のマオキシクチンは、30%10%エタノール摂取量および好みがMOX治療直後の日に、前のメキシクチン注射および好みと比較して45%を超えるアルコール摂取量を有意に減少させた。ここで、暴飲暴飲はDID手順を用いてモデル化した。マウスは、4日目に確立されたベースライン20%エタノールで1日目から4日目に生理液化物を投与した。第2週周期の1日目から3日目に、すべてのマウスはさらに別の毎日の生理液注射を受けた。その後、3日目からのエタノール摂取量の値を使用してマウスを2つのグループに分割し、その後、1キログラム当たり5ミリグラムまたは4日目に生理食糸で1回のモキシクチン注射を受けた。翌週、すべてのマウスは1日目から4日目に毎日生理液注射を受け、エタノール摂取量は4日目に再び測定された。MOXの急性投与を分析し、薬物注射前と比較して54%を超えるアルコール摂取量を有意に減少させることがわかった。このプロトコルを使用した将来の実験は、潜在的な薬物のメカニズム、服用および毒性を評価し、現在の治療オプションに関連して有効性を評価するために行われなければならないことを覚えておいてください。

Research

JoVE Journal

Medicine

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