Name: murine drinking models in the development of pharmacotherapies for alcoholism: drinking in the dark and two-bottle choice
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet, delvis av forskning gir SC CTSI NIH/NCRR/NCATS - UL1TR000130 (D.L.D.), AA022448 (D.L.D.) og USC School of Pharmacy.

Alle prosedyrene som er beskrevet her er godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk komiteer av University of Southern California Health Sciences Campus.
1. eksperimentelle oppsett og montering
<ol><li>Skaffe alle følgende tilbehør og kjemikalier før starten av studien: mus, bur/metal bur topper, sengetøy, mat, vann, etanol, Pipetter for flergangsbruk, sipper topper, krympe wrap, verktøyet kniv, zip bånd, bånd, bunsenbrenner, skala, hodelykt.</li>
	<li>Få C57BL/6J mus, enten fra...

<ol>
	<li>Litten, R. Z., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery,+Development,+and+Adoption+of+Medications+to+Treat+Alcohol+Use+Disorder:+Goals+for+the+Phases+of+Medications+Development.">Discovery, Development, and Adoption of Medications to Treat Alcohol Use Disorder: Goals for the Phases of Medications Development.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 40 (7), 1368-1379 (2016).</li><li>Grant, B. F., Dawson, D. A., Stinson, F. S., Chou, S. P., Dufour, M. C., Pickering, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+12-month+prevalence+and+trends+in+DSM-IV+alcohol+abuse+and+dependence:+United+States,+1991-1992+and+2001-2002.">The 12-month prevalence and trends in DSM-IV alcohol abuse and dependence: United States, 1991-1992 and 2001-2002.</a> Drug and Alcohol Dependence. 74 (3), 223-234 (2004).</li><li>Sacks, J. J., Gonzales, K. R., Bouchery, E. E., Tomedi, L. E., Brewer, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+and+State+Costs+of+Excessive+Alcohol+Consumption.">National and State Costs of Excessive Alcohol Consumption.</a> American Journal of Preventive Medicine. 49 (5), 73-79 (2015).</li><li>Litten, R. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medications+development+to+treat+alcohol+dependence:+a+vision+for+the+next+decade.">Medications development to treat alcohol dependence: a vision for the next decade.</a> Addiction Biology. 17 (3), 513-527 (2012).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Johnson+Medication+Treatment+of+Different+Types+of+Alcoholism.">Johnson Medication Treatment of Different Types of Alcoholism.</a> American Journal of Psychiatry. 167 (6), 630-639 (2010).</li><li>Litten, R. Z., Wilford, B. B., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+medications+for+the+treatment+of+alcohol+use+disorder:+An+evaluation+of+clinical+efficacy+and+safety.">Potential medications for the treatment of alcohol use disorder: An evaluation of clinical efficacy and safety.</a> Substance Abuse. 37 (2), 286-298 (2016).</li><li>Litten, R. Z., Ryan, M. L., Falk, D. E., Reilly, M., Fertig, J. B., Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+Alcohol+Use+Disorder:+Understanding+Mechanisms+to+Advance+Personalized+Treatment.+Alcoholism:+Clinical+and+Experimental.">Heterogeneity of Alcohol Use Disorder: Understanding Mechanisms to Advance Personalized Treatment. Alcoholism: Clinical and Experimental.</a> Research. 39 (4), 579-584 (2015).</li><li>Schuckit, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Genome-Wide+Search+for+Genes+That+Relate+to+a+Low+Level+of+Response+to+Alcohol.">A Genome-Wide Search for Genes That Relate to a Low Level of Response to Alcohol.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 25 (3), 323-329 (2001).</li><li>Batki, S. L., Pennington, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+Personalized+Medicine+in+the+Pharmacotherapy+of+Alcohol+Use+Disorder:+Targeting+Patient+Genes+and+Patient+Goals.">Toward Personalized Medicine in the Pharmacotherapy of Alcohol Use Disorder: Targeting Patient Genes and Patient Goals.</a> American Journal of Psychiatry. 171 (4), 391-394 (2014).</li><li>Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+frameworks+and+mechanistic+aspects+of+alcohol+addiction:+alcohol+addiction+as+a+reward+deficit+disorder.">Theoretical frameworks and mechanistic aspects of alcohol addiction: alcohol addiction as a reward deficit disorder.</a> Current topics in behavioral neurosciences. 13, 3-30 (2013).</li><li>Yoneyama, N., Crabbe, J. C., Ford, M. M., Murillo, A., Finn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voluntary+ethanol+consumption+in+22+inbred+mouse+strains.">Voluntary ethanol consumption in 22 inbred mouse strains.</a> Alcohol. 42 (3), 149-160 (2008).</li><li>Rhodes, J. S., Best, K., Belknap, J. K., Finn, D. A., Crabbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+simple+model+of+ethanol+drinking+to+intoxication+in+C57BL/6J+mice.">Evaluation of a simple model of ethanol drinking to intoxication in C57BL/6J mice.</a> Physiology &amp; Behavior. 84 (1), 53-63 (2005).</li><li>Thiele, T. E., Navarro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Drinking+in+the+dark"+(DID)+procedures:+A+model+of+binge-like+ethanol+drinking+in+non-dependent+mice.">"Drinking in the dark" (DID) procedures: A model of binge-like ethanol drinking in non-dependent mice.</a> Alcohol. 48 (3), 235-241 (2014).</li><li>Crabbe, J. C., Spence, S. E., Brown, L. L., Metten, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol+preference+drinking+in+a+mouse+line+selectively+bred+for+high+drinking+in+the+dark.">Alcohol preference drinking in a mouse line selectively bred for high drinking in the dark.</a> Alcohol. 45 (5), 427-440 (2011).</li><li>Sprow, G. M., Thiele, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neurobiology+of+binge-like+ethanol+drinking:+Evidence+from+rodent+models.">The neurobiology of binge-like ethanol drinking: Evidence from rodent models.</a> Physiology &amp; Behavior. 106 (3), 325-331 (2012).</li><li>Neasta, J., Hamida, B., Yowell, Q., Carnicella, S., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+mammalian+target+of+rapamycin+complex+1+signaling+in+neuroadaptations+underlying+alcohol-related+disorders.">Role for mammalian target of rapamycin complex 1 signaling in neuroadaptations underlying alcohol-related disorders.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (46), 20093-20098 (2010).</li><li>Huynh, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+development+of+moxidectin+as+a+novel+therapeutic+for+alcohol+use+disorder.">Preclinical development of moxidectin as a novel therapeutic for alcohol use disorder.</a> Neuropharmacology. 113, 60-70 (2017).</li><li>Egli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+experimental+paradigms+and+animal+models+be+used+to+discover+clinically+effective+medications+for+alcoholism.">Can experimental paradigms and animal models be used to discover clinically effective medications for alcoholism.</a> Addiction Biology. 10 (4), 309-319 (2005).</li><li>Huynh, N., Arabian, N., Lieu, D., Asatryan, L., Davies, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+an+Orally+Dissolving+Strip+for+Pharmacological+and+Toxicological+Studies:+A+Simple+and+Humane+Alternative+to+Oral+Gavage+for+Animals.">Utilizing an Orally Dissolving Strip for Pharmacological and Toxicological Studies: A Simple and Humane Alternative to Oral Gavage for Animals.</a> Journal of Visualized Experiments. (109), (2016).</li><li>Yardley, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ivermectin+reduces+alcohol+intake+and+preference+in+mice.">Ivermectin reduces alcohol intake and preference in mice.</a> Neuropharmacology. 63 (2), 190-201 (2012).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li></ol>

Verdensomspennende anslag tyder på at som 76 millioner mennesker oppfyller kravene til å rettferdiggjøre en diagnose for alkohol bruk lidelse (AUD). Dessverre farmasøytiske behandlinger tilgjengelig er stort sett ineffektiv og videre utvikling er nødvendig å kompensere behovene til denne kliniske befolkningen20. Dette følgende protokoll som mål å forenkle denne bestrebelsen ved exemplifying to av de mest grunnleggende gnager drikke paradigmer: to-flaske-valg (TBC) og drikker i mørket (DI...

For siste 25 pluss år, betydelig innsats har blitt satt mot å utvikle medisiner for behandling av alkohol bruk lidelse (AUD)1. Selv om mange fremskritt er gjort, AUD fortsatt et stort offentlig helseproblem, påvirker over 18 millioner amerikanere, og koster over $220 milliarder årlig2,3. Foreløpig er det bare tre FDA-godkjente, disulfiram, naltrexon og acamprosate, som har gitt inkonsistente resultater i kliniske forsøk og begrenset suksess selv når kombinert med psykososial intervensjon i klinikken innstillingene 4 , 5 , 6 , 7.
Hovedårsak for feil på gjeldende AUD terapi er koblet til AUD8heterogene natur. Mens både miljø og genetiske faktorer som bidrar til utvikling av AUD, utgjør heritability anslagsvis 50-60% av risikoen for utbruddet9. Lik behandling av depresjon, det er allment akseptert at pasienter som lider av AUD må en rekke medisiner som er tilpasset behovene til hver pasient10.
Klart, det er et presserende behov for mer effektive behandlinger som vil bli lettere hvis den allerede vanskelige og tidkrevende prosessen med stoffet funnet var strømlinjeformet3. Dette viser følgende protokollen prekliniske anvendelse av to gnager drikking modellene brukte undersøke nevrobiologiske grunnlaget for AUD11. Mer spesifikt, metoden innført her kan vurdere effekten av kandidaten forbindelser redusere alkohol forbruk i både "moderat" og "overstadig drikking" scenarier bruker to-flaske valg (TBC) og drikking i mørke (DID) paradigmer, henholdsvis. Begge paradigmer undersøke ikke-operant etanol selv administrasjon, der mus ingest etanol muntlig og på vilje, og derfor illustrere høy ansikt og konstruere gyldighet som en modell av menneskelig alkoholisme11.
TBC drikking, også kjent som fritt valg drikking, preferanse drikke, eller sosiale drikke, er to flasker løsning kontinuerlig tilgjengelig i hjem buret. En flaske inneholder vann, og det andre inneholder en utvannet løsning av etanol, der konsentrasjonen av etanol kan varieres (f.eks., 5-30% v/v)11,12. Mus har konstant tilgang til både flasker, og derfor kan velge hvor mye å drikke fra hver flaske.
Denne modellen vurderer etanol forbruket av hver mus (g/kg), samt etanol preferanse ratio (volum etanol fortært ÷ totale volumet væske fortært). Det brukes rutinemessig sammenligne drikking nivåer over ulike stammer mus, eller etter en bestemt genetisk manipulasjon (f.eks., gene knockout eller knockdown) og resultater i blod etanol konsentrasjoner (BECs) ligner det som er funnet i mennesker når drikker i moderasjon13,14.
I DID prosedyren 3t etter starten av mørke syklusen, utveksles hjem bur flaske vann med en flaske av 20% (v/v) etanol løsning for begrenset adgang drikke økten. Drikking økter oppstå som rad 4-dagers syklus, varig 2t på dager 1-3 og 4 h på dag 4. Dager 1-3 tjene som en alkohol-habituering periode før testing på dag 4. Følgelig mus pålitelig bruker nok etanol for å oppnå BECs > 100 mg/dL og resultatet forevise opptreden effekten av forgiftning i mennesker som er overstadig13,14,15. Vann tilgang er tilgjengelig på alle tider enn drikking økten.
Det finnes flere varianter av begrenset tilgang drikking. For eksempel i intermittent adgang modellen får mus to flasker (en som inneholder vann og andre med 20% (v/v) etanol) på mandag, onsdag og fredag med en 24 h og 48 h uttak periode hverdager som helger, henholdsvis16. Etter flere uker med intermittent adgang, musene vil gradvis og eskalere frivillig drikke nivåer, til slutt oppnå BECS ligner det er observert i DID modellen. DID, men synes å være mest brukte modell å vurdere overstadig-lignende drikking oppførsel. Andre modeller av uregelmessige drikker finnes, men de avhengige begrense tilgang til mat eller damp kammer indusert økning i frivillig selv-administrasjonen, som gjør dem mindre representant frivillige menneskelige alkohol forbruk16.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1617px;" width="1616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:483px;">1 L&#160; graduated cylinder</td>
			<td style="width:315px;">VWR</td>
			<td style="width:232px;">https://us.vwr.com/store/product/20935285/marisco-single-scale-cylinder-graduates-john-m-maris-co</td>
			<td style="width:588px;">To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">1 L glass bottle</td>
			<td>Pyrex (Fisher Scientific)</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/pyrex-reusable-media-storage-bottles-12/p-42752</td>
			<td>To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">100 mL graduated cylinder</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimble-chase-kimax-class-a-to-contain-graduated-cylinders-8/p-4369311</td>
			<td>To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Analox</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>One potential method of analyzing DID blood samples is by using the analox machine</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">ball-bearing sipper tubes</td>
			<td>Ancare Corp.</td>
			<td>http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point</td>
			<td>Length: 2.5 inches, Diameter: 5/16 inches, Model: TD100</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">C57BL/6J Mice</td>
			<td>Jackson lab</td>
			<td>https://www.jax.org/strain/000664</td>
			<td>May also come from internal breeding colony</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">disposable serological pipets</td>
			<td>VWR International (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4760455/vwr-disposable-serological-pipets-polystyrene-sterile-plugged</td>
			<td>10 mL, 18 mL, or 25 mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">ethanol, pure, 190 proof (95%), USP, KOPTEC</td>
			<td>Decon Labs (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4542412/ethanol-pure-190-proof-95-usp-koptec</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">heat gun&#160;</td>
			<td>Master Appliances Corp.</td>
			<td colspan="2">http://www.masterappliance.com/master-heat-guns-kits/</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">heat shrink tubing</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Diameter: 3/8 inches</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">industrial knife/blade</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">metal cage plate</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Should be available through the university/institutional vivarium</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">mouse RO water</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Should be available through the university/institutional vivarium</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">portable electronic scale</td>
			<td>Ohaus (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4789377/portable-electronic-cs-series-scales-ohaus</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">red light headlamp</td>
			<td>nyteBright (Amazon)</td>
			<td>https://www.amazon.com/LED-Headlamp-Flashlight-Red-Light/dp/B00R0LMMF8/ref=sr_1_1?ie=UTF8&#38;qid=1499591137&#38;sr=8-1-spons&#38;keywords=red+lamp+headlamp&#38;psc=1</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">silicone stoppers</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">thermometer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-scientific-hygro-thermometer-clock-large-display-2/p-4077232</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">weigh boat</td>
			<td>VWR International (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/16773534/vwr-pour-boat-weighing-dishes</td>
			<td>The lid from a pipete tip box is an appropriate alternative</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine drinking models in the development of pharmacotherapies for alcoholism: drinking in the dark and two-bottle choice

Alkohol bruk lidelse (AUD) er et stort problem med mer enn rundt 76 millioner mennesker verden over møte de diagnostiske kriteriene. Gjeldende behandlinger er begrenset til tre FDA-godkjente som er stort sett ineffektiv selv når kombinert med psykososial intervensjon, som det fremgår av høy tilbakefall rate. Som sådan, representerer Søk etter flere nye behandlinger en viktige mål. Dette følgende protokollen utnytter to enkle gnager drikking modeller for å vurdere prekliniske effekten av bly anti-alkohol forbindelser: to-flaske valg (TBC) og drikker i mørket (DID). Den tidligere kan mus til frivillige drikk i moderasjon mens sistnevnte induserer mus til frivillig konsumerer store mengder alkohol på kort som etterligner overstadig drikking. Enkel og høy gjennomstrømning natur begge disse paradigmer tillate rask screening av farmakologiske agenter eller identifisere stammer mus som viser enkelte frivillige drikking oppførsel.

I de følgende representative undersøkelsene, var sosiale drikking modellert bruker to-flaske valg (TBC) paradigmet. Kort, mus hadde tilgang til to flasker løsning, en som inneholdt vann, og den andre en 10% (v/v) etanol løsning. Fagene ble deretter delt og jevnt tildelt narkotika behandlingsgrupper, moxidectin (MOX) vs saltvann kontroll, slik at hver gruppe ville gjennomsnitt etanol inntak nivåer med minst variasjon.
Først...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice at JoVE.com

Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice

Trouble drikking modeller i utviklingen av farmakoterapi for alkoholisme: drikke i mørke og to-flaske valg

Utvikling av mer effektive behandlinger er nødvendig å kompensere behovene til denne pasienten befolkningen alkohol bruk lidelse (AUD) er et stort nasjonale helseproblem. Dette benytter følgende protokollen to enkle gnager drikking modeller for å vurdere prekliniske effekten av bly anti-alkohol forbindelser.

Alcohol Use Disorder (AUD) is a major problem with more than an estimated 76 million people worldwide meeting the diagnostic criteria. Current treatments ...

Det overordnede målet med dette paradigmet er å vurdere effektiviteten av et potensielt anti-alkoholstoff ved hjelp av gnagermodeller av alkoholbruksforstyrrelse. Alkoholbruksforstyrrelse representerer en stor folkehelsekrise. Nåværende behandlinger er ineffektive og pågående preklinisk forskning er nødvendig.Vår protokoll tillater oss å evaluere sikkerheten og nytten av en potensiell behandling, samt å ta en titt på den underliggende nevrobiologien til selve lidelsen. Start prosedyren ved å varme opp en verktøykniv på Bunsen-brenneren. Bruk denne kniven, kutt omtrent en tomme av topp og bunn ender av en plast 18 milliliter serologisk pipette.Deretter varme pipetten under en varmepistol. Sett kulelagersipperrøret inn i den nederste enden av pipetten. Deretter bruker en kommersielt tilgjengelig krympe wrap pistol, forsegle sipper røret på plass med krympe wrap.Cap av den andre åpningen med en silikon stopper. For dyre habituation, ved ankomst, enkelt hus hver mus i standard polykarbonat polysulfone bur med sengetøy, mat og vann og et metall rutenett bur topp. Fra dag fire av en uke enkelt bolig akklimatisering, måle og registrere musens daglige kropp og mat vekter.Mål vanninntaket ved hjelp av etsninger sammen med den inverterte flasken, for å registrere det høyeste punktet i menisken. Når vanninntaket har stabilisert seg til pluss eller minus 10% variasjon fra gjennomsnittet av de siste tre dagene, begynn etanoltilgang med enten TBC eller DID. For å utføre TBS, forberede 10% etanol løsning i 1, 000 milliliter ved å legge til 105,3 milliliter av 190 bevis korn etanol til 894,7 milliliter vann, og deretter riste den grundig.Gitt at etanol fordamper raskt, erstatt løsningen to ganger i uken. På den første dagen av TBC, i hvert bur, tøm en av de to vannflaskene og fyll den til randen med den nyberedde etanolløsningen. Gitt at etanol og vann er vanskelig å skilles visuelt, tydelig merke flaskene med tilsvarende innhold.Tilsett mer løsning på vannflasken etter behov. Plasser deretter flasken tilbake i buret, og pass på at hetten er lukket sikkert og blottet for luftbobler eller lekkasjer fra tuten. Fjern eventuelle luftbobler ved ganske enkelt å trykke på flasken slik at luften kan unnslippe flasken.Alternativ plasseringen av flasken annenhver dag som å korrigere for betinget sted preferanse relaterte påvirkninger i drikkeaktivitet. Registrer etanolinntaksnivå og analyser 10% etanolinntak og preferanseforhold. Så snart etanolinntaket har blitt stabilt, administrer en enkelt kontroll intraperitoneal injeksjon til hver mus under den daglige målerutinen, for å venne musen til injeksjon.Når en etanol baseline med lav variasjon har gjenopprettet, dele musene i kontroll og eksperimentelle grupper ved hjelp av etanol inntaksverdier slik at alle grupper har omtrent lignende gjennomsnittlige etanol inntakverdier. Begynn daglig narkotikasteding, enten for en akutt eller multi dagers varighet. For å gjennomføre DID, på hver dag med planlagt etanoltilgang, registrere målinger for vannvolum, matinntak og kroppsvekt og utføre narkotikasteding.Utfør dette i løpet av en forhåndsvalgt tid i lyssyklusen som er valgt i samsvar med farmakokinetikken til legemidlet slik at forbindelsen nærmer seg maksimal hjernekonsentrasjon i drikkeperioden. Deretter forbereder du 20% etanolløsning i 1000 milliliter ved å tilsette 210,5 milliliter med 190 proof grain etanol til 789,5 milliliter vann. Rist den deretter grundig.Fyll etanolflasken før starten av drikkeøkten, slik at så snart DID begynner, kan vannflasken bare erstattes med alkoholflasken. Under hele DID-økten, bruk et rødt lys hodelykt for ikke å forstyrre dyret. Ved starten av DID drikkeøkten, som er planlagt å begynne tre timer inn i den mørke syklusen før lyssyklusen, registrerer du volumet av vann for hver mus.Bytt deretter hver vannflaske med en flaske 20% etanolløsning og registrer startetanolvolumet. Les og registrer det endelige etanolvolumet to timer senere på slutten av drikkeøkten på dag én til tre og fire timer senere på dag fire. Analyser deretter 20% etanolinntaket.Deretter erstatte etanolflasken med vannflaske og registrere vannvolum. Denne figuren viser vurderingen av effekten av en akutt dose moksidctin ved fem milligram per kilo på etanolinntak og preferanse. En enkeltdose av moksidctin reduserte alkoholinntaket betydelig i overkant av 45%sammenlignet med pre-moksidctin injeksjoner og preferanse i overkant av 30% 10% etanolinntak og preferanse begge forblir betydelig lavere enn saltvann på dagen umiddelbart etter MOX behandling.Her ble overstadig drikking modellert ved hjelp av DID-prosedyren. Mus ble administrert saltvannet på dag én til fire med baseline 20% etanol etablert på dag fire. På dag én til tre av den andre ukentlige syklusen fikk alle musene enda en daglig saltvannsinjeksjon.Etanolinntaksverdiene fra dag tre ble deretter brukt til å dele musene i to grupper som senere fikk enten en injeksjon av moksidctin ved fem milligram per kilo eller saltvann på dag fire. Uken etter fikk alle mus daglige saltinjeksjoner på dag én til fire, og etanolinntaket ble målt igjen på dag fire. Akutt administrering av MOX ble analysert og funnet å betydelig redusert alkoholinntak i overkant av 54%sammenlignet med pre-narkotika injeksjoner.Husk at fremtidige eksperimenter ved hjelp av denne protokollen må gjøres for å evaluere mekanismen, dosering og toksisitet av et potensielt stoff, samt å vurdere effektiviteten i forhold til dagens behandlingsalternativer.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Segmentering og Måling av fett Volumene i murine Fedme modeller med X-ray Datatomografiscanning

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Utvikling av obliterans Bronkiolitt i en murine modell av Orthotopic lungetransplantasjon

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

En murine modell av stent i halspulsåren for studier av Restenosis

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

Development of an Audio-based Virtual Gaming Environment to Assist with Navigation Skills in the Blind

Utvikling av en Audio-baserte Virtual Gaming Environment for å bistå med Navigasjon Skills i Blind

Audio-based Environment Simulator (AbES) is virtual environment software designed to improve real world navigation skills in the blind. Using only audio ...

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Tekniske aspekter ved Mouse Aortocaval Fistel

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

Innsamling og Utvinning av spytt DNA for Next Generation Sequencing

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Mus nyretransplanterte: Modeller av allograft-avstøting

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

Utvikling av en direkte Pulp-capping modell for evaluering av pulpal Wound Healing og reparerende Dentin Dannelse i Mus

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is ...