Name: murine drinking models in the development of pharmacotherapies for alcoholism: drinking in the dark and two-bottle choice
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice at JoVE.com

Este trabajo fue financiado, en parte, por la investigación concede SC CTSI NIH/NCRR/NCATS--UL1TR000130 (D.L.D.), AA022448 (D.L.D.) y la Facultad de farmacia de la USC.

Todos los procedimientos aquí descritos han sido aprobados por el cuidado de Animal institucionales y comités de uso de lo Campus de Ciencias de la salud de University of Southern California.
1. montaje y configuración experimental
<ol><li>Adquirir la totalidad de los siguientes suministros y productos químicos antes de iniciar el estudio: ratones, metal y jaulas jaula tops, ropa de cama, alimentos, agua, etanol, pipetas, tapas de sorber, shrink wrap, cuchillo, ataduras de cremallera, ci...

<ol>
	<li>Litten, R. Z., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery,+Development,+and+Adoption+of+Medications+to+Treat+Alcohol+Use+Disorder:+Goals+for+the+Phases+of+Medications+Development.">Discovery, Development, and Adoption of Medications to Treat Alcohol Use Disorder: Goals for the Phases of Medications Development.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 40 (7), 1368-1379 (2016).</li><li>Grant, B. F., Dawson, D. A., Stinson, F. S., Chou, S. P., Dufour, M. C., Pickering, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+12-month+prevalence+and+trends+in+DSM-IV+alcohol+abuse+and+dependence:+United+States,+1991-1992+and+2001-2002.">The 12-month prevalence and trends in DSM-IV alcohol abuse and dependence: United States, 1991-1992 and 2001-2002.</a> Drug and Alcohol Dependence. 74 (3), 223-234 (2004).</li><li>Sacks, J. J., Gonzales, K. R., Bouchery, E. E., Tomedi, L. E., Brewer, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+and+State+Costs+of+Excessive+Alcohol+Consumption.">National and State Costs of Excessive Alcohol Consumption.</a> American Journal of Preventive Medicine. 49 (5), 73-79 (2015).</li><li>Litten, R. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medications+development+to+treat+alcohol+dependence:+a+vision+for+the+next+decade.">Medications development to treat alcohol dependence: a vision for the next decade.</a> Addiction Biology. 17 (3), 513-527 (2012).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Johnson+Medication+Treatment+of+Different+Types+of+Alcoholism.">Johnson Medication Treatment of Different Types of Alcoholism.</a> American Journal of Psychiatry. 167 (6), 630-639 (2010).</li><li>Litten, R. Z., Wilford, B. B., Falk, D. E., Ryan, M. L., Fertig, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+medications+for+the+treatment+of+alcohol+use+disorder:+An+evaluation+of+clinical+efficacy+and+safety.">Potential medications for the treatment of alcohol use disorder: An evaluation of clinical efficacy and safety.</a> Substance Abuse. 37 (2), 286-298 (2016).</li><li>Litten, R. Z., Ryan, M. L., Falk, D. E., Reilly, M., Fertig, J. B., Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+Alcohol+Use+Disorder:+Understanding+Mechanisms+to+Advance+Personalized+Treatment.+Alcoholism:+Clinical+and+Experimental.">Heterogeneity of Alcohol Use Disorder: Understanding Mechanisms to Advance Personalized Treatment. Alcoholism: Clinical and Experimental.</a> Research. 39 (4), 579-584 (2015).</li><li>Schuckit, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Genome-Wide+Search+for+Genes+That+Relate+to+a+Low+Level+of+Response+to+Alcohol.">A Genome-Wide Search for Genes That Relate to a Low Level of Response to Alcohol.</a> Alcoholism: Clinical and Experimental Research. 25 (3), 323-329 (2001).</li><li>Batki, S. L., Pennington, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+Personalized+Medicine+in+the+Pharmacotherapy+of+Alcohol+Use+Disorder:+Targeting+Patient+Genes+and+Patient+Goals.">Toward Personalized Medicine in the Pharmacotherapy of Alcohol Use Disorder: Targeting Patient Genes and Patient Goals.</a> American Journal of Psychiatry. 171 (4), 391-394 (2014).</li><li>Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theoretical+frameworks+and+mechanistic+aspects+of+alcohol+addiction:+alcohol+addiction+as+a+reward+deficit+disorder.">Theoretical frameworks and mechanistic aspects of alcohol addiction: alcohol addiction as a reward deficit disorder.</a> Current topics in behavioral neurosciences. 13, 3-30 (2013).</li><li>Yoneyama, N., Crabbe, J. C., Ford, M. M., Murillo, A., Finn, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voluntary+ethanol+consumption+in+22+inbred+mouse+strains.">Voluntary ethanol consumption in 22 inbred mouse strains.</a> Alcohol. 42 (3), 149-160 (2008).</li><li>Rhodes, J. S., Best, K., Belknap, J. K., Finn, D. A., Crabbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+simple+model+of+ethanol+drinking+to+intoxication+in+C57BL/6J+mice.">Evaluation of a simple model of ethanol drinking to intoxication in C57BL/6J mice.</a> Physiology &amp; Behavior. 84 (1), 53-63 (2005).</li><li>Thiele, T. E., Navarro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Drinking+in+the+dark"+(DID)+procedures:+A+model+of+binge-like+ethanol+drinking+in+non-dependent+mice.">"Drinking in the dark" (DID) procedures: A model of binge-like ethanol drinking in non-dependent mice.</a> Alcohol. 48 (3), 235-241 (2014).</li><li>Crabbe, J. C., Spence, S. E., Brown, L. L., Metten, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alcohol+preference+drinking+in+a+mouse+line+selectively+bred+for+high+drinking+in+the+dark.">Alcohol preference drinking in a mouse line selectively bred for high drinking in the dark.</a> Alcohol. 45 (5), 427-440 (2011).</li><li>Sprow, G. M., Thiele, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neurobiology+of+binge-like+ethanol+drinking:+Evidence+from+rodent+models.">The neurobiology of binge-like ethanol drinking: Evidence from rodent models.</a> Physiology &amp; Behavior. 106 (3), 325-331 (2012).</li><li>Neasta, J., Hamida, B., Yowell, Q., Carnicella, S., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+for+mammalian+target+of+rapamycin+complex+1+signaling+in+neuroadaptations+underlying+alcohol-related+disorders.">Role for mammalian target of rapamycin complex 1 signaling in neuroadaptations underlying alcohol-related disorders.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (46), 20093-20098 (2010).</li><li>Huynh, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+development+of+moxidectin+as+a+novel+therapeutic+for+alcohol+use+disorder.">Preclinical development of moxidectin as a novel therapeutic for alcohol use disorder.</a> Neuropharmacology. 113, 60-70 (2017).</li><li>Egli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+experimental+paradigms+and+animal+models+be+used+to+discover+clinically+effective+medications+for+alcoholism.">Can experimental paradigms and animal models be used to discover clinically effective medications for alcoholism.</a> Addiction Biology. 10 (4), 309-319 (2005).</li><li>Huynh, N., Arabian, N., Lieu, D., Asatryan, L., Davies, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+an+Orally+Dissolving+Strip+for+Pharmacological+and+Toxicological+Studies:+A+Simple+and+Humane+Alternative+to+Oral+Gavage+for+Animals.">Utilizing an Orally Dissolving Strip for Pharmacological and Toxicological Studies: A Simple and Humane Alternative to Oral Gavage for Animals.</a> Journal of Visualized Experiments. (109), (2016).</li><li>Yardley, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ivermectin+reduces+alcohol+intake+and+preference+in+mice.">Ivermectin reduces alcohol intake and preference in mice.</a> Neuropharmacology. 63 (2), 190-201 (2012).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li></ol>

Estimaciones a nivel Mundial indican que unos 76 millones de personas cumplen con los criterios para justificar un diagnóstico de trastorno de uso de Alcohol (AUD). Por desgracia, farmacéuticos tratamientos actualmente disponibles son en gran parte ineficaces y desarrollo es necesario para compensar las necesidades de esta población clínica20. Para ello, el siguiente protocolo pretende facilitar este esfuerzo por ejemplificar dos del roedor más básico potable paradigmas: dos botella de elecc...

Durante los últimos 25 más años, se ha puesto un esfuerzo importante en el desarrollo de medicamentos para el tratamiento de trastorno de uso de Alcohol (AUD)1. Aunque se han logrado muchos avances, AUD todavía sigue siendo un problema de salud pública importante, que afecta a más 18 millones de americanos y cuestan sobre $ 220 billones anualmente2,3. En la actualidad existen tres medicamentos aprobados por la FDA, disulfiram, naltrexona y acamprosato, todos los cuales han arrojado resultados inconsistentes en ensayos clínicos y éxito limitado incluso cuando se combina con la intervención psicosocial en los entornos clínicos 4 , 5 , 6 , 7.
La razón principal de fracasos de la terapia actual AUD está ligada a la naturaleza heterogénea de AUD8. Mientras que factores genéticos y ambientales contribuyen al desarrollo de la AUD, heredabilidad representa aproximadamente el 50-60% del riesgo de inicio9. Similar al tratamiento de la depresión, está ampliamente aceptado que pacientes que sufren de AUD tendrá una variedad de medicamentos que están diseñados para satisfacer las necesidades de cada paciente10.
Claramente, hay una urgente necesidad de tratamientos más efectivos que se facilitaría si el proceso ya difícil y desperdiciador de tiempo del descubrimiento de fármacos fueron racionalizados3. Para ello, el siguiente protocolo demuestra la aplicabilidad preclínica de dos modelos de bebidas roedores ampliamente utilizado para examinar la base neurobiológica de AUD11. Más específicamente, el método introducido en el presente documento puede evaluar la eficacia de compuestos candidatos reducir alcohol consumo "moderado" y "borracheras" escenarios utilizando la opción de dos botellas (por confirmar) y beber en los paradigmas (DID) oscuros, respectivamente. Ambos paradigmas examinan autoadministración del etanol no operante, por el que ratones ingieren de etanol por vía oral y en la voluntad y por lo tanto ilustrar cara alta y construcción la validez como un modelo de alcoholismo humano11.
En TBC beber, también conocido como libre elección beber, beber, de preferencia o beber social, dos botellas de solución están continuamente disponibles en la jaula del hogar. Una botella contiene agua, y el otro contiene una solución diluida de etanol, por el que se puede variar la concentración de etanol (por ej., 5-30% v/v)11,12. Los ratones tienen acceso constante a dos botellas y por lo tanto, pueden elegir cuánto beber de cada botella.
Este modelo evalúa el consumo de etanol de cada ratón (g/kg), así como la relación de preferencia de etanol (volumen de etanol consumida ÷ volumen total líquido consumido). Habitualmente se utiliza para comparar niveles de consumo a través de diferentes cepas de ratones, o después de una manipulación genética específica (e.g., golpe de gracia del gene o caída) y resultados en concentraciones de etanol de sangre (BECs) similares a lo que se encuentra en los seres humanos cuando beber en moderación13,14.
En el procedimiento DID, 3 h después del inicio del ciclo oscuro, la botella de casa jaula de agua se intercambia con una botella de solución de etanol 20% (v/v) para un acceso limitado a beber de la sesión. Las sesiones de bebida se producen como un ciclo de 4 días consecutivo, duración 2 h días 1-3 y 4 h en día 4. Días 1-3 sirven como un periodo de habituación de alcohol antes de la prueba el día 4. Por lo tanto, ratones confiablemente consumirá suficiente etanol para lograr BECs > 100 mg/dL y como consecuencia, los efectos conductuales de la intoxicación en humanos que consumo concentrado de alcohol13,14,15. Acceso al agua está disponible en todo momento que no sea la sesión beber.
Hay varias variaciones del acceso limitado. Por ejemplo, en el modelo de acceso intermitente, ratones reciben dos botellas (una agua que contiene y otros que contengan etanol 20% (v/v)) sólo el lunes, el miércoles y el viernes con un tiempo de espera 24 h y 48 h en días laborables y fines de semana, respectivamente16. Después de varias semanas de acceso intermitente, los ratones se poco a poco y voluntariamente aumentar tomando niveles, logrando finalmente BECS similar a lo que se observa en el modelo DID. El DID, sin embargo, parece ser el modelo más utilizado para evaluar el comportamiento de beber compulsivo-como. Existen otros modelos de consumo intermitente, pero se basan en restringir el acceso a alimentos o vapor cámara inducido aumenta en autoadministración voluntaria, que los hace menos representante del alcohol humano voluntario consumo16.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1617px;" width="1616">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:483px;">1 L&#160; graduated cylinder</td>
			<td style="width:315px;">VWR</td>
			<td style="width:232px;">https://us.vwr.com/store/product/20935285/marisco-single-scale-cylinder-graduates-john-m-maris-co</td>
			<td style="width:588px;">To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">1 L glass bottle</td>
			<td>Pyrex (Fisher Scientific)</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/pyrex-reusable-media-storage-bottles-12/p-42752</td>
			<td>To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">100 mL graduated cylinder</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimble-chase-kimax-class-a-to-contain-graduated-cylinders-8/p-4369311</td>
			<td>To prepare ethanol solution.</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Analox</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>One potential method of analyzing DID blood samples is by using the analox machine</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">ball-bearing sipper tubes</td>
			<td>Ancare Corp.</td>
			<td>http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point</td>
			<td>Length: 2.5 inches, Diameter: 5/16 inches, Model: TD100</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">C57BL/6J Mice</td>
			<td>Jackson lab</td>
			<td>https://www.jax.org/strain/000664</td>
			<td>May also come from internal breeding colony</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">disposable serological pipets</td>
			<td>VWR International (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4760455/vwr-disposable-serological-pipets-polystyrene-sterile-plugged</td>
			<td>10 mL, 18 mL, or 25 mL&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">ethanol, pure, 190 proof (95%), USP, KOPTEC</td>
			<td>Decon Labs (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4542412/ethanol-pure-190-proof-95-usp-koptec</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">heat gun&#160;</td>
			<td>Master Appliances Corp.</td>
			<td colspan="2">http://www.masterappliance.com/master-heat-guns-kits/</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">heat shrink tubing</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Diameter: 3/8 inches</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">industrial knife/blade</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">metal cage plate</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Should be available through the university/institutional vivarium</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">mouse RO water</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
			<td>Should be available through the university/institutional vivarium</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">portable electronic scale</td>
			<td>Ohaus (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/4789377/portable-electronic-cs-series-scales-ohaus</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">red light headlamp</td>
			<td>nyteBright (Amazon)</td>
			<td>https://www.amazon.com/LED-Headlamp-Flashlight-Red-Light/dp/B00R0LMMF8/ref=sr_1_1?ie=UTF8&#38;qid=1499591137&#38;sr=8-1-spons&#38;keywords=red+lamp+headlamp&#38;psc=1</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">silicone stoppers</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>---</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">thermometer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-scientific-hygro-thermometer-clock-large-display-2/p-4077232</td>
			<td>---</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">weigh boat</td>
			<td>VWR International (VWR)</td>
			<td>https://us.vwr.com/store/product/16773534/vwr-pour-boat-weighing-dishes</td>
			<td>The lid from a pipete tip box is an appropriate alternative</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine drinking models in the development of pharmacotherapies for alcoholism: drinking in the dark and two-bottle choice

Trastorno de uso de alcohol (AUD) es un problema importante con más de un aproximadamente 76 millones de personas en todo el mundo cumpliendo los criterios de diagnóstico. Los tratamientos actuales se limitan a tres medicamentos aprobados por la FDA que son en gran parte ineficaces, incluso cuando se combina con psicosociales de intervención, como es evidente por la alta recaída tasa. Como tal, la búsqueda de tratamientos más nuevos representa un objetivo de salud pública. Para ello, el siguiente protocolo utiliza dos modelos de consumo roedores simple para evaluar la eficacia preclínica de compuestos de plomo contra el alcohol: elección de dos botellas (por confirmar) y bebiendo en la obscuridad (DID). El primero permite ratones voluntaria beber con moderación mientras que el segundo induce ratones voluntaria consumen una gran cantidad de alcohol en un período corto que imita el consumo concentrado. La naturaleza simple y alto rendimiento de ambos de estos paradigmas permiten para la detección rápida de agentes farmacológicos o para la identificación de cepas de ratones que presentan cierto comportamiento consumo voluntario.

En las siguientes investigaciones representativas, beber social fue modelado utilizando el paradigma de la elección de dos botellas (por confirmar). Brevemente, los ratones tenían acceso a dos botellas de solución, uno de los cuales contiene agua y el otro una solución de etanol 10% (v/v). Los sujetos fueron posteriormente dividir y uniformemente asignados a grupos de tratamiento de drogas, moxidectina (MOX) vs control de solución salina, para que cada grupo hubiera un promedio de ni...

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Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice

Murine beber modelos en el desarrollo de farmacoterapias para el alcoholismo: en la opción oscurezca y dos botellas

Trastorno de uso de alcohol (AUD) es un problema de salud nacional y el desarrollo de tratamientos más eficaces es necesaria para compensar las necesidades de esta población de pacientes. Para ello, el siguiente protocolo utiliza dos modelos de consumo roedores simple para evaluar la eficacia preclínica de compuestos de plomo contra el alcohol.

Alcohol Use Disorder (AUD) is a major problem with more than an estimated 76 million people worldwide meeting the diagnostic criteria. Current treatments ...

El objetivo general de este paradigma es evaluar la eficacia de una posible droga antidroqueo utilizando modelos de roedores de trastorno por consumo de alcohol. El trastorno por consumo de alcohol representa una crisis de salud pública importante. Los tratamientos actuales son ineficaces y se necesita una investigación preclínica en curso.Nuestro protocolo nos permite evaluar la seguridad y utilidad de un tratamiento potencial, así como echar un vistazo a la neurobiología subyacente del trastorno en sí. Comience el procedimiento calentando un cuchillo de utilidad en el quemador Bunsen. Con este cuchillo, corte aproximadamente una pulgada de los extremos superior e inferior de una pipeta serológica de plástico de 18 mililitros.A continuación, caliente la pipeta bajo una pistola de calor. Inserte el tubo de cierre del rodamiento de bolas en el extremo inferior de la pipeta. Luego, usando una pistola de envoltura retráctil disponible comercialmente, selle el tubo de sipper en su lugar con envoltura retráctil.Tapa la otra abertura con un tapón de silicona. Para la habituación animal, a su llegada, una sola casa cada ratón en la jaula estándar de polisulfono de policarbonato con ropa de cama, comida y agua y una tapa de la jaula de rejilla de metal. A partir del día cuatro de la aclimatación de una semana de vivienda individual, mida y registre el cuerpo diario del ratón y los pesos de los alimentos.Mida la ingesta de agua con los aguafuertes junto a la botella invertida, para registrar el punto más alto del menisco. Una vez que la ingesta de agua se haya estabilizado a más o menos 10% de variabilidad desde la media de los últimos tres días, comience el acceso al etanol con TBC o DID. Para llevar a cabo TBS, prepare una solución de 10% de etanol en 1.000 mililitros añadiendo 105,3 mililitros de etanol de grano a prueba de 190 a 894,7 mililitros de agua y, a continuación, agítelo a fondo.Dado que el etanol se evapora rápidamente, reemplace la solución dos veces por semana. El primer día de TBC, en cada jaula, vacíe una de las dos botellas de agua y llénelo hasta el borde con la solución de etanol recién preparada. Dado que el etanol y el agua son difíciles de distinguir visualmente, etiquete claramente las botellas con su contenido correspondiente.Agregue más solución a la botella de agua según sea necesario. A continuación, vuelva a colocar la botella en la jaula, asegurándose de que la tapa esté cerrada de forma segura y carente de burbujas de aire o fugas de la boquilla. Retire cualquier burbuja de aire simplemente tocando en la botella para que el aire pueda escapar de la botella.Alternar la posición de la botella cada dos días para corregir las influencias relacionadas con la preferencia de lugar acondicionado en la actividad de bebida. Registre el nivel de ingesta de etanol y analice la tasa de ingesta y preferencia de etanol del 10%. Tan pronto como la ingesta de etanol se haya estabilizado, administre una única inyección intraperitoneal de control a cada ratón durante la rutina de medición diaria, para acostumbrar el ratón a la inyección.Una vez que se haya restablecido una línea de base de etanol con baja variabilidad, divida los ratones en grupos experimentales y de control utilizando los valores de ingesta de etanol para que todos los grupos tengan valores de ingesta de etanol promedio aproximadamente similares. Comenzar la dosificación diaria de medicamentos, ya sea para una duración aguda o de varios días. Para llevar a cabo DID, en cada día de acceso programado al etanol, registrar las mediciones para el volumen de agua, la ingesta de alimentos y el peso corporal y realizar la dosificación de drogas.Realizar esto durante un tiempo preseleccionado durante el ciclo de luz que se elige de acuerdo con la farmacocinética de la droga para que el compuesto se está acercando a la concentración máxima del cerebro durante el período de bebida. A continuación, prepare una solución de 20% de etanol en 1.000 mililitros añadiendo 210,5 mililitros de etanol de grano a prueba de 190 a 789,5 mililitros de agua. A continuación, agítelo a fondo.Llene la botella de etanol antes del inicio de la sesión de bebida para que tan pronto como se inicia el DID, la botella de agua pueda simplemente ser reemplazada por la botella de alcohol. Durante toda la sesión de DID, utilice un faro de luz roja para no molestar al animal. Al comienzo de la sesión de bebida DID, que está programada para comenzar tres horas en el ciclo oscuro antes del ciclo de luz, registre el volumen de agua para cada ratón.A continuación, reemplace cada botella de agua con una botella de 20% solución de etanol y registre el volumen de etanol inicial. Lea y registre el volumen final de etanol dos horas más tarde al final de la sesión de bebida en los días uno a tres y cuatro horas más tarde en el cuarto día. A continuación, analice la ingesta de etanol al 20%.Posteriormente, reemplace la botella de etanol con una botella de agua y registre el volumen del agua. Esta cifra muestra la evaluación de los efectos de una dosis aguda de moxidectina a cinco miligramos por kilogramo en la ingesta y preferencia de etanol. Una dosis única de moxidectina redujo significativamente la ingesta de alcohol por encima del 45%en comparación con las inyecciones de pre-moxidectina y la preferencia por encima del 30%10% de la ingesta de etanol y la preferencia permanecen significativamente más bajas que la solución salina en el día inmediatamente posterior al tratamiento con MOX.Aquí, el consumo excesivo de alcohol se modeló mediante el procedimiento DID. A los ratones se les administró la solución salina en los días uno a cuatro con el 20% de etanol basal establecido en el cuarto día. En los días uno a tres del segundo ciclo semanal, todos los ratones recibieron otra inyección salina diaria.Los valores de ingesta de etanol del tercer día se utilizaron para dividir los ratones en dos grupos que posteriormente recibieron una inyección de moxidectina a cinco miligramos por kilogramo o solución salina en el día cuatro. La semana siguiente, todos los ratones recibieron inyecciones salinas diarias en los días uno a cuatro y la ingesta de etanol se midió una vez más en el día cuatro. Se analizó la administración aguda de MOX y se encontró que se redujo significativamente la ingesta de alcohol por encima del 54% en comparación con las inyecciones previas a la droga.Tenga en cuenta que los experimentos futuros que utilizan este protocolo deben realizarse para evaluar el mecanismo, dosificación y toxicidad de un fármaco potencial, así como para evaluar su eficacia en relación con las opciones de tratamiento actuales.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Un método para el aislamiento de los islotes murinos y Trasplante Renal subcapsular

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Investigación

Medicina

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

Una estrategia para identificar mutaciones de novo en los trastornos comunes, tales como el autismo y la esquizofrenia

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

La segmentación y la medición de los volúmenes de grasa en modelos murinos de obesidad Usando rayos X de tomografía computarizada

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

El desarrollo de bronquiolitis obliterante en un modelo murino de trasplante de pulmón ortotópico

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

A Murine Model of Stent Implantation in the Carotid Artery for the Study of Restenosis

Un modelo murino de la implantación de un stent en la arteria carótida para el Estudio de la reestenosis

Despite  the considerable progress made in the stent development in the last decades,  cardiovascular diseases remain the main cause of death in western ...

Development of an Audio-based Virtual Gaming Environment to Assist with Navigation Skills in the Blind

Desarrollo de un entorno de juego basado en audio virtual para ayudar con habilidades de navegación en la ciega

Audio-based Environment Simulator (AbES) is virtual environment software designed to improve real world navigation skills in the blind. Using only audio ...

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Aspectos técnicos de la aortocava Fístula Ratón

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

Recolección y extracción de ADN de la saliva de Next Generation Sequencing

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Ratón Trasplante de Riñón: Modelos de rechazo del aloinjerto

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

Desarrollo de un Modelo de recubrimiento pulpar directo para la Evaluación de la Pulpa Curación de Heridas y formación de dentina reparadora en ratones

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is ...