Name: proliferation and differentiation of murine myeloid precursor 32d/g-csf-r cells
Uploaded: 2018-02-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Proliferation and Differentiation of Murine Myeloid Precursor 32D/G-CSF-R Cells at JoVE.com

Yazarlar Prof. Ruud Delwel ve Prof. Ivo bize 32D/G-CSF-R hücre satırıyla sağlamak için Touw ve Prof. Dr. Daniel G. Tenen bize Bosc23 hücre satırıyla sağlamak için teşekkür ederiz. Bu eser hibe MA-J için Çek Cumhuriyeti (GACR 15-03796S ve GACR 17-02177S) Grant ajansı tarafından desteklenen, MA-J, GA İngiltere Bursu (Proje No. 341015) Enstitüsü, moleküler genetik üzerinden çek Bilimler Akademisi (RVO 68378050) desteği MK ve GA İngiltere Bursu (Proje No. 1278217) Prag Charles Üniversitesi PD Prag'a'nden Charles Üniversitesi'nden.

Not: genişleme açıklayan adımları, farklılaşma ve iletim 32D/G-CSF-R hücre aşağıda sunulmuştur.
1. hazırlık
<ol><li>Medyası hazırlama
	<ol>
<li>250 mL kültür ortamı hazırlamak: RPMI (Roswell Park Memorial Enstitüsü) 1640 orta % 10 ısı ile desteklenmiş inaktive FBS (fetal sığır serum) ve fare IL-3 (10 ng/mL).<ol>
<li>Alternatif olarak, ev yapımı IL-3'ü kullanın. Ev yapımı IL-3 üretmek için HEK293 hücreleri ile IL-3 ifade vektör transduce ...

Deneysel bir model seçimi tek araştırma ana sorunlardan biridir. Birincil hayvan ve insan hücreleri en biyolojik ilgili verileri üretmek inanılan bu modeller etik kaygılar içerebilir ve çoğu kez yalıtım/pahalı ve/veya sofistike kültür yordamları ile ilgili. Primer hücre sayıları sınırlıdır ve genetik olarak onları manipüle etmek zordur. Buna ek olarak, Primer hücre veri yorumu29karmaşık hale çeşitli hücre tiplerinin oluşan heterojen bir nüfus temsil eder. Buna ek o...

Hematopoetik kök ve yaratıcı nüfus organizma Olgun Hücreler, myeloid silsilesi (nötrofiller, eozinofiller, bazofil ve monosit) hücrelerden de dahil olmak üzere geniş bir dizi sağlar. Hematopoetik kök hücre myeloid hücre üretim sürücüler işlem myelopoiesis bilinir ve değişen taleplerine karşılık olgun myeloid hücrelerin yeterli üretim ile stres organizmanın uygun başa çıkma için bir önkoşuldur koşullar, enfeksiyonlar ve kan kaybı gibi. Olgun myeloid hücrelerin yetersiz üretim yetersizlik patojenler, düşük kan pıhtılaşması ve diğer hayati koşulları1,2ortadan kaldırmak için neden olabilir. Buna ek olarak, değişiklikler Miyeloid lineage gelişiminde de Akut Miyeloid Lösemi (AML)3gibi hematolojik maligniteler ile iliskili olabilir. Değişiklikler myelopoiesis içinde kusurları hücre yüzey reseptörlerinin4, transkripsiyon faktörleri5, değiştirilen ifadeler sinyal yolları6, mutasyonlar oluşumu sonucu Engelli gibi çeşitli nedenlerden dolayı oluşabilir / oncogenes7, ya da Tümör baskılayıcı genler8inactivation aktivasyonu.
Myeloid geliştirme çalışma ve bu süreçte belirli genetik değişiklikler etkisini değerlendirmek için çeşitli yöntemler geliştirilmiştir. Myelopoiesis eğitim için kullanılan yaygın bir yaklaşım Primer hücre ve transgenik fareler içerir. Bu modelleri biyolojik ilgili verileri edinimi izin rağmen bazı kısıtlamalar bulunmaktadır. Primer hücre kullanımı sınırlı sayıda hücre ve gen ekspresyonu ve daha sonraki biyolojik ya da biyokimyasal analiz değiştirmek için olasılıklar daralma kültür, sınırlı bir süre karşılaşır. Transgenik fareler yüksek maliyetlidir ve biyolojik gerekçe makul bir ölçüde gerektirir. Buna ek olarak, vivo içinde modelleri ile çalışma bir ölçüde ilgi belirli bir süreç içinde bir gen rolünün anlaşılması halinde karmaşıklık ekler. Bu nedenle, bu sınırlamaları aşmak için alternatif yaklaşımlar ihtiyaç vardır. Hücre hatları tartışılmaz avantajı var: (1) onlar biyolojik ve biyokimyasal araştırmalar için yeterli malzeme üreten sağlar sınırsız nükleer silahların yayılmasına karşı kapasitesine sahip, (2) genetik manipülasyon (nakavt, nakavt, duyarlı oldukları overexpression), (3) maliyeti nispeten düşüktür, ve (4) biyolojik basitleştirme bazı deneysel yaklaşımlar gerekli bir ölçüde olanak tanır.
Ebeveyn IL-3 (İnterlökin-3) bağımlı 32D hücre kültürünü kurulmuştur 1983'te Greenberger ve meslektaşları tarafından enfeksiyon C3H/HeJ fareler arkadaş fare lösemi virüs9ile kemik iliği hücre tarafından. Birkaç 32D klonlar literatürde tarif edildi: cl-239, cl-310ve cl-1011. 32D cl-3 hücreleri IL-3'te çoğalırlar ve granülosit-koloni stimülasyon faktör (G-CSF)10ile tedavi üzerine Nötrofilik farklılaşma tabi gösterilmiştir. Aksine, olurken IL-3 bağımlı, 32D cl-10 hücreleri aslında yanıt G-CSF tedavisi olarak ayırt değil. 1995 yılında Dr Ivo Touw grup retrovirally bu reseptör11işlevsel olarak önemli bölgeleri tanımlamak için 32D cl-10 hücreleri vahşi türü ve G-CSF reseptör (G-CSF-R), mutasyona uğramış formlar transduced. Bu çalışmada IL-3 üzerinde benzer şekilde bağlıdır, 32D/G-CSF-R hücreler nesilde sonuçlandı ama IL-3 G-CSF ile replasmanı sonrası 6-10 gün içinde hücreleri çoğalırlar ve geri dönüşümsüz olgun nötrofiller ayırt durdurmak. Bu özellikleri 32D cl-3 ve iki iyi tanımlanmış büyüme ve farklılaşma faktörlerden - IL-3 ve G-CSF modülasyonlu fare Nötrofilik farklılaşma 32D/G-CSF-R hücreleri Basitleştirilmiş modelleri yapmak. Son yıllarda birden fazla grup nükleer silahların yayılmasına karşı belirli genlerin rol ve farklılaşma myeloid hücre kültürü12,13,14,15 dakika içinde çalışmaya 32D/G-CSF-R hücreleri kullandık , 16ve G-CSF sinyal17,18çalışmaya. Önemlisi, bu hücre satırı kullanarak elde edilen sonuçları Primer hücre ve transgenik fareler16,19,20,21ile elde edilen verilerle ilişkili. Sonuç olarak, 32D/G-CSF-R hücreleri, yaygın olarak kullanılan ve iyi kurulmuş bir model olmak bu soruyu ele diğer yaklaşımlar ile paralel olarak kullanılan Miyeloid farklılaşma eğitim için değerli bir sistemini temsil inanıyorum.
Burada, 32D/G-CSF-R hücre kullanımı açıklayan ayrıntılı iletişim kuralları, hangi kapak genişleme, farklılaşma ve nükleer silahların yayılmasına karşı değerlendirilmesi ve bu hücreler farklılaşma sunulur. Detaylı bilgi için 32D/G-CSF-R hücrelerinin genetik değişiklik retroviral veya lentiviral iletim gibi virüs titrasyon için iletişim kuralları tarafından sağlanır. Ayrıca, potansiyel uygulamalar 32D/G-CSF-R hücre göstermek birkaç temsilcisi sonuçları temin edilmektedir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 powder medium</td>
			<td>Merck, Kenilworth, NJ, USA</td>
			<td>T 121-10</td>
			<td>without NaHCO3, with L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>15028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>31985-047</td>
			<td>L-Glutamine, Phenol Red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>PAA Laboratories (GE Healthcare,Chicago, IL, USA)</td>
			<td>MT35011CV</td>
			<td>For differentiation of 32D/G-CSF-R cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>10270</td>
			<td>Used for culturing HEK293T, NIH3T3, BOSC23 cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td>
			<td>P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td>
			<td>S9137</td>
			<td>Streptomycin sulfate salt powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td>
			<td>G1914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>murine IL-3</td>
			<td>PeproTech, Rocky Hill, NJ, USA</td>
			<td>213-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human G-CSF</td>
			<td>PeproTech, Rocky Hill, NJ, USA</td>
			<td>300-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylenimine</td>
			<td>Polyscience, Warrington, PA, USA</td>
			<td>23966</td>
			<td>Linear, MW 25,000 (PEI 25000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td>
			<td>H9268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>VWR Chemicals, Radnor, PA, USA</td>
			<td>0458</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td>
			<td>E5134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal violet</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td>
			<td>C0775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td>
			<td>T6146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>May-Gr&#252;nwald Giemsa</td>
			<td>DiaPath, Martinengo, BG, Italy</td>
			<td>10802</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

proliferation and differentiation of murine myeloid precursor 32d/g-csf-r cells

Hematopoetik kök ve progenitör hücre biyolojisi anlayış rejeneratif tıp ve hematolojik patolojiler tedavisi için önemli sonuçları vardır. Vivo modelleri veya birincil kültürler kullanarak elde edilebilir en alakalı verileri rağmen hematopoetik kök ve progenitör hücre düşük bereket önemli ölçüde onların soruşturma için uygun teknikleri havuzu kısıtlar. Bu nedenle, hücre hatları gösterimleri veya büyük hücreli numaraları gerektirir deneyleri için biyolojik malzeme yeterli üretim sağlar. Burada ayrıntılı bir açıklama, okuma ve myelopoiesis ve Nötrofilik farklılaşma gerçekleştirilen işlemlere incelenmesi için kullanılan nükleer silahların yayılmasına karşı ve farklılaşma deneyleri yorumlanması mevcut. Bu deneyler IL-3 huzurunda çoğalırlar ve G-CSF içinde ayırt etmek yeteneği sahip 32D/G-CSF-R sitokin bağımlı fare myeloid hücre kültürünü istihdam. Biz protokolleri 32D/G-CSF-R hücreleri işleme için en iyi duruma getirilmiş sağlamak ve büyük tuzaklar ve açıklanan deneyleri ve beklenen sonuçları tehlikeye atabilir sakıncaları tartışıyorlar. Ayrıca, bu makale için lentiviral ve retroviral üretim, titrasyon ve 32D/G-CSF-R hücre iletim protokolleri içerir. Bu hücrelerin genetik manipülasyon başarılı bir şekilde birincil hematopoetik kök ve progenitör hücre veya vivo içinde modelleri ile elde edilen sonuçlar tamamlayabilir işlevsel ve moleküler çalışmalar gerçekleştirmek için istihdam edilecek göstermektedir.

Nükleer silahların yayılmasına karşı ve 32D/G-CSF-R hücrelere farklılaşma
Pro proliferatif ve yanlısı farklılaşma koşullar altında 32D/G-CSF-R hücrelerin çoğalması değerlendirmek için 32D/G-CSF-R hücreleri IL-3 G-CSF, sırasıyla içeren medyayı ve içinde kültürlü. IL-3 içeren ortamda (10 ng/mL) kültürlü hücreleri yaklaşık her 24 h (şekil 2A) bölmek gözlendi. Yavaş...

Watch this Scientific Journal Video about Proliferation and Differentiation of Murine Myeloid Precursor 32D/G-CSF-R Cells at JoVE.com

Proliferation and Differentiation of Murine Myeloid Precursor 32D/G-CSF-R Cells

Burada fare Miyeloid habercisi 32D/G-CSF-R hücre kültürünü kültür, viral enfeksiyonlar gerçekleştirme ve yayılmasını önleme ve farklılaşma deneyleri için detaylı protokol sunulmuştur. Bu hücre kültürünü myeloid hücre gelişimini ve myeloid hücre büyümesi ve Nötrofilik farklılaşma ilgi genlerin rol çalışmak için uygundur.

Nükleer silahların yayılmasına karşı ve fare Miyeloid habercisi 32D/G-CSF-R farklılaşma hücre

Understanding of the hematopoietic stem and progenitor cell biology has important implications for regenerative medicine and the treatment of ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Üretim ve seçici transduce İlköğretim Oligodendrosit Öncü Hücreler için Lentivirüste kullanımı için<em&gt; İn Vitro</em&gt; Myelinasyon Tahliller

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

3D Organotypic Co-culture Model Supporting Medullary Thymic Epithelial Cell Proliferation, Differentiation and Promiscuous Gene Expression

Medüller Timik epitel hücre proliferasyonu, farklılaşması ve Promiscuous Gen İfade Destekleme 3D Organotipik Co-kültür Modeli

Intra-thymic T cell development requires an intricate three-dimensional meshwork composed of various stromal cells, i.e., non-T cells. Thymocytes traverse ...

Epigenetic Regulation of Cardiac Differentiation of Embryonic Stem Cells and Tissues

Embriyonik Kök Hücre ve Doku Kardiyak Farklılaşma epigenetik Yönetmelik

Specific gene transcription is a key biological process that underlies cell fate decision during embryonic development. The biological process is mediated ...

Preparation and Culture of Myogenic Precursor Cells/Primary Myoblasts from Skeletal Muscle of Adult and Aged Humans

Yetişkin ve Yaşlı İnsanların İskelet Kası miyojenik Öncü Hücreler / İlköğretim miyoblastların hazırlanması ve Kültür

Skeletal muscle homeostasis depends on muscle growth (hypertrophy), atrophy and regeneration. During ageing and in several diseases, muscle wasting ...

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

Vitro İnsan Mezenkimal Kök hücre farklılaşma fonksiyonel Cardiomyocyte benzeri hücre içine

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Rapid Detection of Neurodevelopmental Phenotypes in Human Neural Precursor Cells (NPCs)

Rapid Detection of Neurodevelopmental Phenotypes in Human Neural Precursor Cells NPCs

Hızlı algılama nörogelişimsel fenotipleri insan sinir habercisi hücrelerdeki (NPCs)

Human brain development proceeds through a series of precisely orchestrated processes, with earlier stages distinguished by proliferation, migration, and ...

Isolation, Culture, and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells and Osteoclast Progenitors from Mice

Yalıtım, kültür ve kemik iliği Stromal hücreler ve Osteoklast ataları fareler gelen farklılaşma

Bone marrow stromal cells (BMSCs) constitute a cell population routinely used as a representation of mesenchymal stem cells in vitro. They reside within ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Çekirdeklerin dağıtım, proteinler ve sitoiskeleti çalışmaya Caenorhabditis elegans Germline sayısal analizi

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

Türetme ve köpek yumurtalık mezenkimal kök hücre farklılaşma

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

Insan pluripotent kök hücrelerinin karaciğer hücrelerine verimli farklılaşma

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...