Name: a simple high efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice
Uploaded: 2019-08-30T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice at JoVE.com

ونحن ممتنون للغاية للسيدة جنيفر مونغيا على توضيحها الفني للرسم التخطيطي. نشكر السيد مايكل ر. هونيغ في محطة الإذاعة العامة المجتمعية في هيوستن KPFT على مساعدته التحريرية. تم دعم هذه الدراسة من قبل الجمعية الأمريكية للسكري #1-15-BS-177 (YS)، وNIH R56DK118334/R01DK118334 (YS). كما تم دعم هذا العمل من قبل المعهد الوطني للأغذية والزراعة التابع لوزارة الزراعة الأمريكية، ومشروع هاتش 1010840 (YS) وR01 DK095118 (SG).

تمت الموافقة على جميع الطرق الموضحة هنا من قبل لجنة رعاية الحيوانات واستخدامها (ACUC) من جامعة تكساس A & M. تظهر الأدوات الجراحية اللازمة في الشكل 1 ويظهر الرسم التخطيطي للإجراء في الشكل 2.
1- الحلول
<ol><li>إعداد حل الملح المتوازن هانك (HBSS) عن طريق إض?...

<ol>
	<li>Carter, J. D., Dula, S. B., Corbin, K. L., Wu, R., Nunemaker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+guide+to+rodent+islet+isolation+and+assessment.">A practical guide to rodent islet isolation and assessment.</a> Biological Procedures Online. 11, 3-31 (2009).</li><li>Gotoh, M., Maki, T., Kiyoizumi, T., Satomi, S., Monaco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+isolation+of+mouse+pancreatic+islets.">An improved method for isolation of mouse pancreatic islets.</a> Transplantation. 40 (4), 437-438 (1985).</li><li>O'Dowd, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+and+purification+of+rodent+pancreatic+islets+of+Langerhans.">The isolation and purification of rodent pancreatic islets of Langerhans.</a> Methods in Molecular Biology. 560, 37-42 (2009).</li><li>Do, O. H., Low, J. T., Thorn, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lepr(db)+mouse+model+of+type+2+diabetes:+pancreatic+islet+isolation+and+live-cell+2-photon+imaging+of+intact+islets.">Lepr(db) mouse model of type 2 diabetes: pancreatic islet isolation and live-cell 2-photon imaging of intact islets.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (99), e52632 (2015).</li><li>Stull, N. D., Breite, A., McCarthy, R., Tersey, S. A., Mirmira, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+islet+of+Langerhans+isolation+using+a+combination+of+purified+collagenase+and+neutral+protease.">Mouse islet of Langerhans isolation using a combination of purified collagenase and neutral protease.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (67), (2012).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+Differences+in+Islet+Distribution+in+the+Human+Pancreas+-+Preferential+Beta-Cell+Loss+in+the+Head+Region+in+Patients+with+Type+2+Diabetes.">Regional Differences in Islet Distribution in the Human Pancreas - Preferential Beta-Cell Loss in the Head Region in Patients with Type 2 Diabetes.</a> PLOS ONE. 8, (2013).</li><li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas.">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).</li><li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination.">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (88), e50374 (2014).</li><li>Scharp, D. W., Lacy, P. E., Finke, E., Olack, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-temperature+culture+of+human+islets+isolated+by+the+distention+method+and+purified+with+Ficoll+or+Percoll+gradients.">Low-temperature culture of human islets isolated by the distention method and purified with Ficoll or Percoll gradients.</a> Surgery. 107 (5), e50374 (1987).</li><li>Salvalaggio, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+filtration:+a+simple+and+rapid+new+purification+procedure+that+avoids+ficoll+and+improves+islet+mass+and+function.">Islet filtration: a simple and rapid new purification procedure that avoids ficoll and improves islet mass and function.</a> Transplantation. 74 (66), 877-879 (2002).</li><li>Saliba, Y., Bakhos, J. J., Itani, T., Fares, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optimized+protocol+for+purification+of+functional+islets+of+Langerhans.">An optimized protocol for purification of functional islets of Langerhans.</a> Laboratory Investigation. 97 (1), 70-83 (2017).</li><li>Pradhan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obestatin+stimulates+glucose-induced+insulin+secretion+through+ghrelin+receptor+GHS-R.">Obestatin stimulates glucose-induced insulin secretion through ghrelin receptor GHS-R.</a> Scientific Reports. 7 (1), 979 (2017).</li><li>Shapiro, A. M. J., Hao, E., Rajotte, R. V., Kneteman, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+yield+of+rodent+islets+with+intraductal+collagenase+and+stationary+digestion--a+comparison+with+standard+technique.">High yield of rodent islets with intraductal collagenase and stationary digestion--a comparison with standard technique.</a> Cell Transplantation. 5 (6), 631-638 (1996).</li></ol>

ويشمل هذا البروتوكول التسريب الكولاجينوووووووالهضم، تليها تنقية الجزر. الخطوات الأكثر أهمية من هذا البروتوكول هي الحقن الفعال والتسريب الكامل من البنكرياس1،4،7. طريقة التسليم من هذا البروتوكول يسمح للإنزيم لاجتياز الطرق التشريحية لهضم...

هناك طريقتان شائعتان في الأدب لعزل الجزيرة البنكرياسية. واحد يتطلب استئصال البنكرياس وتقطيعه إلى قطع صغيرة باستخدام مقص الجراحية، ومن ثمهضمه في محلول الكولاجين 1،2،3. طريقة أخرى أكثر دقة هو استخدام شبكة من القنوات الموجودة في البنكرياس لإدخال إنزيم الجهاز الهضمي. وقد استخدمت المواقع التالية لحقن الإنزيم الهضمي: تقاطع القناة الصفراوية والكيسي، المرارة في القناةالصفراوية المشتركة، أو القناة الصفراوية المشتركة نفسها 1،4،5. ومن المعروف أن الجزر لا توزع بالتساوي في البنكرياس. منطقة الطحال يحتوي على معظم الجزر6. في حين أن الطريقة الثانية باستخدام الطرق التشريحية لتقديم الإنزيمات الهضمية يسمح لضخ أكثر اكتمالا من البنكرياس، بما في ذلك منطقة الطحال، وهذا الإجراء غالبا ما يتطلب لقط أو خياطة أمبولة من Vater التي هي من الناحية الفنية تحديا. من حيث تنقية جزيرة، وقد استخدمت التدرجات كثافة متعددة، فضلا عن مصافي الخلاياوالتراجع المغناطيسي لتنقية الجزر 3،7. استخدام هذه التدرجات يمكن أن تستغرق وقتا طويلا والتدرجات فيكول يمكن أن يؤدي إلى ضرر سام من الجزر8.
ويستند البروتوكول الحالي على الطريقة التي وصفها لي وآخرون7، مع تعديلات إضافية تضاف على أساس تجربة أنفسنا والآخرين1،4. الخطوات الأكثر أهمية من بروتوكولنا هي لقط من القناة الصفراوية المشتركة بالقرب من نهاية الكبد، حقن الكولاجين P عن طريق أمبولة فاتر لهضم الأنسجة exocrine، ومن ثم استخدام حمام الماء تهتز لتسريع الهضم ميكانيكيا1، 4،7. في وقت لاحق، يتم تطبيق حل 'STOP' لمنع المزيد من الهضم من الجزر. يستخدم HBSS لغسل ما تبقى من الكولاجين P وSTOP الحل. عندما تم استخدام طريقة فيكول لتنقية الجزر البشرية، أفيد أن العائد هو ضعف الجزر مع قدرة وظيفية أكبر (على سبيل المثال، إفراز الأنسولين) بالمقارنة مع استخدام التدرجات Percoll9. ومع ذلك، شككت الدراسات في استخدام تدرج فيكول بسبب تأثيره السام على الجزر1،10. وقد أفيد أن التدرج Histopaque يوفر حركية تنقية الأمثل لعزل جزيرة الماوس، والتي تنتج غلةجيدة من الجزر عالية الجودة مع خطوات أبسط وتكلفة أقل 1. في بروتوكولنا، يستخدم Histopaque-1077 لتنقية الجزرمن الأنسجة المتبقية الأخرى 8،11. يمكن زراعة الجزر المقطوعة في وسائل الإعلام الكاملة RPMI-1640، أو استخدامها مباشرة في RNA /البروتين الكم.
بروتوكولنا، وذلك باستخدام مزيج من الكولاجين P الهضم وخطوة تنقية التدرج واحد، هو أبسط من البروتوكولات المنشورة الأخرى. أسلوبنا لا يتطلب إجراءات جراحية صعبة ولها فقط بضع خطوات بسيطة. والأهم من ذلك، هذا البروتوكول تنتج باستمرار عائد جيد من الجزر الوظيفية عالية الجودة (250-350/mouse) كما أبلغنا12.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3 mL syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td>Hoding collagenase P</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverglass forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-396</td>
			<td>Holding skin of mouse to aid incision procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z168696</td>
			<td>Holding tissues during pancreas removal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>B13B16A</td>
			<td>To anaesthetize mice prior surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm petri dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>30-2041</td>
			<td>Used for islet culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G. &#189; inch needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td>For penetration of Ampulla of vater to deliver Collagenase P - this guage is used as it fits well in most CBDs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-658</td>
			<td>Holding digested pancreatic tissue, collagenase P, and purified islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent pads with waterproof moisture barrier</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82020-845</td>
			<td>To absorb blood from syurgical procesdudes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810R with swing bucket and deceleration capability</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5811FJ478114</td>
			<td>Use for pelleting tissues, pellet is formed at bottom of conical tube - swing bucket centrifuge is needed. Also the decelaration feature is important to form the gradient layers.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase P- 1g</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td>11249002001</td>
			<td>For digestion of exocrine pancreas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved surgical scissors</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>13-804-21</td>
			<td>For cutting open mouse abdomen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX16</td>
			<td>Used for identification of key anatomical structures to accurately deliver collagenase into pancreas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s Balanced Salt Solution 10x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>20-023-CV</td>
			<td>Washing cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histopaque-1077</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>RNBF5100</td>
			<td>For gradient formation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light source</td>
			<td>Leeds</td>
			<td>LR92240</td>
			<td>Enhancing visibility of microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>AM9780</td>
			<td>For removing RNase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 Media w/o L-Glutamine</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15-040-CV</td>
			<td>Culturing Islets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schwartz micro serrefines (Microvascular clamp)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18052-01</td>
			<td>Clamping common bile duct and hepatic artery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking waterbath</td>
			<td>Boekel/Grant</td>
			<td>8R0534008</td>
			<td>Important for mechanical digestion of exocrine tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small surgical scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-578</td>
			<td>Cuttitng tissue that atached to pancreas</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple high efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice

جزر البنكرياس، وتسمى أيضا الجزر من Langerhans، هي مجموعة من خلايا الغدد الصماء التي تنتج الهرمونات لتنظيم الجلوكوز وغيرها من الوظائف البيولوجية الهامة. الجزر تتكون في المقام الأول من خمسة أنواع من الخلايا التي تفرز الهرمونات: خلايا α تفرز الجلوكاجون، خلايا بيتا تفرز الأنسولين، خلايا δ تفرز سوماتوستاتين، خلايا تفرز غريلين، وخلايا PP تفرز ببتيد البنكرياس. 60 إلى 80٪ من الخلايا في الجزر هي خلايا بيتا، والتي هي أهم خلية السكان لدراسة إفراز الأنسولين. جزر البنكرياس هي نظام نموذج حاسم لدراسة إفراز الأنسولين في الجسم الحي السابق. الحصول على جزر عالية الجودة هو ذو أهمية كبيرة لبحوث مرض السكري. تتطلب معظم إجراءات عزل الجزيرة صعوبة تقنية في الوصول إلى موقع حقن الكولاجين، وإجراءات الهضم القاسية والمعقدة، وخطوات تنقية التدرج المتعددة الكثافة. تتميز هذه الورقة بطريقة بسيطة عالية الإنتاجية لعزل جزيرة الماوس مع أوصاف مفصلة ومظاهرات واقعية، وتبين الخطوات المحددة التالية: 1) حقن الكولاجين P في أمبولة فاتر، وهي منطقة صغيرة تنضم إلى قناة البنكرياس و القناة الصفراوية المشتركة، 2) الهضم الأنزيمي والفصل الميكانيكي للالبنكرياس exocrine، و 3) خطوة تنقية التدرج واحد. مزايا هذه الطريقة هي حقن إنزيم الجهاز الهضمي باستخدام أمبولة أكثر سهولة من Vater، والهضم أكثر اكتمالا باستخدام مزيج من النهج الأنزيمية والميكانيكية، وأبسط خطوة تنقية التدرج واحد. ينتج هذا البروتوكول ما يقرب من 250-350 جزيرة لكل ماوس; والجزر الصغيرة هي مناسبة لمختلف الدراسات في الجسم الحي السابق. المحاذير المحتملة من هذا الإجراء يحتمل أن تكون مصحوبة بأضرار الجزر بسبب الهضم الأنزيمي و / أو حضانة التدرج لفترات طويلة، وكلها يمكن تجنبها إلى حد كبير عن طريق تبرير الإعلان الدقيق لوقت الحضانة.

إكمال هذا الإجراء بشكل صحيح يتطلب بعض الفهم لتشريح الماوس في تجويف البطن. وهذا يسمح لتحديد السليم من أمبولة من Vater ولقط من القناة الصفراوية المشتركة. يستغرق الإجراء بأكمله عادة 1-2 ساعة. ومن الأكثر كفاءة عزل الجزر الصغيرة من 4-6 فئران في نفس الوقت، لذلك يمكن طرد العديد من العينات معاً. ويختلف ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice at JoVE.com

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

وصف بروتوكول عزل الجزيرة هذا مسارًا جديدًا لحقن الكولاجين لهضم الأنسجة الخارجية وإجراء تدرج مبسط لتنقية الجزر من الفئران. وهو ينطوي على الهضم الأنزيمي، فصل التدرج / تنقية، ومجموعة انتقاء اليد. يمكن أن ينتج عن العزل الناجح 250-350 جزيرة عالية الجودة وكاملة التشغيل لكل ماوس.

بروتوكول بسيط عالي الكفاءة لعزل الجزيرة البنكرياسية عن الفئران

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

ويتطلب هذا البروتوكول استخدام تدرج كثافة واحد مما يجعله أقل كثافة عمالة بكثير وأكثر فعالية من حيث التكلفة مقارنة بأساليب عزل الجزر التقليدية الأكثر تعقيداً. والميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هو أن يتم تسليم الانزيم مباشرة إلى البنكرياس مما يؤدي إلى تحسين هضم الأنسجة وزيادة العائد الجزير. تبدأ عن طريق تسجيل أطراف الماوس في موقف سوبين ورش الجسم مع 70٪ الإيثانول.باستخدام ملقط غطاء ومقص جراحي منحني، وجعل ما يقرب من ثلاثة سنتيمترات شق الجلد البطن الأفقي وسحب فتح الجلد لفضح جدار البطن. إجراء شق عمودي من ثلاثة إلى أربعة سنتيمترات على الصفاق البطني لفضح البنكرياس بشكل كامل ووضع الماوس تحت مجهر تشريح. دفع الفص الكبدي بتفوق لفضح القناة الصفراوية التي تظهر على أنها أنبوب وردي شاحب وتحريك الأمعاء بلطف من المنطقة اليمنى من أسفل الظهر والخفيف إلى يمين تجويف البطن لفضح القناة الصفراوية والشريان الكبدي.استخدام شوارتز micro serrefines لتضييق الخناق بعناية على القناة الصفراوية المشتركة في أقرب وقت ممكن إلى الكبد وتحديد أمبولا فاتر الذي يقع في papilla الاثني عشر والتي شكلتها اتحاد القناة البنكرياسية والقناة الصفراوية المشتركة. باستخدام ملقط Adson الصغيرة لسحب القناة الصفراوية المشتركة التي تدرس، إدراج إبرة نصف بوصة قياس 30 تعلق على حقنة ثلاثة ملليلتر تحتوي على ثلاثة ملليلتر من محلول الكولاجين P الطازجة في أمبولا فاتر دفع الإبرة في مجرى موازية للسفينة لحوالي ربع طول السفينة. مرة واحدة في الإبرة في مكانها، وتحقيق الاستقرار في الإبرة مع ملقط Adson الصغيرة وحقن ببطء وبثبات ثلاثة ملليلتر من محلول الكولاجيناز P في القناة.تعتبر الحقن ناجحة إذا كانت مناطق الرأس والرقبة والجسم والذيل من البنكرياس مضخمة بالكامل. دخول السليم في ampulla وتكبيل القناة الصفراوية المشتركة حاسمة لنجاح حصاد الهضم. ثقب الجدران القناة يقلل من فعالية العزلة.باستخدام ملقط Adson المنحنية والصغرى ، اسحب البنكرياس المنتفخ بعناية بدءًا من الطحال والاستمرار في المعدة وعلى طول الاثنيث. ثم ضع البنكرياس في أنبوب هضم 50 ملليلتر يحتوي على ثلاثة ملليلترات من محلول الكولاجيناز P البارد. لحصاد الجزر الصغيرة، استخدم أولاً مقصاً جراحياً دقيقاً لختم البنكرياس لمدة ثلاث إلى خمس ثوانٍ قبل وضع الأنبوب في حمام مائي 37 درجة مئوية بمعدل 100 إلى 120 دورة في الدقيقة لمدة 12 إلى 13 دقيقة.في نهاية الحضانة، يهز بلطف الأنبوب لمدة 30 ثانية لتعطيل الأنسجة حتى يكون الحل متجانساً كما تؤكده جزيئات أنسجة البنكرياس الدقيقة الشبيهة بالرمال. بمجرد هضم الأنسجة ، ضع الأنبوب على الثلج وأضف 40 ملليلترًا من محلول توقف الجليد البارد لإنهاء التفاعل الأنزيمي. بعد تعطيل بلطف بيليه، تدور أسفل الأنسجة المهضوضة في جهاز طرد مركزي دلو يتأرجح تليها اثنين من الطرد المركزي مع 20 ملليلتر من محلول وقف جديد لكل غسل.بعد الغسيل الأخير، resuspend بيليه في 40 ملليلتر من الجليد HBSS الباردة لثلاثة يغسل إضافية، resuspending بيليه في خمسة ملليلتر من درجة حرارة الغرفة حل التدرج بعد الغسيل الماضي. دوامة الأنبوب لفترة وجيزة في سرعة منخفضة حتى يتم تجانس الحل قبل إضافة خمسة ملليلتر أخرى من درجة حرارة الغرفة التدرج إلى الأنبوب. الآن استخدام ماصة 10 ملليلتر لإضافة بلطف وببطء 10 ملليلتر من درجة حرارة الغرفة HBSS إلى أنبوب بطريقة قطرة الحكيمة للسماح بتشكيل التدرج واستخدام جهاز طرد مركزي دلو يتأرجح لعزل مجموعات الخلايا عن طريق الفصل الانحدار الكثافة.في نهاية الطرد المركزي، استخدم ماصات 10 ملليلتر قبل الرطب مع HBSS الباردة لجمع خمسة إلى 10 ملليلتر من طبقة الجزر بين التدرج الكثافة وHBSS. نقل الجزر في أنبوب جديد 50 ملليلتر تحتوي على 20 ملليلتر من الجليد الطازج HBSS وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي في جهاز طرد مركزي دلو يتأرجح. pirate بعناية جميع ما عدا المليلترات الثلاث الأخيرة من عظمى دون إزعاج بيليه وغسل الجزر على الأقل ثلاث مرات أخرى مع 20 ملليلتر من HBSS الطازجة في غسل.بعد الغسيل الأخير، استبدل المابير بأربعة ملليلترات من 37 درجة مئوية RMPI 1640 متوسطة ودوامة بلطف الأنبوب لطرد الكريه. صب على الفور الجزر في طبق بيتري 100 ملليمتر وغسل الأنبوب مع خمسة ملليلتر من 1640 1640 1640 جديدة متوسطة لجمع أي الجزر المتبقية تجمع الغسيل مع الجزر الأخرى. ثم استخدام مجهر تشريح و20 ميكرولتر ماصة تلميح لاختيار الجزر البني الكروية أو مستطيلة صحية مع سطح أملس من طبق بيتري لنقلها إلى طبق بيتري جديد يحتوي على 10 ملليلترات كاملة من دورة فاري أو 1640 المتوسطة.عندما يتم جمع جميع الجزر الصغيرة، ضع الجزر في حاضنة معقمه عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون في الهواء المرطب بين عشية وضحاها. الجزر صحية جيدة يبدو أن لها شكل دائري على نحو سلس في حين الجزر التالفة التالفة سيئة المعرض حواف خشنة. الأنسجة غير المهضومة exocrine شفافة في المظهر ويدل على شكل غير منتظم.يمكن تأكيد التبليب والتوزيع السليمين لمينزيم الكولاجيناز P بواسطة تضخم الجزء المُبلِس من البنكرياس. الحضانة بين عشية وضحاها في وسائل الإعلام منخفضة الجلوكوز يمكن أن رئيس الجزر لم مقايسة إفراز الأنسولين تحفيز الجلوكوز في اليوم التالي مما يسمح نظرة ثاقبة القدرة الإفرازية للأنسولين من الجزر.

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

فأري عزل جزيرة البنكرياس

Neutrophil Isolation Protocol

العدلة عزل بروتوكول

Neutrophil polymorphonuclear granulocytes (PMN) are the most abundant leukocytes in humans and among the first cells to arrive on the site of inflammatory ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

الإنسان عزل جزيرة البنكرياس : الجزء الأول : الهضم ومجموعة من الأنسجة البنكرياس

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

الإنسان عزل جزيرة البنكرياس : الجزء الثاني : تنقية الثقافة والإنسان من الفشوت

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

عزل الخلايا الجذعية من الإنسان Xenografts سرطان البنكرياس

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

A Simple Protocol for Extracting Hemocytes from Wild Caterpillars

A بروتوكول بسيط لاستخراج اليرقات من Hemocytes البرية

Insect hemocytes (equivalent to mammalian white blood cells) play an important role in several physiological processes throughout an insect's life cycle ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

وهناك طريقة للماوس البنكرياس جزيرة العزلة وبين الخلايا المخيم تقدير

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Pancreatic Islet Embedding for Paraffin Sections

جزيرة البنكرياس التضمين لمقاطع البارافين

Experiments using isolated pancreatic islets are important for diabetes research, but islets are expensive and of limited abundance. Islets contain a ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

تصوير ديناميات الكالسيوم في السكان الفرعيين من خلايا الفئران جزيرة البنكرياس

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...